4-1BB基因在不同分化胃癌细胞株中的表达

目的：研究共刺激因子4-1BB在人胃高分化腺癌细胞株MKN-28、人胃中分化腺癌细胞株SGC-7901、人胃低分化腺癌细胞株BGC-823、人胃粘液腺癌细胞株MGC-803中的表达及其生物学意义。方法：用RT-PCR法测定胃癌细胞株中4-1BB mRNA表达;免疫细胞化学法测定胃癌细胞株中4-1BB蛋白表达;MTT法测定人淋巴细胞对胃癌细胞的体外杀伤活性;ELISA法检测人淋巴细胞与胃癌细胞共培养上清液中IL-2、IL-10、TNF-α的含量。结果：RT-PCR结果示4-1BB mRNA表达率从高到低依次为：MGC-803（77.30%）、BGC-823（71.68%）、SGC-7901（40.06%）、MKN-28（37.65%）。免疫细胞化学结果显示4-1BB着色程度由深到浅依次为：MGC-803、BGC-823、SGC-7901、MKN-28。MTT结果显示各时间段（24、48、72h）不同效靶比（10∶1,20∶1,40,∶1）下,人淋巴细胞对胃癌细胞的体外杀伤活性由高到低的顺序为：MKN-28、SGC-7901、BGC-823、MGC-803。ELISA结果显示在各效靶细胞比下,人淋巴细胞与胃癌细胞共培养上清液中IL-2、TNF-α的含量由高到低的顺序均为：MKN-28、SGC-7901、BGC-823、MGC-803。而IL-10的含量由高到低的顺序为：MGC-803、BGC-823、SGC-7901、MKN-28。结论：人胃癌细胞株MKN-28、SGC-7901、BGC-823、MGC-803中4-1BB基因的mRNA和蛋白均有表达,且胃癌细胞株的恶性程度越高其4-1BB表达水平越高;淋巴细胞对低表达4-1BB胃癌细胞的杀伤力较高;提示4-1BB可能通过抑制细胞因子TNF-α、IL-2和促进细胞因子IL-10的产生调节肿瘤免疫。     

miRNA-335基因启动子区甲基化与胃癌细胞不良生物学行为的关系

目的:探讨miR-335基因启动子区异常甲基化状态对胃癌细胞系中miR-335表达水平的影响,以及miR-335基因启动子区甲基化状态对胃癌细胞侵袭,迁移,以及增殖能力的影响。方法:1株永生化胃黏膜上皮细胞系(GES-1)和4株胃癌细胞系(SGC-7901,MKN-45,BGC-823和AGS)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测胃癌细胞株miR-335及CRKL的表达水平。甲基化特异性PCR(MSP)方法检测胃癌细胞株miR-335的基因启动子区甲基化状态。应用MTT方法检测恢复miR-335表达对胃癌细胞增殖能力的影响,Transwell侵袭迁移实验及划痕愈合实验分析恢复miR-335表达对胃癌细胞系侵袭及迁移能力的影响。结果:MSP实验结果表明,MKN-45、SGC-7901和BGC-823细胞系均存在基因启动子区异常的高甲基化状态,AGS细胞系基因启动子区亦呈部分高甲基化状态。去甲基药物5-aza-2′-deoxycytidine处理后胃癌细胞miR-335的表达水平可升高2~3倍。Transwell侵袭迁移实验及划痕愈合实验表明miR-335表达水平恢复后SGC-7901细胞的侵袭和迁移能力明显降低。MTT实验结果表明5-aza-2′-deoxycytidine处理后的SGC-7901细胞系与对照组相比,增殖能力显著降低。结论:miR-335启动子区的异常高甲基化状态抑制了miR-335在胃癌细胞系中的表达,恢复miR-335的表达水平可以抑制胃癌细胞的增殖,迁移和侵袭能力。miR-335为胃癌的肿瘤抑制因子。     

MicroRNA-335的表遗传学调控机制及其与胃癌患者临床病理特征的关系

目的:探索miR-335基因启动子区甲基化状态对胃癌组织及细胞系中miR-335表达水平的影响,以及miR-335基因启动子区甲基化状态与胃癌患者临床病理特征以及预后的关系。方法:收集2012年7月1日-2014年7月1日中国医科大学附属第四医院就诊经病理诊断为原发性胃癌并行根治性手术的108例新鲜胃癌组织及配对癌旁组织,1株永生化的胃黏膜上皮细胞系(GES-1)和4株胃癌细胞系(SGC-7901、MKN-45、BGC-823和AGS)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测胃癌细胞株及108例胃癌患者肿瘤组织中miR-335的表达水平。甲基化特异性PCR(MSP)方法检测胃癌细胞系及胃癌患者肿瘤组织中miR-335的基因启动子区甲基化状态。分析miR-335基因启动子区甲基化状态对胃癌患者临床病理特征的影响。结果:qRT-PCR检测结果显示,miR-335在胃癌细胞株中的表达水平显著低于正常胃黏膜上皮细胞株GES-1［MKN-45,0.154±0.016-fold(P＜0.01);SGC-7901,0.138±0.013-fold(P＜0.01);BGC-823,0.432±0.076-fold(P＜0.01);AGS,0.749±0.072-fold(P=0.01)］。miR-335在108例胃癌组织中的表达水平较癌旁组织存在明显下降,差异显著（P＜0.001）。MSP的实验结果表明,MKN-45、SGC-7901、AGS和BGC-823细胞株均存在基因启动子区异常高甲基化状态。miR-335基因启动子区的高甲基化状态与肿瘤大小(P=0.004)、淋巴结转移(P=0.046)、淋巴管浸润(P=0.001) 和miR-335 低表达 (P<0.001) 显著相关。结论:miR-335启动子区的高甲基化状态抑制了miR-335在胃癌细胞中的表达,miR-335的基因启动子区异常高甲基化状态与胃癌患者的肿瘤大小、淋巴结转移以及淋巴管浸润显著相关。     

PIK3CA过表达对胃癌细胞侵袭力影响的探讨

目的:探讨PIK3CA过表达对胃癌细胞侵袭力的影响.方法:采用RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测3种不同分化胃癌细胞HGC-27、BDC-823和SGC-7901中PIK3CA mRNA及蛋白表达水平.通过Transwell侵袭小室法检测其侵袭力,分析PTK3CA表达水平变化对胃癌细胞侵袭力的影响.结果:PIK3CAmRNA及蛋白在未分化HGC-27细胞中表达水平最高,细胞侵袭力最强(穿膜细胞数为45.24±3.16),在低分化BGC-823细胞(穿膜细胞数为22.28±1.65)及中等分化的SGC-7901细胞(穿膜细胞数为14.42±1.02)中分别次之(P<0.05).结论:PIK3CA mRNA及蛋白表达水平越高,细胞侵袭力越强,且后者随前者表达减少而减弱;PIK3CA过表达可能在胃癌细胞侵袭中起重要作用.     

lncRNA 00707 通过miR-613 调控胃癌MGC-803、SGC-7901 细胞的恶性生物学行为

[摘要] 目的:探讨长链非编码RNA 00707（lncRNA 00707）和微小RNA-613(miR-613)对胃癌细胞增殖和转移的调控作用及其相关机制。方法：收集2014 年1 月至2018 年6 月青海省人民医院肿瘤外科89 例原发性胃癌组织及癌旁组织标本以及胃癌MGC-803、SGC-790、BGC-823 细胞,采用qPCR实验检测胃癌组织和细胞系中lncRNA 00707、miR-613 的表达水平。分别建立lncRNA00707 低表达和过表达细胞模型,采用CCK-8 实验检测MGC-803、SGC-7901 细胞增殖能力,Transwell 法检测MGC-803、SGC-7901 细胞迁移和侵袭能力。用双荧光素酶基因报告实验验证lncRNA 00707 与miR-613 的靶向关系。结果：与癌旁组织相比,胃癌组织中lncRNA 00707 呈明显高表达(P<0.01),lncRNA 00707 表达水平与WHO分期呈正相关(P<0.05);与正常细胞系GES-1 相比,胃癌细胞系中lncRNA 00707 表达明显上调(P<0.05)。敲低lncRNA 00707 可明显抑制SGC-7901 细胞的增殖、侵袭和迁移能力(均P<0.05);lncRNA 00707 过表达可明显提高MGC-803 细胞的增殖和迁移能力(P<0.05)。与阴性对照组相比,lncRNA00707 过表达显著降低了miR-613 荧光素酶报告载体的荧光素酶活性,而下调MGC-803 和SCG-7901 细胞中lncRNA 00707,miR-613 的表达显著增加（均P＜0.01）。结论：lncRNA 00707 在胃癌组织和细胞系中发挥促癌效应,其可以通过抑制miR-613 而促进胃癌MGC-803 和SCG-7901细胞的增殖和转移。     

沉默ERK5对胃癌SGC-7901、BGC-823细胞生物学功能的影响

目的 探讨沉默细胞外信号调节激酶5（extracellular signal regulated kinase 5,ERK5）对胃癌细胞SGC-7901、BGC-823生物学功能的影响。方法 实时荧光定量PCR法（qRT-PCR）检测人胃癌细胞株和人胃黏膜上皮细胞株ERK5 mRNA的表达水平。应用短发荚RNA（shRNA）干扰技术沉默胃癌细胞SGC-7901、BGC-823中ERK5的表达。CCK-8法检测ERK5沉默后胃癌细胞的生长能力,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,Transwell 实验检测细胞侵袭和迁移能力,流式细胞仪检测细胞凋亡和周期分布。结果 与胃黏膜上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞SGC-7901、BGC-823、AGS、HGC-27中ERK5 mRNA均呈高表达,相对表达量分别为2.696±0.501、1.865±0.185、1.793±0.137和1.530±0.093（P<0.05）。ERK5-shRNA有效沉默胃癌细胞SGC-7901、BGC-823中ERK5的表达水平,沉默效率分别为（74.4±1.5）%和（69.1±3.9）%,差异有统计学意义（P<0.05）。沉默 ERK5的表达能有效抑制胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力（P<0.05）,而促进胃癌细胞凋亡（P<0.05）,并诱导细胞周期阻滞于G0/G1期。结论 沉默ERK5可显著抑制胃癌细胞SGC-7901、BGC-823的生长侵袭,促进细胞凋亡,ERK5可能是胃癌治疗的潜在靶点。     

干涉Cul1蛋白对胃癌细胞增殖抑制机制的探讨

目的:应用siRNA干涉胃癌细胞中Cul1蛋白表达,观察Cul1蛋白沉默对胃癌细胞增殖的影响,并探计其相关机制.方法:将siRNA转染胃癌细胞BGC-823和SGC-7901,设空白对照组和干涉组,采用蛋白质印迹法检测胃癌细胞BGC-823和SGC-7901中Cul1及PCNA蛋白表达差异.采用CCK8法检测胃癌细胞的增殖活性;流式细胞术(FCM)观察胃癌细胞周期变化.结果:利用siRNA干涉Cul1蛋白表达后,胃癌细胞BGC-823和SGC-7901中Cul1表达水平明显降低,与空白对照组比较有统计学意义,P＜0.01;干涉Cul1蛋白后,其下游相关蛋白-增殖细胞核抗原PCNA表达也明显降低,与空白对照组比较有统计学意义,P＜0.01.CCK8法检测胃癌细胞增殖活性显著降低,与空白对照组比较,差异均具有统计学意义,P＜0.01.流式细胞术观察胃癌细胞周期变化,Cul1蛋白干涉后G1期细胞明显增多,S、G2/M期细胞减少,BGC-823细胞增殖指数(PI)31.68±1.57,干涉Cul1蛋白后PI值为23.74±2.14;SGC-7901 PI值36.04士2.75,干涉Cul1蛋白后PI值为27.29±1.25;两组比较均具有统计学意义,P＜0.05.结论:利用siRNA干涉人胃癌细胞BGC-823、SGC-7901中Cul1蛋白后,胃癌细胞增殖受到明显抑制,其机制可能是通过抑制其下游蛋白PCNA表达.     

香加皮杠柳苷联用TRAIL对胃癌SGC-7901和MGC-803细胞的作用及其机制

目的:探讨香加皮杠柳苷(cortex periplocae,CPP)联用肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)对胃癌细胞的作用及其机制.方法:人胃癌细胞系SGC-7901、MGC-803培养完成后,采用50、100、200 ng/ml的CPP和1μg/ml的TRAIL单用或联合处理.MTS法检测SGC-7901和MGC-803细胞的增殖情况,流式细胞术检测其凋亡率,Westcm boltting检测pro-BID、Mcl-l、cleaved caspase-3、DR4、DR5的表达水平.结果:SGC-7901和MGC-803细胞经CPP (50、100、200 ng/ml)和TRAIL(1 μg/ml)联合处理24 h后,细胞增殖率明显低于空白对照组和对应的CPP各剂量单独处理组(/＜0.05或P＜0.01).SGC-7901和MGC-803细胞凋亡率均明显高于空白对照组和对应的CPP各剂量单独处理组(P＜0.05或P＜0.01).SGC-7901和MGC-803细胞中pro-BID、Mcl-1表达水平明显降低(均P＜0.05),cleaved caspase-3表达水平明显升高(P＜0.05),DR4和DR5受体的表达水平升高(均P＜0.05).结论:CPP协同TRAIL可明显诱导人胃癌SGC-7901和MGC-803细胞凋亡,增强人胃癌细胞对TRAIL的敏感性.     

维拉帕米通过调节Bcl-２表达对胃癌细胞株耐阿霉素的影响

摘 要：［目的］ 探讨Bcl-２在维拉帕米逆转胃癌阿霉素化疗耐药中的作用及初步机制研究。［方法］ MTT法检测维拉帕米逆转胃癌细胞系(SGC-7901、BGC-823、AGS、HGC-27) 对3种化疗药物（氟尿嘧啶、阿霉素、顺铂）的耐药能力;流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测维拉帕米对阿霉素作用下的胃癌细胞系（SGC-7901、HGC-27）凋亡水平的影响。Western blotting检测Bcl-２蛋白表达水平。［结果］ SGC-7901细胞系在单药阿霉素组和阿霉素联合维拉帕米组中的半数抑制浓度（IC50）分别为1.51±0.12μg/ml、0.22±0.01μg/ml,两组差异有统计学意义（P＜0.05）;HGC-27细胞中分别为1.24±0.19μg/ml、1.06±0.08μg/ml,两组差异无统计学意义（P＞0.05）。凋亡实验表明在SGC-7901细胞系中,单药阿霉素组中的细胞凋亡率为36.76%,阿霉素联合维拉帕米组为61.10%,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。HGC-27细胞系中,阿霉素组细胞凋亡率19.79%,阿霉素联合维拉帕米组为21.92%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。SGC-7901细胞中维拉帕米促进ADM组胃癌细胞凋亡指数明显高于HGC-27(P＜0.05)。qRT-PCR实验显示Bcl-２可能介导维拉帕米促进胃癌细胞凋亡;Western blotting结果显示在SGC-7901细胞中,阿霉素联合维拉帕米组Bcl-２的表达明显低于单药阿霉素组,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);而HGC-27中2组间差异无统计学意义。［结论］ 维拉帕米通过下调Bcl-２表达增强维拉帕米逆转胃癌细胞化疗耐受的能力,并促进胃癌细胞凋亡。     

曲古抑菌素A对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其RASSF1A基因表达的影响

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其RASSF1A基因表达调控的影响。方法用0.1、0.3、1.0μmol/L TSA分别处理人胃癌SGC-7901细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR、Western blot分别检测RASSF1A mRNA和蛋白表达水平。结果流式细胞仪分析表明,不同浓度TSA可诱导SGC-7901细胞凋亡,并呈浓度及时间依赖性（P<0.05）。TSA干预前SGC-7901细胞无RASSF1A mRNA及蛋白表达,而不同浓度TSA处理SGC-7901细胞后,RASSF1A mRNA及蛋白表达分别上调,呈浓度及时间依赖性(P<0.05)。结论TSA诱导SGC-7901细胞凋亡可能与RASSF1A基因异常乙酰化状态恢复导致基因重新表达有关。     

Ad-PTEN体外对SGC-7901胃癌细胞生长的抑制作用

目的:探讨腺病毒介导的PTEN基因表达体外对SGC-7901胃癌细胞生长抑制作用及其分子机制。方法:将携有PTEN基因的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-PTEN)感染SGC-7901胃癌细胞,用RT-PCR法检测Ad-PTEN在细胞中的表达,光学显微镜及荧光显微镜下观察Ad-PTEN感染细胞前后形态的变化,MTT法检测Ad-PTEN对SGC-7901胃癌细胞生长的抑制作用,用流式细胞术(FCM)检测SGC-7901胃癌细胞凋亡率。RT-PCR分析Bax、Bcl-2、p53、Survivin细胞凋亡相关基因的表达。结果:Ad-PTEN基因组感染SGC-7901胃癌细胞后,RT-PCR结果显示PTEN目的基因能在SGC-7901胃癌细胞中转录,其表达可明显抑制该胃癌细胞的生长,并诱导细胞凋亡。其凋亡机制可能与Bax/Bcl-2比值、p53基因表达上调、Survivin下调有关。结论:重组腺病毒Ad-PTEN具有抑制SGC-7901胃癌细胞生长和诱导细胞凋亡的作用。     

Ad-PTEN体外对SGC-7901胃癌细胞生长的抑制作用

目的：探讨腺病毒介导的PTEN基因表达体外对SGC-7901胃癌细胞生长抑制作用及其分子机制。方法：将携有PTEN基因的复制缺陷型腺病毒载体（Ad-PTEN）感染SGC-7901胃癌细胞,用RT-PCR法检测Ad-PTEN在细胞中的表达,光学显微镜及荧光显微镜下观察Ad-PTEN感染细胞前后形态的变化,MTT法检测Ad-PTEN对SGC-7901胃癌细胞生长的抑制作用,用流式细胞术（FCM）检测SGC-7901胃癌细胞凋亡率。RT-PCR分析Bax、Bcl-2、p53、Survivin细胞凋亡相关基因的表达。结果：Ad-PTEN基因组感染SGC-7901胃癌细胞后,RT-PCR结果显示PTEN目的基因能在SGC-7901胃癌细胞中转录,其表达可明显抑制该胃癌细胞的生长,并诱导细胞凋亡。其凋亡机制可能与Bax/Bcl-2比值、p53基因表达上调、Survivin下调有关。结论：重组腺病毒Ad-PTEN具有抑制SGC-7901胃癌细胞生长和诱导细胞凋亡的作用。     

EYA1 通过调控PTEN/PI3K/AKT信号通路抑制胃癌SGC-7901 细胞的恶性生物学行为

[摘要] 目的:探讨EYA1(eyes absent 1)通过调控PTEN/PI3K/AKT信号通路抑制胃癌SGC-7901细胞的恶性进展及其相关机制。方法:收集2016年6月至2018年6月陆军军医大学附属西南医院全军普通外科中心29例胃癌组织及其癌旁组织标本,采用Wb和qPCR实验检测胃癌组织和癌旁组织中EYA1 mRNA和蛋白的表达水平。人胃癌细胞株SGC-7901培养完成后,采用过表达EYA1质粒或siRNA干扰质粒转染胃癌SGC-7901细胞;分别采用MTT、流式细胞术、划痕愈合和Transwell实验检测胃癌SGC-7901细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力。结果:胃癌组织中EYA1 mRNA 和蛋白表达水平较癌旁组织均明显降低（P<0.01）;过表达EYA1可明显提高SGC-7901 细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.05）、抑制细胞凋亡（P<0.05）。过表达EYA1 可明显促进PTEN的表达、抑制PI3K/AKT通路的激活（均P<0.05或P<0.01）;但在PTEN干扰后以上作用均受到了明显抑制（均P<0.05或P<0.01）。结论:EYA1可通过促进PTEN的表达抑制PI3K/AKT信号通路,从而抑制胃癌SGC-7901细胞的恶性生物学行为。     

livin在人胃癌组织中的表达及其沉默后对胃癌细胞凋亡的影响

目的探讨凋亡抑制蛋白livin在人胃癌组织中的表达及其与临床病理的关系,研究小分子干扰RNA(siRNA)对胃癌细胞系(SGC-7901)livin基因表达的抑制作用,以及livin基因沉默后对胃癌细胞凋亡的影响。方法采用RT-PCR方法和Western blot法检测胃不同组织中livin基因mRNA和蛋白的表达,分析livin表达与临床病理的关系;设计两条针对人源livin基因的siRNA,分别转染SGC-7901细胞;RT-PCR法检测转染前后livin基因的表达情况,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测转染前后细胞增殖能力的变化以及细胞对5-氟尿嘧啶(5-Fu)、顺铂的半数抑制浓度(IC_(50))的改变,流式细胞术检测转染前后细胞凋亡变化。结果40例胃癌组织中,livin表达阳性率为47.5%(19/40);在癌旁组织和良性病变胃黏膜组织中,livin表达呈阴性。组织分化程度差、淋巴结转移者的livin表达率高(P<0.05)。livin特异性siRNA转染48h后,SGC-7901细胞中的livin mRNA表达受到抑制,细胞增殖能力减弱,对5-Fu和顺铂凋亡敏感性增加,同时IC_(50)降低(P<0.05)。结论livin在胃癌组织中表达增高,且与组织分化程度和淋巴结转移有关,可作为辅助胃癌预后判断的分子标志之一;RNA干扰可明显抑制livin基因表达,并使胃癌细胞的凋亡敏感性增加;livin有可能成为通过诱导细胞凋亡增强胃癌治疗效果的一个分子靶点。     

β-榄香烯对胃癌SGC-7901细胞c-myc基因表达及端粒酶活性的影响

目的：探讨β-榄香烯对胃癌CGC-7901细胞c-myc基因表达及端粒酶活性的影响。方法：应用β-榄香烯处理人胃癌细胞系SGC-7901后,采有RT-PCR检测c-myc基因mRNA的变化。采用流式细胞仪免疫荧光技术检测c-myc蛋白表达,用端粒酶PCR-ELISA法检测端粒酶活性,结果：β-榄香烯可下调c-myc基因表达及抑制端粒酶活性。结论：β-榄香烯可抑制胃癌细胞端粒酶活性,可能与下调c-myc基因表达有关。     

沉默乙酰肝素酶基因对胃癌生物学行为的影响

目的 探讨乙酰肝素酶(HPA)沉默对人胃癌裸鼠移植瘤生长、转移和血管形成的影响.方法 利用人胃癌SGC-7901细胞和HPA被沉默的SGC-7901-HPA-细胞,分别建立6只裸鼠皮下移植瘤模型,观察成瘤的时间、肿瘤生长速度和体积.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法分别检测皮下移植瘤组织中HPA mRNA和蛋白的表达,应用免疫组织化学SP法检测皮下移植瘤组织的微血管密度(MVD).将皮下移植瘤细胞分别注射入6只裸鼠腹腔,建立腹腔转移瘤,并观察成瘤情况.结果 SGC-7901细胞和SGC-7901-HPA-细胞在裸鼠皮下均能生长出移植瘤,分别在接种后第4天后和第7天后出现肉眼可见的肿瘤,接种SGC-7901-HPA-细胞的裸鼠移植瘤生长较慢,MVD为(11.35±1.94)个/高倍视野,明显低于接种SGC-7901细胞组[(20.69±1.20)个/高倍视野,P＜0.05].接种SGC-7901-HPA-细胞与接种SGC-7901细胞的裸鼠皮下移植瘤组织相比,HPA mRNA和蛋白的表达均降低.由SGC-7901细胞皮下移植瘤组织建立腹腔转移瘤的裸鼠,有3只成瘤,在肝脏、大网膜、肠系膜、右肾形成了4处转移灶,且体积较大.而接种SGC-7901-HPA-细胞皮下移植瘤组织的裸鼠,仅有1只在肝脏和右肾形成了转移灶,而且瘤体较小.结论 HPA沉默后抑制了人胃癌在裸鼠体内的生长、转移和血管形成,HPA有可能成为预防和治疗胃癌的一个新靶H点.     

miR-138-5p通过靶向TCF3实现对胃癌细胞SGC-7901侵袭和迁移的调控

目的:探讨miR-138-5p 与T细胞因子3 基因（T cell factor 3, TCF3）的靶向关系及其对人胃癌细胞SGC-7901 侵袭和迁移能力的影响。方法：miR-138-5p 模拟物转染SGC-7901 细胞后,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测miR-138-5p 和TCF3 mRNA的相对表达;生物信息学方法预测miR-138-5p 与TCF3 基因的靶向匹配关系,采用荧光素酶报告基因系统鉴定该关系。miR-138-5p 转染正常胃癌细胞和TCF3 高表达胃癌细胞后,Western blotting 检测TCF3、神经钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、锌指转录因子（Slug）和上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）的表达,Transwell 小室检测胃癌细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力。结果：miR-138-5p 过表达抑制TCF3 mRNA的表达;生物信息学软件预测显示miR-138-5p 与TCF3 mRNA有靶向结合区域,miR-138-5p mimic 降低TCF3 野生型质粒的荧光素酶活性,不影响TCF3 突变型质粒的荧光素酶活性。miR-138-5p 抑制TCF3 蛋白表达,miR-138-5p 减弱TCF3 过表达对SGC-7901 细胞侵袭和迁移能力的促进作用,同时其下调N-cadherin、Vimentin 和Slug 蛋白表达、上调E-cadherin 蛋白表达。结论：miR-138-5p 抑制胃癌细胞SGC-7901 的侵袭和迁移,与直接靶向调控TCF3 的表达有关。     

β-咔啉类生物碱对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及PTEN／Akt表达的影响

目的 探讨β-咔啉类生物碱对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因（PTEN）／丝苏氨酸蛋白激酶（Akt）表达的影响。方法 采用不同浓度β-咔啉类生物碱（0、10、20、40 μg／ml）处理SGC-7901细胞后,应用活细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测β-咔啉类生物碱处理24、48 h后的SGC-7901细胞增殖抑制情况,Hoechst 33258染色、琼脂糖凝胶电泳法观察β-咔啉类生物碱处理48 h后的细胞凋亡情况,荧光定量聚合酶链反应和Western blotting分别检测β-咔啉类生物碱（0、10、20、30、40 μg／ml）处理48 h后细胞中PTEN、Akt mRNA和蛋白水平。结果 β-咔啉类生物碱均能抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,抑制率呈浓度依赖性（P＜0.05）;β-咔啉类生物碱可诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡,且伴有凋亡特有的DNA梯形条带;与0 μg／ml相比,其余浓度β-咔啉类生物碱处理48 h后的PTEN mRNA和蛋白表达增加,而Akt mRNA和蛋白表达减少,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 β-咔啉类生物碱可抑制人胃癌SGC 7901细胞增殖并诱导凋亡,可能与影响PTEN及Akt表达有关。