PTEN基因甲基化及其表达异常与胃癌的关系

目的：探讨PTEN基因表达、启动子区甲基化与胃癌及其临床病理特征的关系。方法：采用甲基化特异性PCR法（MSP）和逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法，分析胃癌组织及相应癌旁正常组织中PTEN基因启动子区甲基化及其mRNA表达情况。结果：48．2％（27／56）的胃癌组织和3．6％（2／56）的癌旁胃组织PTEN基因启动子区发生甲基化．癌组织PTEN基因启动子区甲基化率显著增高（P〈0．05）：其中，2例甲基化癌旁胃组织均为胃癌组织中有甲基化的病例．发生淋巴结转移的29例胃癌组织中．19例PTEN基因启动子甲基化；发生淋巴结转移的PTEN基因启动子甲基化显著高于无淋巴结转移组（P〈0．05）。RT—PCR结果显示，所有甲基化的胃癌组织中PTEN mRNA均无表达，结论：胃癌中PTEN基因mRNA失表达与其启动子区甲基化有关，这可能是胃癌发生、发展以及转移的原因之一。     

急性白血病PTEN的表达及甲基化状态

0引言急性白血病(Acute leukemia,AL)的发生涉及多种抑癌基因和癌基因的异常表达.PTEN基因是一种广泛的抑癌基因,在多种肿瘤中存在失活现象,其失活原因除突变、缺失外,DNA异常甲基化可能是其失活的第三条途径.本研究采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及甲基化特异性聚合酶链反应( MSP)技术检测AL患者骨髓单个核细胞中PTEN基因mRNA的表达及其启动子甲基化状态,探讨其与AL的关系,为AL的发生、发展机制提供分子生物学依据.     

PTEN表达在胃癌发生及分化中的作用

目的:探讨PTEN的表达与胃黏膜癌变及癌细胞分化程度的关系.方法: 采用免疫组织化学方法对胃癌组织、癌前病变和对照组正常胃黏膜进行PTEN表达的检测.结果: 胃癌组PTEN阳性率为53.3%,较正常组和癌前病变组明显下降(P <0.01);低分化组PTEN阳性率为36.0%,显著低于胃癌高中分化组 (P <0.01);高中分化组PTEN阳性率与癌前病变组无差异(P>0.05).结论: PTEN与胃癌的分化程度密切相关,可作为判断胃癌恶性程度的指标.     

HHIP基因CpG岛高甲基化水平参与胃癌的发生

目的：观察人胃癌、癌旁组织与胃癌AGS细胞中人音猬因子相互作用蛋白（human hedgehog interacting protein,HHIP）基因启动子区域CpG岛的甲基化水平,探索其与胃癌发生的关系。方法：RT-PCR检测30例人胃癌组织、癌旁组织及AGS细胞中HHIP mRNA的表达,免疫组织化学方法和甲基化特异性PCR（methylation specific PCR,MSP）分别检测胃癌组织和癌旁组织的HHIP表达和HHIP基因启动子区域甲基化状态。AGS细胞予甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-2′-deoxycitydine,5-Aza-dc）处理前后,RT-PCR、MSP和硫化测序PCR（bisulfite sequencing PCR,BSP）分别检测AGS细胞中HHIP mRNA表达、启动子区域甲基化水平变化、CpG岛甲基化位点数量的变化;分析HHIP基因启动子区CpG岛甲基化水平变化与HHIP mRNA表达水平变化之间的相关性。结果：胃癌组织中的HHIP mRNA（0.82± 0.38 vs 1.60±0.26,P=0.000）和蛋白（0.51±0.03 vs 0.83±0.27,P<0.05）的表达均低于癌旁组织,并且与年龄、性别、TNM分期、分化程度、淋巴结转移均无显著相关性（均P>0.05）。癌旁组织中HHIP基因启动子区甲基化水平显著低于胃癌和AGS细胞\[（17.7±3.59）% vs （62.9±614）%、（99.7±0.67）%,均P<0.05\]。AGS细胞在5-Aza-dc干预后HHIP mRNA表达明显增高（4.68±022 vs 0.21±012,P<0.01）,HHIP基因启动子区甲基化水平明显下降\[（10.1±0.21）% vs （90.2±0.67）%,P<0.01\], CpG岛甲基化位点明显减少,并且HHIP基因启动子区甲基化水平与mRNA表达呈负相关（r=-0.693,P=0.00）。结论：HHIP基因启动子区CpG岛的高甲基化水平可能通过抑制HHIP基因表达参与胃癌的发生。     

PTEN基因甲基化与胃癌临床病理特征的关系

目的研究胃癌组织中抑癌基因第10号染色体缺失性磷酸酶张力蛋白基因（PTEN）表达异常与胃癌临床病理特征的关系。方法应用甲基化特异性PCR方法（MSP）检测45例胃癌及癌旁正常组织PTEN甲基化的表达情况。结果40．0％（18／45）的胃癌组织和2．2％（1／45）的癌旁正常组织PTEN基因发生甲基化,胃癌组织甲基化率显著增高（P〈0．05）;低分化腺癌甲基化率为60．0％（15／25）,高中分化腺癌甲基化率为15．0％（3／20）,二者差异具有统计学意义（P〈0．05）;发生淋巴结转移的24例胃癌组织中,13例PTEN基因发生甲基化,发生淋巴结转移的胃癌组织PTEN甲基化率明显高于无淋巴结转移胃癌组织（P〈0．05）。结论PTEN基因甲基化与胃癌的发生密切相关,PTEN基因甲基化在胃癌的发病过程中起重要作用。     

CpG岛甲基化表型与胃癌

越来越多的证据指出，肿瘤的发生具有多阶段、多基因的特征，是多基因的遗传学（genetics）和表遗传学（epigenetics）共同起作用的结果^[1]。胃癌也是如此。在胃癌的发生发展过程中涉及基因缺陷，如突变、缺失等导致的编码区结构和功能破坏，还包括表遗传学改变等。当前人们越来越认识到表遗传学机制在肿瘤的发生发展中的重要作用。DNA甲基化是导致基因功能丧失的主要形式。CpG岛（CpG island）是指CpG二核苷酸聚集区域，呈不连续分布，长度〉200kb^[2]。在整个基因组中，CpG岛通常位于基因的启动子区域（promoter region，其次CpG岛还位于第一外显子区域），     

PTEN蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨胃癌组织中PTEN蛋白表达及其临床意义。方法：收集53例胃癌和30例慢性胃炎用免疫组化方法检测PTEN蛋白的表达。结果：胃癌和慢性胃炎中PTEN蛋白阳性率分别为67．9％、1013．0％,胃癌中PTEN蛋白的阳性率低于慢性胃炎组织（P〈0．05）。在高、中、低分化胃腺癌中,PTEN阳性率分别为88．9％、70．6％、44．4％,随分化程度的降低,FTEN阳性表达率降低,高分化与低分化之间差异显著（P〈0．05）。胃癌伴有淋巴结转移者,PTEN阳性率55．2％,不伴有淋巴结转移者,阳性率83．3％,两者之间差异显著（P〈0．05）。结论：PTEN在胃癌的诊断、组织学分级、淋巴结转移中有重要价值。PTEN蛋白低表达可能参与了胃癌的发生、发展及淋巴结转移,将有可能作为判断胃癌预后不良的参考指标。     

胃癌CpG岛甲基化表型研究进展

CIMP是指一组在肿瘤中有同时存在的多个基因启动子CpG岛甲基化表型.许多研究证实在胃癌中CIMP是经常存在的现象,与胃癌的发病机制、诊断、病情、预后及治疗疗效等方面均有一定关系.     

胃癌ER基因表达与CpG岛甲基化的意义

目的:研究雌激素受体(ER)基因表达及其CpG岛甲基化状况与胃癌生物学行为和预后的关系.方法:分别应用免疫组化SP法和限制性内切酶PCR法分析91例胃癌ER的表达和30例胃癌ER基因CpG岛的甲基化状况.结果:胃癌ER阳性率为38%(35/91),其中高分化腺癌10%(3/30),分别与低分化腺癌43%(13/30),未分化癌53%(8/15),粘液癌63%(5/8)及印戒细胞癌75%(6/8)比较,皆具有显著性差异(P＜0.05).BorrmannⅢ Ⅳ型56%(24/43)明显高于Ⅰ型22%(4/18)与Ⅱ型23%(7/30)(P＜0.05).淋巴结转移组为55%(28/51),未转移组23%(9/40),两组间有显著性差异(P＜0.05).正常胃粘膜ER基因CpG岛未见甲基化,而40%(12/30)胃癌呈甲基化(P＜0.05),且与其蛋白表达有负相关性(P＜0.05).结论:ER在胃癌中的表达与分化、侵袭、转移有关,并以分化较差的胃癌表达高,提示ER阳性胃癌生物学行为差而预后不佳.ER基因CpG岛甲基化可能是胃癌中ER表达缺失的分子机制.     

贲门腺癌中RASSF1A基因的甲基化状态及表达

 目的 研究贲门腺癌（gastric cardiac adenocarcinoma,GCA）中RASSF1A基因的甲基化状态及其蛋白表达情况。 方法 分别应用甲基化特异性PCR（MSP）、RT-PCR及免疫组织化学SP法检测贲门癌组织及相应癌旁组织的RASSF1A甲基化情况和mRNA水平及蛋白表达情况。 结果 92例贲门癌组织中有54例发生了甲基化,甲基化率为58.7%,显著高于癌旁正常组织（P<0.01）。Ⅲ期和Ⅳ期贲门癌患者中RASSF1A基因发生甲基化的比率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者（P<0.05）。92例贲门癌组织中有43例RASSF1A基因蛋白表达阴性,与相应癌旁正常组织相比有显著性差异（P<0.01）。Ⅲ期和Ⅳ期贲门癌RASSF1A基因蛋白表达显著低于Ⅰ期和Ⅱ期患者（P<0.05）。发生甲基化的贲门癌组织中RASSF1A的mRNA水平的表达显著低于未发生甲基化的贲门癌组织（P<0.01）。 结论 RASSF1A基因启动子区发生甲基化导致的基因沉默可能是贲门腺癌发生的机制之一。     

Reduced Expression and Promoter Methylation p16 Gene in Epstein-Barr Virus-associated Gastric Carcinoma

Epstein-Barr virus (EBV)-associated gastric carcinoma (EBVaGC) is a unique type of gastric carcinoma (GC), which is considered to develop in a different pathway from EBV-negative GC. To evaluate a possible role of p16, an inhibitor of G1/S transition of the cell cycle, in the carcinogenesis of EBVaGC, pl6-immunohistochemistry and methylation-specific PCR analysis (MSP) were applied to surgically resected gastric carcinomas. When the percentage of p16-positive cells in more than 1000 carcinoma cells was expressed as p16 labeling index (p16-LI), it ranged from 2.5 to 88.1 (mean 42.9±24.4) in 70 gastric carcinomas. EBVaGC showed significantly lower values ( n =15, 26.1±22.1) than EBV-negative GC ( n =55, 47.5±23.2) (P=0.0036). Fresh frozen tissues of 55 gastric carcinomas (16 EBVaGC and 39 EBV-negative GC) were further subjected to MSP, to evaluate abnormal methylation of the promoter region of the p16 gene. The frequency of methylation was significantly higher in EBVaGC (14/16) than in EBV-negative GC (9/39) (<0.0001). The methylation-positive carcinomas showed significantly lower p16-LI (35.9±21.6) than the unmethylated ones (55.2±22.7) (P=0.0014). Thus, a marked decrease of p16 expression, caused by the aberrant methylation of the p16 gene promoter, is closely associated with the development of EBVaGC.     

胃癌组织中PDCD4基因的表达和甲基化水平及其临床意义

目的 观察胃癌组织中抑癌基因PDCD4启动子区甲基化状态及其对PDCD4表达水平的影响并探讨其临床意义。方法 通过免疫组织化学、Western blot法检测胃癌组织中PDCD4蛋白的表达;RT-PCR法检测PDCD4 mRNA的表达;甲基化特异性PCR（MSP）法检测PDCD4启动子区甲基化水平。分析PDCD4表达水平以及启动子甲基化水平与胃癌患者临床病理特征之间的相关性。结果 胃癌组织中PDCD4蛋白及mRNA表达水平均显著降低（P<0.05）,甲基化作用显著增强（P<0.05）。PDCD4蛋白表达缺失与胃癌的分化、临床分期以及淋巴结转移密切相关（P<0.05）;PDCD4高甲基化与胃癌的淋巴结转移、临床分期密切相关（P<0.05）。PDCD4甲基化水平与PDCD4蛋白以及mRNA表达水平均呈负相关（P<0.05）。结论 胃癌组织中PDCD4表达水平显著降低,并与胃癌发展相关,启动子区高甲基化可能是PDCD4表达缺失的原因。     

PTEN在膀胱癌组织中的表达及其意义

目的研究膀胱癌组织中抑癌基因PTEN的表达及其临床意义,评价FTEN在膀胱癌发生发展中的作用。方法应用免疫组织化学S-P法检测62例膀胱癌组织和18例良性膀胱病变组织中PTEN的表达,同时结合相关临床因素进行分析。结果62例膀胱癌组织中PTEN阳性率为53.23%(33/62),18例良性膀胱病变组织PTEN全部阳性表达;PTEN的表达与肿瘤分级密切相关(P<0.05)。结论PTEN基因突变或缺失所导致的表达障碍可能在膀胱癌的发生、发展中发挥重要的作用;PTEN表达的检测有助于肿瘤的诊断和判断其预后。     

肝细胞癌中ChREBP基因CpG岛甲基化与mRNA表达的相关性

目的 检测肝细胞癌中ChREBP基因CpG岛甲基化水平及mRNA表达水平,并探讨两者的相关性。方法 收集肝细胞癌及癌旁冰冻组织90例,采用亚硫酸氢钠处理结合克隆测序检测ChREBP基因CpG岛内29个CpG位点的甲基化水平;采用荧光定量PCR检测其中31对新鲜冰冻组织中ChREBP基因mRNA表达水平,分析甲基化水平与mRNA表达之间的关系。结果 ChREBP基因的5、6、7、14号CpG位点甲基化水平在肝细胞癌中显著低于其配对的癌旁组织（P<0.05）。其余CpG位点及整体甲基化在肝细胞癌与癌旁组织中差异无统计学意义（均P>0.05）。15、18、20、23、26、29号CpG位点在≥50岁年龄组的甲基化水平均高于<50岁年龄组（均P<0.05）。肝细胞癌中ChREBP基因mRNA表达水平低于癌旁组织（P=0.003）,但与甲基化无显著相关性（P>0.05）。结论 肝细胞癌中ChREBP基因mRNA表达水平低于癌旁组织,但这一改变可能不是通过影响DNA的甲基化水平实现的。     

RKIP PTEN基因启动子区甲基化与肺癌的关系

探讨RKIP基因和PTEN基因启动子区甲基化与肺癌及其临床病理特征的关系。方法：采用甲基化特异性PCR（MSP）法,分析肺癌组织及相应癌旁正常肺组织中RKIP和PTEN启动子区甲基化表达情况。结果：45.8%（38/83）的肺癌组织和13.3%（11/83）的癌旁肺组织RKIP基因启动子区发生甲基化,51.8%（43/83）的肺癌组织和15.7%（13/83）的癌旁肺组织PTEN基因启动子区发生甲基化,癌组织中RKIP和PTEN启动子区甲基化率显著增高（P<0.05）;发生淋巴结转移的43例肺癌组织中,27例RKIP基因启动子区发生甲基化,30例PTEN基因启动子区发生甲基化,淋巴结转移组RKIP及PTEN基因启动子区甲基化均显著高于无淋巴结转移组（P<0.05）。结论：肺癌中RKIP和PTEN基因启动子区甲基化,可能是肺癌发生、发展及转移的重要原因之一。