AE-941抑制鼠视网膜新生血管的实验研究

目的探讨AE-941（CARTCELL卡特消）对视网膜新生血管形成的抑制作用。方法将鼠龄为7天的Wistar幼鼠置于75％浓度的氧环境中连续生活5天，建立高氧诱导的血管增生性视网膜病变幼鼠模型。随机分为正常对照、给氧对照组及治疗组（幼鼠玻璃体腔内注射AE-9410．25mg，0．5μl，1mg／ml，对侧眼注射相同体积的生理盐水作为对照）。采用ADP酶组织化学法行视网膜铺片，了解视网膜血管改变；用组织切片观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目，观察卡特消对视网膜新生血管形成的抑制情况。结果给氧对照组（鼠龄17天）可见视网膜血管分布紊乱、密度增高，大量的视网膜新生血管，组织切片上可见较多突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核。治疗组视网膜血管分布规则、密度减少，突破内界膜的内皮细胞细胞核数目明显减少，两组差异有显著统计学意义（P〈0．001）。结论AE-941可以抑制视网膜新生血管形成，有望成为防治血管增生性视网膜病变的一种有效的方法。     

氧诱导的血管增生性视网膜病变小鼠模型

目的 建立可量化的血管增生性视网膜病变小鼠模型。方法 将鼠龄为7d的C57BL/6J幼鼠17只暴露于75％氧浓度环境下饲养持续5d,然后回到正常空气中饲养;17只同龄幼鼠置于正常空气环境中饲养作为对照。ADP酶法视网膜铺片了解视网膜血管的改变;用组织切片观察并计数突破视网膜内界膜的内皮细胞核数目;视网膜组织切片用CD31进行免疫组织化学染色。结果 持续高浓度氧使幼鼠视网膜血管收缩、分支闭塞、中央部可见灌注降低,相对低氧使视网膜血管扩张、增生。组织切片可见正常对照组平均每张切片突破内界膜内皮细胞核数目<1个,给氧组平均24个/切片,两组比较差别有显著性意义(P<0.01)。给氧组视网膜组织切片经用CD31抗体处理后显示内界膜玻璃体面细胞染色阳性。结论 该模型具有可重复性强、可定量研究的优点,是进行视网膜新生血管发生机制及药物干预的合适模型。     

促红细胞生成素受体抗体抑制小鼠视网膜新生血管形成

目的:观察促红细胞生成素受体抗体(erythropoietin recep-tor antibody,EpoRA)对视网膜新生血管形成的抑制作用。方法:将鼠龄为7d的C57BL/6J幼鼠置于750±20mL/L氧仓中连续饲养5d,建立高氧诱导的血管增生性视网膜病变模型。幼鼠20只右眼在建模前1d予以玻璃体内注射EpoRA 2μL作为治疗眼,左眼不注射作为对照眼。在H.E.染色的组织学切片上观察并计数突破视网膜内界膜进入玻璃体的新生血管内皮细胞核数目;用ADP酶组织化学法行视网膜铺片,观察视网膜血管改变。饲养在正常条件下的幼鼠作为正常对照组;模型幼鼠8只仅在玻璃体内注射生理盐水,作为阴性对照组。结果:在组织切片上,可见突破视网膜内界膜进入玻璃体腔内的新生血管内皮细胞核,在用EpoRA注射的右眼,明显少于未经EpoRA注射的左眼(17.20±5.42个vs23.47±8.43个;P<0.01)。ADP酶组织化学法视网膜铺片中,可见视网膜新生血管的密度和异常程度,在用EpoRA注射的右眼,明显轻于未经EpoRA注射的左眼以及阴性对照组。正常对照组未见明显异常。结论:EpoRA可抑制小鼠模型中的视网膜新生血管形成。     

重组血管生成抑制因子k4k5抑制视网膜新生血管形成的实验研究

目的 观察重组血管生成抑制因子k4k5 (r-k4k5)对视网膜新生血管形成的抑制作用。 方法 将鼠龄为7 d的88只C 57BL/6J幼鼠置于75%浓度的氧环境中连续生活5 d，建立氧诱导的血管增生性视网膜病变幼鼠模型。幼鼠玻璃体腔内分别注射r-k4k5 500 ng(大剂量治疗组)、250 ng(小剂量治疗组) ，对侧眼注射相同体积的平衡盐溶液(balanced salt solution，BSS)作为对照。二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)酶染色法视网膜铺片，了解视网膜血管改变 ；用组织切片观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞细胞核数目，观察r-k4k5对视网膜新生血管形成的抑制情况。 结果 与对照组相比，治疗组视网膜血管分布规则、密度减少；治疗组突破内界膜的内皮细胞细胞核数目明显减少(P<0.001)；而且与小剂量治疗组相比较，大剂量治疗组内皮细胞细胞核数目减少，两组差异有显著性的意义(P<0.001)。组织切片未见视网膜毒性及炎症反应。 结论 r-k4k5可以抑制视网膜新生血管形成，有望成为防治血管增生性视网膜病变的一种有效的方法。 （中华眼底病杂志，2003，19：121-124）     

低分子量肝素抑制视网膜新生血管形成的实验研究

目的 观察低分子量肝素对视网膜新生血管形成的抑制作用。方法以高浓度氧诱导C57BL／6J幼鼠建立血管增生性视网膜病变动物模型。治疗组皮下分别注射低分子量肝素3．0U／g（大剂量组）和0．5U／g（小剂量组），每日2次共5d；对照组皮下注射相同体积的平衡盐溶液。用免疫组织化学法对视网膜铺片进行染色，了解视网膜血管改变；用组织切片观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞的细胞核数目，观察低分子量肝素对视网膜新生血管形成的抑制情况。结果治疗组视网膜血管密度减少，突破内界膜的内皮细胞细胞核数目明显减少，与对照组相比差异有显著统计学意义；大剂量组突破内界膜内皮细胞细胞核数目减少，与小剂量组相比差异有显著统计学意义。各组间眼内出血情况无显著统计学差异。结论低分子量肝素可以有效抑制视网膜新生血管形成。     

TNP470治疗高氧诱导幼鼠视网膜病变的作用

目的:探讨TNP470[O-(氯乙酰氨甲酰基)烟曲霉醇]治疗高氧诱导的早产儿视网膜病变的幼鼠模型(oxygen induced retinopathy,OIR)的作用.方法:选择鼠龄为7d的C57BL/6J幼鼠60只,分为正常对照组、高氧对照组、大、小剂量药物治疗组及实验对照组.随机取48只幼鼠置于浓度约为750mL/L的氧环境中连续生活5d,建立高氧诱导的早产儿视网膜病变动物模型.治疗组幼鼠取12只TNP470 30mg/kg SC为大剂量治疗组,另取12只鼠皮下注射TNP470 10mg/kg为小剂量治疗组,其余两组各12只小鼠SC相同体积的30mL/L酒精作为对照.每组随机取2只乳鼠4眼作视网膜铺片,观察视网膜血管变化.视网膜组织切片HE染色观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目,探讨TNP470对视网膜新生血管形成的抑制作用.结果:高氧环境对照组与正常环境对照组相比,视网膜有大量新生血管形成,结构及分布紊乱,说明高氧诱导的早产儿视网膜病变动物模型诱导成功;正常对照组与高氧环境对照组相比,药物治疗组与高氧对照组相比突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目明显减少(P＜0.001).大、小剂量治疗组相比较差异明显(P＜0.01).结论:TNP470有抑制早产儿视网膜新生血管形成的作用.     

腺病毒介导的TSP-1f基因转移抑制视网膜新生血管的实验研究

目的 构建表达凝血酶敏感蛋白-1(thrombin sensitive protein-1,TSP-1)抗新生血管活性片段(TSP-1f)腺病毒载体,并观察其对氧诱导的小鼠视网膜新生血管形成的抑制作用.方法 应用RT-PCR 方法从正常人外周血单个核细胞扩增TSP-1f cDNA 序列;采用AdEasy 系统构建TSP-1f重组腺病毒ADV-TSP-1f.将鼠龄为7 d的40只C57BL/6J新生鼠置于体积分数75%的氧环境中连续生活5 d,然后回到正常环境中建立氧诱导的鼠血管增生性视网膜病变动物模型;每只鼠随机选取一眼为实验组,而对侧眼为对照组,在鼠生后12 d时实验组玻璃体腔注射ADV-TSP-1f,对照组注射ADV-LacZ.1周后麻醉处死小鼠,Western 印迹方法检测TSP-1f 在实验组视网膜中的表达;视网膜铺片ADP酶法观察视网膜血管变化,组织学切片观察比较突破视网膜内界膜的血管内皮细胞数量.结果 成功构建表达TSP-1f重组腺病毒载体并转染鼠视网膜,Western blotting检测到实验组视网膜目的基因表达.视网膜铺片实验组视网膜未见明显的无灌注区形成,新生血管几乎消失.组织切片实验组突破内界膜的内皮细胞核数目(10.18±1.74)明显减少,与对照组(48.89±2.98)相比差异有显著统计学意义(P＜0.01).结论 腺病毒介导的TSP-1f对氧诱导的鼠视网膜新生血管有显著的抑制作用,为视网膜新生血管性疾病的基因治疗奠定基础.     

奥曲肽抑制视网膜新生血管形成的实验研究

目的　探讨生长抑素类似物奥曲肽对视网膜新生血管形成的影响及其治疗作用。方法　将鼠龄7d的小鼠40只随机分为5组,每组8只。正常对照组于正常空气环境中饲养,不予任何处理;其他4组置于氧箱中饲养。实验组分别皮下注射奥曲肽20和50μg·kg-1·d-1,实验对照组皮下注射等量PBS,连续用药5d,高氧组不注射奥曲肽。将鼠龄17d的小鼠处死,摘除眼球制作标本,进行组织病理学及电镜观察。光镜下观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数。原位杂交法检测生长抑素受体2(SSTR2)在视网膜上的表达。电镜下观察视网膜组织超微结构的改变。结果　正常对照组标本HE染色几乎未见突破内界膜的血管内皮细胞核,高氧组和实验对照组可见较多的突破内界膜的血管内皮细胞核,而实验组的数目明显少于高氧组和实验对照组。SSTR2原位杂交染色可见正常对照组、高氧组、实验对照组视网膜神经节细胞层、内核层及血管内皮细胞SSTR2强阳性表达,实验组呈弱阳性表达,其中大剂量实验组的表达更弱于小剂量实验组。电镜下可见缺氧引起小鼠视网膜视细胞层的破坏,奥曲肽治疗后,视网膜超微结构的损害明显好转。结论　奥曲肽能有效抑制视网膜新生血管的形成,在一定程度上可预防缺氧造成的视网膜超微结构的损害。     

PEDF抑制鼠视网膜新生血管的实验研究(英文)

目的:观察PEDF对氧诱导的血管增生性视网膜病变动物模型视网膜新生血管的抑制作用。方法:40只7日龄的C57BL/6J新生鼠暴露在750mL/L高氧环境中,然后回到正常空气中建立氧诱导的血管增生性视网膜病变的动物模型。随机取1眼为实验眼,在出氧箱时(12d)玻璃体腔注射PEDF,另1眼为对照组,玻璃体腔注射PBS。所有小鼠均于17d处死,视网膜铺片,ADP酶染色观察视网膜血管情况。HE染色,在光学显微镜下观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞细胞核数目。结果:与对照组相比,实验组视网膜血管分布规则,未见明显的无灌注区形成;实验组突破内界膜的内皮细胞细胞核数目(10.18±1.74)比对照组(38.89±2.98)明显减少(P<0.01) ;组织切片未见视网膜毒性及炎症反应。结论:PEDF能够有效抑制视网膜新生血管的生成。     

Avastin玻璃体腔注射对小鼠氧诱导视网膜病变新生血管的抑制作用

背景早产儿视网膜病变（ROP）主要源于视网膜新生血管的形成,avastin可以同血管内皮生长因子（VEGF）的所有异构体发生高亲和力结合,拮抗其生理活性。目的观察玻璃体腔注射avastin对氧诱导视网膜病变模型新生血管的作用。方法取7日龄清洁级C57BL／6J小鼠90只,用随机数字表法随机分为6组：空气对照组、高氧对照组、高氧BSS组和低、中、高剂量avastin组,每组15只。空气对照组小鼠在空气中喂养,其他各组均置于体积分数75％±2％O,的高氧环境中饲养,连续5d,高氧BSS组大鼠玻璃体腔注射无菌BSS液0．5μl,3个avastin处理组小鼠分别玻璃体腔注射1．25、2．50、5．00g／Lavastin各0．5μl。17日龄时过量麻醉处死小鼠,摘除眼球制备视网膜组织切片,苏木精一伊红染色后计数突破内界膜的新生血管内皮细胞核数目;应用免疫组织化学染色法检测视网膜中CD34分子的表达;利用视网膜铺片技术观察低、中、高剂量avastin组大鼠视网膜新生血管的形态并进行比较。结果苏木精一伊红染色发现,高氧对照组小鼠视网膜突破内界膜的新生血管内皮细胞核数目明显多于空气对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）;不同剂量的avastin组小鼠视网膜中突破内界膜的新生血管内皮细胞核数明显少于高氧BSS组和高氧对照组,差异均有统计学意义（P〈0．01）;高剂量avastin组与低剂量avastin组比较,突破内界膜的新生血管内皮细胞核数明显减少,差异有统计学意义（P〈0．05）。免疫组织化学检测显示,高氧对照组视网膜突破内界膜的内皮细胞CD34分子呈阳性表达。视网膜铺片可见空气对照组的血管自视盘向四周均匀放射,分支良好,结构清晰;高氧对照组、高氧BBS组可见大量新生血管,其结构紊乱,分布不均;各剂量avastin组随着剂量的增加,视网膜血管分布和走行接近空气对照组。结论玻璃体腔注射avastin可抑制视网膜新生血管的产生,其作用与avastin的剂量有关。     

Inhibition of retinal angiogenesis by PEDF

AIM: To investigate the effect of PEDF on retinal neovascularization in mice. METHODS: 40 7-day-old C57BL/6J mice was exposed to 750mL/L oxygen for 5 days and then to normal situation to produce the murine model of oxygen-induced retinopathy(OIR). One eye of the mouse was regarded as experimental one and the other served as control. Eyes in experimental group received intravitreal injection of PEDF and eyes in control group received intravitreal injection of PBS at postnatal day 12. All mice were executed at postnatal day 17. The changes of retinal vessels of mice were observed by ADPase histochemical technique. The inhibitory effect of PEDF on retinal neovascularization was evaluated by counting the endotheliocyte nuclei of new vessels which extended from retina to vitreous in the tissue slice of HE staining. RESULTS: Neovascularization was reduced, retinal blood vessels distributed regularly and non-perfusion areas were not found in eyes of experimental group compared with control group. The number of endotheliocyte nuclei of new vessels extending from retina to vitreous was significantly less in the eyes of experimental group (10.18±1.74) than that in control group (38.89±2.98) (P <0.01). Retinal toxicity and inflammatory reactions were not found in tissue slice. CONCLUSION: PEDF inhibits retinal angiogenesis in OIR and the feasibility should be determined for use of PEDF in ocular angiogenesis treatment.     

Study of the Influence of Angiostatin Intravitreal Injection on Vascular Leakage in Retina and Iris of the Experimental Diabetic Rats

The breakdown of the blood-retinal barrier or increased vascular permeability is an early complication of diabetes and a major cause of diabetic macular edema[1,2]. It is found that the increase of retinal vascular permeabil- ity precedes the appearance of clinical retinopathy at early stages of diabetic retinopa- thy[3,4]. Diabetic macular edema is a major cause of vision loss in diabetic patients. Although the pathogenic mechanism on the breakdown of the blood-retinal barrier and the increas…     

Experiment Study of Retinal Ultrastructure after Intravitreal FK506

Purpose : To investigate the retinal toxicity of FK506 by intravitreal administration.Methods:Twenty-two eyes of 14 New Zealand rabbits were investigated. FK506 at concentrations of 5,25 and 50μg/eye was injected into the vitreous cavities respectively.The control eyes were received mixed solution of balanced salt and ethanol. All eyes were examined by tonometry, slit lamp and indirect ophthalmoscopy preoperatively and postoperatively at the 1^st, 3^rd, 7^th, and 14^th day respectively. In the final examination, all eyes were enucleated and processed for light and electron microscopy.Results: No evidence of toxic reaction was seen in the eyes received 25μg FK506 or less of FK506. Several eyes received 50μg FK506 and control eyes developed conjunctival congestion and slightly bloody exudates in anterior chamber which may be related to irritation of ethanol. Two of five eyes received 50μg developed transient vitreous opacities.Electron microscopically, the mitochondria of the photoreceptor cells were swelled in the eyes treated with 50μg FK506.Conclusion : It is safety with intravitreal FK506. There are no irritation and toxicity to the rabbits eyes with the intravitreal doses of 251.zg FK506 or less. The doses of 50μg FK506 are proved to be toxic to the retina.     

抗血管内皮生长因子单克隆抗体Bevacizumab抑制氧致视网膜病变模型鼠新生血管

目的 观察抗血管内皮生长因子单克隆抗体Bevacizumab 对氧致视网膜病变模型鼠视网膜新生血管的抑制作用。 方法 7日龄C57BL/6J幼鼠90只，数字表法随机分为4组：1 组15只，为正常对照组；2组15只，为给氧对照组；3组30只，为大剂量Bevacizumab治疗组 ；4组30只，为小剂量Bevacizumab治疗组。其中，2、3、4组置于氧浓度（75±2）%的容器内连续饲养至12日龄，再置于正常空气下饲养。第12天3、4组幼鼠玻璃体腔分别注射Bevacizumab 2、1 μl，对侧眼注射相同体积的平衡盐溶液作为对照。二磷酸腺苷酶染色法进行 视网膜铺片,了解视网膜血管改变；视网膜切片染色，计数小鼠视网膜新生血管内皮细胞核数；逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测血管内皮生长因子（VEGF） mRNA的表达。 结果 与给氧对照组比较, Bevacizumab治疗组视网膜血管分布规则、密度减少,突破视网膜内界膜的内皮细胞核数目明显减少(P＜0.001),但不同剂量治疗组间比较，差异无统计学意义 (P＞0.05) ；给氧组无论是否采用Bevacizumab治疗，也不论Bevacizumab剂量大小，其VEGF的mRNA表达 量比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。 结论 抗VEGF单克隆抗体Bevacizumab能有效抑制氧致视网膜病变模型鼠视网膜新生血管的形成，可能成为治疗氧致视网膜病变等早产儿视网膜病变的一种新方法。 （中华眼底病杂志，2008，24：184-188）     

玻璃体腔注射VAS2870对小鼠氧诱导视网膜病变的保护作用

目的：观察玻璃体腔注射VAS2870对C57小鼠氧诱导视网膜病变的影响。方法：将新生C57 BL/6 J小鼠随机分为3组,分别为正常对照组、VAS2870注射 OIR 组和无菌 PBS 缓冲液注射OIR组。将后两组小鼠在出生后第7 d ( P7)至P12置于体积分数为75%±2%的恒定高氧氧箱中以构建OIR模型,在 P12时给予幼鼠双眼玻璃体腔注射 VAS2870(0.5μL),另一组幼鼠双眼注射同等剂量的无菌PBS缓冲液。三组小鼠均在 P17时取右眼行视网膜铺片和Lectin染色,观察视网膜中央无血管区及病理性新生血管的情况;取右眼行视网膜组织定量检测 ROS/RNS 含量;取左眼应用RT-PCR检测Nox4 mRNA含量,并应用Western-blot测定视网膜组织中VEGF的表达。结果：VAS2870注射OIR组小鼠视网膜中央无血管区面积较无菌PBS缓冲液注射OIR组明显减少( P<0.05),病理性新生血管数目明显减少( P<0.05);VAS2870注射OIR组小鼠视网膜组织Nox4 mRNA的表达量明显低于无菌PBS缓冲液注射组;VAS2870注射OIR组小鼠视网膜组织ROS含量较无菌PBS缓冲液注射组明显降低( P<0.05);VAS2870注射OIR组小鼠视网膜组织VEGF的表达明显低于无菌PBS缓冲液注射组( P<0.05)。结论：在小鼠OIR模型中, VAS2870可抑制Nox4 mRNA的表达,减少ROS/RNS,下调VEGF的生成,在视网膜病变进程中具有保护作用。     

GM6001抑制视网膜新生血管形成VEGF和MMP2的表达

目的:探讨基质金属蛋白酶抑制剂GM6001对鼠视网膜新生血管形成的抑制作用及机制。方法:采用高氧使鼠视网膜血管阻塞建立早产儿视网膜病变模型后,将鼠分为两组,玻璃体腔内注射75μmol/L的GM60010.5μL,另一组不治疗。5d后处死,行视网膜HE染色计数矢状面5μm视网膜切片中突破内界膜的血管内皮细胞核数,和血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)免疫组织化学染色,以及视网膜铺片。同时设立正常对照组。结果:GM6001治疗组视网膜发生新生血管的眼数较高氧对照组少,但较正常对照组多。GM6001治疗组、高氧对照组、正常对照组平均每个切面突破内界膜的血管内皮细胞核数为2.38±0.90,21.25±1.12和1.23±0.46,高氧对照组与正常对照组具有显著统计学差异(P<0.01),GM6001治疗组与正常对照组无统计学差异(P>0.05),与高氧对照组具有显著统计学差异(P<0.01)。视网膜铺片正常对照组血管发育成熟,深浅两层血管网结构清晰,可见螺旋动脉,高氧对照组血管迂曲阻塞,大量结构异常新生血管,丧失了血管网结构,GM6001治疗组见两层血管网结构清晰,仍有少部分深层血管阻塞。视网膜免疫组织化学检测GM6001治疗组VEGF及MMP-2与正常对照组有统计学差异(P<0.05),与高氧对照组也有显著统计学差异(P<0.01)。结论:GM6001可抑制视网膜病的血管新生,机制可能是抑制了MMP-2对VEGF的作用。