局部醛固酮系统介导高糖致人系膜细胞损伤记忆效应

目的 研究高糖记忆对人系膜细胞(HMCs)表达局部醛固酮系统、活性氧(ROS)及癌胚纤维连接蛋白(oncofetal FN) mRNA水平的影响,并进一步探讨局部醛固酮系统在其中的作用.方法 实验细胞分组如下:正糖组(NG,5 mmol/L D-葡萄糖培养2 d)、高糖组(HG,25 mmol/L D-葡萄糖培养2d)、记忆组(M,25 mmol/L D-葡萄糖培养2 d→5 mmol/L D-葡萄糖培养4d)、记忆+依普利酮组(MY,25 mmol/L D-葡萄糖培养2 d→5 mmol/L D-葡萄糖+10 μmol/L依普利酮培养4d)、正糖+依普利酮组(NY,5 mmol/L D-葡萄糖培养2 d→5 mmol/L D-葡萄糖+10μmol/L依普利酮培养4d)、持续正糖组(SN,5mmol/L D-葡萄糖培养6d).荧光显微镜及酶标仪检测细胞内ROS水平,蛋白质印迹法检测醛固酮合酶蛋白(CYP11B2)水平,RT-PCR检测11β-羟基类固醇脱氢酶Ⅱ、CYP11B2、oncofetal FN mRNA表达水平,激光共聚焦显微镜观察盐皮质激素受体(MR)表达及转位,放射免疫法测定上清液醛固酮水平.结果 (1)HG组和M组诱导人系膜细胞CYP11B2 mRNA及蛋白分别为NG组的3.45、2.09倍和3.14、2.06倍,HG组和M组细胞上清液醛固酮含量分别为NG组的2.01、1.81倍(P均＜0.05),HG组和M组均可促进MR蛋白发生核转位,定量分析示HG组和M组胞质/胞核荧光强度较NG组分别降低30％、21％(P均＜0.05).(2)HG组和M组oncofetal FN mRNA、ROS表达增加,分别为NG组的2.23、1.99倍和2.16、1.90倍(P均＜0.05),MY组ROS、oncofetal FN mRNA表达分别较M组降低35％、51％(P均＜0.05).结论 HMCs存在高糖记忆效应,局部醛固酮系统可能介导了高糖致系膜细胞损伤的记忆作用.     

醛固酮通过调节ACE2-Ang(1-7)-Mas受体轴诱导内皮细胞凋亡的研究

目的 探讨醛固酮对内皮细胞ACE2-Ang(1-7)-Mas受体轴的影响及其与凋亡的关系.方法 将体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为对照组(DMEM/F12培养基)、醛固酮组(10、100、1 000 nmol/L醛固酮干预)和醛固酮拮抗组(100 nmol/L醛固酮+1μmol/L醛固酮受体拮抗剂共同干预).采用免疫荧光细胞化学染色法观察细胞ACE2蛋白的表达;Western blotting检测细胞中ACE2和Mas受体的表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清中AngⅡ和Ang(1-7)蛋白的含量以及凋亡相关蛋白caspase-3的活性;流式细胞术结合FITC-Annexin V/PI荧光染色检测细胞凋亡.结果 与对照组比较,醛固酮组细胞ACE2和Mas受体的表达明显下调(P＜0.01),并呈浓度依赖性.在100 nmol/L醛固酮组,随着干预时间的延长,细胞ACE2和Mas受体的表达明显下调(P＜0.01),呈时间依赖性;而醛固酮拮抗组细胞ACE2和Mas受体的表达显著高于100 nmol/L醛固酮组(P＜0.01).ELISA检测结果显示,随着干预时间的延长,醛固酮组细胞培养上清中AngⅡ浓度和caspase-3活性均显著升高,而Ang(1-7)浓度降低.流式细胞术检测结果显示:醛固酮组细胞凋亡率显著高于对照组,醛固酮拮抗组细胞凋亡率显著低于醛固酮组(P＜0.05).结论 醛固酮具有调节ACE2-Ang(1-7)-Mas受体轴的作用,并可能通过此轴诱导内皮细胞凋亡.     

大鼠系膜细胞醛固酮的合成及其对细胞外基质生成的影响

目的　证明肾脏系膜细胞能够自身合成醛固酮 ,并探讨醛固酮对系膜细胞细胞外基质生成的影响。方法　用RT PCR法检测大鼠系膜细胞醛固酮合成酶CYP11B2mRNA表达 ,PCR产物存化后直接测序 ;放免法测定系膜细胞培养上清液中醛固酮的浓度。用RT PCR半定量法比较 (3 磷酸甘油醛脱氢酶theenzymeglyceraldehyde 3 phosphatedehydrogenase ,GAPDH为内参照 )经 10 -10 ～ 10 -6mol/LAngⅡ或 7mmol/L、9mmol/LKCl干预 4 8h ,系膜细胞CYP11B2mRNA的表达量。大鼠系膜细胞醛固酮特异性受体 (mineralocorticoidreceptor,MR)和保护其配体特异性的 11β -羟类固醇脱氢酶 2 (11β -HSD2 )的mRNA和蛋白质表达分别用RT PCR法和细胞免疫化学法检测。以ELISA和Western印迹方法检测经 10 -7mol/L醛固酮干预 2 4h ,细胞培养上清液中层黏蛋白 (FN)和Ⅳ型胶原的浓度。结果　大鼠系膜细胞能表达CYP11B2mRNA ,且细胞培养上清液中检测到醛固酮 ,浓度为 1 0 6 5pg/ 10 6个细胞。 10 -8、10 -7mol/LAngⅡ (10 -8mol/L :2 15± 0 10 ,10 -7mol/L :1 16± 0 0 4vs非干预组 0 77± 0 0 3,P <0 0 0 1;)和 9mmol/L的KCl (1 2 7± 0 11vs非干预组 0 89± 0 12 ,P <0 0 5 )均能显著提高CYP11B2mRNA的表达。大鼠系膜细胞有MR和 11β -H     

醛固酮抑制肾小球系膜细胞的自噬激活加速其在氧化应激状态下的凋亡

目的 探讨醛固酮对肾小球系膜细胞自噬激活的影响。 方法 通过3种经典的自噬活性检测方法检测醛固酮对体外培养的系膜细胞自噬的影响:(1)蛋白质印迹法检测不同浓度的醛固酮干预肾小球系膜细胞系(HMCL)后自噬相关的蛋白标记物LC3、SQSTM1/P62的表达水平变化;(2)向系膜细胞系转入GFP-LC3的真核表达质粒,用激光共聚焦显微镜观察醛固酮干预下系膜细胞荧光自噬点数量的变化并进行统计学分析;(3)通过电子显微镜观察醛固酮干预下系膜细胞自噬泡数量的变化并进行统计学分析。通过光镜下形态学观察及蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)剪切体的表达情况,分析醛固酮干预下系膜细胞在过氧化氢刺激后凋亡水平的变化。 结果 3种方法均证实高生理剂量醛固酮可以抑制系膜细胞自噬激活:(1)10^-7 mol/L醛固酮干预12 h后自噬标记蛋白LC3Ⅰ向LC3Ⅱ转化减少约40%;(2) 10^-7 mol/L醛固酮干预12 h能够降低饥饿及雷帕霉素诱导的系膜细胞自噬点数量,降低的比率分别为60%和47%;(3)醛固酮干预后可减少饥饿和雷帕霉素诱导的系膜细胞自噬泡的增加。10^-7 mol/L醛固酮干预系膜细胞12 h后接受过氧化氢2.5×10^-6 mol/L刺激较对照组细胞凋亡的比率明显增加(P <0.05)。 结论 高生理浓度的醛固酮能够抑制系膜细胞的基础自噬激活并促进系膜细胞在氧化应激条件下的凋亡。     

醛固酮诱导MIN6细胞凋亡及作用机制研究

目的 探讨醛固酮对小鼠胰岛B细胞株MIN6细胞凋亡的影响及可能的作用机制.方法 体外培养的小鼠胰岛B细胞株MIN6分为对照组(加入无血清的DMEM培养基)、醛固酮组(加入10、100、1 000 nmol/L醛同酮进行干预)和醛固酮+拮抗剂组(以100 nmol/L醛固酮和100 nmol/L醛固酮拮抗剂螺内酯共同干预).采用MTT法检测细胞活性;放射免疫分析法检测葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS);流式细胞术结合FITC-Annexin V/PI荧光染色检测细胞凋亡;ELISA法检测细胞培养上清液中Caspas-3活性;Western blotting法检测凋亡相关蛋白细胞色素C(Cyt-C)、Bcl-2、Bax和磷酸化蛋白激酶C(p-Akt)的表达.结果 MIN6细胞增殖活性随醛固酮干预浓度的升高而下降,呈现浓度依赖性.在生理糖浓度(5.6 mmol/L)和高葡萄糖浓度(28 mmol/L)环境中,醛固酮组的GSIS均显著低于与对照组(P＜0.01),而醛固酮+拮抗剂组GSIS显著高于醛固酮组(P＜0.01).醛固酮组细胞凋亡率显著高于对照组(P＜0.01),而醛固酮+拮抗剂组细胞凋亡率显著低于醛固酮组(P＜0.01).与对照组比较,醛固酮组Caspase-3活性明显升高,Cyt-C表达上调,Bcl-2/Bax下降,p-Akt表达下调(均P＜0.01);而醛固酮+拮抗剂组对醛固酮组的Caspase-3活性升高及相关蛋白表达异常具有明显抑制作用.结论 醛固酮具有促进MIN6细胞凋亡的作用,其作用机制可能与Cyt-C、Bcl-2、Bax和Akt介导的线粒体信号途径有关.     

醛固酮对大鼠肾小球系膜细胞结缔组织生长因子基因表达的影响

目的 探讨醛固酮(ALD)对大鼠肾小球系膜细胞结缔组织生长因子(CTGF)基因表达的影响.方法 ①以不同浓度的ALD (10-11、10-10、10-9、10-8、10-7mol/L)刺激肾小球系膜细胞72 h后,用半定量KT-PCR.法检测细胞中CTGF mRNA的表达.②以10-9 mol/L的ALD刺激肾小球系膜细胞不同时间(12、24、48、72 h)后,用半定量RT-PCR法检测细胞中CTGF mRNA的表达.结果 半定量RT-PCK结果显示,随着ALD浓度的升高,CTGF mKNA的表达量(以CTGF/GAPDH mRNA表示)明显增加.在10-7mol/L时达高峰,与对照组比较,差异有显著性(P＜0.01).表明ALD促进肾小球系膜细胞CTGF mRNA的表达,且具有一定的剂量-反应关系.以10-7mol/L的ALD作用于大鼠肾小球系膜细胞12～72h,随着作用时间的延长,CTGF mRNA的表达量明显增加,在72 h时达高峰,与对照组比较,差异有显著性(P＜0.01).表明ALD促进系膜细胞CTGF mRNA的表达,且具有一定的时间-效应关系.结论 ALD促进大鼠肾小球系膜细胞CTGF mRNA的表达,从而促进慢性肾脏病进展.     

曲格列酮影响大鼠系膜细胞增殖和凋亡的实验研究

目的 探讨曲格列酮对大鼠系膜细胞(mesangial cell,MC)增殖和凋亡的影响.方法 以体外培养大鼠系膜细胞为研究对象,应用不同浓度曲格列酮刺激系膜细胞.采用流式细胞仪检测系膜细胞凋亡,并用DNA倍体分析检测细胞周期,采用锥虫蓝染色检测系膜细胞增殖.结果 系膜细胞经低浓度曲格列酮(1、5 μmol/L)干预后出现明显凋亡,与正常对照组相比,差异有统计学意义(均P<0.05).经不同浓度曲格列酮干预后,系膜细胞增殖明显抑制,与正常对照组相比,差异有统计学意义(均P<0.05).同时5 μmol/L曲格列酮干预系膜细胞后可将细胞周期阻滞于G2/M期.结论 曲格列酮可明显抑制系膜细胞增殖,促进系膜细胞凋亡.     

1,25-二羟基维生素D3对肾小球系膜细胞生长的作用

目的 研究1,25二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对大鼠肾小球系膜细胞生长及细胞周期的影响.方法 通过肾小球系膜细胞体外培养技术,用含有不同浓度(0～10-6mol/L)1,25(OH)2D3的培养液干预系膜细胞,作用不同时间,应用噻唑蓝(MTT)法检测其对系膜细胞生长及增殖的影响,显微镜观察细胞形态变化,流式细胞仪(FCM)检测其对系膜细胞周期及凋亡的影响.结果 0～10-6mol/L浓度的1,25(OH)2D3作用于系膜细胞48 h均能显著抑制系膜细胞生长及增殖(P<0.01),并呈浓度依赖性;一定浓度的1,25(OH)2D3(10-8mol/L)对系膜细胞生长的抑制作用在一定时间范围内随着时间的延长,其抑制作用增强.不同浓度的1,(OH)2D3作用系膜细胞72 h后,各组GO/GI期细胞含量均较对照组增高,S期含量随之减少,尤以10-6mol/L(P<0.01)、10-8mol/L(P<0.05)显著,并呈浓度依赖性,G2/M期含量无显著变化(P>0.05).各干预组均可见亚G1凋亡峰.结论 0～10-6mol/L浓度的1,25(OH)2D3能够抑制系膜细胞的生长及增殖,促进其凋亡,并呈浓度及时间依赖性.     

醛固酮灌注诱导大鼠肾小球损伤

目的:研究醛固酮(Ald)灌注对大鼠肾小球损伤及依普利酮的干预作用。方法:18只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为Ald灌注组(A)、依普利酮治疗组(E)、空白对照组(C)3组,分别皮下埋置渗透性微泵,A、E组均以1.5μg/h的浓度持续灌注Ald,E组以100 mg/(kg.d)依普利酮灌胃,C组由DMSO代替Ald,测定28 d内大鼠血压及蛋白尿,于第28天处死动物,测定血浆Ald水平,取肾脏观察病理改变。结果:A和E组血浆Ald水平均显著升高。A组血压和尿微量白蛋白排泄率(UAER)从第7天起均较同期C组增高(P<0.05),E组血压和UAER均较同期A组显著降低(P<0.05)。A组肾小球系膜细胞轻度增殖,系膜外基质轻度增宽,少数肾小球出现段性硬化;足突节段性融合,部分足细胞和系膜细胞有凋亡小体形成,E组病变较A组减轻。结论:血浆Ald水平持续增高有致肾小球损伤作用。     

阿托伐他汀对醛固酮诱导心脏成纤维细胞内皮素表达的影响

目的:研究阿托伐他汀对醛固酮诱导大鼠心脏成纤维细胞(CFs)内皮素(ET)表达的影响.方法:以培养的新生SD大鼠CFs为实验模型,放免法检测CFs培养液中ET水平,流式细胞术测定CFs中的ET-1含量,RT-PCR测定内皮素-1前体(ppET-1)mRNA的表达.结果:醛固酮(1×10-7 mol/L)组CFs培养液中ET水平和CFs中的ET-1含量及ppET-1mRNA的表达明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);醛固酮(1×10-7 mol/L) 阿托伐他汀(1×10-6,1×10-5,1×10-4 mol/L)组明显低于醛固酮(1×10-7 mol/L)组,差异有统计学意义(P＜0.01);醛固酮(1×10-7 mol/L) 阿托伐他汀(1×10-4 mol/L) 甲羟戊酸(1×10-3 mol/L)组明显高于醛固酮(1×10-7 mol/L) 阿托伐他汀(1×10-4mol/L)组,差异有统计学意义(P＜0.01),但和醛固酮(1×10-7 mol/L)组接近,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:阿托伐他汀可抑制醛固酮诱导的CFs ppET-1 mRNA表达以及ET-1的合成和分泌,其机制可能与甲羟戊酸代谢途径有关.     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。