神经节苷脂GM1对缺血缺氧后谷氨酸及其转运体神经元的作用

目的 :探讨神经节苷脂GM1对新生大鼠缺氧缺血性脑病保护作用及其可能的机理。方法 :通过建立新生鼠缺氧缺血性脑病动物模型 ,应用免疫组化方法 ,观察缺血缺氧后不同时期脑组织中谷氨酸及其转运体阳性神经元的动态变化 ,以及GM1对其的影响。结果 :缺血缺氧后 6h、1、3d大脑皮层和纹状体中谷氨酸阳性神经元明显减少 ,而谷氨酸转运体阳性神经元有所增加 ,GM1组脑组织损伤明显减轻 ,谷氨酸神经元及谷氨酸转运体神经元较单纯缺氧缺血组明显增多。结论 :神经节苷脂GM1对谷氨酸神经元具有保护作用 ,可能是通过部分提高谷氨酸转运体的表达而发挥作用     

神经节苷脂在大鼠脑外伤中对GAP-43蛋白表达的影响

目的:研究神经节苷脂对大鼠自由落体脑损伤后脑内生长相关蛋白(GAP-43)表达的影响.方法:将S-D雄性大鼠随机分为4组:即正常对照组,假手术组,脑损伤(TBI)模型组,TBI后GM-1治疗组.复制大鼠自由落体脑损伤模型,在外伤后1、3、7、14 d,利用HE染色观察神经细胞形态和免疫组化染色检测神经细胞内GAP-43蛋白表达的变化.结果:脑内GAP-43蛋白的表达水平在头部损伤后逐渐升高,以伤后第三天、第七天最明显,随后有所下降,至第十四天仍轻度增高,TBI组各时段的GAP-43阳性蛋白表达均高于同时段正常对照组及假手术组,差异有统计学意义;神经节苷脂治疗组能促进TBI后GAP-43蛋白的表达,与同时段模型组对比差异有统计学意义,P均<0.05.结论:GAP-43蛋白在大鼠受到脑外伤后表达增高,可促进中枢神经损伤后的再生.神经节苷脂GM-1在TBI后可促进脑内GAP-43的表达,有稳定细胞膜、减轻细胞水肿、促进神经再生的作用.     

知母皂苷元对谷氨酸引起的皮层神经元损伤的保护作用研究

目的观察知母皂苷元(Sarsasapogenin,SAR)对谷氨酸引起的皮层神经元损伤的保护作用。方法大鼠乳鼠大脑皮层神经元,培养7 d后用于实验。倒置相差显微镜观察神经元树突生长发育情况;用MTT法测定细胞活力;Ho-echst33258核染色观察细胞凋亡的形态学改变;Western印迹法检测神经元SYP、caspase-3、钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达水平。结果形态学观察结果显示谷氨酸可明显抑制神经元树突的生长发育,表现为神经元树突总长度明显降低、一级树突数目明显减少、最大分支级数明显减少及胞体面积缩小。SAR(10、30、100μmol.L-1)可明显抑制谷氨酸对神经元树突生长发育的抑制作用,并呈明显浓度依赖。MTT和Ho-echst33258核染色结果显示谷氨酸可降低神经元细胞活力及增加神经元细胞凋亡百分比。SAR(10、30、100μmol.L-1)能明显对抗谷氨酸引起的神经元细胞活力降低及细胞凋亡百分比增加。Western印迹结果显示谷氨酸可明显降低SYP蛋白表达水平及增加活性caspase-3、钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达水平。SAR(10、30、100μmol.L-1)可明显对抗谷氨酸引起SYP蛋白表达降低及活性caspase-3、钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达增加。结论知母皂苷元能够明显对抗谷氨酸引起的皮层神经元损伤作用。     

神经节苷脂对大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3表达的影响

目的研究单唾液四己糖神经节苷脂（Monosialoganglioside,GM1）对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后神经功能缺失评分及Caspase-3表达的影响,探讨其神经保护作用机制。方法42只Wistar雄性大鼠随机分为三组,即神经节苷脂GM1治疗组,脑缺血再灌注损伤模型组,正常对照组。采用改良线栓法建立右侧大脑中动脉缺血再灌注模型。治疗组缺血即刻腹腔注射30mg/kg神经节苷脂,模型组注射等剂量生理盐水,运用Zea-Longa法进行神经病学评分,用光镜观察脑组织形态学改变,用免疫组化法检测Caspase-3。结果与模型组相比,GM1治疗组脑组织变性坏死程度轻,神经功能缺损评分显著减少,Caspase-3阳性细胞减少（P〈0.01）;模型组Caspase-3表达明显多于对照组（P〈0.01）,而且缺血再灌注24h较再灌注1h明显增多（P〈0.01）。结论GM1可以通过抑制Caspase-3的表达来抑制细胞凋亡,从而发挥脑缺血再灌注损伤的保护作用。     

参麦注射液对早产脑损伤仔鼠脑组织GAP-43和IL-21表达的影响

目的从宫内感染致早产的仔鼠脑组织中神经生长相关蛋白（GAP-43）和白介素21（IL-21）的表达方面研究参麦的脑损伤保护机制。方法采用孕鼠腹腔注射脂多糖造成宫内感染模型,将早产仔鼠随机分为：模型组、神经节苷脂组、参麦组、联合组,腹腔注射生理盐水组所生仔鼠为对照组,每组保证成活8只。7日龄时开始分组用药：模型组予生理盐水腹腔注射,神经节苷脂组予申捷腹腔注射,参麦组予参麦注射液腹腔注射,联合组予申捷联合参麦注射液腹腔注射,共14 d。21日龄时取仔鼠脑组织,应用免疫组化方法对GAP-43和白介素21进行测定。结果用药组仔鼠脑组织中GAP-43表达增多、白介素21表达减少,其中联合组疗效优于神经节苷脂组和参麦组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论参麦注射液对宫内感染致早产脑损伤仔鼠的脑保护作用可能与其促进脑组织中GAP-43表达增多、抑制白介素21表达有关。     

S-腺苷蛋氨酸通过降低Cav-1的表达保护KCl刺激引起的神经元损伤

目的探讨S-腺苷蛋氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)对KCl刺激引起的原代培养的小鼠皮层神经元损伤是否有保护作用及机制。方法将原代培养1周的小鼠皮层神经元随机分为3组:正常(Control)组、KCl组、SAM-KCl组。用倒置显微镜观察各组细胞形态的变化,用q PCR、Western blot分别检测各组质膜微囊结构蛋白~(-1)(caveolin~(-1),Cav~(-1))mRNA及蛋白的表达变化。结果 0.05 mol·L~(-1)KCl作用于原代培养1周的小鼠皮层神经元12 h可使神经元产生明显的损伤,突起缩短变细,胞体变小,细胞聚团。0.02 mol·L~(-1)SAM预处理6 h可明显降低KCl引起的细胞损伤,q PCR、Western blot分析显示KCl可使原代培养1周的皮层神经元Cav~(-1) mRNA及蛋白表达增高(P<0.01),SAM可降低KCl引起的神经元Cav~(-1) mRNA及蛋白表达增高(P<0.05)。结论 SAM对KCl引起的神经元损伤有保护作用,该保护作用与其降低Cav~(-1)的表达有关。     

CNTF与NGF对视神经损伤模型大鼠视网膜神经节细胞的影响

目的:本实验通过给视神经不全损伤模型大鼠玻璃体腔内注射外源性神经生长因子(NGF)及外源性睫状神经营养因子(CNTF),观察两种神经营养因子对视网膜神经节细胞是否具有一定的保护作用.方法:将30只Wistar大鼠随机分组,利用无创血管钳造成大鼠左眼视神经的不全损伤,右眼不予任何处理,作为正常对照组.并在造模成功后分别给予大鼠左眼玻璃体腔内注射NGF及CNTF各2μL,作为两组实验治疗组,实验对照组在相同时间给予大鼠左眼玻璃体腔内注射平衡盐溶液2μL.在大鼠视神经不全损伤后5d、10d时分别做RGC计数、光镜组织学观察及生长相关蛋白-43(growth associated pro-tein-43,GAP-43)免疫组织化学检测.结果:光镜下,伤后5d-10d光镜下观察实验组视网膜及视网膜神经节细胞均有不同程度水肿及肿胀,RGC数量明显比正常对照组下降,有明显的统计学差异(P＜0.01),两组实验治疗组视网膜神经节细胞数目明显高于实验对照组,具有明显统计学差异(P＜0.05).免疫组织化学染色结果,伤后5d实验组GCL层GAP-43表达均呈阳性,实验治疗组GAP-43的表达量明显高于实验对照组,具有明显统计学差异(P＜0.05).10d后实验治疗组GAP-43表达量达高峰,实验对照组GAP-43表达量明显减少,具有明显统计学差异(P＜0.05).结论:在视神经受损后NGF与CNTF能提高视网膜神经节细胞的存活率,延长GAP-43的表达时间并增加其表达量,对视网膜神经节细胞具有一定的保护作用.     

牛磺酸对NMDA诱导的视网膜神经节细胞损伤的保护作用

目的 探讨牛磺酸对N-甲基-D天冬氨酸(NMDA)诱导的转基因的视网膜神经节细胞系RGC-5损伤的保护作用.方法 体外培养RGC-5细胞,用NMDA(100 μmol/L)诱导损伤.设正常对照组(A组)、单纯损伤组(B组)和地卓西平(MK-801)对照组(C组);以终浓度分别为0.01 mM(D1组)、0.1 mM(D2组)和1 mM(D3组)的牛磺酸预保护12h.用倒置显微镜下观察细胞形态,MTT比色法测定细胞存活率,Hochest染色检测细胞凋亡,RT-PCR测定B细胞淋巴瘤白血病2(Bcl-2)和B细胞淋巴瘤白血病相关X蛋白(Bax)mRNA表达的变化.结果 NMDA可诱导RGC-5细胞损伤.与B组比较,0.1mM和1mM牛磺酸可提高RGC-5细胞存活率,减少细胞凋亡(P＜0.05).0.1mM牛磺酸预保护后Bcl-2 mRNA表达水平增加,Bax mRNA的表达水平降低(P＜0.05).结论 牛磺酸可抑制NMDA诱导的视网膜神经节细胞凋亡,保护视网膜神经元.其机制可能与其上调Bcl-2mRNA表达和下调Bax mRNA的表达有关.     

银杏内酯B对背根神经节神经元谷氨酸损伤的保护作用

目的:观察银杏内酯B(Gin)对体外培养的胚胎大鼠背根神经节(DRG)神经元谷氨酸(Glu)损伤的保护作用.方法:Wistar胎鼠DRG神经元分散培养48 h后,用Glu(200 μmol/L)造成神经元损伤(Glu损伤组),并同时给予Gin 50 μmol/L(Gin保护组),观察添加Gin和末添加Gin孵育的Glu损伤的神经元活细胞生长状况,并且利用流式细胞仪检测各组神经元的凋亡率,共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)检测各组细胞内钙离子荧光强度.结果:用Gin孵育的DRG神经元生长状况良好,接近于正常对照组细胞,较损伤组DRG神经元生长状态有明显改善;Glu损伤组DRG神经元细胞凋亡率(41.1%)高于对照组(2.5%)和Gin保护组(7.6%).Glu损伤组细胞内钙离子荧光强度较对照组明显增高(P＜0.01),Gin保护组细胞内钙离子荧光强度较Glu损伤组明显降低(P＜0.01),Gin保护组DRG神经元胞体内钙离子的荧光强度与正常对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论:Gin可通过减低钙离子内流,从而对Glu损伤的DRG神经元产生保护作用.     

NGF和神经节苷脂GM1对2,5-己二酮中毒性PC12细胞的协同保护作用

目的：研究神经生长因子（Nerve Growth Factor，NGF）和神经节苷脂GM1（Ganglioside GM1）对2，5-己二酮（2，5-HD）中毒的保护作用。方法：将细胞随机分为对照组和实验组，对照组于正常培养基生长，实验组以2，5-HD、NGF和GM，处理。采用Giemsa染色法在倒置显微镜下观察细胞形态，MTT法检测细胞存活率，流式细胞计数法检测细胞凋亡率。结果：2，5-HD处理后，细胞损伤存活率降低（P〈0．01），凋亡率上升（P〈0．01）；以NGF和GM1预处理的细胞显示出明显的抗损伤性，细胞存活率提高（P〈0．05），凋亡率下降（P〈0．05），且在联合时较单独应用效果更显著（P〈0．01）。结论：2，5-HD抑制PCI2细胞存活和增殖，诱导细损伤和凋亡。NGF和GM1对2，5-HD中毒性PC12细胞显示出协同保护作用。