葡萄糖调节蛋白78 mRNA在高脂喂养大鼠肝脏中的表达和意义

目的 检测高脂饲料喂养大鼠的肝脏葡萄糖调节蛋白7S(GILP78)mR2qA的表达情况,探讨内质网应激与胰岛素抵抗之间的关系及GKP78在胰岛素抵抗发生机制中的作用.方法 采用高脂饲料喂养建立胰岛素抵抗大鼠模型,30只雄性Wistar大鼠被随机分为基础饮食喂养组(NC,n=15)和高脂饮食喂养组(HF,n=15),分别喂养10用后,用正常血糖-高血浆胰岛素钳夹技术进行评估.应用Real Time PCR方法检测大鼠肝脏中GRP78 mRNA的表达.结果 ①高脂饲料组大鼠的葡萄糖输注率明显低于基础饲料组[GIR60-120(0.90±0.15)vs(4.97±0.68)mg/(ks·min),P<0.01].②高脂饲料组肝脏GRP78 mRNA的表达明显高于基础饲料组[(1.13±0.50)vs(0.43±0.10,P<0.01].③肝脏GRP78 mRNA表达与内脏脂肪占体质量的百分比(r=0.52,P=0.019)、总胆固醇(TC)(r=0.51,P=0.022)成正相关.结论 高脂诱导的胰岛素抵抗大鼠肝脏中GILP78mRNA表达增加,表明大鼠肝脏发生内质网应激和未折叠蛋白反应.     

高脂饮食喂养大鼠脂肪组织GRP78mRNA的表达及意义

目的 通过观察高脂喂养的胰岛素抵抗大鼠内脏脂肪组织中GRP78mRNA的表达,探讨其在胰岛素抵抗发病机制中的意义.方法 30只雄性Wistar大鼠随机分为正常饮食组（NC组）和高脂饮食组（HF组）,每组15只.喂养10周后,应用高胰岛素-正常血糖钳夹实验技术评估胰岛素抵抗模型的建立.采用实时荧光定量PCR（Real time PCR）法检测脂肪组织GRP78mRNA的表达.同时检测血清胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、测定血糖（BG）、胰岛素（INS）,测定各组大鼠内脏脂肪的重量与体重的比值.结果 （1）喂养10周后HF组的葡萄搪输注率（GIR）明显低于NC组（P〈0.01）,HF组胰岛素明显高于NC组（P〈0.05）;（2）HF组大鼠内脏脂肪组织中GRP78mRNA的表达明显增高,与NC组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;（3）10周末,HF组大鼠甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、及内脏脂肪相对含量均明显升高（P〈0.01）.结论 高脂喂养10周大鼠胰岛素抵抗模型建立成功,高脂饮食可诱导内脏脂肪组织GRP78mRNA表达增强.     

罗格列酮对胰岛素抵抗大鼠血清C反应蛋白表达水平的抑制作用

目的 观察高脂喂养的胰岛素抵抗大鼠模型C反应蛋白(CKP)水平的动态变化;观察罗格列酮对肥胖大鼠血清CRP水平的影响.方法 将190～240 g健康清洁级近交系SD雄性大鼠36只,按完全随机法分为两组,正常对照组(NC组)和高脂饲养实验组,8周后胰岛素抵抗大鼠造模成功.将高脂饲养大鼠随机分为单纯高脂喂养组(HF组)、罗格列酮干预组(HFR组),于实验过程中取血检测空腹血糖、空腹胰岛素和血清CKP.结果 经高脂饲料喂养8周后,模型组胰岛素敏感指数降低,与对照组比较,差异具有显著性(P＜0.001).经高脂饲料喂养8周后,模型组C反应蛋白水平明显升高,与正常对照组比较,差异具有显著性(P＜0.001).经过8周的干预治疗,HFR组与HF组比较,HFR组ISI显著增高(P＜0.001).但仍低于NC组(P＜0.001).而HFR组经过干预后血清CRP均较为稳定,与HF组相比明显改善,差异有显著性(P＜0.001),但而高于NC组(P＜0.001).结论 随着胰岛素抵抗的加重,血清CKP水平逐渐升高,罗格列酮治疗可改善胰岛素抵抗,降低CKP水平.     

氧化苦参碱对高果糖喂养诱导大鼠脂肪肝和肝脏内质网应激的干预作用

目的 观察氧化苦参碱干预对高果糖饮食诱导大鼠肝脏脂质沉积的影响,并观察高果糖喂养对大鼠肝内内质网应激(ERS)的影响及氧化苦参碱的干预作用.方法 雄性Wistar大鼠分为对照组、高果糖组和氧化苦参碱组,喂养16周后处死大鼠并测定各组大鼠空腹血糖(FBG)、空腹血胰岛素(FINS)水平,计算HOMA指数,测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量及肝脏TG含量,采用油红O染色观察肝脏组织的病理改变;测定ERS标志物内质网伴侣分子78(GRP78)、CHOP mRNA表达以及蛋白磷酸化胰腺内质网激酶(p-PERK)、磷酸化山梨醇要求激酶1(p-IRE1)和活化转录因子6(ATF-6)蛋白表达.结果 与对照组比较,高果糖组的FBG、FINS、HOMA指数、血ALT、血AST及肝TG均显著增高(P均＜0.01),同时肝组织油红O染色显示高果糖组大鼠肝细胞已有明显脂滴沉积;与高果糖组比较,氧化苦参碱干预组的上述指标均显著降低(P均＜0.01),油红O染色显示肝组织内脂质沉积亦显著减轻;与对照组比较,高果糖组大鼠的肝内GRP78、CHOP表达显著增加,p-PERK、p-IRE1和ATF-6的蛋白表达亦显著增加(P均＜0.01),而氧化苦参碱组上述ERS标志物的基因和蛋白表达均显著低于高果糖组(P均＜0.01).结论 长期高果糖喂养引起大鼠胰岛素抵抗、肝脏脂质沉积及肝细胞损伤,并伴有肝细胞内ERS,氧化苦参碱治疗可改善高果糖饮食诱导的脂肪肝和肝细胞损伤,其机制可能与氧化苦参碱改善肝脏ERS有关     

The expression of endoplasmic reticulum stress in recovery of CCl4 induced liver fibrosis in rat

目的 探讨内质网应激(ERS)相关蛋白在大鼠肝纤维化形成与自发逆转过程中的作用.方法 建立CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,免疫组化法检测各组ERS标志性蛋白CHOP、GRP78的表达;RT-PCR法检测CHOP、GRP78 mRNA的表达;Western blot检测CHOP蛋白表达变化.结果 与正常组大鼠相比,模型组大鼠CHOP、GRP78的表达显著升高(P<0.05).与模型组相比,停止CCl4诱导4周和8周后CHOP、GRP78表达降低(P<0.05).结论 ERS存在于大鼠肝纤维化进程中,可能与肝纤维化的发生、发展和逆转存在密切联系.     

大鼠肝纤维化进程中内质网应激相关蛋白的动态变化研究

目的探讨内质网应激(ERS)相关蛋白在大鼠肝纤维化形成与自发逆转过程中的作用。方法建立CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,免疫组化法检测各组ERS标志性蛋白CHOP、GRP78的表达;RT-PCR法检测CHOP、GRP78 mRNA的表达;Western blot检测CHOP蛋白表达变化。结果与正常组大鼠相比,模型组大鼠CHOP、GRP78的表达显著升高(P<0.05)。与模型组相比,停止CCl4诱导4周和8周后CHOP、GRP78表达降低(P<0.05)。结论 ERS存在于大鼠肝纤维化进程中,可能与肝纤维化的发生、发展和逆转存在密切联系。     

利拉鲁肽对高脂喂养大鼠胰腺β细胞ATF4/CHOP通路的影响

目的 观察利拉鲁肽对高脂喂养大鼠胰腺GRP78、转录活化因子4(ATF4)、CCAAT区/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、TRB3蛋白和mRNA表达情况,探讨利拉鲁肽对高脂喂养大鼠胰腺ATF4/CHOP通路的影响.方法 将雄性Wistar大鼠44只分为对照组、高脂组、干预组1、干预组2,每组11只,对照组给予普通饮食,其余3组给予高脂饮食喂养8周后,干预组1给予利拉鲁肽100 μg·kg-1·d-1皮下注射;干预组2给予利拉鲁肽200 μg·kg-1·d-1皮下注射.药物干预2周后处死,每组取5只大鼠行清醒状态下高胰岛素-正葡萄糖钳夹试验计算葡萄糖输注率(GIR),测定其余大鼠空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、血清游离脂肪酸(FFA)、总胆田醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),计算胰岛β细胞功能指数(HOMA-β),Western blot和Realtime-PCR技术检测胰腺GRP78、ATF4、CHOP和TRB3蛋白及mRNA的表达.结果 与对照组相比,高脂组FBG、FFA、TC、FINS、TG、LDL-C水平显著升高,HDL-C、GIR和HOMA-β明显下降(P＜0.05或P＜0.01),与高脂组相比,干预组2 HDL-C、GIR和HOMA-β升高(P＜0.05或P＜0.01),其余指标明显下降;与干预组1相比,干预组2的血FGB、FFA、TC下降,GIR和HOMA-β升高(P＜0.05).与对照组相比,高脂组GRP78、ATF4、CHOP和TRB3蛋白及mRNA的表达明显升高;与高脂组相比,干预组1与干预组2随利拉鲁肽浓度升高,GRP78、ATF4、CHOP和TRB3蛋白及mRNA表达逐渐下降.结论 利拉鲁肽可呈浓度依赖性改善高脂喂养大鼠胰岛素抵抗及保护胰岛β细胞,其作用机制可能涉及胰腺内质网ATF4/CHOP通路.     

运动干预对胰岛素抵抗大鼠血清纤溶酶原激活物抑制剂-1水平的影响

目的 观察高脂膳食诱导的胰岛素抵抗(IR)大鼠血清纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)水平的变化以及运动干预对血清PAI-1水平的影响,以初步探讨非药物疗法-运动改善胰岛素抵抗可能的作用机制.方法 雄性Wistar大鼠(4周龄,体重70～80 g)随机分为基础饲料组(NC,n=20)和高脂膳食组(HF,n=35).HF组经特殊高脂膳食喂养10周,建立胰岛素抵抗大鼠动物模型,同时NC组以基础饲料喂养.10周后HF组再随机分为高脂膳食运动组(HFE,n=15)和高脂膳食非运动组(HFNE,n=15),HFE组游泳运动干预4周.以正常血糖-高血浆胰岛素钳夹技术观察高脂膳食喂养大鼠运动前后胰岛素敏感性的变化.酶联免疫吸附法测血清PAI-1水平.提取大鼠肠系膜和附睾周围脂肪代表内脏脂肪,称重.结果 以SPSS 16.0统计软件分析.结果 葡萄糖钳夹实验结果:10周后HF组葡萄糖输注率(GIK60-120)明显低于NC组(P＜0.01),14周后HFE组GIR60-120明显高于HFNE组(P＜0.01),HFE组经运动后,GIR60-120明显升高,但仍低于NC组(P＜0.01).与NC组相比,HF组大鼠血清PAI-1水平显著升高(P＜0.01),且与内脏脂肪重量成正相关(r=0.656,P＜0.05).运动后HFE组血清PAI-1水平与HFNE组比较显著降低(P＜0.01).结论 高脂膳食可构建胰岛素抵抗大鼠模型,其机制与内脏脂肪增加有关.高脂膳食大鼠PAI-1水平升高并与内脏脂肪含量相关.一定负荷量运动后内脏脂肪减少,胰岛素抵抗改善,PAI-1水平降低,提示PAI-1可能参与胰岛素抵抗的发生和发展.     

胰岛素抵抗大鼠肝脏组织PERK和p-PERK的表达及意义

目的 探讨胰岛素抵抗大鼠肝脏组织PKR样内质网调节激酶(PERK)及磷酸化PERK(p-PERK)的表达及意义.方法 SPF级雄性Wistar大鼠30只,随机分为正常饮食组(NC组)和高脂饮食组(HF组),每组15只.喂养10周后,以高血浆胰岛素-正常血糖钳夹技术评估胰岛素抵抗大鼠模型.应用Western blot方法检测肝脏组织中PERK和p-PERK蛋白的表达.结果 与NC组相比,HF组60～120 min的平均葡萄糖输注率(GIR60-120)明显低于NC组(0.90±0.15mg·kg-1·min-1 vs 4.97±0.68 mg·kg-1·min-1,P<0.01).与NC组相比,HF组大鼠肝脏p-PERK表达明显升高(192.89±25.16 vs 63.04±15.61,P<0.05),p-PERK/PERK也明显升高(0.99±0.12 vs 0.33±0.08,P<0.05).结论 胰岛素抵抗大鼠肝脏组织中p-PERK蛋白及p-PERK/PERK升高,提示内质网应激可能参与胰岛素抵抗的发生.     

高脂饮食诱导肥胖大鼠的胰岛素敏感性与TNFα、FFAs的关系

目的观察正常大鼠在高脂饮食诱导下形成肥胖后,胰岛素敏感性及其TNFα、FFAs的变化。方法 9周龄健康雄性Wistar大鼠16只,随机分为正常饲养组(NC,n=8)和高脂饲养组(HF,n=8)。喂养10周,比较两组大鼠体重、HOMA-IR、以及TNFα、FFAs等的变化。结果经10周高脂喂养,HF组与NC组比较,体重和内脏脂肪组织显著增加并出现胰岛素抵抗,空腹FFAs和TNFα水平显著上升,较NC组分别增加了80.8%(P<0.05)和58.4%(P<0.05),但两组空腹血糖差异无显著性(HF组:7.89±1.46mmol/L vs NC组8.70±1.59mmol/L,P>0.05)。结论高脂饮食可诱导大鼠肥胖伴胰岛素抵抗,其胰岛素抵抗的形成可能与FFAs水平的升高有关。