Toll样受体4在大鼠心肌缺血再灌注损伤中表达的实验研究

目的 观察心肌缺血再灌注早期Toll样受体4 mRNA(TLR4 mRNA)及蛋白表达,探讨TLR4在心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 雄性SD大鼠随机分为2组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组),每组36只,建立大鼠心肌缺血再灌注模型,按照不同的再灌注时间(0、0.5、1、24和8 h)处死动物.光镜和电镜观察心肌组织形态及超微结构改变.免疫组化检测心肌TLR4蛋白表达情况.实时定量逆转录聚合酶链反应定量心肌TLR4 mRNA表达水平.酶联免疫吸附试验测定心肌中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量.结果 (1)Sham组心肌组织形态及超微结构改变不明显;IR组心肌损伤较重,缺血心肌恢复血液灌注8 h内,其病理学变化未见显著改善.(2)Sham组与IR组TLR4蛋白都有阳性表达,IR组TLR4表达增加,且以再灌注1 h最为明显(19.62±3.84,P＜0.01).(3)与Sham组比较,IR组心肌,TLR4 mRNA表达水平均出现不同程度上调,以再灌注1 h达到峰值[(4.03±0.85)×10-2,P＜0.01],而Sham组各时间点未见明显改变.(4)IR组心肌TNF-α水平高于各对应时间点Sham组(P均＜0.05),且心肌TLR4 mRNA表达与TNF-α呈正相关(r=0.728,P＜0.01).结论 心肌缺血再灌注早期,心肌TLR4表达迅速上调,TLR4的激活可能通过促进TNF-α等炎性因子的产生分泌增多来介导心肌缺血再灌注损伤.     

丁苯酞对血管性痴呆大鼠海马CA1区Bax和Bcl-2表达的影响

目的观察丁苯酞(NBP)对血管性痴呆(VD)大鼠海马CA1区凋亡调控基因Bax和Bcl-2表达的影响,探讨NBP对VD的保护作用。方法将80只健康Wistar大鼠随机分为VD组(VD模型)、NBP治疗组(VD模型+NBP)、NBP对照组(假手术+NBP)、Sham组(假手术组),每组20只,每组又分为4个亚组:术后1、2、4、8 w,每个亚组5只。永久性双侧颈总动脉结扎法制备VD大鼠模型。NBP对照组和NBP治疗组大鼠术后1 d开始给予BNP腹腔注射,剂量为5 mg·kg~(-1)·d~(-1),Sham组和VD组给予生理盐水腹腔注射(0.2 ml/d)。各组大鼠连续腹腔注射给药7 d。术后各时间点(1、2、4、8 w)留取海马组织,免疫组化观察各组大鼠海马CA1区Bax和Bcl-2的表达。结果VD组大鼠海马CA1区Bax蛋白表达灰度明显高于Sham组(P<0.05);4 w和8 w时,NBP治疗组大鼠海马CA1区Bax蛋白表达均明显低于VD组大鼠相应时间点(P<0.05)。8 w时VD大鼠海马CA1区Bax表达灰度明显高于1 w和2 w时(P<0.05)。NBP对照组大鼠海马CA1区Bcl-2表达灰度均明显高于Sham组(P<0.05);8 w时NBP治疗组大鼠海马CA1区Bcl-2表达灰度明显高于VD组(P<0.05)。结论VD大鼠海马CA1区促凋亡蛋白Bax过度表达,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达有减弱趋势;NBP对VD大鼠海马CA1区细胞凋亡具有明显的保护作用,可以抑制缺血损伤导致的海马CA1区Bax蛋白过度表达,同时能够提高大鼠海马CA1区Bcl-2蛋白的表达水平,抑制细胞凋亡,促进细胞存活,发挥神经保护作用。     

右美托咪定联合Tol样受体4抑制剂对缺氧复氧心肌细胞凋亡和炎症反应的影响及其机制

目的探讨右美托咪定(DEX)联合Toll样受体4(TLR4)抑制剂TAK-242对缺氧复氧(H/R)心肌细胞凋亡和炎症反应的影响及其机制。方法心肌细胞H9C2分为对照(Con)组、H/R组(H/R损伤)、DEX组(1.0μmol/L DEX,再行H/R损伤)、TAK-242组(30μmol/L TAK-242,再行H/R损伤)和DEX+TAK-242组(30μmol/L TAK-242及1.0μmol/L DEX,再行H/R损伤处理)。各组细胞复氧培养6 h后,采用MTT法、流式细胞仪、试剂盒、酶联免疫吸附法检测细胞增殖、凋亡、乳酸脱氢酶(LDH)释放率、白介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,Western blot检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的caspase-3(cleaved caspase-3)、TLR4和核因子B p65(NF-κB p65)蛋白表达。结果五组细胞凋亡率、LDH释放率、Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、TLR4、NF-κB p65蛋白表达水平、IL-1β、TNF-α含量比较差异均有统计学意义(F=316.938、330.004、839.933、169.750、378.365、476.535、298.527、99.219、293.498,P<0.05)。与Con组相比,H/R组细胞的凋亡率、LDH释放率、Bax、cleaved caspase-3、TLR4和NF-κB p65蛋白表达水平、细胞上清液中IL-1β和TNF-α含量均明显升高(均P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显降低(均P<0.05)。与H/R组相比,DEX组、TAK-242组和DEX+TAK-242组的细胞凋亡率、LDH释放率、Bax蛋白、cleaved caspase-3、TLR4和NF-κB p65蛋白、IL-1β、TNF-α的表达水平均明显降低,Bcl-2蛋白表达水平明显升高(均P<0.05)。与DEX组、TAK-242组相比,DEX+TAK-242组的细胞凋亡率、LDH释放率、Bax、cleaved caspase-3、TLR4和NF-κB p65蛋白表达、IL-1β、TNF-α表达水平更低,Bcl-2蛋白的表达更高(均P<0.05)。结论DEX和TAK-242联合可协同抑制H/R引起的心肌细胞凋亡和炎症反应,其作用机制可能与协同抑制TLR4/NF-κB通路有关。     

非选择性冠状动脉微栓塞对大鼠心肌细胞凋亡及左室功能的影响

目的:探讨非选择性冠状动脉微栓塞(CME)对大鼠心肌细胞凋亡及左室功能的影响.方法:采用雄性SD大鼠56只, 体重280～320 g.随机分为假手术组(Sham组,24只)和CME组(32只).CME组夹闭升主动脉同时自左室腔注入自体微血栓混悬液,Sham组则注入等容量的0.9%氯化钠溶液.术后3 d、7 d、14 d及28 d(每个时间点CME组8只,Sham组6只)采用苏木精-伊红染色观察心肌组织病理学改变,Real Time PCR(实时定量聚合酶链式反应)检测心肌细胞Bcl-2、Bax、Fas、Fas-L等凋亡调控基因mRNA的表达,采用Western blot蛋白印迹法检测Caspase3、Caspase9和裂解PARP蛋白的表达,TUNEL(脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法)测定凋亡细胞,应用有创血流动力学检测大鼠左心功能的变化.结果:①苏木精-伊红染色显示,CME术后可见心内膜下多中心小灶性心肌缺血、坏死伴白细胞浸润.②术后7 d,与Sham组相比较,CME组Bax、Fas及Fas-L mRNA的表达水平明显增高,Bcl-2/Bax的比值明显降低(0.18±0.04∶2.98±0.49 P<0.01);Caspase-3、Caspase-9及裂解PARP蛋白表达明显升高 (0.762±0.129∶0.133±0.027,0.295±0.023∶0.067±0.020,0.992±0.146∶0.386±0.074,均P<0.01).③术后7 d CME组凋亡指数较Sham组明显增高(17.2±1.9∶1.2±0.6, P<0.01).④LVSP及±dp/dtmax较Sham组明显降低(P<0.01).结论:CME早期即可通过改变凋亡调控基因的平衡,启动、激活Caspase级联反应,促进心肌细胞凋亡,降低左室功能.     

室旁核TLR4阻断改善2型糖尿病大鼠糖代谢及机制

目的 聚焦于下丘脑室旁核(PVN)区域，研究中枢Toll样受体(TLR)4阻断对2型糖尿病(T2DM)大鼠糖代谢的影响及探讨相应影响机制。方法 将SD大鼠随机分为：正常对照(NC+PVN vehicle)组、正常干预(NC+PVN TAK-242)组、糖尿病(DM+PVN vehicle)组、糖尿病干预(DM+PVN TAK-242)组。高糖高脂联合小剂量链脲佐菌素(STZ)方法建立T2DM大鼠模型，皮下植入室旁核微型渗透泵(28 d,输注速率0.11 L/h)给予TAK-242(一种TLR4特异性抑制剂)和人工脑脊液；各组大鼠监测体重、空腹血糖(FBG)、葡萄糖耐量试验(GTT)、胰岛素耐量试验(ITT)和丙酮酸耐量试验(PTT)评估体内糖代谢情况；肾交感神经放电检测交感神经活性；Western印迹检测还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶(NOX)4、Cu-Zn超氧化物歧化酶(SOD)、NF-κB通路激活标志物(TH)、谷氨酸脱羧酶(GAD)67蛋白表达；二氢乙淀(DHE)检测PVN中活性氧簇(ROS)水平；免疫荧光检测PVN中TLR4、TH阳性神经元表达数量；免疫组化...     

Toll样受体-4抑制剂TAK-242对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用的研究

目的探讨Toll样受体-4(TLR-4)的选择性抑制剂TAK-242对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及可能机制。方法健康雄性SD大鼠60只,随机分为正常对照(NC)组、DN模型(M)组及TAK-242治疗(TAK-242)组。腹腔一次性注射STZ(60mg/kg)建立DN大鼠模型。造模成功后4和8周测定体重、血糖、24小时尿蛋白、血肌酐(Scr)、血浆白蛋白水平,8周末取新鲜肾组织检测人核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、核转因子p65(NF-KBP65)、TNF-α和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达量。结果与NC组相比,M和TAK-242组血糖、Scr、尿蛋白水平均升高(P0.05),体重、血浆白蛋白的水平降低(P0.05);与M组相比,TAK-242可减少Scr[(69.8±7.96)μmol/L]、尿蛋白[(35.21±8.06)mg/d]含量(P0.05),增加血浆白蛋白[(28.1±6.9)g/L]含量(P0.05);与M组相比,TAK-242可减轻DN大鼠肾脏组织中核内NF-KBP65含量,以及TNF-α和MCP-1的表达,抑制IκBα的降解(P0.05)。结论 TAK-242对DN大鼠有保护作用,其机制可能与抑制NF-κB信号通路相关。     

盐酸法舒地尔对慢性心力衰竭大鼠心肌组织Toll样受体/MyD88信号通路的影响

目的探讨盐酸法舒地尔对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌组织Toll样受体(TLR)/My D88信号通路的调节作用。方法采用冠状动脉前降支结扎法建立CHF大鼠模型,分为健康对照组、模型组、治疗(盐酸法舒地尔)组和地高辛组,给予相应药物干预4 w后,观察大鼠心脏功能指标,采用实时聚合酶链反应(PCR)和Western印迹法分别检测各组心肌组织TLR2、TLR4和My D88 mRNA和蛋白表达水平。结果模型组心肌组织TLR2、TLR4和My D88 mRNA及蛋白表达水平较对照组明显增高(P0.01)。同时,模型组心功能指标左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)和左心室重量指数(LVMI)与对照组相比明显增高(P0.01),而左心室内压最大上升、下降速率(+dp/dtmax和-dp/dtmax)则显著降低(P0.01)。治疗组干预后,无论是在mRNA还是在蛋白表达水平,心肌组织TLR2、TLR4和My D88表达水平均显著下调(P0.01),同时可明显改善心脏功能指标(P0.01)。结论盐酸法舒地尔可能通过下调CHF大鼠心肌组织TLR2、TLR4和My D88表达水平,抑制TLR/My D88信号通路来改善CHF症状。     

丁苯酞预处理对局灶脑缺血-再灌注大鼠Toll样受体4表达的影响

目的探讨丁苯酞预处理对局灶性脑缺血-再灌注大鼠Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法将60只成年SD大鼠随机分为假手术(sham)组、缺血-再灌注(IR)组和丁苯酞预处理(NBP)组,每组20只。采用线栓法制作大脑中动脉缺血-再灌注模型,于术前1周按400 mg·kg~(-1)·d~(-1)NBP预处理。在缺血2 h,再灌注24 h后观察大鼠的神经行为学评分、脑梗死体积、脑组织TLR4蛋白及mRNA表达情况。结果神经行为学评分显示:sham组为0分,NBP组神经行为学评分[(1.62±0.15)分]显著低于IR组[(2.33±0.22)分],差异具有统计学意义(P0.01)。脑梗死体积测定显示:NBP组脑梗死体积[(164.3±7.5)mm3]小于IR组[(186.5±10.1)mm3],差异具有统计学意义(P0.01);NBP组脑组织TLR4蛋白(9.1±1.1)及mRNA(10.2±1.3)均较IR组TLR4蛋白(14.4±1.3)、mRNA(15.6±1.4)表达降低(P0.01)。结论丁苯酞抑制TLR4表达,减轻缺血-再灌注损伤,发挥脑保护作用。     

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨大蒜素对大鼠冠状动脉微栓塞的影响及作用机制

目的基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨大蒜素对大鼠冠状动脉微栓塞(CME)的影响及作用机制。方法将60只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组、大蒜素低、中、高剂量组,每组10只,其中空白对照组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,阳性对照组给予瑞舒伐他汀[3.0 mg/(kg·d)]灌胃,大蒜素低、中、高剂量组分别给予大蒜素[10、20、40 mg/(kg·d)]灌胃,预处理14天后,模型组、阳性对照组及大蒜素低、中、高剂量组采用左心室注射42μm微栓塞球造模,空白对照组采用左心室注射等体积生理盐水。检测大鼠心功能变化; HBFP染色法检测心肌微梗死面积; TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况; ELISA法检测白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;电化学法检测肌钙蛋白I(c Tn I)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平; RT-PCR法检测大鼠心肌组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)和核因子κB p65(NF-κB p65) m RNA水平;Western blot法检测大鼠心肌组织中TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白表达。结果大蒜素可显著改善CME大鼠心功能,明显降低心肌微梗死面积和心肌细胞凋亡率,有效抑制炎症因子IL-1β、TNF-α和心肌损伤指标c Tn I、CK-MB表达,明显下调TLR4、MyD88和NF-κB p65 m RNA和蛋白相对表达量。结论大蒜素可抑制CME大鼠心脏功能障碍和心肌损伤,其作用机制可能与TLR4/MyD88/NF-κB信号通路密切相关。     

不同剂量卡维地洛对大鼠冠状动脉微栓塞后心室重塑的影响

目的:比较不同剂量卡维地洛对大鼠冠状动脉微栓塞(CME)后心室重塑的影响.方法:利用大鼠自体的血栓微粒造成心肌内小冠状动脉栓塞,建立CME模型.40只大鼠随机分成4组,即假手术组(SO组)、CME组、小剂量卡维地洛组(LCAR组,1.0 mg*kg-1*d-1)和大剂量卡维地洛组(HCAR组,10.0 mg*kg-1*d-1).灌胃4周后,行心功能检测、血流动力学测定及心肌病理学分析.结果:与SO组比较,CME组细胞间质胶原容积分数(CVF)与心肌细胞凋亡率(Rapo)明显增加,左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)明显增大,左心室短轴缩短率 (LVFS)、左心室射血分数 (LVEF)明显降低(均P<0.01);左心室舒张末期压(LVEDP)明显增加,左心室收缩压(LVSP)和左心室腔内压力最大上升速率(+LVdp/dtmax)显著下降(均P<0.01).与CME组比较,LCAR组和HCAR组心肌间质CVF和Rapo显著降低,LVEDD、LVESD明显减小,LVFS明显上升,LVEF明显改善(均P<0.01);LVEDP明显下降,+LVdp/dtmax显著上升,心率明显减慢(均P<0.01).除LVSP外,以上改变HCAR组均较LCAR组明显(P<0.05).结论:①大鼠CME后心脏发生慢性重塑;②卡维地洛剂量依赖性地改善CME后心室重塑.     

Toll样受体4激活Wnt/β-catenin信号通路促进骨髓间充质干细胞增殖

目的探讨Toll样受体(TLR)4激活后调控Wnt/β-catenin信号通路促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)的增殖及其相关机制。方法体外培养BMSCs,应用流式细胞术鉴定BMSCs,用脂多糖(LPS)剌激BMSCs,应用CCK-8法检测BMSCs的增殖能力;采用Western印迹检测大鼠BMSCs中TLR4蛋白表达;实验分为对照组、LPS组、TLR4阻断剂+LPS组、Wnt通路经典抑制剂(DKK-1)+LPS组。应用实时荧光定量PCR法检测BMSCs中β-catenin、c-myc及细胞周期蛋白(cyclin)D1 mRNA表达,应用Western印迹检测蛋白表达。结果与对照组相比,LPS组BMSCs的细胞增殖能力明显增强,TLR4呈高表达(均P<0.01);LPS组β-catenin、c-myc和cyclin D1表达显著增加(P<0.01)。与LPS组相比,加入TLR4阻断剂后,β-catenin、c-myc和cyclin D1表达显著下调(P<0.05,P<0.01),加入DDK-1后,β-catenin、c-myc和cyclin D1表达显著降低(均P<0.01)。结论 TLR4促进BMSCs的增殖,其机制可能与调节Wnt/β-catenin信号通路有关。     

肾去交感支配术对心肌梗死大鼠心功能和结缔组织生长因子的影响

目的探讨肾去交感支配术(renal sympathetic denervation,RSD)对心肌梗死(myocardial infarction,MI)大鼠心肌纤维化的影响及其可能机制。方法健康雄性SD大鼠54只,分为假手术(Sham组,10只)、RSD组(12只)、Sham 3d+MI组(16只)、RSD 3d+MI组(16只),观察期为MI术后4周。超声心动图评估大鼠心功能、RT-PCR法和蛋白印迹法分别评估大鼠左心室心肌组织中结缔组织生长因子(CTGF)mRNA和蛋白的表达水平。结果Sham 3d+MI组较Sham组和RSD组左心室收缩末内径和左心室舒张末容积水平明显增加(P0.01),左心室短缩率和LVEF水平明显降低(P0.01)。Sham 3d+MI组和RSD 3d+MI组大鼠心肌胶原容积分数[(59.13±6.00)%和(43.96±6.23)%vs(4.94±0.37)%和(4.19±0.59)%,P0.01]、CTGF mRNA相对表达(2.28±0.18和1.53±0.23 vs 0.80±0.11和0.71±0.07,P0.01)、CTGF蛋白相对表达(0.25±0.02和0.16±0.02 vs0.12±0.02和0.08±0.01,P0.01)较Sham组和RSD组明显增加,但RSD 3d+MI组大鼠心肌胶原容积分数、CTGF mRNA相对表达、CTGF蛋白相对表达水平较Sham 3d+MI组明显降低。结论 RSD术能改善MI大鼠心肌纤维化及心功能,可能与其下调致纤维化因子CTGF的表达有关。     

冠状动脉微栓塞后大鼠心肌组织炎症细胞因子表达和心功能的动态变化及关系

目的:探讨大鼠冠状动脉微栓寒(CME)后心肌组织中炎症细胞因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β及IL-10的表达和心功能动态变化及其关系.方法:经左心室心尖部注射42μm的微球,建立大鼠CME模型.将大鼠随机分为CME组和假手术组,以注射生理盐水为假手术组(每组n=50).按CME后3 h、6 h、12 h、24 h、4周共5个时间点(各时间点n=10)分为不同时间观察.采用逆转录--聚合酶链反应和免疫组织化学方法检测各组大鼠微栓塞后不同时间点心肌组织内TNF-α、IL-1β、IL-10的动态表达规律及其与心功能变化的关系.结果:CME组与假手术组比较,在CME后3 h、6 h、12 h、24 h心肌组织中TNF-α、IL-1β和IL-10信使核糖核酸、蛋白表达均升高,差异均有统计学意义(P均<0.05).心脏超声显示与假手术组比较,CME组在微栓塞后3 h、6 h、12 h、24 h和4周的左心室射血分数均下降,差异均有统计学意义(P均<0.05).CME组中3 h、6 h、12 h、24 hTNF-α信使核糖核酸(mRNA)和IL-1β mRNA表达量分别与左心室射血分数呈显著负相关(P均<0.05).CME组内各时间点微梗死面积和炎症细胞浸润比较差异无统计学意义(P均>0.05).结论:CME后TNF-α、IL-1β和IL-10在心肌组织中表达均显著增高,并在微栓塞后12 h达到高峰,24 h后明显下降.同时心功能也随着炎症细胞因子的变化而改变,提示CME后心肌组织TNF-α、IL-1β等炎症细胞因子表达的显著增加在心肌损伤中发挥重要作用.     

丹参酮ⅡA对压力负荷增加大鼠心肌肥厚的抑制作用

目的:观察RhoA、Rock1蛋白在压力负荷增加大鼠心肌中的表达,探讨丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA,Tan Ⅱ A)对压力负荷增加大鼠心肌肥厚的抑制作用。方法:40只成年雄性SD大鼠,随机分成5组(n=8),即假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、Tan Ⅱ A低剂量组[L-Tan Ⅱ A组,10 mg/(kg.d)]、Tan Ⅱ A高剂量组[H-Tan Ⅱ A组,20 mg/(kg.d)]及阳性对照药物卡托普利组[Captopril组,100 mg/(kg.d)]。除Sham组外,其余4组大鼠均行肾上方腹主动脉缩窄术建立压力负荷增加心肌肥厚模型,Sham组大鼠仅分离腹主动脉而不结扎。术后4周成功造模并开始给药,疗程为4周。8周后,检测心脏肥厚指数和心肌组织病理学,ELISA法检测心肌羟脯氨酸含量以及免疫组化和免疫印迹法检测心肌组织中RhoA和Rock1蛋白的含量。结果:与Sham组比较,Model组大鼠的心脏肥厚指数、心肌羟脯氨酸含量及心肌组织中RhoA和Rock1蛋白含量均显著升高(均P<0.01);与Model组比较,Tan Ⅱ A低剂量组的心脏肥厚指数、心肌羟脯氨酸含量及心肌组织中RhoA和Rock1蛋白含量均降低(均P<0.05),而Tan Ⅱ A高剂量组上述指标均显著降低(均P<0.01)。结论:压力负荷增加大鼠心肌组织中RhoA和Rock1蛋白的表达明显升高,表明RhoA/Rock信号通路参与了压力负荷增加大鼠心肌肥厚的发生与发展。Tan Ⅱ A能抑制RhoA/Rock信号通路,从而改善心肌肥厚。     

原花青素对大鼠心肌梗死后炎性浸润及肿瘤坏死因子-α的影响

目的:观察原花青素(PC)对心肌梗死(MI)大鼠炎性浸润及其对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法:结扎大鼠左冠状动脉前降支构建大鼠MI模型,存活大鼠随即分为MI组和PC组,另设假手术组(Sham组),各组按观察时相2周和4周再分为:MI 2周和4周,PC 2周和4周,sham 2周和4周;组织病理学观察术后2周及4周各组心肌组织病理结构;逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)检测TNF-α的mRNA表达,Westernblotting及免疫组织化学检测TNF-α蛋白表达。结果:MI后2周及4周:①与Sham组比较,MI组和PC组心肌组织结构显著异常;与MI组比较,PC组心肌结构明显改善。②与Sham组比较,MI组和PC组TNF-α在基因和蛋白水平上显著增加,差异有统计学意义(P<0.01);与MI组比较,PC组TNF-α在基因或蛋白水平上表达显著减少,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:PC能够减轻大鼠MI后的炎性浸润,下调TNF-α表达。     

缬沙坦对糖尿病大鼠动脉Toll样受体4和髓样分化因子88表达的影响

P<0.01),糖尿病和缬沙坦组间血糖差异无统计学意义(P>0.05);糖尿病组大鼠血管组织中TLR4和Myd88 mRNA与蛋白的表达明显高于正常对照组(均P<0.01),而缬沙坦组明显低于糖尿病组(均P<0.01).结论 缬沙坦降低糖尿病大鼠动脉血管组织中TLR4和Myd88表达,可能对糖尿病血管早期的炎性改变起防治作用.     

左西孟旦对猪冠状动脉微栓塞后心肌细胞炎症反应的影响

目的探讨左西孟旦对猪急性冠状动脉微栓塞(CME)后心肌细胞炎症反应的影响及意义。方法将健康巴马系小型猪随机分为CME+左西孟旦组、假手术组及CME组,每组5只。采用经皮冠状动脉介入治疗法,于左前降支中段(发出第一对角支)处,经微导管在40 min内注入42μm的微栓塞球45 ml(假手术组注射等量生理盐水),再用10 ml生理盐水冲洗微导管并注入冠状动脉内。CME+左西孟旦组在CME建立前以左西孟旦预处理[从耳缘静脉以0.05μg/(kg·min)使用24 h,术前60 min再以0.2μg/(kg·min)负荷使用]。术后12 h采用超声心动图检测心功能包括左心室舒张末期内径(LVEDd)、左心室射血分数(LVEF)、心排血量(CO)及左心室短轴缩短率(FS),以Western blot检测活化肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达水平。结果 CME组术后12 h FS[(24.49±2.86)%比(41.28±2.86)%,P=0.023]、LVEF[(49.83±4.64)%比(66.86±3.97)%,P=0.035]、CO[(2.58±0.42) L/min比(4.32±0.89) L/min,P=0.042]与假手术组比较均显著下降,而LVEDd[(38.26±1.93) mm比(32.39±1.52) mm,P=0.043]比假手术组显著增加,差异均具有统计学意义。CME+左西孟旦组FS[(32.42±3.98)%比(24.49±2.86)%,P=0.029]、LVEF[(58.42±5.28)%比(49.83±4.64)%,P=0.043]、CO[(3.58±0.92) L/min比(2.58±0.42)L/min,P=0.038]与CME组比较均呈现升高趋势,LVEDd [(33.92±1.56)mm比(38.26±1.93) mm,P=0.037]比CME组呈现降低趋势,差异均有统计学意义。Western blot定量分析显示,CME组与对照组比较,心肌组织TNF-α蛋白表达水平较高(P=0.039);CME+左西孟旦组与CME组比较,心肌组织TNF-α蛋白表达水平较低(P=0.042),差异均有统计学意义。结论左西孟旦预处理可明显减少CME后心肌细胞炎症反应并改善心功能,其机制可能是通过抑制心肌细胞促炎蛋白TNF-α表达来实现。     

SIRT3对SD大鼠体外循环心功能的影响

目的 探讨心肌线粒体去乙酰化酶 SIRT3对大鼠体外循环(CPB)所致急性心功能下降的影响及机制。方法 Sprague-Dawley(SD)成年大鼠30只,随机分为3组:对照组(sham组)、体外循环组(CPB组)、外源性烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)治疗体外循环组(NAD+治疗组),每组10只（n=10）。麻醉复苏后1 h,采用彩色多普勒超声诊断仪检测左心室收缩末期内径(LVIDs)、左心室舒张末期内径(LVIDd)、短轴缩短率(FS)及左心室射血分数(LVEF)。然后处死SD大鼠,取心肌组织,检测 AMPK、p-AMPK和心肌细胞膜Glut-4的蛋白表达及SIRT3和AMPK的活性。结果 与sham组相比,CPB组在CPB后血糖升高(P<0.05),心功能下降(P<0.05),具体表现为LVIDs和LVIDd值升高(P<0.05)、FS和LVEF值下降(P<0.05),CPB后SD大鼠心肌的SIRT3活性下降(P<0.05),下游的AMPK磷酸化水平及AMPK活性下降以及心肌细胞膜Glut-4的蛋白表达下降（均P<0.05）;预先采用外源性NAD+治疗,可显著降低血糖水平(P<0.05),提高CPB后SD大鼠心肌SIRT3的活性,促进心肌AMPK的磷酸化和该酶活性的升高(均P<0.05),并增加CPB大鼠心肌细胞膜Glut-4蛋白表达(P<0.05);与CPB组相比,NAD+治疗组心功能降低有所改善,表现为LVIDs和LVIDd值下降、FS和LVEF值升高(均P<0.05)。结论 NAD+治疗可明显改善SD大鼠CPB后的心功能,其机制可能与激活SIRT3,进而增加下游AMPK的磷酸化和该酶活性,以及增加心肌细胞膜Glut-4蛋白表达,并促进CPB术后心肌对葡萄糖的摄取和利用以及ATP的生成有关。     

阿托伐他汀对大鼠心肌梗死后心肌纤维化的干预作用

目的通过研究阿托伐他汀对大鼠急性心肌梗死(AMI)后periostin蛋白及转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA的表达水平的影响,探讨阿托伐他汀对于AMI后心肌纤维化的干预作用机制。方法将60只SD雄性大鼠随机分为正常组(Sham)、单纯心肌梗死组(MI)和心肌梗死联合阿托伐他汀组(Ato);注射异丙肾上腺素造心肌梗死模型,Ato组于心肌梗死造模成功后给予阿托伐他汀5 mg/(kg·d)灌胃,MI组及Sham组以同等剂量生理盐水灌胃;各组分别于术后8周取材,病理技术:Masson染色观察并计算心肌纤维化中胶原纤维的容积分数(CVF);利用RT-PCR技术检测心肌periostin蛋白及TGF-β1 mRNA的表达水平。结果 Masson染色提示MI组及Ato组CVF均显著高于Sham组(P0.01);而Ato组CVF明显低于MI组(P0.05);RT-PCR结果MI组和Ato组较Sham组的TGF-β1 mRNA及periostin蛋白表达量均显著增加(P0.01);Ato组比MI组TGF-β1 mRNA及periostin蛋白的表达量显著下降(P0.05)。结论阿托伐他汀能够抑制periostin蛋白和TGF-β1 mRNA的表达,其机制可能为抑制TGF-β1/periostin信号传导通路,进而抑制心肌纤维化,并保护心脏功能。     

豁痰解毒通络方对SD大鼠颈总动脉球囊损伤后炎性因子表达的影响

目的探讨豁痰解毒通络方对SD大鼠颈总动脉球囊损伤后炎性因子表达的影响。方法建立球囊损伤大鼠颈总动脉模型,随机分为假手术组、模型组、中药组、西药组、中西药组。灌胃给药28d后,用酶联免疫吸附法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)的表达;逆转录-聚合酶链反应检测损伤侧颈总动脉中Toll样受体4(TLR4)及IL-6的mRNA表达。结果模型组与假手术组比较,血清中TNF-α、IL-6水平均升高(P 0.01);中药组、西药组、中西药组与模型组比较,血清中TNF-α、IL-6的水平均降低(P 0.05)。模型组与假手术组比较,IL-6、TLR4mRNA表达水平显著升高(P 0.01);中药组、西药组、中西药组IL-6mRNA表达水平较模型组显著降低(P 0.01)。中药组、西药组与中西药组TLR4mRNA表达水平较模型组降低(P 0.05或P 0.01),中西药组下降程度更明显(P 0.01)。结论豁痰解毒通络方能够降低大鼠颈总动脉球囊损伤后炎性因子TNF-α、IL-6、TLR4的含量,减轻炎症反应。