来氟米特活性代谢物A771726对大鼠角膜移植排斥反应的影响

目的探讨来氟米特活性代谢物A771726对大鼠角膜移植排斥反应的抑制作用。方法建立SD-Wistar大鼠同种异体穿透角膜移植模型,随机分组。A组为空白对照组;B、C、D组分别为0．5％、1．0％及2．0％A771726滴眼液组;E组为Wistar大鼠自体移植对照组。术后比较各组角膜植片排斥指数（RI）及植片存活时间,并对植片进行组织学及免疫组织化学染色观察。结果A组角膜植片存活时间为（9．38±2．26）d,B组（10．13±2．41）d,C组（17．57±1．72）d,D组（17．50±2．14）d,E组（〉28．00）d。A组、B组分别与C组、D组植片存活时间差异有统计学意义（P〈0．01）。移植术后10d,A组、B组角膜植片发生排斥反应,植片高表达IFN-γ及ICAM-1;术后20d,C组、D组植片发生排斥反应,植片IFN-γ及ICAM-1表达增高。结论局部应用A771726滴眼液能有效抑制角膜移植排斥反应。     

小分子化合物J2对小鼠角膜移植术后植片RANTES基因表达的影响

[摘要]目的研究小分子化合物J2对同种异基因小鼠角膜移植后植片RANTES基因表达的影响，从而探讨新型药物J2对于角膜移植排斥反应的作用机制。方法建立小鼠角膜移植模型，随机分为A、B、C、D四组。A组为自体原位移植组，B、C、D组均采用C57BL／6-BALB／c同种异体角膜移植模型，术后采用腹腔注射给药，自手术当日开始，A组、B组给予安慰剂，C组给予CsA10mg／kg，D组给予J215mg／kg，每天1次，连续给药12d。观察各组植片生存指数变化，分别在术后第1周、第2周、第3周、第4周行RT-PCR检测角膜植片中RANTES基因的表达。结果同种异体移植安慰剂组角膜植片平均存活时间为（18.87±4，19）d，J2组和CsA组发生排斥时间明显延迟，分别为（33.12±6.80）d和（35.13±5.74）d，与同种异体移植安慰荆组比较差异有显著性（P〈0.01），但J2组与CsA组比较差异无显著性。在正常小鼠角膜未见RANTES基因表达。自体移植组RANTES基因在第1周均有少量表达，而其他3周没有显著表达；异基因移植组从第1周开始表达各种基因，第3周表达明显增强；而CsA组和J2组从第1周开始表达，第2、第3周表达减弱，第4周表达强于前3周。结论RANTES基因参与了异基因小鼠角膜移植排斥反应，J2可以抑制其表达。     

以CD4为靶点的小分子化合物J2对异基因角膜移植小鼠淋巴细胞的影响

目的探讨小分子化合物J2对异基因角膜移植小鼠淋巴细胞的影响。方法建立小鼠角膜移植模型,随机分为A、B、C、D4个组。A组为空白对照组3只BALB/c小鼠,B、C、D组各11只鼠,均取右眼行C57BL/6-BALB/c同种异体角膜移植术,自手术当日开始腹腔注射给药,B组给予不含药物的安慰剂,C组给予环孢素A（CsA）10mg/kg,D组给予J215mg/kg,每日1次,连续给药12d。给药后7d,取大鼠脾细胞给予刀豆蛋白（ConA）刺激细胞增生,采用ELISA法测定细胞上清液中白细胞介素-2（IL-2）及IL-4的含量,比较各组细胞增生指数及细胞因子含量。结果 B组角膜植片平均存活时间为（18.88±4.19）d,C组、D组发生排斥时间分别为（35.13±5.74）d、（33.62±6.80）d,明显延迟,与B组比较差异均有统计学意义（q=9.17,P〈0.01;q=8.33,P=0.00）,而C组与D组比较差异无统计学意义（q=0.85,P=0.60）。ConA刺激角膜移植后小鼠脾细胞增生,各组小鼠脾细胞的增生指数差异无统计学意义（F=3.729,P=0.061）。异基因小鼠角膜移植后3周左右小鼠脾细胞中IL-2和IL-4的含量无明显变化。应用ConA刺激后ELISA法检测结果表明,角膜移植小鼠脾细胞分泌IL-2明显增多,J2可抑制ConA诱导的IL-2分泌增加。结论 J2可能通过抑制CD4^＋T淋巴细胞而抑制角膜排斥反应的发生;J2能够明显抑制ConA刺激角膜移植后小鼠脾细胞的增生及Th1细胞因子的产生。     

小分子化合物J2抑制小鼠角膜移植术后排斥反应的研究

目的 探讨新型药物J2抗同种异基因小鼠角膜移植术后排斥反应的作用及其机制.方法 实验研究.采用随机分组设计的研究方法.建立以C57BL/6小鼠为供体,BALB/c小鼠为受体的角膜移植实验模型,其中供体38只,受体100只,随机分为A、B、C、D 四组,每组25只.A组为BALB/c小鼠白体原位角膜移植,B、C及D组均采用C57BL/6-BALB/c同种异体角膜移植,术后采用腹腔注射给药,自手术当日开始,A组、B组给予安慰剂,C组给予CsA 10 mg/kg体重,D组给予J215 mg/kg体重,每天1次,连续给药12 d.观察各组植片生存指数变化,苏木素-伊红染色及冰冻切片免疫组织化学观察角膜植片病理改变;分别在术后1、2、3及4周行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测角膜植片中细胞因子的表达.各组间植片存活时间差异采用One-Way ANOVO分析进行比较,两组之间比较采用SNK法.结果 B组角膜植片平均存活时间为(18.88±4.19)d,D组发生排斥时间明显延迟为(33.62±6.S0)d,两组比较差异有统计学意义(q=8.33,P=0.00),而D组与C组比较差异无统计学意义(q=0.85,P=0.60).组织学检查证实,术后21 d,B组见大量细胞浸润,而D组与C组植片未见明显的细胞浸润.免疫组织化学检测显示安慰剂组角膜植片大量CD4+和CD8+T淋巴细胞浸润,J2组与CsA组植片仅有少量的CD4+和CD8+T淋巴细胞浸润.RT-PCR结果显示,在正常小鼠角膜未见IL-10和IFN-γ基因表达;异基因移植组从第1周开始表达各种基因,第3周表达明显增强;而J2组与CsA组从第1周开始表达,第2、3周表达减弱,第4周表达强于前3周.结论 J2通过拮抗CD4与主要组织相容性抗原(MHC)Ⅱ分子结合抑制CD4+T淋巴细胞激活,从而具有抗小鼠角膜移植排斥作用.     

诱导供体特异性前房相关免疫偏离对高危角膜移植排斥反应的影响

目的:探讨诱导供体特异性的前房相关免疫偏离(anterior chamber-associated immune deviation,ACAID)对高危角膜移植排斥反应的影响。方法:采用新西兰白兔眼角膜建立碱烧伤眼模型,实验动物随机分为4组,A:正常角膜常规角膜移植组(正常对照组);B:碱烧伤常规角膜移植组(碱烧伤对照组);C:正常角膜诱导ACAID的角膜移植组(正常诱导组)。D:碱烧伤后诱导ACAID的角膜移植组(碱烧伤诱导组)。B,D组进行左眼碱烧伤,烧伤后1mo进行角膜移植。C,D组在角膜移植前2wk于右眼前房注入可溶性抗原以预先诱导供体特异性ACAID。A,B组右眼前房注等量平衡盐溶液。术后记录植片存活时间;对角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)生长情况进行评分;记录移植排斥指数(rejection index,RI);角膜固定、包埋后制作切片行HE染色。结果:A、C组角膜植片长期存活,碱烧伤对照组植片平均存活25.13±0.64d,碱烧伤诱导组角膜植片平均存活时间为38.25±1.28d。与碱烧伤对照组相比,碱烧伤诱导ACAID组角膜植片平均存活时间显著延长,两组植片存活时间的差异具有统计学意义(P=0.00)。结论:诱导供体特异性ACAID可以延长碱烧伤高危眼角膜植片的存活时间。     

小鼠角膜移植排斥反应中植片内细胞因子表达水平的变化

背景研究表明细胞因子在角膜移植免疫调节中起重要的作用,但关于角膜移植术后角膜植片内细胞因子表达的变化报道较少。目的探讨角膜移植术后不同时间点细胞因子的表达变化。方法采用雌性6～8周龄BALB／c小鼠及C57BL／6小鼠分别建立小鼠自体角膜移植和同种异体角膜移植模型,每组各10只,自体角膜移植术组供体和受体同为BALB／c小鼠,同种异体角膜移植术组供体为C57BL／6小鼠,受体为BALB／c小鼠。于术后1d开始临床观察角膜植片并对炎症程度进行评分,当植片评分总和≥5分或植片混浊≥2分时为发生植片排斥反应。将BALB／c小鼠随机分为正常对照组3只和同种异体角膜移植术组15只,后者分别于术后6h及1、3、7、14d对角膜植片行逆转录PCR（RT—PCR）检测植片中细胞因子白细胞介素4（IL-4）、γ-干扰素（IFN-γ）、IL-10、肿瘤坏死因子α（TNF—α）表达的变化。结果在60d的观察期中,自体角膜移植术后小鼠角膜植片混浊评分均〈2分,植片的炎症评分之和均〈5分,植片存活率为100％,但同种异体角膜移植术后角膜植片水肿、混浊,伴有角膜新生血管形成,至术后24d角膜植片排斥反应评分之和均≥5分,植片混浊评分≥2分,全部发生排斥反应,角膜植片平均存活时间为（17．80±4．66）d。RT—PCR检测结果表明,正常角膜中IL-4和IFN-γ呈阳性表达,IL-10和TNF-α表达阴性。同种异体角膜移植术后6h可检测到IL-4呈阳性表达,IFN-γ和IL-10表达呈强阳性,而未检测到TNF—α的表达。术后1～3d角膜植片中IL-4呈强阳性表达,IFN-γ阳性表达,TNF—α表达增强,IL-10表达逐渐消失。角膜移植术后7d,可见IL-4表达阴性,而IFN-γ、IL-10和TNF—α仍呈强阳性表达。至术后14d,角膜植片中IL-4、IFN-γ和TNF—α．均未见表达,仅检测到IL-10呈阳性表达。结论TNF-α是角膜移植术后局部参与调控的主要因子。     

颈淋巴结切除术抑制碱烧伤后角膜移植免疫排斥反应的实验研究

目的：探讨颈淋巴结切除术对碱烧伤后角膜移植免疫排斥反应的抑制作用． 方法：建立大鼠同种异体角膜移植模型，SD鼠为受体，Wistar鼠为供体，受体鼠再随机分为A，B，C，D四组，A组为对照组，B组为颈淋巴结切除组，C组为碱烧伤后角膜移植组，D组为碱烧伤后角膜移植合并颈浅淋巴结切除组。每组均为6只，其中1只于术后14d行植片的巨噬细胞免疫组化染色。其余5只通过裂隙灯观察角膜免疫排斥的状况，检测并比较各组植片平均存活时间（mean survival time，MST）。 结果：各组MST分别是10．40±1．14d；46．30±9．46d；7．00±1．58d和15．00±3．39d。B组MST较A组明显延长（P〈0．05），而D组MST较C组明显延长，差异具有显著性意义（P〈0．05）。角膜移植后14d，B组植片中无CD68阳性细胞出现，A组和D组植片中有不同程度的CD68阳性的巨噬细胞浸润，而C组植片中CD68呈强阳性表达。 结论：颈淋巴结切除术能有效抑制正常及碱烧伤后角膜移植术后的免疫排斥反应。     

重组腺病毒载体RNA干扰阻断ICOS共刺激通路抑制大鼠角膜移植免疫排斥反应的研究

目的观察携带有报告基因绿色荧光蛋白且表达ICOS-siRNA的重组腺病毒载体Ad-siICOS-EGFP阻断ICOS共刺激通路对角膜移植急性免疫排斥反应的抑制作用。方法取Wistar大鼠(供体)及SD大鼠(受体),建立大鼠同种异体穿透性角膜移植模型,将SD大鼠随机分为A、B、C、D4组,每组各20只:A组为单纯角膜移植对照组;B组为Ad-siICOS-EGFP注射组,术后即刻于球结膜下注射Ad-siICOS-EGFP;C组为Ad-EGFP注射组,术后即刻于球结膜下注射Ad-EGFP;D组为生理盐水注射组,术后即刻于球结膜下注射生理盐水;每眼选择角膜缘1200位、600位两个注射点,每个注射点注射剂量为15μL。术后每天在裂隙灯显微镜下观察排斥反应指数的变化并记录植片的存活时间。各组分别于术后5d随机取10只大鼠,麻醉后取角膜,部分植片行RT-PCR检测,部分角膜冰冻切片行共聚焦显微镜观察。各组其余大鼠进行角膜植片存活时间统计。结果 A组、B组、C组、D组角膜植片平均存活时间分别为(9.800±0.632)d、(14.700±1.418)d、(10.000±1.054)d、(10.100±0.876)d,其中B组存活时间最长,与其余各组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05);A组、C组、D组各组间差异均无统计学意义(均为P>0.05)。B组及C组角膜植片共聚焦显微镜下可见GFP绿色荧光表达,表达位于角膜植片上皮层及整个角膜基质层;A组、D组角膜植片未见绿色荧光表达。A组、B组、C组、D组植片组织ICOS的PCR产物凝胶电泳条带灰度值比值分别为1.004±0.164、0.621±0.096、0.929±0.134、0.918±0.120,其中B组最低,与其余各组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05);A组、C组、D组各组间差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论 Ad-siICOS-EGFP可以有效地抑制大鼠植片组织ICOSmRNA及蛋白的表达,从而阻断ICOS共刺激通路;移植术后即刻受体鼠球结膜下注射Ad-siICOS-EGFP,可以抑制大鼠角膜移植急性免疫排斥反应,延长角膜植片存活时间。     

高危角膜移植大鼠排斥反应及VEGF-C/D表达的研究

目的：探讨鼠角膜碱烧伤后VEGF-C/D的表达和意义,以及新生淋巴管在高危角膜移植后排斥反应中的作用。
　　方法：制作角膜碱烧伤模型,取不同时间段角膜进行电镜观察,观察角膜血管化情况;采用免疫组织化学方法检测l、3、5、7、14、28 d角膜组织VEGF-C/D及VEGFR-3的表达;并在角膜中仅有血管(A组),同时存在新生血管及新生淋巴管(B组),新生淋巴管消退期(C组),角膜新生血管消退期(D组)以及正常组(N 组)进行穿透性角膜移植,比较不同角膜植片的排斥反应指数( rejection index, RI)值及存活时间。
　　结果：电镜观察发现,在碱烧伤后第7d时鼠角膜出现新生血管,未出现新生淋巴管,在碱烧伤2 wk时出现新生血管的同时出现淋巴管,5wk时无明显的新生淋巴管,8wk时新生血管逐渐消退;大鼠角膜组织中 VEGF-C/D 及VEGFR-3的表达从第3 d开始明显上升,并于第5 d达到最高峰。角膜移植后N、A、B、C、D组的植片平均存活时间分别为14.25±0.62、9.35±1.02、5.06±1.13、8.71±0.83、9.44±1.05d。组间比较发现,B组植片平均存活时间显著性缩短(P<0.05),A、C、D的存活时间均显著性延长(P<0.05)。
　　结论：角膜碱烧伤后存在VEGF-C/D及VEGFR-3的高表达,而且新生淋巴管能加速高危角膜移植后的免疫排斥反应。     

颈浅淋巴结在大鼠角膜移植免疫中的作用

目的探讨颈浅淋巴结在角膜移植免疫中的作用,为抑制移植术后的免疫排斥反应提供新的思路。方法建立大鼠同种异体角膜移植模型,24只SD鼠为受体,12只Wistar鼠为供体,所有大鼠均为雌性。受体鼠再分为A、B、C、D4组,A组为正常角膜移植组,B组为正常角膜移植合并颈浅淋巴结切除组,C组为高危角膜移植组,D组为高危角膜移植合并颈浅淋巴结切除组。每组均为6只,其中1只于术后14d行植片病理学检查及巨噬细胞免疫组化染色。对各组角膜存活情况进行评分比较,评价疗效。结果各组植片存活时间分别是(10.40±1.14)d、(46.30±9.46)d、(7.00±1.58)d和(15.00±3.39)d。植片存活时间B组较A组、C组,D组较C组均明显延长,差异均具有显著性意义(P<0.05)。结论颈浅淋巴结在大鼠角膜移植免疫中起着非常重要的作用,颈浅淋巴结切除术能有效抑制正常及高危角膜移植术后的免疫排斥反应。     

雷帕霉素抑制大鼠角膜移植免疫排斥反应的实验研究

目的探讨雷帕霉素(RAPA)对大鼠角膜移植排斥反应的防治效果。方法以SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体建立角膜移植实验模型。采用完全随机分组设计方案,将68只Wistar鼠(68只眼)随机分为4组,A组为Wistar鼠自体原位角膜移植,B、C、D组为SDWistar鼠之间进行同种异体角膜移植。术后灌胃给药,A组和B组给予空白液,C组和D组分别给予RAPA(3mg·kg-1·d-1)和环孢霉素A(CsA)(10mg·kg-1·d-1),连续用药12d。根据Holland排斥反应评分系统,判断术后植片排斥情况。比较各组角膜植片的平均存活时间和植片存活率。采用广义估计方程对角膜的新生血管评分进行统计学分析。术后14d,对各组角膜进行组织学检查。结果RAPA组发生排斥反应的时间明显延迟,同种异体移植对照组植片平均存活时间(MST)为(11.0±1.5)d,RAPA组MST为(36.1±14.9)d,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。RAPA组角膜植片存活情况较CsA组好,但两组植片存活率比较差异无统计学意义(P>0.05)。RAPA组术后角膜新生血管的生长明显低于异体移植对照组(P<0.05)和CsA组(P<0.05)。组织学检查证实,术后14d,RAPA组角膜植片未见明显淋巴细胞浸润。结论口服RAPA能够延缓大鼠角膜移植排斥反应的发生,并能够抑制术后新生血管的生成。     

FK506缓释系统前房植入抑制兔高危角膜移植术后的免疫排斥反应

目的探讨前房植入FK506药物缓释系统（DDS）对兔高危角膜移植术后免疫排斥反应的抑制作用和FK506房水药物浓度与免疫排斥反应的关系。方法107只新西兰白兔中随机数字法选取73只兔进行角膜新生血管化模型的制作,其中68只兔作为受体成功建立高危角膜移植动物模型,随机数字法分为对照组、空白DDS前房植入组、环孢素A（CsA）DDS前房植入组（含CsA 1mg）、0．1％FK506眼液滴眼组及FK506 DDS前房植入组（含FK5060．5mg）。角膜移植术后观察各组角膜植片排斥发生的时间,移植术后1周取各组实验兔眼房水和静脉血进行FK506药物浓度检测。0．1％FKS06眼液滴眼组和FKS06 DDS前房植入组在移植术后的不同时间点抽取实验兔眼房水和静脉血,进行FK506药物浓度的检测。观察各组兔移植术后4周和观察期结束时角膜植片的病理变化,同时应用原位杂交的方法检测各组角膜植片内白细胞介素2受体a（IL-2Bot）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、Fas及FasL mRNA的表达。结果FK506 DDS前房植入组角膜植片存活时间超过180d,明显优于其他各组（F=926．37,P=0．0000）,其房水和角膜组织中的FK506药物浓度明显高于FKS06眼液滴眼组（T=21．00,P=0．0022）。FKS06 DDS前房植入组在术后24周内均能在房水中检测出FK506。术后4周对照组和空白DDS前房植入组有大量的炎性细胞浸润,并有明显的IL．2Bet和MCP-1mRNA的表达,而CsADDS前房植入组、FK506眼液滴眼组及FK506 DDS植入组角膜未见明显的炎性细胞浸润,未见IL-2Pux和MCP-1mRNA的表达。各组均未见明显的Fas和FasL mRNA的表达。结论前房植入FK506 DDS可有效地抑制高危角膜移植术后免疫排斥反应的发生,房水中较高的FK506药物浓度是防治术后发生免疫排斥反应的重要因素。     

IL-10基因修饰的未成熟树突状细胞在大鼠角膜移植排斥反应中的作用

目的：通过建立大鼠角膜穿透性移植模型,探讨IL－10基因修饰的未成熟树突状细胞在大鼠角膜移植排斥反应中的作用及其作用机制。方法：建立大鼠同种异体穿透性角膜移植模型,将受体SD大鼠随机分为：阳性对照组、GFP－DC组、8－DC组及IL－10－GFP－DC组,分别于角膜移植术前3 d尾静脉注射等量的PBS、供体Wistar 大鼠骨髓源8－DC （培养8d的DC）、转染48h的GFP－DC及IL－10－GFP－DC。术后每天在裂隙灯下观察角膜植片情况,记录排斥反应指数及角膜植片存活时间,在移植术后第14 d行各组角膜组织的病理学检查及免疫组织化学检查。结果：IL－10－GFP－DC组角膜植片存活时间较GFP－DC组、8－DC组比较显著延长（ P＜0．01）。术后第14 d时IL－10－GFP－DC组角膜植片的混浊、水肿、新生血管及排斥指数均显著降低（P＜0．01）。病理组织学检查结果显示各实验组角膜植片的炎症反应较阳性对照组轻,植片中央未见明显新生血管。免疫组织化学结果显示：IL－10－GFP－DC组的CD4＋、CD8＋、CD25＋、IL－2＋、NK＋及NF－κB＋阳性细胞数量较阳性对照组、GFP－DC组、8－DC组减少,差异均具有显著统计学意义（P＜0．01）。结论：经过供体来源未成熟树突状细胞预处理的受体,角膜植片的存活时间显著延长,成功诱导角膜移植免疫耐受。 CD4＋、CD8＋、CD25＋、IL－2＋、NK＋及NF－κB＋阳性细胞参与了同种异体角膜移植排斥反应的调控,IL－10－GFP－DC可降低CD4＋、CD8＋、CD25＋、IL－2＋、NK＋及NF－κB＋阳性细胞的浸润,抑制角膜移植排斥反应的发生。     

人纤溶酶原K5突变体滴眼液对大鼠角膜移植植片存活时间的影响

目的 探讨人纤溶酶原K5突变体(mK5)滴眼液预防大鼠角膜移植排斥反应发生的效果.方法 实验研究.以F344大鼠30只作为供体,Lewis大鼠60只作为受体,建立同种异体角膜移植排斥反应模型.另取15只Lewis大鼠行自体原位角膜移植,即A组为15只F344大鼠自体原位角膜移植.采用完全随机分组设计方案,将60只Lewis大鼠(60只右眼)分为B、C、D及E组.术后术眼4次/d滴眼液,每次1滴,A组和B组滴生理盐水,C组和D组滴mK5滴眼液,浓度分别为5 mg/L和10 mg/L,E组给予0.1%地塞米松滴眼液,连续用药14 d.根据Holland排斥反应评分标准,判断术后植片排斥情况.比较各组角膜植片的平均存活时间,并观察各时间点角膜新生血管生长情况,计算其面积.术后第14天,对各组大鼠角膜植片做组织学检查.采用方差分析和SNK-q检验对以上所得结果进行统计学分析.结果 B、C、D、E组植片平均存活时间分别为(9.3±2.1)、(21.1±7.3)、(23.5±10.8)及(28.2±19.1)d;C、D组分别与B组比较,差异有统计学意义(q=10.24,13.47:P<0.05);E组植片存活情况较C、D组好,但组间比较,差异无统计学意义(q=2.54,1.49;P>0.05).术后A、B、C、D及E组角膜新生血管开始出现的时间分别为(3.1±0.8)、(2.6±0.5)、(6.4±0.5)、(7.8±0.7)及(5.3±1.0)d;C、D、E组与A组比较(q=31.58,51.21,19.98;P<0.05);C、D、E组也较B组明显延长(q=43.87,67.14,24.53;P<0.05);C、D及E组两两组间比较差异有统计学意义(q=11.41,20.37,9.67;P<0.05).术后C、D组角膜新生血管的生长面积明显较B组少(q=30.76,62.14;P<0.05),且与E组比较差异有统计学意义(q=15.20,25.64;P<0.05).病理学检查显示,B组角膜植片可见大量炎性细胞浸润和角膜新生血管形成,而C组与D组植片炎性反应较轻,无明显新生血管形成.结论 mK5滴眼液可抑制同种异体大鼠角膜移植术后新生血管的生成,延缓角膜移植排斥反应的发生.     

CD4+CD25+调节性T细胞参与大鼠角膜移植免疫耐受的研究

目的 探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)诱导大鼠高危角膜移植免疫耐受时CD4+CD25+调节性T细胞在眼局部及全身的表达情况.方法 本实验采用对照设计,以13只SD大鼠作为供体,26只Wistar大鼠作为受体建立高危穿透性角膜移植模型.所有受体大鼠抽签法随机分为2组,对照组和SEB组分别腹腔注射生理盐水和SEB(75 μg/kg体重),1次/4 d,共3次,末次注射后1 d行右眼穿透性角膜移植术.术后观察大鼠角膜植片的存活时间,并采用免疫荧光染色分析CD4+CD25+T细胞在大鼠角膜植片和虹膜的表达,使用流式细胞学方法分析外周血中的CD4+CD25+T细胞百分数.结果 对照组大鼠角膜植片平均存活时间为(11.63±2.83)d,SEB组为(14.13±0.99)d,两组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).组织病理学检查可见发生排斥的角膜植片有大量炎性细胞浸润,炎性细胞数量与排斥反应程度呈正相关性.直接免疫荧光染色检查可见术前两组角膜组织均不表达CD4+CD25+T细胞,而术后20 d两组均有表达.虹膜铺片直接免疫荧光染色检查术前对照组未见CD4+CD25+T细胞表达,而SEB组(首次注射SEB后第10天)虹膜片可见CD4+CD25+T细胞表达,术后第20天两组大鼠虹膜铺片均可见CD4+CD25+T细胞表达,并且SEB组阳性细胞数更多.流式细胞学方法分析显示手术前后、对照组大鼠外周血中CD4+CD25+T细胞的百分数无变化,而SEB组呈先升高、后降低的变化趋势.结论 CD4+CD25+调节性T细胞参与超抗原SEB诱导大鼠高危角膜移植术后免疫耐受的形成.     

拮抗CD4小分子化合物J2抗小鼠角膜移植排斥机制的初步研究

目的 探讨拮抗CD4小分子化合物J2抗小鼠角膜移植排斥的机制.方法 实验研究.采用随机数字表法将53只Balb/c小鼠分成A、B、C、D及E组,A、C、E组各13只,B、D组各7只,A组为不做任何处理的正常对照,B组为自体角膜原位移植组,C、D、E组为Balb/c-C57BL/6同种移植组,其中B、C组给予不含药物的空白液灌胃,D组给予环孢菌素A(CsA)10 mg/kg体重,E组给予J2 15 mg/kg体重.在角膜移植后第1至4周,每周行外周血流式细胞学检查,观察CD3~+CD4~+T淋巴细胞、CD3~+CD8~+T淋巴细胞的动态变化趋势,在角膜移植后3周行迟发性超敏反应实验,在角膜移植后18 d行免疫酶联斑点实验,检测脾脏白细胞介素2(IL-2)、IL-10、γ干扰素(IFN-γ)的变化.实验数据通过单因素方差分析以及重复测量资料的单因素方差分析进行统计学处理.结果 流式细胞学检查显示:E组小鼠外周血总CD3~+T淋巴细胞、CD3~+CD4~+T淋巴细胞、CD3~+CD8~+T淋巴细胞较B、D组未发生特异性增殖(CD3~+CD4~+T淋巴细胞的E与B组间比较,P=0.776;E与D组间比较,P=0.606.CD3~+CD8~+T淋巴细胞的E与B组间比较,P=0.941;E与D组间比较,P=0.482).迟发性超敏反应结果显示:在移植后3周,E组小鼠对供体脾细胞和第3鼠系脾细胞均呈低反应,与A组小鼠比较差异无统计学意义(F=1.00,P=0.422).免疫酶联斑点试验结果显示:E组分泌IL-2较A组增加(36.0±7.6),分泌IFN-γ较A组增加(56.0+42.2),但与B组比较,差异无统计学意义(IL-2比较,P=0.832;IFN-γ比较,P=0.356).IL-10各组之间差异无统计学意义(F=2.911,P=0.240).结论 J2阻断了CD4与主要组织相容性抗原复合物Ⅱ(MHC-Ⅱ)类分子的抗原提呈过程,特异性抑制了抗原特异性迟发性超敏反应的发生;在J2阻断CD4/MHC-Ⅱ类分子的抗原提呈过程后,IL-2、IFN-γ及IL-10分泌未发生特异性变化.     

Effect of allergic conjunctival inflammation on the allogeneic response to donor cornea

PURPOSE: Immunologic rejection is the most common cause of corneal allograft rejection. Ipsilateral ocular inflammation has been identified as a predictor of future corneal graft failure. This study investigates the effect of perioperative allergic conjunctivitis on corneal allograft survival. METHODS: C57BL6 donor corneas were transplanted into naive A/J mice, A/J mice sensitized to short ragweed (SRW) pollen by intraperitoneal injection and then challenged with topical SRW to induce allergic conjunctivitis (Sens(+)Chall(+)), and A/J mice sensitized to SRW and challenged with topical PBS (Sens(+)Chall(-)). Syngeneic grafts were also performed in eyes with allergic conjunctivitis. Graft survival and infiltrating cell phenotype in rejected grafts were compared between groups. RESULTS: Mice with allergic conjunctivitis (Sens(+)Chall(+)) rejected corneal allografts significantly more quickly than naive mice. Syngeneic grafts in allergic eyes survived indefinitely. The rate of rejection in Sens(+)Chall(-) mice was similar to that in naive mice. There were no significant differences, between groups, in the numbers of infiltrating CD4(+) cells, CD8(+) cells, and macrophages at the time of graft rejection. Eosinophils were seldom observed in rejected grafts in naive and Sens(+)Chall(-) mice but were observed consistently in Sens(+)Chall(+) eyes. Eosinophils were also found consistently in the ciliary body of Sens(+)Chall(+) eyes at the time of graft rejection. CONCLUSIONS: Active allergic conjunctivitis at the time of transplantation accelerates corneal allograft rejection. Local conjunctival inflammation is an important factor in accelerating rejection.