一种新的高纯度因子Ⅷ(OCTATE)的病毒安全性

用人混合血浆制备的血液制品有病毒污染的可能性,虽然溶剂/去污剂法(SD)已广泛地用于凝血因子浓制剂和静注免疫球蛋白制剂及全血浆的病毒灭活,但这种方法只能灭活脂质包膜病毒,对无包膜病毒效果不佳.为此作者将引入OCTAVI(一种仅用vonWillebrand因子稳定的高纯度因子Ⅷ浓制剂)制备工艺的改良巴氏消毒法(63℃加热     

短波紫外线对人凝血因子Ⅷ中猪细小病毒灭活的研究

目的 研究短波紫外线(short-wave ultraviolet-C,UV-C)对人凝血因子Ⅷ(human coagulationfactor Ⅷ,FⅧ)中猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)的灭活的效果.方法 将PPV作为指示病毒与FⅧ中间品混合,用紫外灭活仪UVivatec分别以200、300和400 J/m2 UV-C进行灭活.将UV-C灭活的FⅧ接种ST细胞并进行培养,采用细胞病变(cytopathic effect,CPE)法检测病毒,并以Reed-Muench法计算病毒滴度.对所有UV-C灭活后未出现CPE的样品盲传3代,验证灭活效果;同时对UV-C灭活前后的FⅧ活性进行检测.结果 3个照射剂量的UV-C灭活后,FⅧ中的PPV滴度降低均不低于每0.1 ml4.62lg半数组织培养感染剂量,所有未出现CPE的样品盲传至第3代均未检到病毒.UV-C灭活的FⅧ的活性无明显降低,且各项质量指标均符合药典的要求.结论 UV-C可有效灭活无包膜病毒PPV,且对FⅧ活性无明显影响.     

人凝血因子Ⅷ血液制品中的病毒灭活与验证

目的 研究人凝血因子Ⅷ制备过程中S/D病毒灭活法和80℃、72 h干热灭活法的病毒灭活工艺的灭活效果。方法 经过S/D法及80℃、72 h干热法双重处理灭活病毒,并通过加入指示病毒(PRV、Sindbis、HIV、EMCV、PPV)验证病毒灭活效果。结果 上述工艺可有效灭活脂包膜和非脂包膜病毒。最终制品中TNBP残余量小于1/10万(10 ppm)、吐温-80(Tween-80)残余量小于1/万(100 ppm),符合安全标准,人凝血因子Ⅷ的生物活性及其他各项指标未发现明显变化。结论 可以作为人凝血因子Ⅷ实验过程中的病毒灭活方法。     

液体巴氏消毒法对无稳定剂的免疫球蛋白制剂的生物学及生化性质的影响

用低温乙醇分级分离法纯化的静注免疫球蛋白(IVIG)制剂有很好的病毒安全性,但也有在使用IWIG制剂后传播非甲非乙型肝炎的病 例报道.为了保证IWIG的病毒安全性,作者在原有生产工艺中增加了病毒灭活步骤,即在无稳定剂、低盐、酸性pH的条件下实施巴氏消毒法.研究所用的初始材料为通过低温乙醇工艺抽提制备的肌注破伤风抗毒素IgG,IgG制剂经无菌过滤后,于60℃培育5、7或10小时.用大肠杆菌噬菌体(?)X174作为无包膜病毒模型对此法的病毒灭活效果进行评估,同时对免疫球蛋白制剂的性质进行分析.结果显示,IgG制剂经60C10 小时处理后,病毒滴度降低5log.高压液相层析显示,加热处理后制剂中未测得多聚体,仅测得痕量的二聚体,单体比例大于99%.60C10小时处理前后的IgG制剂的圆二色谱不同,加热处理的IgG的二色性信号较低,表明其二级结构有轻微改变.抗体依赖性细胞介导的细胞毒性抑制试验证实,巴氏消毒处理的IgG的     

制备高纯度因子IX浓制剂时用金属螫合物亲和层析去除细小病毒和甲型肝炎病毒

特异性病毒灭活技术(如溶剂/去污剂、巴氏消毒法和干热处理)的广泛应用大大提高了凝血因子浓制剂的安全性.     

用巴氏消毒法灭活抗血友病血浆蛋白制剂中引起艾滋病的逆转录病毒及其他人类病毒

用巴氏消毒法(60℃,10小时)加热处理血浆蛋白制剂,已消除了乙型肝炎病毒传播给受血者的危险。能否用同样方法消除抗血友病冷沉淀(AHC)和因子Ⅷ浓缩物(FⅧ)中的爱滋病病原体Ⅲ型人类嗜T淋巴细胞病毒(HTLV-Ⅲ)?为此,作者将HTLV-Ⅲ、巨细胞病毒(CMV)、EB病毒(EBV)、单纯疱疹病毒(HSV)、脊髓灰质炎病毒和牛痘病毒加入AHC或FⅧ中,然后以巴氏消毒法处理,观察病毒灭活情况。     

大规模凝胶过滤柱层析法生产经有机溶剂/表面活性剂处理的高纯度因子Ⅷ浓剂制

在制备中纯度因子Ⅷ浓制剂过程中如应用有机溶剂/表面活性剂进行病毒灭活,通常需要用Sephadex G-25凝胶过滤去除制剂中的有机溶剂(三正丁基磷酸盐,TNBP)和活性剂(胆酸钠)。本文作者报导采用一种新的凝胶Sephacryl S400HR(由Pharmacia出品,分离     

在盐酸胍存在的情况下应用巴氏消毒法灭活血浆蛋白制品中的病毒

溶剂 /去污剂法和其他特定的病毒灭活法对血浆制品的安全性 ,尤其是对有包膜病毒的灭活具有重要作用。然而 ,仍受到特别关注的是无包膜小病毒 ,如细小病毒 B19,因为它们体积很小且理化性质极其稳定。目前对细小病毒及其他无包膜小病毒的有效灭活和去除仍存在许多问题 ,正在进行相关技术的研究。作者对在盐酸胍存在情况下巴氏消毒法灭活血浆病毒的效力进行评估。　　用冷乙醇沉淀法分离血浆获得含载脂蛋白 A1(apo A- 1)的沉淀物 ,用盐酸胍和乙二胺四乙酸悬浮沉淀物 ,获得浓度为 2 .5 %的apo A- 1悬液。用巴氏消毒法 (6 0℃ ,10小时 )处理上…     

采用两步凝胶吸附法制备人凝血酶原复合物的工艺研究

目的应用两步凝胶色谱法制备高纯度、高安全性的人凝血酶原复合物(PCC)制剂。方法检测合格的健康人血浆经离心去除冷沉淀后,采用DEAE-Sephadex A50进行吸附色谱,经洗涤、洗脱得到洗脱液,加入0.3%的磷酸三丁酯和1%的吐温80(S/D)进行病毒灭活;灭活后的制品再重新进行二次吸附色谱,洗涤、洗脱去除残留的S/D试剂的同时,进一步提高制品的纯度、效价等质量指标。结果最终制品的回收率达70%,比活、S/D残留量等各项指标达到药典标准。结论用所建立的工艺制备的PCC制剂的比活及安全性指标高于传统工艺制得产品。     

抗汉城病毒荧光单克隆抗体的制备及初步应用

目的 制备抗汉城病毒（Seoul virus,SEOV）荧光单克隆抗体（单抗）,并初步应用于Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗原液的病毒灭活验证。 方法  以SEOV L-99株灭活病毒原液为免疫原,采用小鼠杂交瘤细胞融合技术,筛选抗SEOV特异性单抗杂交瘤;小鼠体内诱生法制备单抗腹水,蛋白A亲和层析纯化单抗,并以蛋白质印迹法鉴定其特异性;间接ELISA测定单抗效价和相对亲和力;纯化单抗采用搅拌法标记异硫氰酸荧光素,并分别采用直接免疫荧光法与小鼠脑内接种法对Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗原液进行病毒灭活验证。结果 共筛选出4株特异性抗SEOV L-99株杂交瘤1D5、2E3、3A4及5B7。蛋白质印迹法鉴定4株单抗均与SEOV L-99株核衣壳蛋白发生特异性反应;间接ELISA测定腹水效价为3.13×10^-8~ 1.25×10^-7;相对亲和力顺序为1D5>3A4>2E3>5B7;纯化抗体纯度>95%;异硫氰酸荧光素标记1D5株单抗的结合比率为3.4;直接免疫荧光法与小鼠脑内接种法检测盲传3代的Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗原液,病毒灭活验证结果一致。结论 成功筛选到高效价特异性抗SEOV单抗,并制备成荧光单抗,可用于Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗生产工艺中的病毒灭活验证。     

人血丙种球蛋白制备的新工艺

本文报道了利凡诺-低温乙醇-DEAE离子交换层析结合法制备人血丙种球蛋白的新工艺,按此工艺,IgG收率约0.5％（g/ml）,纯度>99％,制剂各项指标均符合规程要求。以VSV为病毒模型,制备过程至少可失活或排除10~(11)ID_(50)/ml病毒,工艺对灭活脂质壳病毒是有效的。     

因子Ⅸ复合浓制剂中乙型肝炎病毒相关DNA多聚酶的灭活

作者分别用巴氏消毒法(60℃加热10小时)和烷化剂碘乙酸(IA)和碘乙酰胺(IAM)对因子Ⅸ复合浓制剂进行处理,并测定了制剂中乙型肝炎病毒相关DNA多聚酶(HBV-DNAP),以评价HBV灭活情况。方法为:用EDAE-Sephadex离子交换树脂提取因子Ⅸ复合物,加入纯化的HBV颗粒,用改进的His-chman方法检测溶液中的HBV-DNAP。将该溶液分成若干份,进行不同时间的巴氏消毒或烷化处理。用0.1% β-巯基乙醇1.3% Tri-ton X-100配制已处理和未处理的溶液,使病毒核心从它的相关表面抗原分离。取3份此     

肌注血清免疫球蛋白的病毒灭活

为进一步确保肌注免疫球蛋白 (IGIM)产品的安全性 ,作者在 IGIM生产工艺中增加了一步用溶剂去污剂 (SD)磷酸三正丁酯(TNBP)和胆酸钠对 级分离物进行病毒灭活的步骤 ,并将其与传统制备工艺进行比较。　　用于病毒灭活研究的病毒为 1型人类免疫缺陷病毒 (HIV- 1 )、牛病毒性腹泻病毒(BVDV,有包膜 RNA病毒 ,作为丙型肝炎病毒的模型 )、伪狂犬病病毒 (PRV,有包膜DNA病毒 ,作为疱疹病毒的模型 )和 3型呼肠弧病毒 (REO- 3,无包膜 RNA病毒 ,作为物理 -化学试剂抗性病毒的模型 )。在缩小实验中 ,作者分别向生产流程的七个阶段加入上…     

人抗凝血酶Ⅲ生产工艺中病毒灭活/去除效果的验证

目的验证和评价人抗凝血酶Ⅲ(human antithrombin Ⅲ, AT-Ⅲ)生产工艺中有机溶剂/去污剂(solvent/detergent, S/D)法联合纳米膜过滤法灭活/去除病毒的可行性。方法采用S/D法作为AT-Ⅲ病毒灭活工艺, 纳米膜过滤法(20 nm孔径)作为其病毒去除工艺, 分析病毒灭活/去除工艺对AT-Ⅲ活性的影响;以伪狂犬病毒、辛德毕斯病毒、猪细小病毒、脑心肌炎病毒作为指示病毒, 对上述工艺进行病毒灭活/去除工艺效果的验证。结果 S/D法联合纳米膜过滤法可有效灭活/去除脂包膜病毒和非脂包膜病毒, 指示病毒滴度下降均>4 lg;且AT-Ⅲ的生物活性及其他各项指标未发生明显改变, 活性变化<10%。结论研究建立的S/D法联合纳米膜过滤法可有效灭活/去除AT-Ⅲ中的指示病毒, 该方法为凝血因子类制品的病毒灭活验证工艺提供了参考。     

乙醇工艺对同种异体肌腱病毒灭活效果的研究

目的:研究乙醇工艺对同种异体肌腱的病毒灭活效果.方法:选择伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、牛腹病毒性腹泻病毒(BVDV)和人类免疫缺陷病毒(HIV-1)为指示病毒,将同种异体肌腱(3个批号)分别负载指示病毒后,用75％乙醇浸泡灭活处理;分别在不同时间点取样,用96孔板的细胞病变法和Karber法测定,计算乙...     

人血高密度脂蛋白制备新工艺

以血浆制备白蛋白 (Cohn 6法 )后所产生的 F - 1沉淀为原料 ,采用低温乙醇工艺 ,经过 3步分离纯化 ,再用截留分子量 5 0 k D的超滤膜超滤脱醇浓缩后 ,加入 (10± 1) %(g/ m l)蔗糖作保护剂进行巴斯德病毒灭活 ,制得人血高密度脂蛋白。制品经 SDS- PAGE显示 ,纯度 85 %～ 95 %,载脂蛋白 A 分子量 2 7.3k D,活性 4.0× 10 6u/ g蛋白以上 ,载脂蛋白 A 回收率在 6 0 %以上。     

凝血因子Ⅷ制剂

凝血因子Ⅷ(FⅧ)制剂是治疗血友病甲的最主要血液制品.冷沉淀是这类制剂中最简便的制品,从单一供血者中采集单浆制备冷沉淀成本低且疾病传染性小.中纯度FⅧ制剂比活性为0.2～1.0 IU/mg蛋白,较冷沉淀中Ⅶ活性含量高.高纯度制剂比活性高于1.0IU/mg蛋白.单克隆抗体(McAb)亲和层析和DNA重组技术可制备FⅧ活性4000～28万倍提纯的FⅧ制剂和纯FⅧ制剂.随着非甲非乙型肝炎(NANBH)病毒的分离和FⅧ制剂灭活方法的改进,这类制品将更安全.     

接种传染性牛鼻气管炎病毒和副流感3型病毒灭活疫苗后牛体内所产生的抗体持续性与回忆应答

作者用40头传染性牛气管炎(IBR)和副流感3型(PI-3)病毒血清反应阴性的5～6月龄混合饲养牛,进行效力试验。6头牛作为对照,另34头牛接种灭活IBR和PI-3两型商品疫苗。用一种加有佐剂的IBR-PI-3病毒疫苗5ml对12头牛进行肌肉接种,连续5次。用IBR-PI-3疫苗和溶血性巴氏杆菌混合制剂10ml对22头牛进行肌肉接种,连续8次。每次接种间隔为14天,12个月后     

应用单克隆抗体精制无病毒的因子Ⅷ制剂

本文就最近正在开发的两种利用单克隆抗体(McAb)亲和层析法高度纯化的因子Ⅷ制剂(Monoclate和AHF-M)的制备、特性及临床效果作了介绍。两种制剂纯化中所用的McAb及制剂的病毒灭活方法有较大差异。 Monoclate利用vW因子的McAb作亲和层析柱。取自血浆提取的冷沉淀,上亲和层析柱,洗净杂蛋白后,用高浓度的钙离子溶液将因子Ⅷ解离洗脱,再经氨基己基琼脂糖层析后透析、过滤、冻干,最后加热灭活病毒。 AHF-M则利用因子Ⅷ促凝成分(Ⅷ∶C)的McAb作亲和层析柱。从血浆中取得的冷沉淀,先经用有机溶剂/表面活性剂处理,以     

治疗用因子Ⅷ浓制剂经SD和巴氏消毒法灭活病毒后的改变

曾有报道在使用溶剂/去污剂（SD）加巴氏消毒法（P）（SDP）灭活病毒的因子Ⅷ（FⅧ）浓制剂的病人中抑制剂（同种抗体）产生率增加。为弄清病毒灭活方法对FⅧ生物活性的影响,作者对临床使用的SD和SDP灭