大鼠肺移植排斥反应中细胞胀亡的发生及其意义

目的探讨移植肺中是否有细胞胀亡发生及其可能的临床意义。方法将26对SD 大鼠进行左侧单肺移植。利用透射电镜及病理学等技术,检测移植肺及对照肺组织中胀亡细胞数、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量,分析细胞胀亡在肺移植中的生物学作用。结果移植肺组织中主要是Ⅱ型肺泡上皮细胞发生胀亡,细胞胀亡指数与MDA含量呈正相关性,与SOD含量呈负相关性;受鼠移植肺较健侧肺、空白对照肺及阴性对照肺组织中存在更多的胀亡细胞。结论细胞胀亡在肺移植排斥反应的发生发展过程中可能起重要作用。     

转化生长因子β1质粒联合反复冻融移植物减轻大鼠神经移植后的排斥反应

目的 探讨局部注射含转化生长因子β1(TGF-β1)基因的质粒联合预先反复冻融处理移植神经对大鼠异体神经移植后排斥反应的影响.方法 SD大鼠分为4组进行实验,每组20只.TGF-β1组大鼠移植Wistar大鼠的冷冻坐骨神经,局部注射含TGF-β1基因的质粒;空质粒组大鼠移植Wistar大鼠的冷冻坐骨神经,注射空质粒;新鲜异体神经移植组大鼠接受Wistar大鼠的新鲜坐骨神经移植,不注射质粒;自体移植组SD大鼠移植自体的冷冻坐骨神经,不注射质粒.移植后用Western印迹法检查移植神经中TGF-β1的表达,并进行混合淋巴细胞反应(MLC),测量运动神经的传导速度.各组移植神经样本分别在光镜和投射电镜下进行观察.结果 TGF-β1组中TGF-β1的表达明显较高.移植后12周时,自体移植组、TGF-β1组、空质粒组和新鲜异体神经移植组的MLC结果(吸光度值)分别为0.312±0.009、0.213±0.006、0.521±0.018和0.928±0.032.TGF-β1组各个时间点的运动神经传导速度均高于空质粒组和新鲜异体神经移植组,TGF-β1组与自体神经移植组相比较,差异无统计学意义(P＞0.05).光镜下可见,TGF-β1组的神经纤维结构破坏不明显.结论 局部注射含TGF-β1基因的质粒联合反复冻融处理异体移植神经可以减轻神经移植后的排斥反应.     

转化生长因子β1与大鼠小肠同种异体移植急性排斥反应的关系

目的　研究转化生长因子 β1(TGF -β1)与大鼠小肠同种异体移植急性排斥反应的关系。方法　试验分 3组。Ⅰ组 :Wistar→SD小肠移植 ;Ⅱ组 :Wistar→SD小肠移植 +环孢素A(CsA) ;Ⅲ组 :Wistar→SD小肠移植 +重组人转化生长因子 β1(rhTGF -β1)。术后 3、5、7d观察病理学改变并用半定量RT -PCR方法检测干扰素γ(IFN -γ)、白细胞介素 2 (IL -2 )、TGF -β1mRNA。结果　病理改变 :Ⅰ组术后 3d出现排斥反应 ,7d最重 ;Ⅱ组术后 7d部分出现轻度排斥反应 ;Ⅲ组术后 5d出现轻度排斥反应 ,术后 7d中度排斥反应。Ⅰ组IFN -γ、IL -2mRNA术后明显增高 ;Ⅱ组术后略升高 ,与Ⅰ组相比差异有统计学意义 ( P <0 .0 1) ;Ⅲ组IFN -γ、IL -2mRNA术后升高 ,较Ⅰ组升高程度低 ,二者比较差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。Ⅰ组TGF -β1mRNA术后增高 ,Ⅱ组术后增高大于Ⅰ组 ,两者差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。结论　TGF -β1可抑制大鼠小肠移植急性排斥反应     

大鼠移植小肠急性排斥反应期组织病理学研究

目的　探讨大鼠异位小肠移植急性排斥反应期移植小肠病理学特点及意义。方法　实验分 4组 ,每组 6只。A组为非手术对照组 ;B组为异系移植组 ;C组为同系移植组 ;D组为异系移植加环孢霉素A治疗组。术后 3 ,5 ,7,10d取移植小肠进行病理学检查 ,测量黏膜厚度 ,绒毛高度和隐窝深度 ;并检测 3 ,5 ,7d移植小肠黏膜细胞凋亡。结果　A组小肠黏膜正常 ;B组移植小肠炎性细胞浸润、黏膜结构破坏程度和黏膜细胞凋亡数目明显高于C ,D组 ,随移植时间的延长黏膜细胞凋亡数目增加 ,黏膜结构破坏程度加重 ;C组移植小肠黏膜结构损伤程度较B组轻 ;D组仅有少量炎性细胞浸润 ,间质轻度水肿 ,未见黏膜结构破坏。结论　炎性细胞浸润、黏膜细胞凋亡和黏膜结构破坏是移植小肠急性排斥反应损伤病理学变化的主要特点。动态观察移植小肠病理学变化和细胞凋亡 ,对诊断小肠移植急性排斥反应和估计损伤程度有一定的价值。     

骨髓输注减轻大鼠肺移植急性排斥反应的研究

目的 研究供体骨髓细胞输注减轻大鼠肺移植急性排斥反应。方法 应用Cuff技术改进大鼠原位单肺移植模型，同时输注供体骨髓细胞，采集受体鼠外周血动态监测嵌合；存活4周大鼠杀死后切取移植肺进行排斥反应分级，切取脾应用免疫组织化学方法检测组织嵌合。结果 流式细胞术在骨髓输注组外周血中检测到明显的嵌合，在脾脏中得到组织嵌合。骨髓输注组移植肺急性排斥反应明显减轻。结论 肺移植同时输注供体骨髓细胞，可以产生显著的供体细胞与受体细胞嵌合，有效地抑制大鼠肺移植急性排斥反应。     

TGF-β1mRNA与大鼠小肠同种异体移植急性排斥反应的关系

目的:研究TGF-β1mRNA与大鼠小肠同种异体移植急性排斥反应的关系.方法:试验分2组,Ⅰ组:Wistar→SD小肠移植;Ⅱ组Wistar→SD小肠移植 CsA.术后3,5,7d观察病理学改变并用半定量RT-PCR方法检测IFN-γ、IL-2、TGF-β1mRNA.结果:病理改变:Ⅰ组术后3d出现排斥反应,7d最重,Ⅱ组术后7d部分出现轻度排斥反应.Ⅰ组IFN-γ、IL-I mRNA术后明显增高,Ⅱ组术后略升高,两者相比差异有统计学意义(P＜0.01).Ⅰ组TGF-β1mRNA术后增高,Ⅱ组TGF-β1mRNA术后增高大于Ⅰ组,两者差异有统计学意义(P＜0.01).结论:TGF-β1mRNA转录水平增高可抑制大鼠小肠移植急性排斥反应.     

转染转化生长因子β1基因减轻非协调性异种心脏移植急性血管性排斥反应

目的探讨移植物局部转染转化生长因子β1(TGF-β1)基因对非协调性异种心脏移植急性血管性排斥反应(AVR)的影响。方法建立豚鼠到SD大鼠的颈部心脏移植模型,移植前受鼠接受中华眼镜蛇毒因子和环孢素A预处理,供心切取后,经冠状动脉按每克心肌组织灌注5×1010PFU携带TGF-β1基因的重组腺病毒载体进行基因转染,再移植到经过预处理的SD大鼠颈部(基因转染组),另设灌注5×1010PFU腺病毒空白载体的空白载体组和对照组。术后观察各组移植物的存活情况、移植物组织学变化情况以及移植物中CD68和CD57的表达、细胞凋亡指数、TGF-β1的表达。结果基因转染组移植物的存活时间为(95±3)h,明显长于空白载体对照组的(57±2)h和对照组的(60±2)h(P<0.01);各组移植物均呈急性血管性排斥反应的病理改变,但基因转染组较轻;基因转染组移植物组织中炎症细胞浸润数、CD68和CD57的表达量及细胞凋亡指数明显低于空白载体对照组和对照组,并能检测到外源性TGF-β1的表达。结论经冠状动脉灌注重组腺病毒载体介导的TGF-β1基因转移可减轻非协调性异种心脏移植AVR,明显延长移植物的存活时间。     

异基因大鼠全胰十二指肠移植急性排斥反应的病理变化

目的 观察异基因大鼠间行全胰十二指肠移植后急性排斥反应的病理变化特点。方法 实验分两组，Ⅰ组为同基因移植组，Ⅱ组为异基因移植组，术后第3，5，7，10d取移植胰腺及十二指肠行病理检查。结果 Ⅰ组移植胰腺及十二指肠后未见明显病理学改变，Ⅱ组移植胰腺术后第3d出现轻度排斥反应，第5d出现中度排斥反应，第7d发生重度排斥反应，第10d胰腺几乎完全被纤维结缔组织取代，胰腺急排斥反应首先损伤腺泡，以后累及胰腺导管，最后累及胰岛和血管，胰腺和十二指肠急性排斥反应大多同时存在，间质性排斥反应评分相同者占45%，评分不同者均以胰腺评分较高。结论 胰腺急性排斥反应首先累及外分泌组织，最后累及内分泌组织，十二指肠黏膜活检有助于确定有无胰腺急性排斥反应发生。     

腺泡细胞凋亡在大鼠胰腺移植急性排斥反应中的意义

目的：观察移植胰腺的腺泡细胞凋亡及其与急性排斥反应的关系。方法：选用SD和Wistar大鼠进行全胰十二指移植。实验分为同基因移植组（Wistar→Wistar）和异基因移植组（SD→Wistar）两组。于术后第3d、5d和7d分批处死受体，取移植胰腺标本用HE染色和原位末端标记（TUNEL）技术检测移植胰腺切片，进行排斥反应的病理学评分和计数凋亡指数（AI）。结果：发生凋亡的细胞主要是腺泡细胞，同基因移植组胰腺有散在的腺泡细胞凋亡，AI在术后无明显变化。异基因移植组胰腺腺泡细胞凋亡在术后第3d、5d和7d逐渐升高，AI与急性排斥反应的病理学评分成正相关。结论：细胞凋亡与移植胰腺急性排斥反应的严重程度显著相关，凋亡指数可作为判断移植物损伤程度的指标，对急性排斥反应的诊断有一定的参考价值。     

冠状动脉灌注TGF-β1基因对异基因大鼠心脏移植物急性排斥反应的影响

目的 探讨经冠状动脉灌注重组腺病毒载体介导转化生长因子-β1(TGF-β1)基因转染对异基因大鼠心脏移植物急性排斥反应的影响.方法 建立大鼠颈部心脏移植模型,转基因组供心切取后经冠状动脉缓慢灌注含携带TGF-β1基因腺病毒载体(每克心肌组织5×1010PFU)的Stanford大学液,再植入受体颈部.空载体组灌注腺病毒空载体(每克心肌组织5 × 1010PFU)的Stanford大学液,对照组灌注无病毒的Stanford大学液.结果 转基因组的移植物内外源性TGF-β1基因和蛋白表达,移植物内CD68表达减少,心肌细胞凋亡减少,移植物急性排斥反应的始发时间明显推迟,程度较轻.结论 经冠状动脉灌注重组腺病毒载体介导TGF-β1基因转移可明显减轻异基因大鼠心脏移植物急性排斥反应.     

己酮可可碱对高糖诱导肾小球系膜细胞结缔组织生长因子表达信号通路的影响

目的 探讨高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞结缔组织生长因子（CTGF）表达的变化及其作用通路,并且研究己酮可可碱（PTX）对CTGF表达的影响。 方法 体外培养大鼠系膜细胞,观察不同浓度的高糖在不同时间对系膜细胞转化生长因子β（TGF-β）、CTGF、 p-Smad2/3、Smad7及纤连蛋白（FN）表达的影响;并在高糖培养液中加入TGF-β中和抗体及不同浓度的PTX观察其对上述各指标表达的影响。 结果 高糖可以诱导系膜细胞TGF-β、CTGF mRNA及蛋白表达增加（均P < 0.05）,且呈时间、剂量依赖性,同时伴有p-Smad2/3蛋白表达的增加及Smad7蛋白表达的减少。阻断TGF-β可使高糖诱导的CTGF mRNA及蛋白表达分别下降86.4%及91.8%（均P < 0.05）。PTX可以抑制高糖诱导的系膜细胞CTGF mRNA及蛋白表达,随着PTX浓度的增加其抑制作用更为显著（P < 0.05）,但对于TGF-β的表达没有影响。结论 高糖可通过TGF-β-Smads通路使CTGF mRNA表达增加进而影响其蛋白表达。PTX可以有效的抑制CTGF的表达而对于TGF-β的表达没有直接的抑制作用。     

肺移植急性排斥反应的诊治(附三例报告)

目的观察和探讨肺移植急性排斥反应的临床表现、诊断方法、经支气管活检排斥反应的病理分类和治疗。方法2002年9月至2003年6月，分别为3例肺气肿、肺功能重度减损的患者进行了单肺移植。其中后2例为同一供者的左、右肺，第2例受者HLA无1个位点匹配。结果第1例左肺移植术后第9d发生1次急性排斥(A2b级)，经大剂量甲泼尼龙冲击治疗后症状消退；第2例右肺移植第7d持续发生急性排斥(A4c级)，经甲泼尼龙冲击并用OKT3治疗无效，术后第15d死亡；第3例左肺移植第9d、第15d发生2次急性排斥(A3a级)，经甲泼尼龙冲击并用OKT3治疗8d后缓解。结论选择组织相容性好的供、受者进行肺移植，是成功的保证。肺组织活检成为诊断急性排斥的金标准，对肺移植急性排斥反应的及时诊治是减少术后死亡率的关键。     

丝裂原活化蛋白激酶类和蛋白激酶C在转化生长因子β1诱导肾小管细胞结缔组织生长因子表达中的作用

目的了解转化生长因子β1（TGF-β1）诱导肾小管细胞结缔组织生长因子（CTGF）表达的机制，特别是蛋白激酶C（PKC）和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）在CTGF基因表达中的作用及其对Smad磷酸化的影响。方法分别应用PKC抑制剂G06850以及MAPK的3个组成成分ERK、JNK和p38MAPK的抑制剂PD98059、U0126、SP600125和SB203580阻断相应通路，观察其对TGF．131诱导的CTGF表达以及Smad2／Smad3磷酸化的影响。结果TGF-β1（5μg／L）以时间依赖方式诱导HK-2细胞中Smad2／Smad3的磷酸化，从基础值0．87±0．09上升至2h时高峰2．350±0.11。PKC抑制剂G06850（5μmol／L）和ERK抑制剂PD98059（10μmol／L）、U0126（10μmol／L）可部分抑制TGF-β1诱导的CTGF表达，而p38MAPK抑制剂SB203580（20μmol／L）和JNK抑制剂SP600125（10μmol／L）对TGF-β1诱导的CTGF的表达无影响。PKC抑制剂G06850（5μmol／L）可减少TGF-β1诱导的Smad2／Smad3磷酸化，而ERK抑制剂PD98059（10μmol／L）和U0126（10μmol／L）对Smad2／Smad3的磷酸化没有影响。结论在肾小管上皮细胞中，TGF-β1诱导CTGF的表达需要PKC和Ras／MEK／ERK的参与。PKC以Smad依赖的方式参与肾小管上皮细胞中TGF-β1诱导的CTGF的表达，而Ras／MEK／ERK对CTGF表达的调节不依赖于Smads。     

纤维支气管镜肺活检在准确诊断肺移植术后急性排斥反应中的作用

目的 探讨肺移植术后纤维支气管镜肺活检(TBLB)对准确诊断急性排斥反应(AR)的作用.方法 分析肺移植术后有完整TBLB随访资料的50例受者AR的诊断情况.肺移植术后50例受者常规进行TBLB共145例次.根据术后早期TBLB的病理学诊断结果,将受者分为早期AR组和早期无AR组.分析术后早期TBLB诊断AR的阳性率,术后远期两组受者AR发生率和TBLB对诊断AR的准确率.结果 术后早期受者AR发生率为44%(22/50).早期AR组22例受者中,经TBLB诊断为AR的共有25例次;TBLB对肺移植术后早期AR的诊断准确率为100%.受者术后远期AR发生率为22%(11/50),其中早期AR组和早期无AR组分别有5例和6例受者发生AR.TBLB对术后远期AR的诊断准确率为100%.所有发生AR的受者中,有61.1%的受者无典型的AR临床表现.结论 肺移植术后急性排斥反应无典型的临床表现,容易误诊,TBLB对诊断肺移植术后急性排斥反应具有较高的准确率.     

结缔组织生长因子在血吸虫病肝纤维化肝窦毛细血管化形成中的作用

目的通过动态观察结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在血吸虫病性肝纤维化鼠肝窦内皮细胞表达水平的时相变化,探讨CTGF、肝窦内皮细胞与肝窦内皮下基底膜形成的关系。方法采用腹部敷贴法感染血吸虫尾蚴建立血吸虫病性肝纤维化模型,模型组和正常对照组均为40只。于45、60、90、120 d取肝组织标本,苏木素-伊红(HE)、Masson染色和透射电镜观察模型病理变化;免疫组织化学技术检测CTGF、ColⅣ和LN在小鼠肝脏组织中的定位、发布,并应用彩色图像分析仪进行半定量分析;Western blot检测CTGF蛋白;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CTGF mRNA的表达。结果血吸虫病肝纤维化鼠肝窦内皮细胞表达CTGF蛋白阳性或强阳性,肝窦壁LN、ColⅣ表达水平增高,且随着肝纤维化的发展,CTGF和LN、ColⅣ表达逐渐增强,同步可见肝窦内皮下基底膜逐渐增厚;正常对照组呈阴性或低水平表达。图像定量分析两组平均吸光度值、平均灰度值和阳性面积比具有统计学意义(P<0.05)。相关分析CTGF蛋白与LN、ColⅣ水平呈正相关(r=0.7512、0.6417,P<0.01)。结论血吸虫病肝纤维化时小鼠肝窦内皮细胞调控细胞外基质产生,通过CTGF蛋白表达上调,导致ColⅣ、LN分泌增加,参与肝窦内皮下基底膜形成,从而引起肝内微循环障碍。     

结缔组织生长因子在结直肠癌组织中的表达及其与患者预后的关系

目的探讨结直肠癌组织中结缔组织生长因子（CTGF）mRNA和蛋白的表达及其与患者临床病理因素及5年生存率的关系。方法采用实时定量PCR技术检测92例结直肠癌及其相应远端正常结肠组织中CTGFmRNA的表达情况,再从中随机选取30对组织进行免疫组织化学检测CTGF蛋白表达．并对该组患者进行生存分析。结果CTGFmRNA在结直肠癌组织中高表达,其CTGF蛋白阳性率73．3％（22／30）高于正常结肠组织的23．3％（7／30）（P〈0．01）。合并淋巴结转移和肿瘤分期为Ⅲ、Ⅳ期者。CTGFmRNA表达水平和蛋白阳性率降低（均P〈0．05）;CTGF蛋白阳性表达率低者浸润深度越深（P〈0．05）。癌组织CTGFmRNA高表达组患者的5年生存率高于低表达组（68.3％比29．3％．P〈0．01）。癌组织CTGFmRNA相对表达水平是患者生存期的独立影响因素（RR=2．960,95％CI：1．49-5．877,P〈0．01）,其预测患者预后的敏感性为64．9％,特异性为74．5％。结论CTGF的异常表达与结直肠癌恶性生物学行为有关,CTGF低表达的结直肠癌患者预后不良。     

Treatment with keratinocyte growth factor does not improve lung allograft survival in the rat

Purpose  Lung allografts are threatened by primary graft dysfunction, infections, and rejection. Novel therapies protecting pulmonary allografts are badly needed. Keratinocyte growth factor (KGF) protects the lung against a variety of injurious stimuli and exerts anti-inflammatory effects. The aim of the study was to test the potential of recombinant truncated KGF (ΔN23-KGF, palifermin) to attenuate pulmonary allograft rejection. Materials and methods  Intratracheal instillation of 5 mg/kg ΔN23-KGF was performed twice in donor rats on days 3 and 2 before explantation of the lung. In control animals, an equivalent volume of vehicle was instilled. Left lungs were transplanted in the fully allogeneic Dark Agouti to Lewis rat strain combination and in the less stringent Fischer 344 to Wistar Kyoto combination. Allograft recipients were additionally treated with ΔN23-KGF post-transplantation. Graft outcome, leukocytic infiltration, and major histocompatibility complex (MHC) class II antigen expression was analyzed. Results  In both rat strain combinations, ΔN23-KGF treatment did not improve pulmonary allograft outcome. Graft infiltration by macrophages and T lymphocytes remained unchanged. In addition, we demonstrated that MHC class II antigens were more abundant in KGF-treated allografts compared to control-treated grafts, which probably results in an increased alloreactivity. Conclusion  In conclusion, intratracheal ΔN23-KGF treatment is not effective to prevent acute pulmonary allograft rejection.