骨膜细胞联合BMP成骨作用的实验研究

目的 观察骨膜细胞联合BMP协同成骨作用及其效果，探索骨缺损后骨再生的新方法。方法 采用自体骨膜细胞体外培养、扩增、传代，观察兔骨膜细胞活细胞形态学和功能变化；兔24只随机分四组，切除双侧连同骨膜桡骨1cm，分别置入骨膜细胞＋BMP、骨膜细胞、BMP、空白对照，术后定期进行X线拍片、组织学检查。结果 兔骨膜培养活细胞形态分三期：细胞分裂期、细胞发展期、细胞功能期，细胞传代进化后，其结构与原代细胞无明显差异；骨膜细胞体外培养，大量增殖，其细胞悬液自体移植至骨缺损区能形成骨组织；修复骨缺损能力骨膜细胞＋BMP〉BMP〉骨膜细胞，骨膜细胞移植后表现为在骨缺损端形成骨样组织。类似膜内化骨形成新骨，BMP类似软骨内化骨形成新骨，骨膜细胞＋BMP表现膜内化骨和软骨内化骨两种机制，以前者明显。结论 骨膜细胞或BMP两者均有修复骨缺损的能力，骨膜细胞联合BMP有协同成骨作用，为修复骨缺损的一种理想方法。     

游离骨膜体内异位培养成骨的实验研究

目的 探讨以游离骨膜复合支架材料培养工程骨组织的可行性.方法 将游离骨膜与聚乳酸支架复合后体内异位培养,于2、4、6、8周对标本进行碱性磷酸酶及钙磷含量检测.结果 碱性磷酸酶活性及钙磷含量2周到6周逐渐增高,8周略有下降,统计学分析与对照组有显著差异.结论 聚乳酸材料与游离骨膜复合异位培养可以产生新骨,新生的骨组织于6周时成熟.     

bFGF促进骨膜细胞成骨性生长的研究

目的研究bFGF对骨膜细胞的成骨性生长的影响。方法手术分离大鼠骨膜，用胰酶消化法分离骨膜细胞进行元代培养稳定传代后，选择第3～5代细胞随机分成两组；细胞同步化处理后，实验组用终浓度10ug／L的bFGF刺激细胞，对照组正常培养，72h后，用[3H]-TDR方法检测细胞的增殖状态，RT—PCR方法和Westernblot方法检测成骨细胞骨钙素基因的表达。结果10ug／L的bFGF处理细胞72h后，[3H]-TDR方法检测显示细胞DNA合成水平明显上调；而成骨细胞骨钙素基因在mRNA水平和蛋白水平的表达也明显上调。结论bFGF能刺激骨膜细胞的成骨性生长。     

人子宫平滑肌细胞体外培养

目的 分离培养人子宫平滑肌细胞，为研究人子宫平滑肌细胞生理和病理等方面提供了一个十分有用的实验模型。方法 采用胶原酶消化法培养人子宫平滑肌细胞，可获得95％以上具有正常代谢活性的平滑肌细胞，对存活的子宫平滑肌细胞经倒置显微镜观察和免疫组化染色对其进行鉴别。结果 平滑肌细胞接种4h后开始贴壁，6～7d汇合成片，所培养的细胞在倒置显微镜下呈梭形和典型“峰-谷”样生长，α-Actin免疫组化染色强阳性。结论 采用本法体外培养的人子宫平滑肌细胞生长良好，纯度高，可用于人子宫平滑肌细胞生理和病理等方面的研究。     

胎盘Hofbauer细胞的体外培养和鉴定

目的 通过对早孕胎盘绒毛膜Hofbauer细胞的分离,纯化和培养,寻找一种稳定、简便的,可获得较高纯度Hofbauer细胞的培养方法,以满足后续实验要求.方法 通过胰酶/胶原酶联合消化法对妊娠6～10周绒毛组织进行消化,获得单细胞悬液,根据不同细胞贴壁时间的差异,对Hofbauer细胞进行纯化,并通过免疫组织化学法对Hofbauer细胞进行鉴定.结果 获得了较高纯度的胎盘Hofbauer细胞,免疫组化法鉴定CD68阳性,细胞生长状态良好.结论 利用胰酶/胶原酶联合消化法及差异贴壁法可以获得满意的人胎盘Hofbauer细胞.     

人蜕膜细胞体外培养体系的建立

目的改良人蜕膜细胞(decidual cell)的培养方法,并对其进行特征鉴定,探讨蜕膜细胞的部分生物学特性。方法取人工流产6～8周妊娠蜕膜组织,机械法分离,复合酶消化,传代自然增殖法纯化细胞。倒置显微镜观察其大体形态及体外转化,组织学鉴定、HE染色观察其胞核情况,人催乳素(HPL)免疫组化法鉴定。流式细胞仪测定其细胞周期。结果分离培养的蜕膜细胞呈长梭形和不规则星形,95%细胞胞浆阳性表达。细胞周期显示约有59.8%的细胞处于G0/G1期。结论成功分离培养了人蜕膜细胞,方法经济、简单、获得细胞形态一致、成活率高、生长稳定,为进一步研究蜕膜细胞妊娠病理、生理改变提供了可靠的实验对象。     

滋养层细胞原代体外培养体系的建立

目的改善体外分离、培养人早孕绒毛细胞滋养层细胞(cytotrophoblastCTB)的方法,并对其进行鉴定,探讨CTB的一些生物学特性。方法取人工流产6~8周妊娠绒毛,机械法分离,复合酶消化,差速贴壁法纯化细胞后继续培养。倒置显微镜观察其大体形态及体外转化,HE染色观察其胞核情况,免疫细胞化学观察细胞的细胞角蛋白18(cy-tokeratinCK18)、波形蛋白(vimentinVim)和人胎盘催乳素(humanplacentallactogenhPL)的表达。流式细胞仪测定其细胞周期。结果分离培养的CTB呈不规则多角形片状,单层铺展生长。所有的细胞都表达CK18,Vim只在部分细胞表达,hPL免疫反应阳性物质在胞浆表达。细胞周期显示约有58%的细胞处于G0/G1期。结论成功分离培养了人早孕绒毛CTB,方法简便易行,获得的细胞形态单一、生长稳定,为进一步研究CTB在妊娠生理和妊娠免疫耐受中的作用提供了实验基础。     

早孕绒毛外细胞滋养细胞的体外培养方法

目的:探讨改良人早孕绒毛外细胞滋养细胞原代分离培养方法。方法:建立改良的复合酶消化梯度离心法,分离培养绒毛外细胞滋养细胞,通过免疫细胞化学、Giemsa染色和细胞侵袭实验检测细胞纯度、数量及生物学活性(侵袭性),并与低浓度胰蛋白酶消化方法进行比较。结果:低浓度胰蛋白酶消化方法和改良的复合酶消化梯度离心法所得贴壁细胞量分别为(11.69±1.26)×104和(17.21±0.51)×104,两者比较有统计学差异(P<0.05);绒毛外细胞滋养细胞纯度分别为(63.20±7.12)%和(92.10±5.11)%,两者比较有统计学差异(P<0.05),穿膜细胞数分别为(36.10±3.28)和(66.20±5.17),两者比较有统计学差异(P<0.05),提示该实验室改良的复合酶消化梯度离心法所得细胞总量、绒毛外细胞滋养细胞纯度及数量均显著高于低浓度胰蛋白酶消化方法。结论:该实验室改良的复合酶消化梯度离心法获得绒毛外细胞滋养细胞纯度和数量显著提高。     

皮脂腺细胞体外培养及生长调节的研究进展

皮脂腺是皮肤重要的附属器。皮脂腺体外培养模型的建立为研究相关因子如细胞因子、生长激素及药物等对皮脂腺形态功能、生长发育及病理改变的作用提供了良好的平台。本文对皮脂腺细胞体外培养的实验方法、体外生长特性及影响皮脂腺细胞增殖分化的相关因素作简要综述。     

20例人早孕绒毛滋养细胞的体外培养

目的建立快速、有效的绒毛滋养细胞体外培养的方法。方法采用0．25％胰酶和Ⅱ型胶原酶混合消化法消化绒毛组织,用胰蛋白酶消化传代体外培养,通过光镜对培养出的细胞进行形态评价;用细胞角蛋白和波形蛋白单克隆抗体检测细胞纯度。结果联合消化法的细胞生长迅速,接种6～8d可以传代,原代细胞生长时间明显缩短,所得细胞纯度达95％。结论联合消化法是一种较有效的人早孕绒毛滋养细胞培养方法。     

人牙髓细胞体外培养及向成牙本质细胞诱导分化

目的利用组织块酶解法体外培养人牙髓细胞并进行鉴定。方法通过组织块酶解法行人牙髓细胞体外培养,免疫细胞化学法鉴定细胞组织来源,测定体外复层生长的人牙髓细胞碱性磷酸酶活性,并检测其诱导矿化能力。结果牙髓细胞在连续培养后具有复层生长特性,并具有显著的碱性磷酸酶活性,连续培养的牙髓细胞可形成矿化结节。结论建立了成牙本质细胞样细胞体外培养体系,所获得的成牙本质细胞样细胞具有成牙本质细胞的部分形态和生物学功能。     

生物钙在人体内的吸收和利用实验研究

作者对大连大洋离子钙厂以沿海盛产的牡蛎副产物—牡蛎壳为原料加工生产的生物钙进行了人体内吸收利用实验研究,并以牛乳粉和磷酸氢钙作为对照。结果表明生物钙、牛乳粉和磷酸氢钙的吸收率(%)分别为77.27、76.71和75.23:存留率(%)分别为75.81、74.05和72.86,二者之间差异均不显著(P>0.05), 说明生物钙在儿童体内吸收利用是比较好的,是可以广为利用并可代替磷酸氢钙的一种较为理想的食品钙强化剂。     

细胞内快速连续传代培养甲肝病毒的研究

目的:研究甲肝病毒在细胞内快速连续传代培养病毒增殖情况,探索疫苗生产工艺改进的可能性。方法:将甲肝病毒吕8株感染KMB17细胞后形成带毒细胞,每7 d传代1次,检测每次收获物的甲肝病毒抗原(HAAg)滴度及感染性滴度,比较滴度的变化,同时检测一步生长曲线,分析病毒增殖特性有无变化。结果:甲肝病毒吕8株感染KMB17细胞后每7 d传代1次,其第1~8代抗原滴度为1 024~2 048 Eu/0.1 ml,感染性滴度为7.33~7.67 lg CCID50/ml,第9代开始下降,抗原滴度仅为256 Eu/0.1 ml,感染性滴度为6.83~7.00 lg CCID50/ml;在连续传10代内,细胞均未出现CPE现象;第10代与第1代相比,其一步生长曲线病毒增殖高峰均为20~25 d,没有明显变化。结论:甲肝病毒吕8株在KMB17细胞上每7 d传代1次,在第8代以内,其抗原滴度及感染性滴度均能达到较高的程度。经细胞内连续快速传代后,HAV吕8株生长的增殖高峰约为第20~25 d,与传代前样品没有明显差别。     

镉致人肾近曲小管上皮细胞氧化损伤及凋亡的实验研究

[目的]探讨氯化镉对人肾近曲小管上皮细胞脂质氧化损伤和凋亡的影响.[方法]将细胞分成对照组和实验组,采用MTS法测定细胞死亡率;采用分光光度计检测乳酸脱氢酶(LDH)活力和丙二醛(MDA)含量;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率.[结果]随着氯化镉浓度的增高,细胞死亡率、LDH活力、MDA含量均升高,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05),LDH活性和MDA含量与染毒剂量作相关分析,相关系数为分别为0.878、0.931,有明显的相关性(P＜0.01).流式细胞仪检测结果显示,40 μmol/L氯化镉对细胞凋亡的影响最大,细胞凋亡率为39.41%.[结论]氯化镉可引起人肾近曲小管上皮细胞氧化损伤、细胞凋亡和坏死.     

香加皮水提取物诱导人食管癌细胞TE-13凋亡的实验研究

[目的]运用多种技术手段研究香加皮水提取物诱导人食管癌细胞TE-13凋亡.[方法]利用MTT染色在普通光镜下观察细胞凋亡形态学变化并观测药物对肿瘤细胞的抑制率;通过流式细胞仪分析人食管癌TE-13细胞凋亡率、细胞周期变化;DNA琼脂糖凝胶电泳方法检测肿瘤细胞凋亡的DNA水平变化;激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测细胞内钙离子浓度变化.[结果]经香加皮水提取物处理的人食管癌细胞TE-13出现核固缩、凋亡小体、新月状浓染区等细胞凋亡形态学改变,各剂量药物处理组的肿瘤细胞均表现生长抑制,且具有剂量依赖性,250μg/ml香加皮水提取物处理组的抑制率达91.02%.DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型的梯形电泳条带.药物处理组的肿瘤细胞更多地被阻止于G2/M期,各剂量组均出现明显的凋亡变化,最大凋亡率可达20.3%.各剂量药物处理组的肿瘤细胞内的Ca2 浓度明显高于对照组(P<0.01).[结论]香加皮水提取物可明显抑制人食管癌细胞TE-13的生长增殖,诱导细胞凋亡,并能改变该肿瘤细胞周期分布,阻止细胞周期于G2/M期.     

重离子束与X射线辐照对人舌鳞癌细胞周期影响的比较

[目的]研究重离子和X射线辐照对人舌鳞癌Tb细胞周期影响的规律。[方法]采用X射线和离子束分别辐照人舌鳞癌Tb细胞,X射线照射剂量为0、2、4、6、8Gy;重离子照射剂量为0、0.5、1、2.0、4.0Gy。PI荧光探针标记,流式细胞仪检测不同剂量组受照后在6h、12h、24h的细胞周期变化。[结果]人舌鳞癌Tb细胞在X射线照射后,2.0Gy组激活G1期检测点,而4.0、6.0、8.0Gy组激活G2期检测点。重离子照射后,Tb细胞G2/M期阻滞明显增加,阻滞程度具有剂量和时间依赖性,并且0.5、1Gy组细胞在12～24h时间点出现"崩溃"现象,细胞阻滞解除;2Gy和4Gy组细胞表现为明显的G2/M阻滞,未出现"崩溃"现象。在2Gy辐照时对细胞G2期阻滞率达到70%,相当于6GyX射线辐照。[结论]重离子和X射线对人舌鳞癌细胞周期影响不同,小剂量重离子束具有较高的生物学效应。     

SD大鼠骨髓基质细胞的分离培养和鉴定

目的观察SD大鼠骨髓基质细胞的体外分离培养情况并加以鉴定。方法采用密度梯度离心(Percoll法)和贴壁培养结合的方法分离培养SD大鼠BMSCs;采用倒置相差显微镜观察BMSCs形态学特征;流式细胞仪检测细胞表面标志抗原CD45和CD90表达阳性率。结果第3代以后的细胞形态较一致,呈大而扁的梭形为主,第3～5代细胞增殖力保持旺盛;第3代细胞表面标志抗原CD45和CD90表达阳性率分别为:0.2%和94.7%。结论密度梯度离心结合贴壁培养的方法可获得较高纯度的BMSCs,对其进行研究和应用应选用第3～5代的BMSCs。     

三氧化二砷诱导人横纹肌肉瘤RD细胞株凋亡的实验研究

[目的]研究三氧化二砷(As2O3)体外抑制人胚胎型横纹肌肉瘤细胞株RD(RD细胞株)增殖及诱导凋亡的作用. [方法]以不同浓度的As2O3处理RD细胞株,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞的DNA含量及凋亡率. [结果]4～8 μmol/L hs2O3能以时间剂量依赖的方式抑制RD细胞株的增殖,并诱导其凋亡,在流式细胞仪DNA线条图上出现典型的亚二倍体“凋亡峰”,细胞周期阻滞于G0/G1期,S期和G2/M期细胞减少;低浓度As2O3(＜2μmol/L)则有轻微促增殖作用,细胞周期向S期和G2/M期集中,G0/G1期细胞减少. [结论]As2O3浓度≥4μmol/L时,可明显抑制RD细胞株的生长并促进细胞凋亡,其临床应用还需进一步研究.     

黄芪多糖对鼻咽癌CNE-2细胞增殖抑制作用的研究

[目的]研究黄芪多糖(APS)对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖的影响。[方法]设不同浓度APS(12.5,25.0,50.0,100.0μg/ml)、二甲基亚砜2‰为空白对照组,顺铂2μg/ml为顺铂组。应用MTT法检测APS对鼻咽癌CNE-2细胞的增殖抑制作用。[结果]与空白对照组比较,不同浓度的APS组在12、24、48、72h作用时吸光度均表现为上升的趋势,在48h时达到最大值,随后下降。不同浓度的APS组经不同的作用时间后,其吸光度与空白对照组比较差异均有统计学意义(P﹤0.05)。与顺铂组比较,12.5、25.0μg/mlAPS作用鼻咽癌CNE-2细胞12h时细胞的增殖没有明显的抑制作用(P﹥0.05),但作用24、48、72h时对鼻咽癌CNE-2细胞的增殖有明显的抑制作用(P﹤0.05);50.0、100.0μg/mlAPS在不同的作用时间对鼻咽癌CNE-2细胞的增殖均有明显的抑制作用(P﹤0.05)。[结论]APS可以明显地抑制鼻咽癌CEN-2细胞的生长,且存在剂量-时间的关系。     

硫酸镍,亚砷酸钠所致转化细胞的凝集试验

为了从细胞表面的变化来观察转化细胞的特性，对于经硫酸镍，亚砷酸钠染毒的ＳＨＥ细胞，用ＣｏｎＡ进行了凝集试验。结果表明，两染毒组的凝集试验的均呈阳性，且与ＣｏｎＡ浓度呈依赖关系。