疱疹病毒侵入介体在免疫应答及抗肿瘤免疫中的研究进展

T细胞以及抗原提呈细胞上的受体和它们的配体所传递的激活或抑制信号,对于免疫细胞的有效激活或保持休眠状态极其重要.肿瘤坏死因子受体超家族和CD28-B7家族就包含了很多这样的调节分子.疱疹病毒侵入介体(HVEM)能在其配体肿瘤坏死因子超家族成员14(LIGHT)的作用下参与细胞免疫应答的激活;同时HVEM作为B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)的配体,使其转导共抑制信号.本文介绍HVEM精细调节免疫的功能并讨论其在抗肿瘤免疫中的新进展.     

系统性红斑狼疮患者血清单纯疱疹病毒侵入介体和白细胞介素-17的水平及意义

目的检测系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中可溶性单纯疱疹病毒侵入介体(HVEM)和白细胞介素17(IL-17)的水平并探讨其临床意义。方法应用ELISA法检测48例SLE患者和16例健康体检者血清中可溶性HVEM和IL-17水平,并分析其相关性。结果 SLE患者血清可溶性HVEM水平为(168.5±106.7)μg/L,健康者血清可溶性HVEM为(42.9±11.8)μg/L,两者比较差异有统计学意义(P<0.05);患者血清IL-17水平为(295.5±151.7)pg/mL,健康者血清IL-17水平为(229.3±97.1)pg/mL,两者比较差异有统计学意义(P<0.05),且血清可溶性HVEM水平与L-17水平呈正相关(r=0.433,P<0.05)。结论 SLE患者血清可溶性HVEM可能是SLE的一种新型诊断标志物,检测血清HVEM对SLE的辅助诊断及疗效评估有一定的参考价值。     

人巨细胞病毒UL144基因克隆表达及其对树突状细胞功能的影响

目的:构建携带人巨细胞病毒(hCMV) UL144基因的重组腺病毒,研究UL144基因修饰的树突状细胞(dendritic cell,DC)的功能变化。方法:从hCMV-DNA阳性患者外周血提取cDNA,采用PCR技术扩增出UL144基因。采用AdEasy系统构建携带hCMV UL144基因的重组腺病毒载体pAd-UL144,转染HEK293细胞后包装产生重组腺病毒Ad-UL144。通过RT-PCR检测目的基因的表达。将此重组腺病毒转染小鼠骨髓来源的DC,采用流式细胞术检测DC表面分子,采用ELISA技术分析DC培养上清中的细胞因子,采用3H-TdR掺入法检测UL144基因修饰的DC激活T细胞增殖的能力。结果:成功将UL144基因片段克隆至载体上,并经HEK293细胞包装出病毒颗粒,经测定病毒滴度为3×1010 pfu/ml。流式细胞术检测显示,UL144基因修饰的DC表面分子CD80、CD86和I-Ad表达水平低于对照组(P<0.01)。ELISA分析表明,UL144基因修饰的DC分泌TNF-α、IL-6和IL-1β的能力减弱(P<0.05)。UL144基因修饰的DC介导的T细胞增殖功能明显低于DC对照组(P<0.01)。结论:UL144基因修饰的DC具有维持相对未成熟状态的能力,并减弱了对抗原特异性T效应细胞的刺激功能。     

BTLA介导的负调共刺激信号对小鼠心脏移植受体Treg的影响

目的 探讨人疱疹病毒侵入介导因子(HVEM)基因突变体腺病毒载体对小鼠心脏移植受体Treg(调节性T细胞)的影响.方法 HVEM基因突变体腺病毒载体转染心脏移植物,行颈部异位心脏移植后观察其对受体小鼠Treg数量和功能的影响,并检测该腺病毒对供受体混合淋巴细胞培养体系中IL6和TGF-β的影响.结果 HVEM突变体腺病毒载体转染心脏移植物后对移植受体Treg数量有增加,功能有增强的作用,移植物存活时间较对照组显著延长;该腺病毒处理供受体混合淋巴细胞培养体系后,培养上清液中IL-6的表达较对照组显著上调.结论 HVEM突变体腺病毒载体在延长小鼠心脏移植物存活同时提高受体Treg的数量,并显著上调了其相关细胞因子的表达,提示HVEM-BTLA通路通过干预受体Treg功能是延长移植物存活的可能机制.     

慢性髓性白血病来源的树突状细胞的体外扩增培养

目的 :探讨慢性髓性白血病 (CML)来源的树突状细胞 (DC)的体外扩增及其功能 .方法 :采用两步法 ,首先将慢性髓性白血病骨髓或外周血CD34+ 细胞与rhFlt3 L和rhTPO共育 7d,再用rhGM CSF ,rhTNF α及rhIL 4诱导培养1 4d ;同时以rhGM CSF ,rhTNF α及rhIL 4直接诱导体系作对照 .获得的DC通过免疫表型检测、电镜分析及染色体鉴定 ,并用MTT法检测其刺激T细胞增殖能力及T细胞对CML细胞的杀伤作用 .结果 :两步法培养 2 1d ,CML的CD34+ 细胞扩增 (76 . 5 6± 5 . 1 7)倍 ,DC产率 (39. 1 0± 8. 0 3) % ,直接诱导产生DC扩增倍数及比例均低于两步法 (P <0 . 0 1 ) ,且此DC能刺激自体或异体T细胞增殖进而杀伤CML细胞 .结论 :两步法体外扩增培养可明显提高DC前体总数及产率 ,优于直接诱导培养 ;CML细胞来源的DC可诱导抗白血病免疫应答的产生     

小鼠髓系树突状细胞上4-1BB分子的功能性表达

目的 探讨小鼠髓系DC(CD8α-)中4-1BB的功能性表达。方法 采用免疫荧光标记和流式细胞仪检测DC上4-1BB分子的表达,用酶联免疫方法检测DC分泌的IL-2和IL-12。结果 小鼠髓系DC前体细胞中已有4-1BB分子表达,且随着DC的分化发育和成熟,其表达上调。激发型抗4-1BB分子的抗体2A刺激的DC分泌IL-2和IL-12能力增强,而2A抗体联合TNF-α刺激的DC分泌IL-2和IL-12的量明显高于两者单独刺激组(P<0.05)。结论 小鼠髓系DC表达的4-1BB具有功能性。     

树突状细胞表面共刺激分子在哮喘小鼠中的作用研究

目的:研究哮喘小鼠骨髓来源树突状细胞(DCs)的表型及共刺激分子在哮喘发病中的影响.方法:用卵清蛋白建立哮喘模型,利用rmGM-CSF和rmIL-4体外诱导骨髓细胞分化为DCs,流式细胞仪检测DCs表面共刺激分子的表达,混合淋巴细胞反应检测DCs刺激同种异体的T淋巴细胞增殖的能力.结果:在两种细胞因子的作用下,从骨髓中可以诱导出大量的DCs;且均表达DCs的表面标志(33D1).哮喘组DCs表达CD86分子的水平高于对照组,而CD40、CD80在两组之间没有差异;哮喘组与对照组DCs均能强烈刺激同种异体T淋巴细胞的增殖,哮喘组DCs的刺激能力明显强于对照组.结论:哮喘组DCs的抗原递呈能力增强,表明DCs在哮喘的发病中可能起着重要作用.     

CD137信号对小鼠树突状细胞表面TLR4表达的调节

目的 探讨CD137（4-1BB）激发型单克隆抗体2A对小鼠未成熟树突状细胞株DC2.4表面TLR4表达的调节。方法 以流式细胞术检测不同剂量2A、LPS,或LPS预刺激后再加入2A等因素作用下,DC2.4表面的TLR4表达情况。结果 LPS下调TLR4表达,2A使DC2.4上TLR4表达上调,并拮抗LPS对TLR4的下调作用。LPS预处理后再加入2A,也拮抗LPS的下调作用。结论 CD137信号可以上调DC2.4表面TLR4的表达。     

肿瘤抗原冲击的树突状细胞对小鼠肾细胞癌的治疗作用研究

目的 树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗是近年来肿瘤免疫治疗的热点,文中观察肿瘤冻融抗原体外冲击的DC对肾细胞癌(renal cell carcinoma, RCC)的治疗作用. 方法 反复冻融法制备肿瘤抗原,Lowry法测定肿瘤抗原蛋白浓度,小鼠重组巨噬细胞粒细胞集落刺激因子(human granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)、白细胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)培养扩增小鼠DC,肿瘤抗原体外冲击制备DC瘤苗,DC瘤苗与淋巴细胞混合培养诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL),LDH释放法测定CTL的杀伤活性,小鼠皮下接种Ranca细胞荷瘤后72 h皮下接种DC瘤苗,1次/周,共接种3次,荷瘤后4周取瘤体称重. 结果 小鼠RCC Ranca细胞冻融抗原体外冲击制备的DC瘤苗具有典型的DC形态特征与免疫表型特征,在体外能有效诱导肿瘤特异性CTL生成,对于小鼠RCC Ranca细胞具有较强的杀伤作用,体内接种DC瘤苗治疗组小鼠肿瘤体积较等渗盐水对照组及细胞因子激活的杀伤(lymphokine activated killev,LAK)细胞治疗对照组明显缩小, DC瘤苗治疗组小鼠的瘤体重较等渗盐水对照组(P<0.01)及LAK细胞治疗对照组(P<0.05)显著减小. 结论 肿瘤冻融抗原体外冲击的DC瘤苗对小鼠RCC具有明显的治疗作用,本研究为DC免疫治疗复发、难治性RCC提供了实验依据.     

创伤小鼠骨髓来源树突状细胞诱导T细胞应答的能力变化

目的：研究失血合并闭合性骨折小鼠骨髓来源树突状细胞（BMDC）诱导异源T细胞应答能力的变化.方法：致伤后24h分离小鼠骨髓细胞,体外应用重组小鼠粒细胞/巨噬细胞-集落刺激因子（rmGM-CSF）诱导BMDC,通过混合淋巴细胞反应（MLR）检测未成熟、成熟树突状细胞（DC）诱导异源T细胞的应答能力,流式细胞术检测BMDC表面主要组织相容性复合物Ⅱ类分子（MHCⅡ）及共刺激分子CD40、CD80、CD86表达,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测脂多糖（LPS）刺激的BMDC培养上清中白细胞介素-12（IL-12）p40、IL-12p70以及白细胞介素-10（IL-10）水平的变化.结果：无论是否经过LPS诱导,创伤组小鼠BMDC介导的MLR值均明显低于对照组值（P〈0.05）,创伤组小鼠BMDC在LPS刺激前后的CD40表达均明显低于对照组[（4.0±1.0）%vs（22.0±3.5）%;（56.0±7.5）%vs（91.0±8.0）%,P〈0.01],但MHCⅡ、CD80和CD86表达在2组间差异无显著性.创伤组小鼠BMDC在体外经LPS刺激24h后其IL-12p40、IL-12p70分泌水平均明显低于对照组[（45.0±6.5）vs（78.0±6.8）ng/L;（9.0±1.0）vs（18.0±1.9）ng/L,P〈0.05],但创伤组小鼠BMDC分泌IL-10的能力与对照组相比差异无统计学意义.结论：创伤小鼠BMDC诱导T细胞应答的能力降低,该变化可能与其共刺激分子CD40表达降低及IL-12分泌不足有关.     

大鼠骨髓树突状细胞的体外分离培养及生物学特性研究

目的 探讨体外分离培养大鼠骨髓来源树突状细胞(DC)的方法并对其生物学特性进行研究.方法 应用粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和IL-4诱导培养从大鼠管状骨中提取的骨髓细胞5 d后,将细胞分成脂多糖(LPS)刺激组和未刺激组(对照组),48 h后进行形态学观察,用流式细胞仪检测组织相容性复合体Ⅱ(MHC-Ⅱ)和CD80的表达,用ELISA法测定培养上清中IL-6和IL-12的含量.结果 培养的大鼠骨髓细胞具有树突状突起,具有DC的典型形态.培养7 d后,对照组MHC-Ⅱ、CD80表型表达阳性率分别为5713%和29.1%,LPS刺激组MHC-Ⅱ、CD80表型表达阳性率分别为70.9%和73.5%;LPS刺激组IL-6和IL-12含量高于未刺激组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功建立了大鼠DC体外分离培养和诱导成熟的方法;在分化成熟过程中,DC在表型和细胞因子分泌功能上均发生了变化.     

小鼠骨髓来源树突细胞体外扩增和鉴定

目的　探讨从小鼠骨髓分离纯化及大量扩增树突细胞 (DC)的方法 ,并对其行免疫表型和形态鉴定。　方法　制备 Balb/ c小鼠骨髓细胞 ,利用 0 .83% NH4 Cl- Tris溶液、抗鼠 CD4 / CD8/ CD4 5R单克隆抗体和补体溶液 ,依次去除红细胞、淋巴细胞、单核 -巨噬细胞、粒细胞等混杂细胞以获得纯化的 DC,再将其培养于含有小鼠重组的粒细胞 -巨噬细胞集落刺激因子 (m GM- CSF)和白细胞介素 4 (m IL - 4 )的 RPMI 1 6 4 0营养液中 ,培养第 6～ 8天收集悬浮的细胞 ,电子显微镜观察细胞形态并用流式细胞术检测小鼠 DC细胞表面特有的 CD1 1 b抗原和 MHC- 类分子的表达量。　结果　每只小鼠可扩增到 (2～ 4 )× 1 0 6个 DC细胞 ,细胞纯度 >85 % ;细胞表面高水平表达小鼠 DC细胞特异性抗原 CD1 1 b和 MHC- 类分子 ,电镜下细胞形态符合典型的树突细胞形态。　结论　联合应用 m GM- CSF和m IL- 4刺激小鼠骨髓细胞可扩增到大量高纯度的树突细胞     

青藤碱对小鼠骨髓树突状细胞免疫功能的影响

目的研究青藤碱对小鼠骨髓树突状细胞(dendritic cell DC)免疫功能的影响.方法小鼠骨髓细胞用GM-CSF培养7 d,再加入不同浓度青藤碱培养12 h.流式细胞仪检测细胞表达HLA-DR的能力,ELISA检测细胞产生的细胞因子,混合淋巴细胞培养检测细胞提呈抗原的能力.结果青藤碱刺激后的DC细胞表达HLA-DR、产生细胞因子和刺激同种同基因T细胞增殖的能力显著低于正常DC细胞.结论青藤碱可抑制DC的发育成熟和免疫应答功能.     

BD926对骨髓源性未成熟树突状细胞增殖及吞噬作用的影响

目的 研究苯并噻唑类衍生物BD926对小鼠骨髓源性未成熟树突状细胞(immature dendritic cells, imDCs)增殖及吞噬作用的影响. 方法 分离小鼠骨髓源性单核细胞诱导imDCs,借助PE/Annexin V凋亡检测试剂盒、CFSE细胞增殖试剂盒以及FITC-葡聚糖,应用流式细胞术检测BD926对imDCs在粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)刺激下的细胞存活、细胞增殖以及吞噬作用的影响.结果 与PBS组相比,25 、5 、1 μM 的BD926处理imDCs后,其细胞增殖水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);高、中、低3个剂量组BD926处理后,imDCs与PBS组相比,细胞存活差异无统计学意义 (P>0.05);高、中、低3个剂量组BD926处理后,imDCs与PBS组相比,吞噬作用差异无统计学意义 (P>0.05).结论 BD926在体外可明显抑制GM-CSF刺激的imDCs增殖作用,对imDCs的细胞存活和吞噬作用则无明显影响.     

树突状细胞分泌的exosomes体外诱导特异性CTL抗肾癌的初步研究

 目的提取树突状细胞外来体(DC)分泌的外来体(exosomes),检测其体外刺激同源T细胞活化和诱导特异性细胞毒性T细胞(CTL)抗肾癌769-P的免疫效应。方法从健康志愿者外周血单个核细胞中诱导培养DC,流式细胞术检测DC的表型;通过超速离心法结合超滤法制备DC分泌的exosomes,透射电镜观察exosomes的形态,MTT法检测DC分泌的exosomes诱导T细胞的增殖和特异性CTL对769-P的体外杀伤活性。结果超速离心法结合超滤法能从DC上清中分离exosomes,并且肿瘤抗原致敏DC分泌的exosomes能有效促进T细胞的增殖及特异性CTL抗769-P效应,T细胞增殖倍数达(1.68±0.22)%,CTL杀瘤活性为(38.23±2.16)%。结论抗原致敏DC分泌的exosomes能有效诱导激活具有较强杀瘤活性的肿瘤特异性CTL。     

Expression of PD1 and BTLA on the CD8+ T Cell and γδT Cell Subsets in Peripheral Blood of Non-Small Cell Lung Cancer Patients

Objective To investigate the expression and regulation of programmed cell death protein 1 (PD1), B lymphocyte and T lymphocyte attenuator (BTLA) in peripheral blood of patients with non-small cell lung cancer (NSCLC); to examine the correlation of the mRNA levels between PD and BTLA in NSCLC. Methods Flow cytometry was used to detect the expression of PD1 and BTLA on the surfaces of CD8⁺ T cells and γδ⁺ T cells in the peripheral blood samples collected from 32 in-patients with stage IV NSCLC and 30 healthy individuals. We compared the expression of PD1 and BTLA on the surfaces of γδ⁺ T cells in the NSCLC patients with bone metastasis before and after the treatment of zoledronic acid. The correlations of PD1 and BTLA, as well as their ligands were analyzed using Pearson correlation analysis with the cBioPortal data platform. Results The frequency of PD1 on the surfaces of CD8⁺ T cells was significantly higher than that of the γδT cells in both healthy controls (t=2.324, P=0.024) and NSCLC patients（t=2.498, P=0.015). The frequency of PD1 on CD8⁺ T cells, rather than on γδ⁺ T cells, was significantly upregulated in advanced NSCLC patients compared with that in healthy controls (t=4.829, P<0.001). The PD1⁺ BTLA⁺γδT cells of the healthy controls were significantly lower than that of the NSCLC patients (t=2.422, P=0.0185). No differences in percentage of PD1⁺γδ⁺ and BTLA⁺γδ⁺ T cells were observed in 7 NSCLC patients with bone metastasis before and after zoledronic acid treatment. PD1 was positively correlated with BTLA in both lung adenocarcinoma (r=0.54; P<0.05) and lung squamous cell carcinoma (r=0.78; P<0.05). Conclusions The upregulation of co-inhibitory molecules occurs on the surfaces of both CD8⁺ T cells and γδT cells in advanced NSCLC, suggesting that these molecules were involved in regulating the inactivation of CD8⁺ T cells and γδ⁺ T cells, immune escape and tumor invasion.     

In Vitro Anti-tumor Immune Response Induced by Dendritic Cells Transfected with Recombinant Adenovirus Carrying Mutant K-ras Genes

Intherecentyears,researchabouttumorvac cineshasbecomeafocusofcancerimmunotherapy.Thediscoveryandidentificationoftumorantigensaffordanewwaytothecancerimmunotherapy,especiallytheactiveone.Activatedproto oncogeneproteinisdrawingtheattentionofresearchersasatumorantigen.Manystudieshavedemonstratedthatmutatedrasproteinscanbespecificallyrecog nizedbyhostTcells[1,2].Mutationsofrasproto oncogeneshavebeendetectedinasubstantialpartofmanytypesofmalignanciesincludinglungcanc er[3]andthecorrespondingantige…     

树突状细胞与恶性肿瘤

树突状细胞是目前已知人体内功能最强的抗原递呈细胞,参与抗原识别、加工处理和提呈,启动、维持并调控免疫应答。近年来,大量研究资料表明树突状细胞在肿瘤特异性免疫反应过程中起重要作用,树突状细胞与肿瘤的临床分期、浸润、转移及预后密切相关。这为提高恶性肿瘤的治疗效果,改善疾病的生存和预后提供了新的潜在治疗靶点。文章旨在对树突状细胞与恶性肿瘤之间的关系及其所发挥的作用进行综述。     

滤泡树突细胞肉瘤的研究进展

滤泡树突细胞肉瘤（FDCS）又称树突网状细胞肉瘤,是一罕见的淋巴滤泡树突细胞（FDC）来源的造血组织肿瘤。本文介绍近年来该病在发病机制、病理学、诊断和治疗等方面的研究进展。     

皮肤交错树突细胞肉瘤一例报道并文献复习

目的 :探讨交错树突细胞肉瘤 (IDCS)的临床和病理特征及诊断、鉴别诊断。方法 :运用组织病理学、免疫组化研究并随访 ,总结临床特点和治疗情况 ,并复习文献加以分析。结果 :临床表现为左胸壁皮肤肿块 ,局部 2次复发并全身广泛转移。镜检瘤组织位于真皮及皮下 ,由梭形、多角形、卵圆形细胞组成呈编织状排列或弥漫分布 ;瘤细胞 S-10 0、Vim entin、CD6 8(+)。结论 :IDCS是一种罕见的高度恶性肿瘤 ,诊断需依赖免疫组化及电镜。