人原发性肝癌、7402细胞株及髓细胞白血病K562细胞株DNA的转化基因的共同属性——N-ras基因

人原发性肝癌、7402细胞株及髓细胞白血病K562的DNA对NIH 3T_3转化,已获得第二代以上的转化细胞株。用各种癌基因探针进行分子杂交,证明上述转化细胞株中共同存在人的N-ras基因(7.0,9.2Kb;EcoRI带)。由此提示N-ras是人原发性肝癌的转化基因之一。但7402、K562 DNA的转化细胞株中还存在Ha-ras基因,而在原发性肝癌中未找到。这是对人原发性肝癌中转化基因属性的首次报道。     

人原发性肝癌转化基因——N-ras的研究

近三年内已有报道从10余种人体恶性肿瘤应用DNA转染和分子生物学技术鉴定和分离癌基因,例如从膀胱癌、肺癌分离出Ha-ras;从肺癌、结肠癌、胆囊癌、胰腺癌卵巢癌、某些软组织肉瘤中分离出Ki-ras;从纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、神经母细胞瘤、髓细胞性白血病和T细胞淋巴瘤等分离出N-ras等。但关于我国常见的原发性肝癌的转化基因尚未见正式报道。本文描述从原发性肝癌、肝癌7402细     

原发性肝癌中癌基因及HbV DNA状态的研究

本文报告从癌基因与HBV感染两方面探讨原发性肝癌(PHC)中肝细胞癌变机理的实验结果。根据DNA转染、mRNA表达及P21合成的资料,提示N-ras是致人肝癌的恶性变转化基因;仅在7/16例PHC标本中发现整合的HBV DNA,但电泳带类型不一致,说明无共同的整合位点;未发现整合的HBV DNA邻近有癌基因存在;在6/16例PHC标本中发现有复制形式的HBV DNA,     

ras癌基因产物P_(21)在人体肝癌组织中分布

用人体肝癌转染的NIH/3T3细胞证实有人的癌基因N-ras并有过量ras产物P_(21)表达。利用上述转化细胞株为免疫原制得抗P_(21)单克隆抗体后,进一步用ABC免疫酶染色法观察了P_(21)在肝癌、胃癌和肺癌等恶性组织中的分布。 实验结果显示肝癌组织切片中,恶性细胞与P_(21)     

含人N-ras反意密码的逆转录病毒对人肝癌裸小鼠移植瘤(LTNM_4)的抑制作用

N-ras基因是人体肝癌细胞的转化基因之一,在肝癌细胞中N-ras基因有过量表达。为了研究N-ras基因对人体肝癌细胞的生长调控作用,我们曾报道了含N-ras cDNA反意密码顺序的假型病毒的构建、组装和它对人肝癌细胞的生物学作用。体外试验表明此病毒对人肝癌细胞(PLC/PRF/5细胞)的生长有明显的抑制作用,并表现N-ras基因产     

人原发性肝癌中基因的表达

上海市肿瘤研究所对9例人原发性肝癌,1例癌旁组织,1例正常肝的Poly(A)~+RNA进行了分析。用各种基因探针作分子杂交,发现在6例原发性肝癌中,有二条增强表达的区带:2.2Kb和5.6Kb。肝癌组织较正常的mRNA在2.2Kb处有明显的增强。提示人N-ras基因的转录产物明显增强。癌旁,正常肝中N-ras基因的专一的mRNA很弱或低于检测水平。由于癌的发生是通过癌基因产物发生作用,因此N-ras基因在多数的人原发性肝癌中的表达明显增强,提示了N-ras基因是人原发性肝癌的重要转化基因之一。     

N-ras癌基因在人染色体上的定位

细胞癌基因(C-onc)是单拷贝的结构基因,在生物进化过程中高度保守。正常状况下,对机体有重要生理功能。但一旦被激活后便大量表达,产生过量的可能有转化作用的蛋白。许多文献报道,癌细胞的某些C-onc常常发生DNA放大与重排,包括易位、缺失和插入。对于N-ras癌基因定位研究及探究它在某些肿瘤细胞内基因放大现象,已有不     

P53蛋白的结构、功能和作用机制

近年来的研究显示,P53基因与多种人体肿瘤有关。P53基因是一个单拷贝基因,其基因产物是一种核蛋白。半衰期较短。最初的研究发现,P53蛋白能与多种DNA病毒蛋白结合,在肿瘤和转化细胞中常有高表达;P53基因具有使原代大鼠细胞永生化,和ras癌基因一起使大鼠成纤维细胞转化的能力,认为P53基因是典型的癌基因。但近几年的研究发现,起癌基因作用的是P53基因突变体,     

广西地区肝细胞癌中c-myc和N-ras癌基因的原位表达与HBV感染关系的研究

目的：分析广西地区肝细胞癌中c-myc、N-ras癌基因的表达及乙型肝炎病毒（HBV）感染的关系及其在肝癌发生中的作用。方法：应用原位cDNA－RNA杂交方法和免疫组化方法检测40例广西地区肝癌和相应的癌旁组织中的c-myc mRNA、N-ras mRNA和HBsAg、HBxAg。结果：肝癌及癌旁组织均有较高的c-myc、N-ras癌基因的表达,其在不同分化程度肝癌中的表达差异无显著性意义：HBsAg和HBxAg的检出率分别为87．09％和79．31％。癌基因的表达与HBsAg和HBxAg的检出率呈平行状态。结论：c-myc、N-ras在广西地区肝癌的形成和保持恶性表型中有协同作用。HBxAg可能有激活c-myc、N-ras癌基因的作用。     

人鼻咽癌癌基因:Ha—ras

本文首次报道了对人鼻咽癌癌基因的研究结果。 人鼻咽癌活检组织DNA经二次体外转染N1H/3T3细胞及软琼脂生长,可得到典型生长的转化细胞灶,注射裸鼠后可形成肿瘤。转化细胞DNA经分子杂交可检测到人的顺序,提示人的转化顺序已进入小鼠纤维细胞内。 将上述具有肿瘤形成能力的30μg转化细胞DNA及其诱发肿瘤DNA分别经限制性内切酶ECoR1,BamHl和HindⅢ酶解后,与已知各种癌基因的~(32)p标记探针杂交,可发现它们具有癌基因Ha-ras的特性,经BamHl酶切后。Ha-ras呈现6.6kb大小的专一条带,经HpaⅡ酶切后呈现0.7kb的条带。其它癌基因如N-ras,ki-ras,Met等都呈阴性。在某些转化细胞中,还可看到Ha-ras杂交片段的长度呈现出多态性,可能反映了转化活性的强弱。     

肝癌病人血清中类P21蛋白的检测

P21蛋白是ras基因的产物,含188～189个氨基酸。N-ras、Ha-ras及Ki-ras的P21在氨基酸序列上有很大同源性,一般氨基酸的差异小于18％,鉴于在人原发性肝癌中,N-ras是转化基因之一。为此,应用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)、Western转移和~(125)I标记抗P21单抗Y_(13)-259对肝癌、肝炎     

探讨HBV X、TGF-alpha,c-myc及beta-catenin基因与高发区肝癌的相关性

目的　研究HBVX基因、TGF alhpa、c myc、beta catenin等癌变相关基因及 2 49密码子突变的p5 3蛋白在高发区肝细胞癌癌变发生及其恶性表型维持所发挥的作用。方法　以肝癌高发区启东的肝癌细胞株 770 1和 770 3标本作为研究对象 ,以PCR及DNA测序分析方法确定HBVX基因在细胞DNA水平的整合。以RT PCR及Western blot检测HBVX基因的转录与表达。用PCR RFLP方法确定 p5 3基因 2 49密码子的错义突变。应用免疫组织化学法分析TGF alhpa ,c myc ,beta catenin的表达。结果　 2株细胞在DNA水平都存在HBVX基因片断的整合 ,但未见完整的转录和蛋白水平表达。序列分析显示 2株细胞的HBVX基因的序列各有特异性 ,并存在 13 0、13 1密码子的热点突变。PCR RFLP分析说明 2个细胞株中p5 3基因 2 49密码子均属野生型。免疫组化显示 2株细胞中TGF alpha ,c myc和beta catenin蛋白均有显著的积累。 结论　本实验的结果显示HBVX基因对这 2株细胞恶性表型的维持并不存在必然的关联 ,而是 1种HBV感染的遗传标志。未见HBVX基因蛋白表达 ,可能由于X基因 3′端缺失变异所致。免疫组化的结果显示TGF alpha ,c myc和beta catenin蛋白的显著积累 ,说明多种癌基因的相互协同 ,可能与肝癌的发生、发展及恶性表型的维持相关联     

抑癌基因及人原发性肝癌中抑癌基因研究进展（Ⅰ）

抑癌基因及人原发性肝癌中抑癌基因研究进展（Ⅰ）顾健人上海市肿瘤研究所、＂癌基因与相关基因＂国家重点实验室（上海２０００３２）一、抑癌基因的基本概念（一）命名及标准抑癌基因或抗癌基因是一大类可抑制细胞生长并能潜在抑制癌变作用的基因群，它仅在某一种特定细...     

人原发性肝癌的癌基因谱

肿瘤发生是多病因参与和多阶段的过程。因此,从理论上推测应有多种激活的原癌基因参与。由于各种癌的组织发生不同,推测各种肿瘤应有一个癌基因谱的参与,不同肿瘤中可以有所差异。 从发现人原发性肝癌N-ras作为一种转化基因     

吸烟者肺肿瘤ras原癌基因活化的检测

从有长期吸烟嗜好的肺癌患者的手术标本（鳞状上皮癌）提取高分子量的癌细胞基因组DNA，对小鼠成纤维细胞（NIH／3T3）进行转染，获二轮转化细胞，发现二轮转化率是一轮的3倍．证实在转染过程中转化灶出现的多少，与所用DNA的量有关，二轮转化细胞可在软琼脂上培养存活，接种裸鼠（BALB／c）于注射部位长出肿瘤。表明该二轮转化细胞具有肿瘤细胞的特性，用32P标记的人Alu重复序列和ras癌基因家族探针分别与一轮、二轮转化细胞和裸鼠肿瘤细胞的DNA进行Southern印迹转移和分子杂交。结果在三者细胞的DNA中都见有与Alu杂交的阳性条带，从而证明在转染过程中人体特有的Alu重复序列已整合到转化细胞的基因组中，并确定了转化细胞中的转化基因之一的属性为Ha－ras癌基因，本工作提示吸烟可能是人体原癌基因（C－Ha－ras）活化和肺鳞癌发生的重要原因。     

力达霉素对人肝癌bel 7402细胞凋亡基因表达和细胞骨架的影响

背景与目的：力达霉素是我所分离的烯二块类抗肿瘤抗生素,因其独特的化学结构和对体内外肿瘤的强烈抑制作用,而倍受关注。除了断裂DNA外,力达霉素对细胞凋亡基因表达和细胞骨架的影响,可能与其高活性有关。本文通过观察力达霉素对人体肝癌bel-7402细胞多指标的影响,进一步阐明其分子机制。方法：用Northern blot印迹法和dot印迹法检测癌基因表达,间接免疫荧光法检测微丝和微管,线粒体特异染料Mitosensor^tm检测细胞凋亡。结果：低浓度的力达霉素（0.1nmol/L)处理人肝癌bel-7402细胞8h,明显促进c-myc、c-fos基因表达,而抑制N-ras表达。10nmol/L力达霉素处理细胞8h后,细胞伸展,微丝排列整齐,向非恶性细胞转变,但对微管没有影响。用线粒体特异凋亡染料Mitosensor^TM检测发现,力达霉素处理8h后的细胞未出现凋亡,说明力达霉素引起肿瘤凋亡首先需要诱导c-myc基因表达。结论：低浓度的力达霉素明显影响人肝癌bel-7402细胞的有关凋亡基因表达和细胞骨架的分布,这些结果有助于解释力达霉素高活性地作用肿瘤细胞的分子机制。     

FHIT基因与妇科肿瘤的研究进展

肿瘤的发生、发展与癌基因异常激活、抑癌基因失活及DNA错配修复基因异常密切相关。其中，抑癌基因是一大类可抑制细胞生长，并能潜在抑制癌变作用的基因群，这类基因缺失或失活与细胞癌变有关。脆性组氨酸三联体基因（fragile histitine triad，FHIT）是近年发现的1个抑癌基因，综合目前的研究，该基因在人类约60％的上皮性肿瘤中表达降低或缺失，且与多种肿瘤预后差呈正相关。现就其结构、抑癌机制及在妇科肿瘤的研究进展做一综述。     

癌基因、生长因子与甲状腺癌

癌基因学说是目前最引人注目的解释肿瘤发生机理的学说,是近年来肿瘤病因研究的重大突破.癌基因是正常人体和动物细胞内以及致癌病毒体内所固有的一类基因.如果这类基因受到某种因素的影响一旦被激活就会异常表达,指导合成与细胞癌变有关的蛋白质,从而使正常细胞转化为恶性细胞.癌基因分为二大类.一类是存在于病毒基因组内的癌基因,称为病毒癌基因(viral oncogene V-onc);另一类是存在于正常细胞基因组内的癌基因,称为细胞癌基因(cellular oncogene,C-onc)或者叫原癌基因(protooncogene).     

切割MDR1 RNA的核酶(Ribozyme)对肝癌多药耐药细胞株BEL-7402/DOX化疗耐药性的逆转作用

为逆转肿瘤多药耐药基因(MDR1)产物P-gp蛋白所介导的肿瘤细胞对多种化疗药物的耐受性,设计合成了一种能切割MDR1 mRNA第196密码子GUC序列的锤头状核酶(Ribozlyme)并定向克隆于转录病毒载体pDOR-neo的BamH Ⅰ位点.经病毒包装细胞PA317包装后感染人肝癌多药耐药细胞株BEL-7402/DOX细胞,经G418筛选得到稳定的转化细胞株.Northem Blot杂交证实包装细胞PA317及转化的BEL-7402/DOX细胞中均有病毒的高表达,RT-PCR证实转化细胞中MDR1 mRNA与未转化细胞相比明显减少甚至不能扩增出来,流式细胞技术检测转化细胞P-gp的表达与非转化细胞的93.4～97.5%相比下降至8.2～14.6%.MTT法检测证实转化细胞对多种化疗药物重新产生较高的敏感性.结果表明,表达Ribozyme的逆转录病毒载体转化肝癌多药耐药细胞BEL-7402/DOX后能有效抑制MDR1的表达和翻译,使已产生耐药的肿瘤细胞的多药耐药表型发生逆转.     

siRNA沉默RhoC表达诱导人肝癌BEL7402细胞凋亡

目的:研究siRNA沉默RhoC基因表达对人肝癌细胞BEL7402凋亡的影响及其机制,为肝癌的基因治疗提供实验依据。方法:构建RhoC-siRNA真核表达载体pU6mRFPRhoC-siRNA,转染BEL7402细胞,激光共聚焦显微镜检测转染效率,RT-PCR和Western blotting鉴定RhoC基因沉默效果;流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳和瑞氏染色检测BEL7402细胞凋亡,RT-PCR检测细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达。结果:成功构建pU6mRFPRhoC-siRNA重组载体,转染BEL7402细胞的效率为70%,RT-PCR和Western blotting检测RhoC基因沉默效率分别为85%和82%。pU6mRFPRhoC-siRNA转染组BEL7402细胞凋亡显著高于未转染BEL7402细胞和pU6mRFP Scramble-siRNA转染组BEL7402细胞[(21.00±2.23)%vs(6.47±1.64)%、(4.63±0.47)%,P<0.01)],pU6mRFPRhoC-siRNA转染组BEL7402细胞DNA呈典型的"梯状"条带,瑞氏染色见转染组BEL7402细胞中有大量凋亡细胞。pU6mRFPRhoC-siRNA转染组BEL7402细胞Bcl-2基因水平显著低于、而Bax基因水平显著高于未转染BEL7402细胞和pU6mRFP Scramble-siRNA转染组BEL7402细胞(0.28±0.15vs0.96±0.21,1.03±0.24,P<0.05;1.09±0.21vs0.26±0.10,0.25±0.07,P<0.01)。结论:siRNA沉默RhoC基因可诱导人肝癌BEL7402细胞凋亡,其机制与下调Bcl-2基因、上调Bax基因表达有关。