刺老苞根皮黄酮类化合物对MC31E-E1成骨细胞OPG和RANKL mRNA基因表达影响的实验研究

目的:探讨刺老苞根皮黄酮类化合物对MC3T3-E1成骨细胞骨保护素(OPG)和核因子κB受体激活因子配体(RANKL)mRNA基因表达的影响.方法:体外培养MC313-E1成骨细胞,分别加入含0mol·L-1、10-8mol·L-1、10-7mol·L-1、10-6mol·L-1刺老苞根皮黄酮类化合物的培养液,48h及96h后分别提取细胞总mRNA,用RT-PCR方法分析OPG/RANKL的mRNA的表达,进行半定量分析.结果:培养48h后,与对照组比较,刺老苞根皮黄酮类化合物增强了OPGmRNA的表达,有显著性差异(P<0.05或P<0.01),VOPG/VRANKL比值增大;96h后,刺老苞根皮黄酮类化合物明显增强了OPG mRNA的表达,各浓度组与对照组相比,均有显著性差异(P<0.05或P<0.01),各浓度组VOPG/VRANKL比值增大,有显著性差异(P<0.05或P<0.01).结论:刺老苞根皮黄酮类化合物可能通过增加成骨细胞OPG的表达来抑制破骨细胞的分化和成熟,从而抑制骨吸收,达到治疗骨质疏松症的目的.     

刺老苞根皮黄酮类化合物抗去势雌性大鼠骨质疏松症实验研究

目的探讨刺老苞根皮黄酮类化合物对去卵巢骨质疏松模型大鼠的影响。方法将72只15周龄SD大鼠随机分为空白组、模型组、尼尔雌醇组及刺老苞根皮黄酮类化合物高、中、低剂量组,每组12只。空白组行假手术,其余5组行卵巢切除术,术后用药12周后处死,测定右侧股骨骨密度、骨矿含量、血清雌二醇、碱性磷酸酶含量及子宫湿重。结果与模型组比较,刺老苞根皮黄酮类化合物高、中、低剂量组、尼尔雌醇组能对抗骨密度、骨矿含量、血清雌二醇的下降、血清碱性磷酸酶的升高（P〈0.05）,对抗子宫指数的减轻（P〈0.05）。结论刺老苞根皮黄酮类化合物可以改善骨质量,抑制大鼠去卵巢骨质疏松的发生,具有类雌激素的效应。     

刺老苞根皮黄酮类化合物对抗大鼠泼尼松性骨质疏松的作用研究

目的 研究刺老苞根皮黄酮类化合物对泼尼松致大鼠骨质疏松的对抗作用.方法 将50只大鼠随机分成正常对照组、泼尼松模型组和刺老苞根皮黄酮类化合物高、中、低(10,20,30 mg/kg)剂量组,每组10只.分别灌胃相应药物,1次/d,连续8周后取血清检测生化指标,对骨进行组织切片检查,长度、宽度以及骨质的测量.结果 泼尼松模型组大鼠股骨重量、尺骨骨羟脯氨酸和骨钙含量比正常对照组明显降低,胫骨骨髓腔中脂肪组织增多(P<0.01),血浆胆固醇(TG)含量上升、碱性磷酸酶(ALP)和高密度脂蛋白(HDL)含量下降(P<0.01).刺老苞根皮黄酮类化合物组能有效提高骨的重量和骨质的含量(P<0.01),减少骨髓腔中脂肪的含量,升高碱性磷酸酶和高密度脂蛋白含量(P<0.01).结论 泼尼松可抑制大鼠的骨生长及引起骨丢失,而刺老苞根皮黄酮类化合物可有良好的对抗作用.     

2-乙酰基毛蕊花糖苷抗破骨细胞形成及其作用机制

目的：研究2-乙酰基毛蕊花糖苷对破骨细胞分化的影响及潜在的分子机制。方法：采用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色及TRAP酶活力检测法评价0.1、1.0、10.0μmol·L–1的2-乙酰基毛蕊花糖苷对破骨前体细胞向破骨细胞分化的影响;采用细胞增殖活性检测试剂盒（CCK8）法检测2-乙酰基毛蕊花糖苷对破骨细胞分化的影响;采用F-actin环染色和骨陷窝形成实验检测2-乙酰基毛蕊花糖苷对破骨前体细胞诱导形成的破骨细胞功能的影响;采用蛋白免疫印迹法（WB）检测破骨细胞分化相关特异性蛋白TRAP、整合素β3(ITGβ3)和细胞原癌基因cFos的表达水平。结果：与模型组相比,2-乙酰基毛蕊花糖苷显著降低TRAP活性（P<0.05）,且对破骨前体细胞活力未见显著影响,提示2-乙酰基毛蕊花糖苷显著抑制破骨细胞形成。F-actin环染色和骨陷窝形成实验也显示2-乙酰基毛蕊花糖苷显著抑制破骨细胞骨吸收功能;WB实验结果表明2-乙酰基毛蕊花糖苷可显著抑制破骨细胞分化特异性蛋白TRAP、ITGβ3和c-Fos等蛋白水平的表达。结论：2-乙酰基毛蕊花糖苷能抑制破骨细胞的形成,作用机制可能与其抑制TRA...     

黑骨藤抑制破骨细胞分化及骨吸收能力的活性部位研究

目的:探究黑骨藤对破骨细胞分化的影响并确定其活性部位。方法:采用维生素D3(VD3)诱导兔骨髓细胞法获得破骨细胞,以形态学观察、苏木素和伊红(HE)染色、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定破骨细胞,然后通过测定黑骨藤各极性部位低、中、高剂量组(1,10,100 mg·L-1)对破骨细胞TRAP酶活力,TRAP+细胞计数及骨吸收陷窝面积的影响来确定活性部位。结果:黑骨藤水饱和正丁醇层的高剂量组及乙酸乙酯层的中、高剂量组均对骨髓细胞向破骨细胞分化具有显著的抑制作用(P<0.01),并具有剂量依赖性。在抑制破骨细胞骨吸收能力实验中,黑骨藤乙酸乙酯层各剂量组均有显著抑制骨吸收陷窝面积的作用(P<0.01),而正丁醇层中、高剂量组具有显著抑制作用(P<0.01),均呈剂量依赖性。结论:黑骨藤抑制骨髓细胞向破骨细胞分化及骨吸收能力的主要活性部位是乙酸乙酯部位。     

刺老苞根皮黄酮类化合物对维甲酸致大鼠骨质疏松的影响

目的研究刺老苞根皮黄酮类化合物对维甲酸致大鼠骨质疏松的影响。方法将60只大鼠随机分成对照组,模型组,刺老苞根皮黄酮类化合物高、中、低剂量(10、20、30 mg/kg)组和仙灵骨葆胶囊(20 mg/kg)阳性对照组,每组10只。各组以ig维甲酸70 mg/kg造模后,各给药组分别ig给予相应药物,每日1次,连续8周。取血清检测相关生化指标,进行骨组织切片检查和骨生化指标检测,测定股骨长度、宽度及质量。结果与对照组比较,模型组大鼠股骨质量、尺骨羟脯氨酸(Hyp)和骨钙的量明显降低,胫骨骨髓腔中脂肪组织增多(P<0.01),血浆胆固醇(TC)水平升高、碱性磷酸酶(ALP)和高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)水平降低(P<0.01)。与模型组比较,刺老苞根皮黄酮类化合物各剂量组能有效增加骨质量和提高骨质的量(P<0.01),减少骨髓腔中脂肪的量,升高ALP和HDL-C的量(P<0.01)。结论刺老苞根皮黄酮类化合物可有效对抗维甲酸引起的大鼠骨生长抑制及骨丢失。     

大蒜素调控RANK表达对破骨细胞分化成熟的影响

目的 研究大蒜素调控核因子κB受体活化因子（RANK）对破骨细胞分化成熟的影响。方法 诱导小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）分化破骨细胞，分为对照组及实验组，两组采用30 ng/mL巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）及60 ng/mL RANKL培养，实验组第1、3、7天进行大蒜素（20 μg/mL）干预。采用CCK-8检测两组细胞的增殖情况，通过抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色及定量检测TRAP酶活性，通过RT-PCR检测RANK mRNA表达量。结果 与本组第1天比较，两组第3天破骨细胞增殖均降低（P<0.01），TRAP酶活性增加（P<0.01），实验组第3天RANK mRNA表达降低（P<0.05）;与本组第3天比较，第7天两组破骨细胞增殖能力增高（P<0.01）。与对照组比较，实验组第1天RANK mRNA表达更高（P<0.05），第3、7天破骨细胞增殖能力及RANK mRNA表达降低（P<0.05，P<0.01），第7天TRAP酶活性降低（P<0.01）。结论 大蒜素对破骨细胞分化成熟具有显著抑制作用，其对破骨细胞胞的增殖、RANK mRNA表达、破骨细胞活性作用均有抑制作用，且呈时间依赖性。     

右归饮对体外培养破骨细胞分化与功能的影响

目的：探讨右归饮对体外培养破骨细胞的分化、凋亡及骨吸收活性的影响。方法：分离培养大鼠破骨细胞,分别以空白对照血清、地塞米松＋对照血清、地塞米松＋右归饮血清的培养液来培养破骨细胞,通过抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色对TRAP阳性多核破骨细胞计数;采用吖啶橙荧光染色法计数破骨细胞的凋亡率;用RT-PCR测定ATPase a3基因相对表达变化分析破骨细胞骨吸收活性。结果：与空白对照血清组和对照血清＋地塞米松组相比,地塞米松＋右归饮血清组TRAP染色阳性的破骨细胞数量显著减少（分别为P〈0.01,P〈0.05）,破骨细胞的凋亡率明显增加（P〈0.01）,ATPase a3基因表达明显减少（P〈0.01）。结论：右归饮可抑制破骨细胞的形成和分化及骨吸收活性,促进破骨细胞的凋亡,从而发挥其抗激素性股骨头坏死的作用。     

刺老苞根皮黄酮对骨折模型大鼠骨质代谢的影响研究

目的研究刺老苞根皮黄酮对胫骨骨折模型大鼠骨质代谢变化的影响。方法将50只6周龄SD（雌雄各半）大鼠随机分成5组,即对照组（A组）、模型组（B组）、刺老苞根皮黄酮低剂量组（C组）、刺老苞根皮黄酮中剂量组（D组）、刺老苞根皮黄酮高剂量组（E组）,每组10只。其中刺老苞根皮黄酮低、中、高剂量组给予刺老苞根皮黄酮相应剂量灌胃（分别为10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg）,对照组和模型组以等量的0.9%NaCl溶液灌胃。观察各组灌胃第4天、7天、14天、21天、28天不同时间点其他骨代谢相关参数（碱性磷酸转移酶、骨钙素、羟脯氨酸以及骨盐）变化情况。结果与对照组比较,模型组不同时间点的骨碱性磷酸转移酶（ALP）、骨钙素、羟脯氨酸、骨钙、骨磷含量均降低,差异有统计学意义（P〈0.01）。与模型组比较,刺老苞根皮黄酮各剂量组除骨折第4天外其他时间点的ALP、羟脯氨酸、骨钙、骨磷含量均升高,差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;而刺老苞根皮黄酮各剂量组骨钙素的含量在骨折第14天、第21天及第28天升高,差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。与低剂量组比较,中、高剂量组除骨折第4天外其他时间点的骨碱性磷酸转移酶（ALP）、骨钙素、羟脯氨酸、骨钙、骨磷含量均升高,差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。与中剂量组比较,高剂量组除骨折第4天外其他时间点的骨碱性磷酸转移酶（ALP）、骨钙素、羟脯氨酸、骨钙、骨磷含量均升高,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论刺老苞根皮黄酮可以改善胫骨骨折大鼠骨代谢状况,有利骨折愈合修复。     

大血藤对破骨细胞活性及成骨细胞增殖分化作用的研究

该研究采用1α, 25-(OH)₂VitD₃诱导兔骨髓细胞法获得破骨细胞,以形态学观察、HE染色、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色和骨吸收陷窝甲苯胺蓝染色来鉴定破骨细胞,用TRAP⁺细胞计数、TRAP活力测定和骨吸收陷窝的数量及面积来检测大血藤对破骨细胞分化及骨吸收功能的影响。培养MC3T3-E1Subclone 14(小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14)细胞,用MTT法、碱性磷酸酶活力测定检测大血藤对其增殖和分化的影响。结果表明大血藤醇提物和水煎物低、中、高剂量组(2,20,200 mg·L^-1)对破骨细胞分化及骨吸收功能具有抑制作用,并具有剂量依赖性。大血藤醇提物和水煎物低、中剂量组具有促进MC3T3-E1Subclone 14细胞增殖分化的作用,说明大血藤对骨质疏松有一定的防治作用,这种作用可能是通过抑制破骨细胞活性和促进成骨细胞增殖分化来实现的。     

黄芩素对内毒素诱导的内皮细胞细胞间黏附分子-1表达的影响

目的研究黄连解毒汤有效成分黄芩素对细菌脂多糖（LPS）诱导的人血管内皮细胞细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和抑制蛋白KB（I-KB）表达的影响。方法分别用LPS（终浓度1μg／mL）或LPS＋黄芩素（终浓度1umol／L,10μmol／L、50μmol／L）处理生长良好的ECV-304细胞,用RT～PCR和WesternBlot法检测ICAM=1表达情况和I—KB含量变化。结果LPS刺激ECV-304细胞可促进I～KB降解,上调ICAM-1表达水平,与空白对照组比较有统计学意义（P〈O．01）;黄芩素预处理能抑制LPS诱导的I—gB降解,降低IcAM-1l表达水平,与LPS组比较有统计学意义（P〈0．05）。结论黄芩素可通过抑制I—KB降解,影响NF-KB炎症信号途径,下调IcAM-1的表达,这可能是黄连解毒汤抗动脉粥样硬化的作用机制之一。     

地乌三萜皂苷W1对破骨细胞分化和骨吸收功能的影响

目的探讨地乌三萜皂苷类成分W1对体外破骨细胞分化及骨吸收功能的影响。方法3个不同浓度（0．0625,0．125,0．25μg／ml）的W1与核因子-κB受体活化因子配体（receptor activator of nuclear factor kB ligand,RANKL）诱导的小鼠单核／巨噬细胞RAW264．7共孵育7天,抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase,TRAP）染色观察TRAP阳性多核细胞的形成,甲苯胺蓝染色及扫描电镜观察骨吸收陷窝的形成,图像分析计算骨吸收陷窝面积百分比;同3个浓度的W1与RANKL诱导的RAW264．7细胞共孵育24小时后收集细胞上清液,放射免疫法检测肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的含量;甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测W1对RAW264．7细胞毒性影响。结果RANKL组诱导RAW264．7细胞形成多量TRAP阳性多核细胞,形成明显的骨吸收陷窝,并诱导TNF-α在RAW264．7细胞上清中异常高表达;与RANKL组相比,3个浓度的W1均能显著减少TRAP阳性细胞数（P〈0．01）,显著减少骨吸收陷窝面积（P〈0．01,P〈0．001,P〈0．001）,明显降低TNF-α的表达量（P〈0．05,P〈0．01,P〈0．01）,且未观察到对RAW264．7的细胞毒性。结论W1对由RANKL诱导的体外破骨细胞分化和骨吸收功能有一定的负调节作用。     

不同来源铁棒锤中乌头碱的含量比较

目的:采用RP-HPLC法测定宁夏固原地区4种地质条件下铁棒锤根、茎、叶及果实中乌头碱的含量并进行分析比较,为铁棒锤药材的标准化种植提供实验数据。方法:色谱柱ThermoODS-HYPER-SIL(4.6mm×250mm,5μm);DAD检测器;流动相0.1%乙二胺水溶液-甲醇-乙腈(37:39:24);流速1mL/min;柱温30℃。结果:测定了16批次样品,其中铁棒锤根部乌头碱的含量高,最高为固原地区黑城乡铁棒锤根中乌头碱的含量1.7494(mg/g);铁棒锤茎部中乌头碱的含量最低。结论:宁夏固原地区不同地质条件下的铁棒锤及其不同生长部位之间乌头碱的含量存在差异。所测定的乌头碱含量数据可作为宁夏铁棒锤药材标准化种植的实验依据。     

银杏内酯B衍生物抗血小板聚集作用和作用机制

目的：探讨银杏内酯B衍生物（XQ）抗血小板聚集的作用及其机制。方法：运用比浊法测定静脉给药后PAF诱导的家兔血小板聚集作用,采用放射配基结合试验观察[3H]PAF与兔血小板受体特异性结合的作用。结果：XQ1.95、3.90、7.80mg·kg^-1对家兔血小板聚集的抑制率分别为29.8%、43.5%和55.2%（P〈0.01）,PAF与家兔血小板膜上PAF受体结合的平衡解离常数（KD）=8.31×10^-5mmol·L^-1,最大结合容量（BMAX）=2.62×10^-9mmol/10^8血小板。XQ和银杏内酯B（GB）可抑制[3H]PAF与兔血小板受体的特异性结合,抑制常数（Ki）分别为8.72×10^-8、7.13×10^-7mol·L^-1。结论：XQ具有抗血小板聚集作用,Ki值接近,其拮抗PAF受体的能力与GB相似。     

刺老苞根皮黄酮对兔骨性关节炎软骨细胞增殖与凋亡影响的研究△

目的：通过观察刺老苞根皮黄酮对新西兰兔骨性关节炎模型的软骨细胞增殖与凋亡基因表达的影响,初步探索其干预软骨细胞代谢的作用机制。方法：取5月龄新西兰兔骨性关节炎模型的膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系,分别采用MrITll法、TUNEL法、免疫组化法对细胞增殖、凋亡及细胞周期调控基因Bax、Bcl-2、Caspase-3、p53mRNA的表达进行检测。结果：不同剂量组刺老苞根皮黄酮可显著促进软骨细胞体外增殖,并可通过减弱软骨细胞Bax、Caspase-3、p53mRNA的表达,增强Bcl-2mRNA的表达来减缓软骨细胞凋亡进程。结论：刺老苞根皮黄酮可有效调控兔骨性关节炎软骨细胞代谢,增强细胞活性,延缓凋亡,具有研发成为骨性关节炎治疗药物的潜能。     

伏毛铁棒锤药材HPLC指纹图谱研究

目的:建立伏毛铁棒锤药材HPLC指纹图谱。方法:色谱条件:美国Thermo ODS-2HYPERSIL(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱;甲醇-乙腈-醋酸-醋酸钠(pH=4.5)缓冲液为流动相进行梯度洗脱;240～280nm整合波长检测,流速0.8mL/min,柱温30℃。结果:建立了伏毛铁棒锤药材HPLC-DAD指纹图谱,标定出25个共有峰,各批药材均具有上述特征峰,但特征峰的相对含量存在差异,即各批药材指纹图谱相似度大小与其来源相关。结论:本方法重现性好,所建立的指纹图谱可作为伏毛铁棒锤药材的鉴定依据。