可同时释放两种骨形态发生蛋白复合支架的制备

目的 研制一种可同时释放骨形态发生蛋白2 (BMP-2)和骨形态发生蛋白7(BMP-7)的生物活性复合支架,以应用于骨组织工程的研究.方法 分别采用复乳溶剂挥发法和相分离法制备负载BMP-2和BMP-7的聚乳酸/羟基乙酸-聚乙二醇(PGLA-PEG)微球和三维多孔的聚己内酯(PCL)支架.然后采用改良的二氯甲烷熏蒸法将PGLA-PEG微球黏附在PCL支架上,形成同时负载BMP-2和BMP-7的复合支架,并检测BMP-2和BMP-7的缓释效果.将人成骨细胞系hFOB1.19分别种植在复合支架和传统支架中,研究支架上的细胞增殖能力和成骨分化能力.结果 制备的复合支架能同时缓慢地释放BMP-2和BMP-7.细胞培养第10天,复合支架上的细胞活性优于传统支架(P＜0.01),细胞形态正常.复合支架上细胞的碱性磷酸酶和Ⅰ型胶原蛋白、骨钙素、骨桥蛋白3种成骨基因的mRNA水平均高于传统支架(P＜0.05,P＜0.01).结论 成功研制出一种可同时释放BMP-2和BMP-7的生物活性复合支架,并可用于骨组织工程的研究.     

负载转化生长因子β3微球的壳聚糖三维支架的制备

目的 探讨制备负载转化生长因子β3微球的壳聚糖三维支架的可行性.方法 利用冻干法制备壳聚糖三维支架,扫描电镜观察并测定其水结合率及孔隙率.利用乳化交联法制备负载转化生长因子β3的壳聚糖微球,检测负载微球的体外缓释情况及吸水膨胀率.制作负载转化生长因子β3微球的壳聚糖三维支架,扫描电镜观察支架形态特征.结果 壳聚糖三维支架孔隙较为一致,孔隙直径(180.4±35.3)μm,孔隙率(83.2±0.6)％,与水的结合能力为(123±5)％.电镜观察微球表面光滑,分散性好,粒径(28.5 ±5.1)μm.对壳聚糖微球体外缓慢释放TGF-β3连续监测7d,总释放率为(46.2±0.3)％.负载TGF1-β3微球的壳聚糖三维支架观察见微球在支架中分布均匀.结论 负载TGF-β3微球的壳聚糖三维支架的制备技术成熟,理化性质稳定,微球缓释TGF-β3效果理想,可作为理想的组织工程材料.     

环丙沙星/壳聚糖植入微球的制备及其体外释放研究

目的:探讨制备植入微球的工艺、确定调控微球缓释速率的途径.方法:以水溶性羧甲基壳聚糖(CMC)作为缓释辅料,以环丙沙星(CPX)为模型药物通过乳化交联工艺制备CPX/CMC微球;应用扫描电镜等方法考察其理化特性;建立持续流动释放系统,检测微球的体外释放特性和影响因素.结果:微球的理化特性受工艺条件如温度、离子强度、载药量比例量等因素影响;CPX体外释放行为符合Higuchi方程,微球的体外释放速率与微球交联度、粒径呈负相关,与载药量呈正相关,与酶的降解无关.结论:CMC可作为缓释微球辅料;乳化交联的制备工艺简单且稳定;微球的释放速率可控.CMC微球是一种良好的药物缓释载体.     

左氧氟沙星羧甲基壳聚糖缓释微球的制备及其体外释放研究

目的:探讨乳化交联法制备可植入左氧氟沙星羧甲基壳聚糖缓释微球的最佳工艺,了解微球体外释药规律.方法:按正交设计,考察不同壳聚糖浓度、投药比、交联度、乳化转速条件对质量指标的影响,选出最佳方案,进一步用转篮法检测微球的体外释放特性.结果:各因素对所制微球综合指标的影响大小依次为:壳聚糖浓度＞投药比＞乳化转速＞交联度,用优化后工艺制得微球平均粒径64.55μm,载药量21.69%,包封率58.07%,体外释放行为符合Higuchi方程,T 50为47.01 h,7 d累计释放量72.02%.结论:本法所制缓释微球工艺稳定,微球在体外具有缓释作用.     

阿司匹林缓释微球的制备及体外缓释效果评估

目的:阿司匹林(acetylsalicylic acid, aspirin)作为经典非甾体抗炎药,已被证实具有抗炎、调节免疫和促矿化作用,但是如何实现长期缓释aspirin并实现促进骨再生仍有待研究。本研究拟构建微球缓释体系,实现aspirin药物长期稳定缓慢释放,从而实现更为理想的成骨效果。方法:(1)合成制备三种缓释微球支架:① 单纯物理浸提法合成硅酸钙(calcium silicate, CaSiO₃)负载aspirin微球(CaSiO₃+aspirin),② 水包油(oil/water, O/W)乳化法制备聚乳酸羟基乙酸(poly lactic-co-glycolic acid, PLGA)负载aspirin微球(PLGA+aspirin),③ O/W乳化法制备PLGA复合CaSiO₃负载aspirin微球(PLGA+CaSiO₃+aspirin),并通过调整PLGA与CaSiO₃的比例,得到材料的最佳形貌。(2)缓释效果评价:用分光光度计测第1、2、4、6、9、13、17、21、24、30、36、45天微球浸提液的aspirin浓度,计算微球的aspirin载药率,绘制三种缓释微球支架的aspirin累积释放曲线并评价其缓释效果。结果:(1)环境扫描电镜下观察,三种微球支架表面结构规整,粒径均匀,但PLGA+aspirin组微球存在少量团聚现象,CaSiO₃+aspirin组部分微球破裂,PLGA+CaSiO₃+aspirin组微球均匀分布于CaSiO₃粉末上。(2)三组的载药率分别为(1.06±0.04)%、(7.05±0.06)%和(6.75±0.18)%。(3)95%药物缓释时间分别为3 d、24 d和36 d,PLGA+CaSiO₃+aspirin微球支架释放时间显著长于其余两组,且释放速率更为稳定。结论:PLGA+CaSiO₃+aspirin复合微球支架具有较理想的阿司匹林缓释效果,该复合微球有望成为理想的成骨材料。     

吗啡-壳聚糖缓释微球的制备及其体外药物释放性能研究

目的应用乳化-离子交联法制备负载盐酸吗啡的壳聚糖微球并考察初始吗啡量和不同交联剂用量对微球载药量、包封率、体外缓释性能的影响。方法相对分子质量50000,脱乙酰度大于或等于90%的壳聚糖100mg,分别加入盐酸吗啡20、30、40、50mg溶于2%的乙酸制成20mg/ml的吗啡壳聚糖乙酸溶液作为水相,缓慢加入到15ml含0.75ml司盘80的大豆油中电动搅拌700r/min,温度35℃,乳化时间1.5小时。乳化完成后以微量注射泵缓慢滴入10mg/ml的三聚磷酸钠溶液进行交联,壳聚糖与三聚磷酸钠质量比分别为5∶1、7∶1、9∶1,交联时间2h。丙酮、无水乙醇去油干燥测定载药量、包封率和体外释放曲线。结果微球载药量随初始吗啡量的增加而增加,包封率随初始吗啡量的增加而减小,交联剂用量越大缓释作用越明显。结论制备的吗啡-壳聚糖缓释微球具有一定的缓释作用。     

可长时间缓释骨形态发生蛋白2的聚己内酯复合支架的制备及应用

目的 制备一种可长时间缓释骨形态发生蛋2(BMP-2)的聚己内酯(PCL)复合支架,并通过检测其对人源骨髓间充质于细胞(BMSC)成骨分化的影响探讨其在骨组织工程中的应用.方法 将磷脂(PL)和BMP-2混合形成的BMP-2/PL混合物(B/P)分散在二氯甲烷中,与PCL混合后,采用相分离法制备负载BMP-2的三维PCL-B/P复合支架和PCL-B传统支架,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两种支架的BMP-2缓释效果.将BMSC种植在PCL-B传统支架和PCL-B/P复合支架中,分别采用CCK-8法和实时定量PCR(qPCR)检测两种支架上BMSC的增殖和成骨分化能力.结果 与PCL-B传统支架对比,PCL-B/P复合支架对BMP-2缓释效果更佳,缓释时间更长,可达22 d.在BMSC培养的第7、14和21天,PCL-B/P复合支架上BMSC的增殖能力均优于PCL-B传统支架(P＜0.05),且PCL-B/P复合支架上BMSC中碱性磷酸酶和Ⅰ型胶原蛋白、骨钙、骨桥蛋白3种成骨基因mRNA的表达均高于PCL-B传统支架(P＜0.05,P＜0.01).结论 成功地制备出一种可长时间缓释BMP-2的高分子三维PCL-B/P复合支架,其较PCL-B传统支架能更好地诱导BMSC的增殖和成骨分化.     

载VEGF/VAN多层海藻酸盐-壳聚糖缓释微球的制备

目的：制备载有血管内皮生长因子（VEGF）和万古霉素（VAN）的多层海藻酸盐-壳聚糖缓释微球,探讨其体外释放特性。方法：采用乳化交联和层层自组装技术制备微球;正交实验设计考察海藻酸钠浓度、氯化钙（CaCl₂）浓度、油水比及span80浓度对VEGF和VAN包封率（EE）和载药量（DL）的影响,以优化制备工艺;扫描电子显微镜（SEM）观察多层微球的表面形貌和粒径;傅里叶变换红外光谱仪（FTIR）检测海藻酸与壳聚糖的自组装情况;分别采用ELISA双抗体夹心法和紫外分光光度法检测VEGF和VAN的EE、DL和体外释放量并绘制累积释放曲线。结果：所制备微球呈黄褐色粉末状;SEM观察,微球呈圆球形,表面光滑,分散性较好,平均粒径约为50μm。制备缓释微球时,海藻酸钠浓度为1.0 g·mL^-1、CaCl₂浓度为8 g·mL^-1、油水比为3：1及span80浓度为2%时为最佳配方,VEGF和VAN的EE分别达49.63%和16.67%,体外累计释放时间分别为16.5和12.5d,释放量可达95%。结论：本研究通过优化制备工艺,制备了粒径较小、EE较高、缓释效果较好的载VEGF/VAN多层海藻酸盐-壳聚糖缓释微球。     

TGF-β1壳聚糖缓释微球的制备和体外检测

[目的]通过制备新型的转化生长因子-β1(TGF-β1)缓释系统,并对其载药、体外释药及降解特性进行检测,评估应用生物可降解壳聚糖微球作为TGF-β1控制释放载体的可行性.[方法]应用三聚磷酸钠(TPP)作为交联剂,以乳化交联法制备具有控制释放功能的负载TGF-β1的壳聚糖微球;以牛血清白蛋白(BSA)作为模板蛋白,应用相同的方法制备负载BSA的微球.应用扫描电镜、微镜粒度分、药物包封率测定、体外药物释放动力学检测等方法分析微球的特性.[结果]制备的微球球形良好,球体表面光滑,具有较高的TGF-β1包封效率90.1%).持续7 d的药物释放试验表明,BSA与TGF-β1两种蛋白均可以从微球中缓慢释放,其中TGF-β1的释放率低于BSA的释放率.溶菌酶溶液降解作用下,4周的体外降解过程中,可见微球质量持续下降并伴有明显的微球形貌改变.[结论]应用乳化交联法可制备负载TGF-β1的壳聚糖缓释微球.这种新型药物控制释放系统在细胞因子的控制释放及软骨组织工程中有潜在的应用价值.     

葛根素壳聚糖微球的制备及体外释药特性

目的：以脱乙酰壳聚糖为药物载体,制备了葛根素壳聚糖微球,考察葛根素壳聚糖微球在体外药物释放特性。方法以液体石蜡为油相,采用乳化-交联法制备葛根素壳聚糖微球,高效液相色谱法测定葛根素的含量。结果制备的葛根素壳聚糖微球形态圆整,大小均匀,表面光滑,平均粒径为9．56μm ,葛根素包封率为72．20％,平均载药量为17．82％。结论体外药物释放结果显示：以壳聚糖为载体,采用乳化-交联法制备的葛根素壳聚糖微球具有良好的缓释效果。     

Biodegradable chitosan scaffolds containing microspheres as carriers for controlled transforming growth factor-β1 delivery for cartilage tissue engineering

Background Natural articular cartilage has a limited capacity for spontaneous regeneration. Controlled release of transforming growth factor-β(1) (TGF-β(1)) to cartilage defects can enhance chondrogenesis. In this study, we assessed the feasibility of using biodegradable chitosan microspheres as carriers for controlled TGF-β(1) delivery and the effect of released TGF-β(1) on the chondrogenic potential of chondrocytes.Methods Chitosan scaffolds and chitosan microspheres loaded with TGF-β(1) were prepared by the freeze-drying and the emulsion-crosslinking method respectively. In vitro drug release kinetics, as measured by enzyme-linked immunosorbent assay, was monitored for 7 days. Lysozyme degradation was performed for 4 weeks to detect in vitro degradability of the scaffolds and the microspheres. Rabbit chondrocytes were seeded on the scaffolds containing TGF-β(1) microspheres and incubated in vitro for 3 weeks. Histological examination and type II collagen immunohistochemical staining was performed to evaluate the effects of released TGF-β(1) on cell adhesivity, proliferation and synthesis of the extracellular matrix.Results TGF-β(1) was encapsulated into chitosan microspheres and the encapsulation efficiency of TGF-β(1) was high (90.1%). During 4 weeks of incubation in lysozyme solution for in vitro degradation, the mass of both the scaffolds and the microspheres decreased continuously and significant morphological changes was noticed. From the release experiments, it was found that TGF-β(1) could be released from the microspheres in a multiphasic fashion including an initial burst phase, a slow linear release phase and a plateau phase. The release amount of TGF-β(1) was 37.4%, 50.7%, 61.3%, and 63.5% for 1, 3, 5, and 7 days respectively. At 21 days after cultivation, type II collagen immunohistochemical staining was performed. The mean percentage of positive cells for collagen type II in control group (32.7%±10.4%) was significantly lower than that in the controlled TGF-β(1) release group (92.4%±4.8%, P<0.05). Both the proliferation rate and production of collagen type II in the transforming growth factor-β(1) microsphere incorporated scaffolds were significantly higher than those in the scaffolds without microspheres, indicating that the activity of TGF-β(1) was retained during microsphere fabrication and after growth factor release.Conclusion Chitosan microspheres can serve as delivery vehicles for controlled release of TGF-β(1), and the released growth factor can augment chondrocytes proliferation and synthesis of extracellular matrix. Chitosan scaffolds incorporated with chitosan microspheres loaded with TGF-β(1) possess a promising potential to be applied for controlled cytokine delivery and cartilage tissue engineering.     

载普伐他汀钠的壳聚糖微球的制备及性能评价

目的制备一种包载普伐他汀钠,以获得长效释放的载药微球。方法以京尼平为交联剂制备载普伐他汀钠的壳聚糖微
球,考察壳聚糖相对分子质量、油相水相比、反应温度、搅拌速度等对壳聚糖微球形成的影响,通过扫描电镜观察其微观形貌,测
定微球的包封率以及不同pH条件下的溶胀度,并考察了普伐他汀钠的体外累积释药情况。结果载普伐他汀钠药微球体外释
放时间长达31 d以上,反应条件不同,药物释放速度不同,普伐他汀的包封率可达54.7%。最佳制备条件为：壳聚糖的粘度为
200~400 mPa.s,油水比10∶1,搅拌速度850 r/min,温度40 ℃。结论京尼平交联载普伐他汀钠的壳聚糖微球具有较好的长效缓
释能力,并且可通过调节交联时间控制其对药物的释放速度。
     

氟比洛芬聚丙烯酸树脂RL/RS缓释微球的制备

目的观察溶剂挥发法制备的氟比洛芬聚丙烯酸树脂RL/RS微球的体外释药特性。方法以氟比洛芬为主药,司盘-80为乳化剂,硬脂酸镁为抗黏剂,丙酮-液状石蜡挥发法制备氟比洛芬微球。通过紫外分光光度仪、电镜扫描及差热分析研究微球的性质,并于pH 7.2的磷酸盐缓冲溶液中测试体外释放。结果制备的微球为白色、流动性好的粉末;用显微镜观察微球为圆形的球体,直径为50～190μm;差热分析表明,药物具有稳定性且药物与聚合物间不存在反应;体外释放度测试显示,微球能稳定地在pH 7.2磷酸盐缓冲溶液中释放,药物4 h累积释放量约50%,12 h不少于80%。结论溶剂挥发法制备的微球工艺稳定,得到的氟比洛芬聚丙烯酸树脂RL/RS微球呈现缓释特性,微球体外释放过程符合Higuchi方程。     

肺靶向甲强龙琥珀酸钠明胶微球的制备

目的:探讨肺靶向甲强龙琥珀酸钠明胶微球的制备、稳定性及体外释药特性。方法:采用二步法制备肺靶向甲强龙琥珀酸钠明胶微球,并结合甲强龙琥珀酸钠的水解特性测定其载药量和体外释药特性。结果:制备出吸胀后平均算术粒径(9.9±3.5)μm的微球,515μm的微球占82.7%,载药量20.5%,在pH7.4PBS缓冲液中的释药规律符合Weibull方程,t1/2为43.5min。微球在室温下放置3个月形态及载药量无明显改变。结论:本方法制备的甲强龙琥珀酸钠明胶微球可用于肺靶向治疗。     

羧甲基壳聚糖/环丙沙星植入缓释微球防治局部感染的实验研究

目的:探索局部植入抗菌药缓释微球防治术后局部感染的可行性及效果.方法:以羧甲基壳聚糖为缓释辅料,通过乳化交联工艺制备负荷盐酸环丙沙星的植入缓释微球;建立模拟体内释放环境的体外释放系统,评价微球体外释放特性和抑菌能力;利用高效液相色谱法检测药物的体内释放特性;利用透射电镜和病理检查检测微球的体内降解和组织相容性.结果:羧甲基壳聚糖环丙沙星植入缓释微球在体外的释放达7 d以上;微球植入体内后局部药物浓度维持在金葡菌MIC90以上约10 d,无明显突释现象;微球植入动物体内后无局部感染和切口愈合不良;透射电镜和病理结果发现微球和组织之间无明显的炎性异物反应.结论:羧甲基壳聚糖环丙沙星植入缓释微球在体内具有良好的生物相容性和释药行为,可用于植入体内防治局部感染.     

载VEGF荧光PLGA亚微米缓释微球的制备及体外控释特性

目的 制备生物可降解聚乳酸羟基乙酸共聚物(PLGA)包裹的载血管内皮生长因子(VEGF)荧光缓释亚微米微球,了解微球装载以及释放VEGF的效率,体外观察荧光微球的降解.方法 采用双相溶剂挥发法制备PLGA载VEGF亚微球,激光共聚焦及扫描电镜观察荧光微球体外降解,ELISA法观察其载药效率及释药曲线.结果 双相溶剂挥发法成功制备了PLGA荧光载VEGF亚微米微球,扫描电镜观察及激光共聚焦显微镜观察微球形态正常,激光粒度分析仪观察粒径0.5～1.0 μm,分布均匀,定量ELISA检测微球载VEGF率与包封率分别为3.91％和51.42％,荧光显微镜观察其缓慢降解,定量ELISA检测VEGF释放平缓,呈线性零级释放趋势.结论 直径0.5～1.0μm的PLGA载VEGF荧光亚微米微球载药效率较高,呈线性零级释放,荧光能够直接观测.