内皮抑素的研究新进展

肿瘤的抗血管生成疗法是通过肿瘤内新生血管的形成来抑制肿瘤的生长和转移。内皮抑素是当前该疗法中最具潜力的药物蛋白,本文综合介绍了该蛋白的结构和理化特征、生物学功能、体内分布和激活以及作用机制等方面的研究进展。     

内皮抑素治疗人骨肉瘤裸鼠模型的实验研究

目的:观察内皮抑素(ES)对裸鼠骨肉瘤皮下移植模型血管生成和肿瘤生长的抑制作用及其机制。方法:Transwell双室模型观察ES对骨肉瘤细胞9901诱导内皮细胞迁徙的影响;随机将30只骨肉瘤荷瘤裸鼠分为对照组、ES低剂量组[0.75mg(kg·d)-1]和高剂量组[1.5mg(kg·d)-1],瘤体及瘤体周围注射ES,1次/d,连续给药14d,观察肿瘤生长情况,计算抑瘤率。肿瘤组织进行病理学观察及免疫组化染色,计数坏死组织百分比,微血管密度以及细胞增殖和凋亡指数;动物处死前3个小时尾静脉注射EF5,激光共聚焦显微镜观察组织缺氧及血管标记。结果:ES低剂量组(350ng·ml-1)和高剂量组(700ng·ml-1)对内皮细胞迁徙有明显抑制作用,且高剂量组明显高于低剂量组(P<0.01);高剂量组和低剂量组平均瘤重明显小于对照组,抑瘤率分别为35.83%和22.92%(P<0.01);正常对照组、低剂量组、高剂量组的坏死百分比分别为2.40%、4.68%和9.52%(P<0.01),细胞增殖指数(PI)分别为66.44%、46.11%和25.11%(P<0.01),细胞凋亡指数(AI)分别为2.69%、7.58%和11.53%(P<0.01)。激光共聚焦观察ES治疗组绿色荧光量减少,血管稀疏;肿瘤细胞缺氧增加,呈弥漫的强红色。结论:ES可显著地抑制骨肉瘤细胞诱导的内皮细胞迁徙,以及人骨肉瘤的生长和发展,且呈剂量依赖效应,其可能机制为抑制血管生成,增加肿瘤细胞缺氧和凋亡。     

血管抑素和内皮抑素的研究进展

近年来，越来越多的学者对血管抑素和内皮抑素的结构、作用机制，以及抗肿瘤作用做了深入的研究，认为它们极有可能成为未来抗肿瘤的主要药物，为肿瘤治疗提供新的有效手段。     

重组腺相关病毒介导人内皮抑素抑瘤作用的实验研究

背景与目的：研究表明,内皮抑素能抑制肿瘤血管的生成,进而抑制肿瘤的生长和转移,然而有关内皮抑素治疗的研究报道却很少。本研究初步探讨了重组腺相关病毒介导内皮抑素对肿瘤生长和转移的作用。方法：用RT-PCR方法获得人内皮抑素基因,构建内皮抑素可分泌表达的通用型重组腺相关病毒（rAAV）载体,包装获得重组腺相关病毒rAAV-SS-Endostain。以动物实验分析其抗肿瘤作用。结果：C57BL/6小鼠肌肉注射10^11TUrAAC-SS-Endostatin一次,该重组病毒对小鼠黑色瘤B16F10移植瘤生长的抑制率为57.1％,在实验肺转移模型中,对转移灶的抑制率为70.7％。结论：重组腺相关病毒介导的内皮抑素能有效抑制肿瘤的生长和转移。     

内皮抑素基因治疗对小鼠肿瘤组织内新生血管形成抑制作用的实验研究

目的:研究腺病毒介导的内皮抑素基因治疗对小鼠肺肿瘤组织内部血管的抑制作用。方法:皮下注射2×106LLC细胞至C57BL/6小鼠背部建立小鼠肺癌种植瘤模型,2周后瘤内注射2×109pfu内皮抑素腺病毒载体治疗。免疫组化检测内皮抑素在肿瘤组织的原位表达,观察治疗对肿瘤生长的影响。免疫组化标记计数肿瘤内部血管密度,观察治疗对肿瘤血管的影响。结果:Admendostatin治疗从第2周起就可明显减缓肿瘤生长速度,P<0.05。免疫组化显示治疗组肿瘤组织内皮抑素蛋白强阳性表达,对照组阴性或痕量表达。Admendostatin治疗组、空载体对照组和阴性对照组肿瘤血管密度用CD31和CD105抗原标记分别为37.5±4.6、65.2±5.8、68.5±4.5和10.5±3.2、39.7±5.6、42.4±4.8。治疗组与两对照组相比差异有统计学意义,P<0.05;空载体对照与阴性对照相比差异无统计学意义,P>0.05。结论:腺病毒介导的内皮抑素基因治疗可抑制小鼠皮下种植瘤的生长,其作用机制是抑制肿瘤内部新生血管的生成,应用CD105抗原标记可准确反映新生血管的变化。     

内皮抑素研究新进展

内皮抑素通过特异地抑制血管内皮细胞的生长来抑制肿瘤的生长和转移,是一种很有前景的抗肿瘤药物.该文就内皮抑素的结构与功能、作用机制、提取与应用等方面进行综述.     

血管内皮抑素研究进展

血管内皮抑素(ES)为内源性血管生成抑制剂,通过特异性抑制微血管内皮细胞迁移及诱导其凋亡,发挥抗血管生成和抑制肿瘤生长作用.临床前研究表明ES在肿瘤模型中能诱导肿瘤细胞凋亡,无宿主毒性,也未产生抗药性.Ⅰ期临床试验结果显示ES剂量达到600mg/(m2&#183;d)时,仍未发现最大耐受剂量(MTD).ES药代动力学符合二室开放模型.ES的血浆药物浓度时间曲线下面积(AUC)、最大稳态血药浓度(CmaxSS)与给药剂量呈线性关系.ES的清除不随给药剂量、体表面积的变化而变化.Ⅱ期临床开放性研究表明,ES对于转移性神经内分泌肿瘤可能有效.ES皮下给药剂量为60mg/(m2&#183;d)或90mg/(m2&#183;d)时,2例(2/37,5%)患者达微效(MR),23例(23/37,62%)病灶稳定(SD).ES的中位治疗时间为24周,中位随访时间是35周,肿瘤进展中位时间(TTP)是39周.目前尚未见有关ESⅢ期临床报道.ES是非常有前途的肿瘤靶向治疗药物.     

血管内皮抑素研究进展

血管内皮抑素(ES)为内源性血管生成抑制剂,通过特异性抑制微血管内皮细胞迁移及诱导其凋亡,发挥抗血管生成和抑制肿瘤生长作用.临床前研究表明ES在肿瘤模型中能诱导肿瘤细胞凋亡,无宿主毒性,也未产生抗药性.Ⅰ期临床试验结果显示ES剂量达到600mg/(m2·d)时,仍未发现最大耐受剂量(MTD).ES药代动力学符合二室开放模型.ES的血浆药物浓度时间曲线下面积(AUC)、最大稳态血药浓度(CmaxSS)与给药剂量呈线性关系.ES的清除不随给药剂量、体表面积的变化而变化.Ⅱ期临床开放性研究表明,ES对于转移性神经内分泌肿瘤可能有效.ES皮下给药剂量为60mg/(m2·d)或90mg/(m2·d)时,2例(2/37,5%)患者达微效(MR),23例(23/37,62%)病灶稳定(SD).ES的中位治疗时间为24周,中位随访时间是35周,肿瘤进展中位时间(TTP)是39周.目前尚未见有关ESⅢ期临床报道.ES是非常有前途的肿瘤靶向治疗药物.     

内皮抑素研究新进展

内皮抑素(ES)为内源性抗血管生成物质,体内外试验表明,它具有抑制肿瘤新生血管形成、无细胞毒性、也不产生耐药等特点,已显示良好的临床应用前景.现综述近年有关内皮抑素基础和临床研究新进展.     

内皮抑素基因治疗的研究进展

内皮抑素是迄今为止所发现的最强的血管形成抑制因子，可抑制内皮细胞生长和迁移，在动物试验中能有效抑制多种恶性肿瘤生长和转移。主要介绍近年来有关内皮抑素基因治疗的研究新进展。     

腺病毒介导p16基因转移及诱导黑色素瘤细胞凋亡

目的 进一步了解Ｐ１６基因对肿瘤细胞的作用。方法 通过腺病毒介导外源性Ｐ１６基因转移到Ｐ１６基因突变的人黑色素瘤细胞秒ＷＭ－９８３Ａ,对Ｐ１６基因的表达,细胞生长的抑制与机制和对肿瘤模型的治疗效果进行分析。结果 外源性Ｐ１６基因在靶细胞高水平的表达显著地抑制了ＷＭ９８３Ａ的生长和集落形成,流式细胞仪检测显示细胞Ｇ１的期阻滞并发生了凋亡,瘤内注Ａｄ－ｐ１６对裸鼠体内移植瘤有一定抑瘤作用。结论 Ｐ１６     

Anti-tumor effect of adenovirus-mediated gene transfer of pigment epithelium-derived factor on mouse B16-F10 melanoma

Background

Angiogenesis plays an important role in tumor growth, invasion, and eventually metastasis. Antiangiogenic strategies have been proven to be a promising approach for clinical therapy for a variety of tumors. As a potent inhibitor of tumor angiogenesis, pigment epithelium-derived factor (PEDF) has recently been studied and used as an anticancer agent in several tumor models.

Methods

A recombined adenovirus carrying PEDF gene (Ad-PEDF) was prepared, and its expression by infected cells and in treated animals was confirmed with Western blotting and ELISA, respectively. Its activity for inhibiting human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) proliferation was tested using the MTT assay. C57BL/6 mice bearing B16-F10 melanoma were treated with i.v. administration of 5 × 10⁸ IU/mouse Ad-PEDF, or 5 × 10⁸ IU/mouse Ad-Null, or normal saline (NS), every 3 days for a total of 4 times. Tumor volume and survival time were recorded. TUNEL, CD31 and H&E stainings of tumor tissue were conducted to examine apoptosis, microvessel density and histological morphology changes. Antiangiogenesis was determined by the alginate-encapsulated tumor cell assay.

Results

The recombinant PEDF adenovirus is able to transfer the PEDF gene to infected cells and successfully produce secretory PEDF protein, which exhibits potent inhibitory effects on HUVEC proliferation. Through inhibiting angiogenesis, reducing MVD and increasing apoptosis, Ad-PEDF treatment reduced tumor volume and prolonged survival times of mouse bearing B16-F10 melanoma.

Conclusion

Our data indicate that Ad-PEDF may provide an effective approach to inhibit mouse B16-F10 melanoma growth.     

腺病毒携带的人内皮抑素基因(Ad/hEnd)抑制人舌鳞状细胞癌生长的研究

背景与目的：舌癌是口腔常见的恶性肿瘤,目前常规采用以手术为主结合放疗化疗的综合治疗,总体的5年生存率只有50％左右,抗肿瘤血管生成治疗已成为舌癌治疗的研究方向之～。本实验以5型E1缺陷型腺病毒携带的人内皮抑素基因(Ad／hEnd)感染舌癌细胞(Tca8113)和人脐静脉内皮细胞株(ECV),并对荷瘤裸鼠舌癌的抑瘤效果进行观察,研究其在舌癌细胞中的表达及对舌癌抑制作用。方法：(1)免疫组化法检测内皮抑素蛋白在Tca8113细胞和ECV细胞中的表达及分布。ELISA法检测上清中内皮抑素含量,Western blot检测内皮抑素基因在Tca8113和ECV细胞的表达特征。(2)流式细胞仪检测Ad／hEnd感染ECV后的细胞周期及凋亡,WST-1法检测Ad／hEnd对ECV细胞增殖的抑制。(3)Ad／hEnd对荷瘤裸鼠的舌癌的生长抑制分析。结果：(1)实验结果显示感染Ad／hEnd后。Tca8113细胞和ECV细胞胞浆内可有效合成内皮抑素蛋白,细胞培养液上清中的内皮抑素蛋白表达浓度呈时间剂量依赖关系,最高达到597ng／ml,可持续到第7天,并且表达产物有抑制人体静脉内皮细胞ECV生长特性。呈剂量依赖关系。(2)Ad／hEnd可延长感染后的ECV细胞的S期及G2期。并出现细胞凋亡现象。(3)应用Ad／hEnd后第3天肿瘤体积增长受到抑制,第6天开始肿瘤抑制明显增强,第3周抑瘤率达45．8％。结论：本实验制备的重组腺病毒Ad／hEnd能在ECV和Tca8113细胞中有效表达内皮抑素,表达产物可影响ECV细胞周期、抑制ECV细胞增殖、诱导ECV细胞凋亡及抑制荷瘤裸鼠舌癌的生长。     

IL-24对B16细胞生长抑制作用的体内外实验研究

目的:构建白细胞介素24(Interleukin24,IL24)真核表达质粒,研究其体内外表达对肿瘤细胞的生长抑制作用。方法:采用重组DNA技术构建IL24真核表达质粒pEGFPIL24。用脂质体法将重组质粒及空载体体外转染B16细胞,再经激光扫描共聚焦显微镜(LSM)观察其表达,用MTT法检测B16细胞的体外增殖能力,用流式细胞仪检测细胞周期。小鼠实体瘤模型研究基因转染对肿瘤的体内生长抑制作用。结果:pEGFPIL24转染B16细胞后,LSM可观察到IL24在细胞中的表达。转染IL24基因的B16细胞体外增殖能力明显受到抑制,细胞被阻滞在G2/M期。与对照组相比,IL24基因治疗组肿瘤在体内的生长受到明显抑制,P<0.05。结论:IL24基因转染的肿瘤细胞体外生长受抑。于荷瘤小鼠的瘤内注射pEGFPIL24可抑制肿瘤生长,提示IL24具有明显的体内外抗肿瘤作用。     

Effects of sodium cyanate in mice bearing B16 melanoma

Summary Sodium cyanate injected IP at a dose level of 200 or 250 mg/kg caused a 90% or greater inhibition of the incorporation of [³H]thymidine into DNA of B16 melanoma transplanted SC in mice. Despite the inhibitory effect of sodium cyanate on precursor incorporation into DNA, no significant effect on host survival was observed when sodium cyanate was administered as a single agent in the diet, in drinking water, or by IP injection to mice that had received IP transplants of B16 melanoma. The action of melphalan and 1-(2-chloroethyl)-3-cyclohexyl-1-nitrosourea (CCNU) in prolonging the survival time of melanoma-bearing mice was not enhanced by combined treatment with sodium cyanate. However, combined injections of sodium cyanate and 1,3-bis(2-chloroethyl)-1-nitrosourea (BCNU) increased the survival of tumor-bearing mice significantly more than injections of BCNU alone at a lower dose than the maximum tolerated one. These data and other studies suggest that B16 melanoma may be less responsive to the action of sodium cyanate than are murine leukemic cells or rat hepatomas.The work described in this paper was supported by NIH grant CA-35315 and a research award from the Veterans Administration     

血管内皮抑制素对Calu-6裸鼠移植瘤的生物学效应

目的 探讨血管内皮抑制素对Calu-6裸鼠移植瘤生长及新生血管形成的影响.方法 在荷瘤裸鼠皮下注射不同剂量的血管内皮抑制素,观察注射后肿瘤体积的变化;应用免疫组化SABC法检测肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)、生存素(survivin)和环氧化酶-2(COX-2)蛋白的表达以及微血管密度(MVD)的变化;流式细胞术检测循环血管内皮细胞(CECs)的含量;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和实时定量PCR检测外周血中CD146和CD105 mRNA的表达.结果经血管内皮抑制素治疗后,荷瘤鼠肿瘤体积明显减小;肿瘤组织中VEGF、survivin和COX-2蛋白的表达以及MVD均下降,且各治疗组与阳性对照组间的差异均有统计学意义(均P＜0.05);外周血中CECs、CD146和CD105 mRNA的含量均明显下降;活化CECs的含量与肿瘤组织中survivin和VEGF的表达以及MVD的变化均呈正相关.结论 血管内皮抑制素可通过下调移植瘤中VEGF、survivin和COX.2蛋白的表达以及减少MVD抑制肿瘤生长;活化CECs将可能作为理想的预测抗血管形成治疗预后的标记物应用于临床.     

局部应用内皮抑素对小鼠Lewis肺癌抑瘤作用的研究

目的我们通过局部应用内皮抑素治疗小鼠Lewis肺癌,观察内皮抑素对小鼠Lewis肺癌的抑瘤作用,及内皮抑素对VEGF表达的影响.方法用小鼠Lewis肺癌细胞种植于15只C57小鼠体内,建立小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,当移植瘤体积生长至400～600mm3时分组并开始给药.小鼠随机分为三组,A组为空白对照组,B组每日尾静脉注射内皮抑素20μg,C组每日于肿瘤部位局部注射内皮抑素20μg,共11天.测定抑瘤率及微血管密度评价疗效,免疫组化(S-P)法测定VEGF在各组的表达水平.结果试验组较对照组抑瘤率增高(P＜0.05),微血管密度降低(P＜0.05),试验组VEGF水平较对照组低(P＜0.01).结论内皮抑素对小鼠Lewis肺癌移植瘤的生长有明显抑制作用,局部用药较全身用药的作用增强,内皮抑素可以通过降低VEGF在肿瘤组织中的表达抑制肿瘤生长.     

微波消融治疗小鼠黑色素瘤及对肿瘤血管生成的影响

目的 研究微波消融对小鼠黑色素瘤肿瘤负荷、生存期、肿瘤血管生成的影响.方法 建立C57BL/6J小鼠B16-BL6黑色素瘤皮下移植模型,随机分成对照组、微波低剂量组、微波中剂量组、微波高剂量组,比较各组瘤重,病理学检测消融后肿瘤坏死、复发情况,免疫组织化学检测VEGF和CD34表达,计算微血管密度(microvessel density,MVD),记录其生存期.结果 微波消融各组小鼠肿瘤重量较对照组显著减少(P＜0.05);病理学观察发现消融病灶肿瘤细胞大量坏死,肿瘤血管破坏;消融后微血管密度MVD计数及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达显著降低(P＜0.05);但微波消融各组同对照组比较不具有生存期优势(P＞0.05).结论 微波消融可抑制小鼠消融后黑色素瘤病灶血管新生,并减少肿瘤负荷,但并未延长小鼠生存期.     

逆转录病毒介导高效的白血病细胞基因转移

目的建立安全高效的逆转录病毒介导的基因转移系统,为白血病基因治疗提供实验基础。方法分别用脂质体转染和小鼠逆转录病毒转导方法,将含标志基因ＮｅｏＲ的逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ导入双嗜型包装细胞ＧＰ＋ｅｎｖＡｍ１２,获得重组逆转录病毒;用含病毒上清感染白血病细胞系（ＮＢ４、Ｕ９３７和ＴＨＰ－１）,并分析对Ｋ５６２细胞的转导效率。结果脂质体ＤＯＳＰＥＲ转染法获得病毒滴度为８．０×１０５ＣＦＵ／ｍｌ,而病毒感染法高达１．６×１０７ＣＦＵ／ｍｌ。经Ｇ４１８选择,ＰＣＲ证实ＮｅｏＲ基因被整合到白血病细胞基因组中,巢式ＰＣＲ与补救分析均未检测到辅助病毒存在。单个集落Ｋ５６２细胞的ＰＣＲ分析证实,基因转移效率可达９３．３％～１００％。结论逆转录病毒介导的基因转移系统是高效、安全的,有助于人类白血病的基因治疗研究。