临床分离多重耐药假单胸菌耐药机制的研究

为了解假单胞菌对亚胺培能、头孢他啶、头孢哌酮和氨曲南的耐药机制。以绿脓杆菌标准株ＰＡＯ１和对照株ＴＮＰＯＯ４为对照，应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ外膜蛋白图谱和β－内酰胺酶测定方法，研究了临床分离的两株多重耐药绿脓杆菌和一株ＩＭＰ耐药荧光假单胞菌。     

铜绿假单胞菌对β—内酰胺类抗生素耐药机制的研究进展

铜绿假单胞菌能通过产生多种β—内酰胺酶、改变细菌外膜的渗透性及各种主动泵出系统以及形成生物膜而对抗生素产生耐受性，本文就其对临床上应用最广的β—内酰胺类抗生素耐药机制的研究进展做一综述。     

多重耐药铜绿假单胞菌耐药状况分析

目的 了解医院铜绿假单胞菌对常用抗菌药物的耐药谱动态变化,为临床合理选用抗菌药物提供依据.方法 应用回顾性调查方法,对本院从2005年1月至2009年6月间临床样本分离的铜绿假单胞菌的药敏试验进行对比统计分析.结果 所分离出的1125株铜绿假单胞菌对常用抗菌药物的耐药率总体呈上升趋势.耐药率最低的是美罗培南（33%）.铜绿假单胞菌对常见抗菌药物的耐药性均有显著性变化.结论 本地区铜绿假单胞菌耐药率有显著性变化,多重耐药现象严重,动态监测其耐药谱变化是防止铜绿假单胞菌的感染率攀升的重要措施.     

铜绿假单胞菌临床分离株耐药性分析

采用VITEK32细菌鉴定／药敏仪或K-B法检测临床分离的213株铜绿假单胞菌（PA）对26种抗生索的耐药性。结果高产β-内酰胺（AmpC酶）不断增加,提示应开展PA耐药性检测,指导临床合理用药。     

铜绿假单胞菌临床分离株的耐药性分析

目的:了解临床分离的铜绿假单胞菌的耐药特征,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法:回顾性调查并分析我院近3年铜绿假单胞菌的临床分离情况及其耐药特征。结果:近3年临床分离出铜绿假单胞菌1287株,占革兰阴性(Gˉ)杆菌的21%,药敏结果显示,对亚胺培南、美洛培南及β-内酰胺酶抑制剂耐药率增加(>20%),对其他β-内酰胺类、氨基糖苷类及喹诺酮类的耐药率较高(>30%),仅对头孢他啶和阿米卡星保持较高的敏感率(>75%)。结论:铜绿假单胞菌对碳青霉烯类及β-内酰胺酶抑制剂敏感性下降,对多种药物耐药率较高,应合理应用抗菌药物,加强耐药性监测。     

铜绿假单胞菌耐药机制的研究

铜绿假单胞菌是主要的院内感染条件致病菌,常常感染免疫力低下的患者,同时对多种抗菌药物耐药,多重耐药性足导致其治疗效果不理想的重要原因.主动外排系统及生物被膜的形成是铜绿假单胞菌耐药的主要机制,本文对铜绿假单胞菌5种耐药机制的最新研究进展进行了综述.     

呼吸重症监护病房多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因研究

目的 观察我院呼吸重症监护病房(RICU)临床分离多重耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶基因和Ⅰ类整合子标志物(qacE△1-sul1)存在状况.采用多基因聚类分析方法进行多重耐药菌株亲缘性分析.方法 收集RICU分离多重耐药铜绿假单胞菌33株,采用PCR方法检测8种β-内酰胺酶基因(TEM、SHV、PER、DHA、IMP、VIM、OXA-23、OXA-24)和qacE△1-sul1基因共9种.应用多基因聚类分析法分析菌株亲缘性.结果 33株多重耐药铜绿假单胞菌中blaTEM阳性8株(24.24%),blaVIM阳性6株(18.19%),blaIMP阳性3株(9.09%),blaSHV阳性2株(6.06%),blaDHA阳性5株(15.15%),blaOXA-23,blaOXA-24,blaPER均未检出,qacE△1-sul1基因阳性28株(84.85%).多基因聚类分析发现存在克隆传播现象.结论 我院RICU多重耐药铜绿假单胞菌携带多种β-内酰胺酶基因,以携带blaTEM基因为主.qacE△1-sul1携带率高,聚类分析显示存在克隆传播现象,应引起临床重视.     

铜绿假单胞菌中Ambler A和D类酶流行状况与药物敏感性研究

目的了解AmblerA和D类β-内酰胺酶在铜绿假单胞菌（PA）的流行状况及其与药物敏感性的关系。方法用琼脂稀释法检测101株铜绿假单胞菌对8种常用抗菌药物的最低抑菌浓度，并PCR测序法鉴定101株铜绿假单胞菌中AmblerA和D类β-内酰胺酶流行状况。结果101株铜绿假单胞菌对8种常用药物的MIC50的范围为2～32μg／ml。最有效的药物是美罗培南，但也仅能抑制80．2％的菌株。1种或1种以上β-内酰胺酶基因阳性的有27株，其中tem-1型是最常见的亚型，共有14株菌阳性；有10株菌oxa-10基因阳性；菌株PA36的oxa-I群酶基因在基因库中无完全同源序列，将其暂命名为oxa-56 like，并已提交基因库，序列号为EF437948。结论铜绿假单胞菌对β-内酰胺类耐药现象非常普遍，产酶株有对广谱抗菌药物广泛耐药的趋势。因此，早期及时地检出产酶菌株对临床治疗中抗菌药物的选择和控制感染的播散都是非常重要的。     

西安地区耐亚胺培南铜绿假单胞菌感染现状及危险因素分析

目的了解西安地区耐亚胺培南铜绿假单胞菌（i mipenem-resistant pseudomonas aeruginosa,IRPA）的感染现状及危险因素分析。方法收集2003年12月至2004年6月间西安地区6所三级甲等医院细菌室从临床标本分离到的非重复性铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa,PA）,采用标准纸片扩散法（Kirby Bauer,KB法）检测PA对13种药物的敏感性,并回顾性分析引起IRPA感染的危险因素。结果共分离PA258株,IRPA为113株,总分离率达43.80%;神经科和ICU分离率较高,分别为64.56%和53.33%;标本中痰的IRPA分离率最高为50.23%;除亚胺培南外,IRPA对替卡西林/克拉维酸耐药率最高（80.53%）,对环丙沙星耐药率最低（23.89%）;单因素分析发现患者住院时间≥4周、曾入住ICU、机械通气、气管插管（或切开）以及2周内接受过碳青酶烯类抗生素治疗与IRPA感染有关,但多因素Logistic回归仅确定了2项独立危险因素：入住ICU病房（RR=6.994）和2周内接受碳青酶烯类治疗（RR=5.553）。结论西安地区IRPA分离率较高,神经科和ICU是主要来源病区,IRPA主要表现为多重耐药。入住ICU和2周内接受过碳青酶烯类抗生素治疗是IRPA感染的独立危险因素。     

外膜蛋白OprD2缺失和金属酶产生在铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药中的作用

采用K-B法测定10种抗菌药物对44株铜绿假单胞菌的体外抗菌活性,使用双纸片协同试验进行金属酶筛选,用PCR方法对耐药基因OprD2、IMP和VIM基因进行检测和分析.结果 44株耐亚胺培南铜绿假单胞菌中,11株耐药菌经OprD2基因扩增呈阴性,扩增出IMP型阳性株4株,未检测到VIM型金属酶基因.认为北京天坛医院临床分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌,外膜蛋白OprD2缺失和产IMP型金属酶两种机制均起着重要作用.     

铜绿假单胞菌113株的耐药性分析

目的：分析铜绿假单胞菌对常用抗菌药物的耐药性,以指导临床对铜绿假单胞菌的合理用药。方法采用湖南天地人公司生产的TDR．200B细菌分析系统对临床标本中分离出的铜绿假单胞菌进行药敏试验,分析我院2010-02～2012-02分离的113株铜绿假单胞菌的耐药性。结果铜绿假单胞菌对19种常用抗菌药物的耐药率以亚胺培南最低（10.6％）,其次为阿米卡星（12.4％）;其中敏感株7株（6.2％）,多重耐药株25株（22.1％）,泛耐药株8株（7.1％）,其余耐药株73株（64.6％）。结论铜绿假单胞菌对19种常用抗菌药物存在不同的耐药性,应加强铜绿假单胞菌的耐药性监测,为临床合理选用抗菌药物提供依据。同时应对多重和泛耐药铜绿假单胞菌采取有效的预防措施,避免多重和泛耐药株的暴发流行。     

下呼吸道感染者痰检出耐亚胺培南铜绿假单孢菌的流行状况

目的了解下呼吸道感染(LRTI)者痰检出耐亚胺培南铜绿假单孢菌(PA)的流行状况。方法调查我院1998～2003年,痰培养为铜绿假单孢菌的LRTI患者的痰培养结果,药敏用MIC法测定。结果共有PA569株。耐亚胺培南(IMP)140株,占25%;前、后三年分别为38、102株,分别占同期总菌株的18%、28%;57%分布于神经内科和ICU,分布科室逐渐增多。耐IMP菌株的药物敏感率逐渐下降(普遍低于对IMP敏感株);各个科室的药敏状况不完全相同;比较敏感的药物有阿米卡星、P/T(哌拉西林他唑巴坦)、头孢他啶、哌拉西林,敏感率64%～50%;从神经内科和ICU分离的菌株耐药率相当高;联合药物可以明显提高敏感率。结论耐IMP菌株逐渐增加,分布更加广泛;药物敏感性不断下降,各个科室的耐药谱不尽相同,药物选择上一定要参考本科室的药敏状况,部分科室耐药严重,强调联合治疗。     

慢支病人铜绿假单胞菌和不动杆菌对抗菌药的耐药性研究

目的 探讨我院呼吸内科慢性支气管炎急性发作期住院病人痰的铜绿假单胞菌和不动杆菌对20种抗菌药的耐药性。方法 回顾性分析2003年1月至2005年12月期间,慢性支气管炎急性发作期病人的痰培养所分离的铜绿假单胞菌136株和不动杆菌127株,其对20种药物敏感试验抗菌药的耐药率差值。结果 铜绿假单胞菌的2004,2005年耐药菌株比2003年明显增加。鲁氏不动杆菌的2004,2005年耐药菌株比2003年没有明显增加,鲍曼／溶血不动杆菌的2004,2005年耐药菌株比2003年明显增加（P〈0．05）。结论 铜绿假单胞菌和不动杆菌属的耐药比率逐年上升。据此,调控抗菌药的使用。     

整合子及相关基因盒在临床分离铜绿假单胞菌中的分布

目的检测Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子及Ⅰ类整合子相关基因盒在铜绿假单胞菌临床分离株中的分布,分析整合子对细菌耐药性的影响。方法用纸片法对62株临床分离铜绿假单胞菌进行药敏试验;应用多重PCR法检测62株铜绿假单胞菌Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子;对Ⅰ类整合子阳性菌进行整合子相关基因盒检测。结果62株菌中有40株(64.5%)含有Ⅰ类整合子,1株(1.6%)含有Ⅱ类整合子;没有检测到Ⅲ类整合子阳性菌。在Ⅰ类整合子阳性菌中,有26株携带Ⅰ类整合子相关基因盒(65.0%);分离自同一科室的部分菌株携带大小相同的基因盒;Ⅰ类整合子阳性菌株的耐药率高于整合子阴性的菌株。结论Ⅰ类整合子及整合子相关基因盒在铜绿假单胞菌临床菌株中分布广泛,整合子在细菌耐药中发挥作用。     

鲍曼不动杆菌外膜蛋白研究进展

鲍曼不动杆菌是医院获得性感染主要致病菌之一,其外膜蛋白是指肽聚糖外脂质双层中间镶嵌的一些特殊的蛋白质.CarO、33-to-36-kDa、OprD等外膜蛋白丢失与细菌耐药有关,而OmpA外膜蛋白是重要的致病因素.其研究技术分为提取、分离和鉴定3个方面,超声物理法、双向凝胶电泳、质谱技术及免疫印迹是目前常用技术.     

多重耐药大肠杆菌外膜屏障机制的研究

目的研究临床分离的多重耐药大肠杆菌耐药的外膜屏障机制。方法用尿素－ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法对临床分离的大肠杆菌外膜孔蛋白进行分析，并用抽滤法测定大肠杆菌细胞内四环素浓度。结果临床分离的多重耐药大肠杆菌Ｒ３、Ｒ４、Ｒ２８、Ｒ３０外膜孔蛋白中均缺失ＯｍｐＦ，Ｒ３、Ｒ３０中同时缺失ＯｍｐＣ，Ｒ１２缺失ＯｍｐＡ。敏感菌株中均不缺失ＯｍｐＦ，但敏感株Ｓ２２缺失ＯｍｐＡ和ＯｍｐＣ。ＬＭ２１８（ＯｍｐＦ标准缺失株）、Ｒ２８细胞中稳态四环素浓度分别为敏感株Ｓ３６的８０％和４０％。结论外膜通透性的改变是大肠杆菌产生多重耐药的机制之一     

Contribution of different mechanisms to the resistance to fluoroquinolones in clinical isolates of Salmonella enterica

ObjectivesTo study the potential factors include gene mutation, efflux pump and alteration of permeability associated with quinolone-resistance of Salmonella enterica strains isolated from patients with acute gastroenteritis and to evaluate the degree of synergistic activity of efflux pump inhibitors when combined with ciprofloxacin against resistant isolates.MethodsAntimicrobial resistance patterns of fifty-eight Salmonella isolates were tested. Five isolates were selected to study the mechanism of resistance associated with quinolone group, including mutation in topoisomerase-encoding gene, altered cell permeability, and expression of an active efflux system. In addition, the combination between antibiotics and efflux pump inhibitors to overcome the microbial resistance was evaluated.ResultsFive Salmonella isolates totally resistant to all quinolones were studied. All isolates showed alterations in outer membrane proteins including disappearance of some or all of these proteins (Omp-A, Omp-C, Omp-D and Omp-F). Minimum inhibitory concentration values of ciprofloxacin were determined in the presence/absence of the efflux pump inhibitors: carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrazone, norepinephrin and trimethoprim. Minimum inhibitory concentration values for two of the isolates were 2–4 fold lower with the addition of efflux pump inhibitors. All five Salmonella isolates were amplified for gyrA and parC genes and only two isolates were sequenced. S. Enteritidis 22 had double mutations at codon 83 and 87 in addition to three mutations at parC at codons 67, 76 and 80 whereas S. Typhimurium 57 had three mutations at codons 83, 87 and 119, but no mutations at parC.ConclusionsEfflux pump inhibitors may inhibit the major AcrAB-TolC in Salmonella efflux systems which are the major efflux pumps responsible for multidrug resistance in Gram-negative clinical isolates.     

湖北地区2000～2007年铜绿假单胞菌临床分离株的耐药性分析

目的了解湖北地区临床分离的铜绿假单胞菌的耐药变迁,为临床合理使用抗生素提供依据。方法综合分析湖北地区17家医院2000～2007年的铜绿假单胞菌分离情况及其对各种抗生素的耐药率。结果湖北地区铜绿假单胞菌的年分离量和对各抗生素的耐药率基本呈逐年上升的趋势,对头孢唑啉、头孢呋辛的耐药率几乎达100％,对头孢曲松、头孢噻肟的耐药率〉50％,对庆大霉素、加替沙星的耐药性大大增加（耐药率在40％～50％之间）,对环丙沙星、左氧氟沙星、氨曲南、哌拉西林、他唑巴坦保持中度敏感性（耐药率在30％--40％之间）,对阿米卡星、头孢哌酮／舒巴坦、头孢他啶、头孢吡肟、亚氨培南、美洛培南保持相对较好的敏感性（耐药率〈30％）。结论铜绿假单胞菌对各种抗生素的耐药性逐年增加,临床上应选择敏感性相对较好的药物作为铜绿假单胞菌的经验用药,以避免医疗成本的浪费及耐药性加剧。     

10株鹦鹉热衣原体菌株主要外膜蛋白基因的比较性研究

目的　进行比较性研究了 10株鹦鹉热衣原体菌株 ,分析其主要外膜蛋白 (MOMP)基因的限制性内切酶图谱和基因同源性。方法　接种鸡胚卵黄囊对菌株进行培养 ,收集培养物 ,通过聚合酶链式反应 ,扩增了 10株Cps的主要外膜蛋白基因 ,获得 10 5 8bp的片段 ,根据限制性片段长度多态性 (RFLPs)技术 ,利用AluⅠ酶切此片段 ,获得其限制性图谱。将此片段连入 pGEMT载体 ,进行基因测序。 结果　有 5株菌的MOMP基因完全相同 ,将它们与其它 5株比较 ,仅有个别碱基不同。提示MOMP基因是鹦鹉热衣原体中高度保守的序列     

红霉素对铜绿假单胞菌蹭行运动的抑制

目的体外培养铜绿假单胞菌（pseudomonasaeruginosa，PA），观察低浓度红霉素对铜绿假单胞菌蹭行运动（twitchingmotility）的影响。方法将铜绿假单胞菌ATCC1244菌株接种于3组不同浓度红霉素（2．5mg／L、0.5mg／L、0.25ms／L）的细菌培养基中，同时接种于未加红霉素的对照培养基中，采用肉眼观察、免疫荧光显微镜检查、免疫印迹实验、点杂交实验、电镜观察等方法观察铜绿假单胞菌蹭行运动的变化及鉴别其蹭行运动的分子组成。结果经过18—36h的孵育，LB平板上不同浓度的红霉素对PA蹭行运动有抑制作用，细菌光晕（halation）直径与药物浓度呈反比；18h时细菌的平均光晕直径2．5mg／L组为（0.48±0．14）cm，0．5mg／L组为（0．64±0．20）cm，0．25mg／L组为（0.95±0.18）cm，对照组为（1．40±0．21）cm，组间比较差异有统计学意义（F=123．15，P〈0．01）；24h时2．5mg／L组为（0．67±0．12）cm，0．5mg／L组为（0．82±0.23）cm，0．25mg／L组为（1．18±0．24）cm，对照组为（1．58±0．28）cm，组间比较差异有统计学意义（F=76．37，P〈0．01）；36h时2．5mg／L组为（0.91±0．17）cm，0．5mg／L组为（1．04±0．32）cm，0．25mg／L组为（1．49±0．31）cm，对照组为（2．07±0．38）cm，组间比较差异有统计学意义（F=54．75，P〈0．01）。免疫荧光显微镜观察结果可见细菌菌体一端呈簇状突起，为Ⅳ型菌毛的位置所在，簇状突起的多少与药物浓度呈反比。免疫印迹实验结果显示，随着药物浓度的减少，Ⅳ型菌毛的主要成分PilA蛋白表达增加。点杂交实验结果显示在蹭行运动中起作用的PilA蛋白主要表达在光晕的最外周，但组间未见明显区别。电镜下可见红霉素作用后PA菌体一端的Ⅳ型菌毛较对照组减少，部分脱离菌体。结论低浓度红霉素对PA的蹭行运动有抑制作用，且与红霉素浓度呈正比。