良恶性子宫内膜病变组织中p-mTOR及p-P70S6K的表达及意义

目的 探讨磷酸化雷帕霉素靶蛋白（p-roTOR）及磷酸化40S核糖体蛋白6s激酶（P-P70S6K）在良恶性子宫内膜病变组织中的表达情况。方法选取49例子宫内膜腺癌组织（A组）、11例子宫内膜不典型增生组织（B组）、11例子宫内膜单纯性增生组织（C组）、10例子宫内膜增生期组织（D组）。用免疫组化sP法染色及显微图像分析系统检测四组中的P．mTOR、P—P70S6K。结果A组P．mTOR、P．P70S6K的表达强度均明显高于B、C、D组（P均〈0．05）。子宫内膜腺癌病理分期不同,其p-mTOR、P-P70S6K表达亦不同（P〈0．05）。结论p-mTOR、P—P70s6K可能参与了子宫内膜腺癌发生发展过程。     

mTOR/P70S6K信号通路在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的:研究mTOR/P70S6K信号通路在肝细胞肝癌(HCC)中的表达,探讨其在HCC发生发展中的作用及意义.方法:用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测120例HCC患者癌组织、癌旁肝组织以及10例正常肝组织中mTOR及P70S6K mRNA表达情况;并分析mTOR及P70S6K mRNA的表达与相关临床参数的关系.结果:mTOR及P70S6K mRNA在HCC组织中的表达水平显著高于在癌旁肝组织和正常肝组织中的表达水平(mTOR mRNA:0.594±0.218 vs 0.437±0.156.0.594±0.218 vs 0.383±0.081,均P＜0.05;P70S6K mRNA:0.610±0.147 vs 0.486±0.162.0.610±0.147 vs 0.440±0.141,均P＜0.05).mTOR mRNA和P70S6KmRNA在HCC组织中的表达呈正相关(r=0.548,P=0.012),且两者在癌旁肝组织及正常肝组织中的表达亦正相关性(r=0.607,0.737,P=0.005,0.015).mTOR及P70S6K mRNA在HCC组织中的表达水平与病理分期、门静脉癌栓等明显相关,而与肿瘤直径、血清AFP水平、性别等无明显关系.结论:mTOR/P70S6K信号通路在HCC中特异性激活.mTOR/P70S6K信号通路可能在肝细胞肝癌的发生、发展中起重要作用.     

mTOR／S6K1信号通路在高脂饮食诱导小鼠胰岛素抵抗发生中的作用

目的探讨mTOR及其下游效应因子S6K1在胰岛素抵抗（IR）发生中的作用。方法C57BL／6雄性小鼠20只随机平均分为正常饮食组（NC组）和高脂饮食组（HF组）。后者喂养14周后建立IR模型。检测两组血清胰岛素水平和葡萄糖耐量,显微镜下观察胰岛形态学变化;检测骨骼肌中mTOR和S6K1mRNA的表达,以及mTOR、S6K1和其磷酸化水平蛋白的表达。结果与NC组相比,HF组小鼠表现出明显的IR症状,其体重和空腹胰岛素分别升高了21．99％（P〈0．05）和181．82％（P〈0．01）;胰岛8细胞团面积也显著增加,糖耐量明显受损,骨骼肌细胞中mTOR mRNA和蛋白分别升高了25．61％（P〈0．05）和37．41％（P〈0．01）,S6K1 mRNA和蛋白分别升高了54．98％（P〈0．01）和37．36％（P〈0．01）,S6K1磷酸化水平蛋白表达在高脂饮食后升高了680．15％（P〈0．01）。结论mTOR／S6K1信号通路与高脂饮食诱导IR的发生密切相关。     

mTOR信号通路相关蛋白在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的 探讨mTOR信号通路相关蛋白在胰腺癌中的表达及其临床意义。方法 采用免疫组织化学技术测定并比较mTOR信号通路相关蛋白Akt、mTOR及P70S6K在胰腺癌和非胰腺癌组织中的磷酸化水平,应用Spearman相关分析探讨mTOR信号通路相关蛋白磷酸化水平与胰腺癌患者年龄、性别、肿瘤大小、组织学分级、淋巴结转移及肿瘤分期的相关性。结果 p-Akt和p-mTOR蛋白阳性着色定位于细胞质内,而p-P70S6K蛋白阳性着色定位于细胞核。p-mTOR、p-Akt和p-P70S6K蛋白在胰腺癌组织中表达水平显著高于非胰腺癌组织（P均< 0.01）。Spearman 相关分析显示,p-Akt、p-mTOR和p-P70S6K蛋白表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、组织学分级无关（P均>0.05）,与淋巴结转移和分期有关（P均<0.05）。结论 mTOR信号通路与胰腺癌的发生发展相关,但mTOR信号通路相关蛋白磷酸化水平在胰腺癌临床分型及转归中的意义不大。     

结肠癌组织中Ku70、转录因子Sp1的表达变化及意义

目的：观察Ku70和特异性蛋白1（Sp1）在结肠癌组织中的表达变化,并探讨其意义。方法分别采用免疫组化SP法、RT-PCR法对结肠癌及对应癌旁正常组织中的Ku70和Sp1蛋白及mRNA进行检测,并分析二者间的相关性及与结肠癌临床病理参数的关系。结果结肠癌癌组织与癌旁正常组织中Ku70阳性表达率分别为68．9％（42/61）、36．1％（22/61）,二者比较,P＜0．05;Sp1阳性表达率分别为78．7％（48/61）、26．2％（16/61）,二者比较,P＜0．05。结肠癌和癌旁正常组织中Ku70 mRNA相对表达量分别为1．184±0．410、0．845±0．424,二者比较,P＜0．05;Sp1 mRNA相对表达量分别为1．280±0．311、0．912±0．362,二者比较,P＜0．05。 Ku70 mRNA和Sp1 mRNA在结肠癌组织中表达呈正相关（r＝0．398,P＝0．029）。 Ku70和Sp1蛋白表达水平与结肠癌肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关（P均＜0．05）。结论 Ku70和Sp1在结肠癌中高表达,与结肠癌的侵袭、转移有关,二者可作为结肠癌发生、发展的预测指标。     

运动干预对大鼠骨骼肌mTOR与P70^S6K磷酸化的影响

运动干预增加大鼠骨骼肌核糖体蛋白S6激酶(P70S6K)及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的磷酸化水平,改善P70S6KmRNA表达,降低血液胰岛素浓度(P均<0.05).提示运动干预可能通过增加mTOR与P70S6K活性,提高骨骼肌对胰岛素的敏感性.     

肾透明细胞癌组织中AKT／mTOR的表达变化及意义

目的观察磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）因子在肾透明细胞癌组织中的表达变化,为mTOR及AKT抑制剂应用于肾透明细胞癌的治疗提供依据。方法用免疫组化染色测定肾透明细胞癌和正常肾组织中p-AKT和p-mTOR的表达情况。结果p-AKT在肾透明细胞癌和正常肾组织中的阳性表达率分别为61．3％、26．1％（P〈0．01）,p-mTOR的阳性表达率分别为56．0％、28．3％（P〈0．05）。P—AKT表达与肿瘤临床分期明显相关,临床分期越高,其阳性表达率越高（P〈0．05）。p-mTOR蛋白表达与肿瘤临床分期也具有相关性（P〈0．05）。肾透明细胞癌组织中p-AKT与p-mTOR的表达呈正相关（r=0．953,P=0．000）。结论AKT／mTOR信号通路在肾透明细胞癌组织中被过度激活。理论上,应用mTOR及AKT抑制剂可治疗肾透明细胞癌。     

大肠癌组织中P16蛋白和血管内皮生长因子的表达及其临床意义

目的：探讨大肠癌组织中P16蛋白和血管内皮生长因子（VEGF）表达及其临床意认。方法：用S－P免疫组织化学方法测定66例大肠癌组织和20例正常大肠组织中P16蛋白和VEGF的表达。结果：大肠癌中P16蛋白阳性率为48．5％（32／66）明显低于对照组的70．0％（14／20）（P＜0．01），VEGF阳性率为72．7％（48／66）则明显高于对照组的15．0％（3／20）（P＜0．01）：P16蛋白和VEGF在大肠癌中表达具有明显负相关性；P16蛋白和VEGF表达与大肠癌组织学类型、肿瘤直径、肿瘤部位无关（P＞0．05），而与淋巴结转移、Duke's分期五年生存率有明显的关系（P＜0．01）。结论：大肠癌中存在P16蛋白下调和VEGF上调，P16蛋白和VEGF表达可作为反映大肠癌生物学行为的指标之一。     

喉鳞状细胞癌组织中 Beclin1、COX-2、MVD 的表达变化及意义

目的：观察Beclin1、环氧化酶-2（COX-2）、微血管密度（MVD）在喉鳞状细胞癌组织中的表达变化,并探讨其意义。方法60例喉鳞状细胞癌患者,手术切除肿瘤组织,取其中30例患者癌旁正常喉黏膜组织作为对照,应用免疫组织化学二步法对喉鳞状细胞癌组织及正常喉黏膜组织中Beclin1、COX-2的表达进行检测,并检测CD105的表达评估微血管密度（ MVD ）。结果喉鳞状细胞癌组织中 Beclin1、COX-2的阳性表达率分别为56．7％、76．7％,癌旁正常喉黏膜组织分别为93．3％、20．0％,两者比较,P均＜0．05。喉鳞状细胞癌组织中MVD为（14．90±7．40）条,癌旁正常喉黏膜组织为（3．16±1．02）条,两者比较,P＜0．05。 Beclin1蛋白在喉鳞状细胞癌组织中的表达与肿瘤部位、组织分化程度有关（P均＜0．05）。 COX-2在喉癌组织中的表达与组织分化程度、临床分期和淋巴结转移有关（P均＜0．05）。 MVD在喉癌组织中的表达与淋巴结转移、浸润深度、临床分期有关（P均＜0．05）。Beclin1与MVD表达呈负相关（r＝0．825,P＜0．01）,COX-2与MVD表达呈正相关（r＝0．763,P＜0．01）,COX-2和Beclin1在喉癌组织中的表达呈负相关（r＝-0．621,P＜0．01）。结论 Beclin1在喉癌组织中表达下调及COX-2在喉癌组织中表达增强与喉癌的浸润性发展和MVD有密切关系,联合检测Beclin1、COX-2和CD105可作为判断喉癌转移潜能和预后的重要指标之一。     

单侧输尿管梗阻肾间质纤维化大鼠肾组织PHB1和 PHB2的表达及意义

目的：观察单侧输尿管梗阻（ UUO）肾间质纤维化（ RIF）大鼠肾组织PHB1和PHB2的表达,并探讨其意义。方法80只雄性6周龄Wistar大鼠随机分为模型组和假手术组各40只。模型组大鼠分离左侧输尿管后行双重结扎,假手术组只探查到肾包膜。于造模后第2周末和第4周末,每组各处死20只大鼠,取左侧肾组织进行肾脏病理学检查,并计算RIF指数;应用实时荧光定量PCR检测大鼠肾组织PHB1、PHB2、TGF-β1 mRNA;Western blot检测肾组织PHB1、PHB2、TGF-β1、Ⅳ型胶原（ Col-Ⅳ）和纤维连接蛋白（ FN）。结果与假手术组比较,模型组大鼠各时间点RIF指数增高,梗阻时间越长RIF指数越高,P均＜0．01;肾组织PHB1、PHB2 mRNA及蛋白表达均降低,梗阻时间越长表达水平越低,P均＜0．01;TGF-β1 mRNA及蛋白、Col-Ⅳ和FN蛋白表达均增高,P均＜0．01。肾组织PHB1蛋白表达与RIF指数、TGF-β1、Col-Ⅳ、FN呈负相关（ r分别为－0．86、－0．87、－0．70、－0．73,P均＜0．05）;PHB2蛋白表达与RIF指数、TGF-β1、Col-Ⅳ、FN呈负相关（r分别为－0．73、－0．81、－0．91、－0．84, P均＜0．05）;PHB1蛋白表达与PHB2蛋白表达呈正相关（ r＝0．78,P＜0．05）。结论在UUO所致RIF大鼠肾组织中,PHB1和PHB2表达显著降低,参与RIF的发生发展。     

护骨素对软脂酸诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的探讨护骨素（OPG）对软脂酸诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）凋亡的影响及可能机制。方法将HUVECs细胞分为3组：正常对照组：以0．4％牛血清白蛋白处理;软脂酸组：以0．4mmol／L软脂酸处理;OPG组：以不同浓度OPG预处理24h,再加入0．4mmol／L软脂酸（OPG浓度分别为50、100、200、400μg／L）,以上各组细胞培养24h,流式细胞术及Hoechst33258核染色检测细胞凋亡。将HUVECs细胞分为5组：正常对照组：以0．4％牛血清白蛋白处理;软脂酸组：以0．4mmol／L软脂酸处理;OPG组：以400μg／LOPG预处理24h,再加入0．4mmol／L软脂酸;软脂酸±OPG±雷帕霉素组：以10μg/L雷帕霉素预处理24h,再给予400μg／LOPG处理24h,最后加入0．4mmol／L软脂酸;软脂酸±雷帕霉素组：以10μg/L雷帕霉素预处理24h,再加入0．4mmoL／L软脂酸。以Westernblotting法分析各组HUVECs细胞马铃薯球蛋白（tuberin）、磷酸化马铃薯球蛋白（P-tuberin）、核糖体蛋白s6激酶（S6K）、磷酸化核糖体蛋白S6激酶（P-S6K）、Bcl-2、Bax以及caspase3蛋白表达水平。组间均数比较采用单因素方差分析,组问两两比较采用SNK法。结果与正常对照组比较,软脂酸组早期细胞凋亡率显著增加（18．31％±0．51％比6．88％±0．60％,P〈0．05）;OPG组早期凋亡率（12．58％±0．19％、9．39％±0．42％、7．55％±0．17％、5．90％±0．14％）明显低于软脂酸组（均P〈0．05）,且呈OPG剂量依赖性;与正常对照组比较,软脂酸组晚期凋亡率显著增加（9．55％±0．22％比5．28％±0．90％,P〈0．05）;OPG组晚期凋亡率（7．71％±0．17％、6．42％±0．18％、5．24％±0．16％、4．50％±0．16％）明显低于软脂酸组（均P〈0．05）,且呈OPG剂量依赖性。与正常对照组比较,软脂酸组P-tubefin／tubefin（2．0942±0．0163比1．1948±0．0541）、P-s6K／S6K（2．0942±0．0163比3．2052±0．0051）、Bax／β-actin（0．3868±0．0013比1．2991±0．0026）、caspase3／β-actin（0．2346±0．0009比0．57934-0．0103）表达水平均显著提高,差异均有统计学意义（均P〈0．05）,Bcl-2／β-aetin表达显著降低（0．2470±0．0038比0．0716±0．0004,P〈0．05）;OPG组P-tuberin／tubefin（0．8258±0．0074）、P．S6K／S6K（2．5073±0．1403）、Bax／β-actin（0．7452±0．0045）、easpase3／β-actin（0．4713±0．0066）表达水平明显低于软脂酸组（均P〈0．05）,Bcl-2／β-actin（0．1909±0．0021）表达明显高于软脂酸组（P〈0．05）。结论OPG对软脂酸诱导的HUVECs凋亡具有保护作用,此作用可能通过下调tuberin／mTOR活性,增加Bcl-2表达、降低Bax及Caspase3表达实现的。     

P^16和PCNA在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

应用S－P免疫组织化学方法对62例膀胱移行上皮癌及6例正常膀胱粘膜组织分别检测P^16蛋白、PC－NA蛋白表达,结果显示62例膀胱移行细胞癌中P^16的表达与膀胱癌分级间呈负相关（P＜0．005）,在浸润性癌显著低于浅表性癌（P＜0．005）,在复发组低于未复发组（P＜0．005）;PCNA表达与膀胱癌分级呈高度正相关（P＜0．05）,浸润性癌高于浅表性癌（P＜0．01）,复发组高于未复发组（P＜0．01）。P^16和PCNA的表达呈显著负相关（P＜0．005）。认为检测P^16、PCNA的表达对了解膀胱癌的生物学行为、膀胱癌的诊断、推测预后及治疗方式的选择有一定的临床参考价值。     

乳腺癌中BP1及mTOR的表达及临床意义

目的探讨BP1及mTOR蛋白表达与乳腺癌发生发展之间的关系。方法运用双重免疫组织化学技术检测85例乳腺癌、癌旁组织及正常乳腺组织中BP1、mTOR的表达。结果BP1、mTOR蛋白在乳腺癌组织中高表达,且两者呈正相关（r=0．271,P=0．012）;两者同乳腺癌临床分期、病理分级相关（P〈0．01）,且BP1蛋白与雌激素受体（ER）存在相关性（P〈0．01）,mTOR蛋白与淋巴结转移存在相关性（P〈0．01）。结论BP1及mTOR与乳腺癌发生与发展相关,可作为药物治疗乳腺癌的靶点。     

肾细胞癌组织中内皮抑素、VEGF、MVD的表达变化及意义

目的观察肾细胞癌（RCC）组织中内皮抑素、VEGF、微血管密度（MVD）表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组化SABC法检测50例肾细胞癌（RCC）及30例正常肾组织的内皮抑素、VEGF、CD34。结果内皮抑索和VEGF在癌旁正常肾脏组织中的阳性表达率分别为37％和20％,在肾癌组织中阳性表达率分别为76％和74％,在肾癌组织中的表达强度显著高于癌旁正常肾脏组织（P均〈0．05）。内皮抑素和VEGF表达水平在高分期的病例中呈高表达,与低分期的病例比较,P〈0．05。RCC组织中的MVD均值为（35．62±11．38）条／HP,明显高于癌旁正常肾脏组织的（18．71±9．53）条／HP,P〈0．01。临床分期为Ⅲ～Ⅳ期RCC组织MVD为（41．29±10．65）条／HP,显著高于Ⅰ－Ⅱ期的（24．74±7．83）条／HP,P〈0．01。内皮抑素和VEGF与MVD的表达有关（P均〈0．05）。结论RCC组织中内皮抑素、VEGF阳性表达率和MVD升高。三者可作为评估RCC恶性程度、转移及预后的重要指标。     

头颈部鳞状细胞癌组织中 Smad7、Smad4蛋白的表达变化及意义

目的：观察Smad7及Smad4蛋白在头颈部鳞状细胞癌组织中的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组化SP法分别对头颈部鳞状细胞癌组织、癌旁组织、活检留取的正常头颈部组织中的Smad7蛋白、Smad4蛋白、TGF-β1表达进行检测,分析三者间表达及其与肿瘤临床病理参数的关系。结果①TGF-β1和Smad7蛋白在肿瘤组织中的表达水平明显高于癌旁组织和正常组织（F分别为5．71、7．31）,而Smad4蛋白在肿瘤组织中的表达明显低于癌旁组织和正常组织（F为14．92）,P均＜0．05。②随肿瘤分化程度增高,TGF-β1及Smad7蛋白表达呈降低趋势（F分别为11．2、12．8）、Smad4蛋白呈升高趋势（F为7．91）,P均＜0．05;Smad4蛋白表达与肿瘤直径呈负相关、Smad7蛋白表达与肿瘤直径呈正相关（P均＜0．05）,TGF-β1表达与肿瘤直径无明显相关（P＞0．05）;Smad4蛋白表达在淋巴结转移者明显低于无转移者（P＜0．05）,有无淋巴结转移者Smad7蛋白及TGF-β1表达无显著差异（P＞0．05）。③Smad4蛋白表达与TGF-β1呈负相关（r＝-0．32）,与Smad7蛋白呈正相关（r＝0．39）,P均＜0．05。结论头颈部鳞状细胞癌组织中Smad7、Smad4蛋白表达异常,且可能通过调控上皮-间质转化参与肿瘤的侵袭、分化;检测两者（尤其是Smad4蛋白）可为临床分期、预后评估提供依据。     

Cx43和Fas在胃癌组织中的表达

目的研究间隙连接蛋白43（Cx43）和凋亡调节因子Fas在胃癌组织中的表达情况。方法应用免疫组化法检测70例胃癌患者手术切除的癌组织和癌旁正常组织中Cx43和Fas表达水平。结果Cx43在胃癌组织中的表达率为44．29％（31／70）,在癌旁正常组织中的表达率为92．86％（65／70）,P〈0．01;Fas在胃癌组织中的表达率为40．00％（28／70）,在癌旁正常组织中表达率为87．14％（61／70）,P〈0．01。Cx43表达水平与胃癌组织学分化程度、浸润深度、淋巴结转移有关（P〈0．05）,Fas表达水平与胃癌组织学分化程度、浸润深度、TMN分期、淋巴结转移有关（P〈0．05）。结论胃癌组织中Cx43和Fas表达水平的检测有助于判断胃癌的恶性程度。     

不稳定性心绞痛患者红细胞变形性改变的机理及其意义

观察13例不稳定性心绞痛（USAP）患者红细胞变形能力（ED）、红细胞膜收缩蛋白（SP）、钠泵（Na＋－K＋－ATPase）活性以及血脂的变化，并分析其相关性。结果显示，与对照组比较USAP患者红细胞变形指数（DI）、SP含量及Na＋－K＋－ATPase活性均明显降低（P＜0．001、0．01、0．01），而血脂（Ch、TG）明显升高（P＜0．01、0．05）。Ch浓度与Na＋－K＋－ATPase活性呈负相关（r＝－0．5941，P＜0．01），Na＋－K＋－ATPase活性与SP含量呈正相关（r＝0．6215，P＜0．01），DI与Na＋－K＋－ATPase活性和SP含量有正相关关系（τ＝100dyn／cm2时，r＝0．5732、0．5976，P＜0．05；τ＝200dyn／cm2时，r＝0．6781、0．6497，P＜0．01）。提示USAP患者ED减退与血脂增高以及SP含量和Na＋－K＋－ATPase活性降低有关，并且变形性减退的红细胞对动脉粥样硬化形成可能有直接作用。     

高水平蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型22．6 mRNA 的表达在克罗恩病中的临床意义

目的：检测蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型22（PTPN22）基因选择性剪切亚型PTPN22．6 mRNA 在克罗恩病（CD）患者外周血单核细胞（PBMCs）中的表达水平,研究 PTPN22．6 mRNA 表达状况与 C 反应蛋白（CRP）和红细胞沉降率（ESR）的关系及其临床意义。方法采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）方法分析50例 CD 患者和35例对照组 PBMCs 中PTPN22．6 mRNA 表达。分别采用速率散射比浊法和全自动红细胞沉降系统分析仪测定 CRP 和ESR 水平。结果与对照组比较,CD 患者 PBMCs 中 PTPN22．6 mRNA 的表达量升高（P ＜0．05）。活动期 CD 患者 PBMCs 中 PTPN22．6 mRNA的表达量显著高于缓解期 CD 患者（P ＜0．05）。CD 患者 PBMCs 中 PTPN22．6 mRNA 表达量与 CRP 和 ESR 浓度呈正相关（r ＝0．356,P ＜0．01;r ＝0．512, P ＜0．01）。疾病行为与 CD 患者PBMCs中 PTPN22．6 mRNA 表达水平相关,梗阻型 CD 患者 PBMCs中 PTPN22．6 mRNA 表达量显著高于非狭窄非穿透型和穿透型 CD 患者（P ＜0．05）。结论CD 患者 PBMCs 中 PTPN22．6 mRNA 表达水平升高,高水平 PTPN22．6 mRNA 的表达不仅与梗阻型疾病行为和疾病活动状态相关,而且与 CRP 和 ESR 呈正相关,提示 PTPN22．6可能在 CD 免疫学发病中起重要作用。     

核糖体蛋白S6激酶1基因沉默对高脂喂养小鼠肝脏炎性因子和肝脏胰岛素抵抗的影响

目的研究核糖体蛋白S6激酶1（S6K1）基因沉默对肝脏炎性因子表达的影响,探讨S6K1在肝脏胰岛素抵抗中的作用机制。方法将48只体重12．6～14．8g的6周龄雄性C57BL／6J小鼠按随机数字表法分为4组：普食对照组[普通饲料（ND）＋含U6启动子空载体腺病毒组（pU6Ax组）,即ND＋pU6Ax组]、普食实验组[ND＋S6K1短发夹RNA（shRNA）重组基因腺病毒组,即ND＋S6KIAx组]、高脂对照组[高脂饲料（HFD）’pU6Ax组,即HFD＋pU6Ax组]、高脂实验组（HFD＋S6K1Ax组）,分别喂养16周。实验组和对照组尾静脉分别注射S6K1Ax、pU6Ax（均为普食实验组及对照组90ml,高脂实验组及对照组120ml,效价为2．0×10^10pfu／m1）。注射后第6天过夜饥饿后,4组各随机抽取6只行葡萄糖耐量实验,剩余的小鼠处死取肝脏,逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测肝脏炎性因子单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β、IL-6、IL-10mRNA的表达,Western blotting观察肝脏蛋白S6K1、S6K1苏氨酸389（S6K1-thr389）、胰岛素受体底物1（IRS1）丝氨酸1101（IRS1-ser1101）、IRS1丝氨酸636／639（IRS1-ser636／639）、蛋白激酶B丝氨酸473（Akt—ser473）、c—Jun氨基末端激苏氨酸183／酪氨酸185（JNK—thr183／tyr185）表达。两组比较采用t检验,多组问比较采用单因素方差分析。结果肝脏S6KI基因沉默后,与高脂对照组相比,HFD＋S6K1Ax组小鼠炎性因子MCP-1、TNF-α、IL-1βmRNA均表达下降（分别为0．549±0．016比0．871±0．081、0．635±0．079比0．905±0．059、0．642±0．042比1．327±0．025;t=9．55、6．71、34．07,均P〈0．05）。IL-6mRNA未表现出组间差异（P〉0．05）,抗炎因子IL-10mRNA在HFD＋S6KIAx组肝脏S6K1基因沉默后升高（0．773±0．076比0．436±0．046,t=9．27,P〈0．05）。Western blotting显示与HFD＋pU6Ax组相比,HFD＋S6K1Ax组肝脏S6K1基因沉默后,IRS1－serll01、IRS1-ser636／639、S6K1-thr389、JNK—thr183／tyr185表达下降,Akt—ser473表达增强（t=6．59、8．44、5．37、3．15、6．52,均P〈0．05）。结论高脂喂养可引起肝脏低度炎症并介导胰岛素抵抗的发生,肝脏S6K1可能通过促进炎症因子、抑制抗炎因子表达参与了肝脏胰岛素抵抗发生。     

高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的机制

目的 探讨高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的机制.方法 (1)将人脐静脉内皮细胞分为3组:正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高渗对照组(5.5 mmol/L葡萄糖+27.5 mmol/L甘露醇)、高糖组(11 mmol/L、22 mmol/L、33 mmol/L、44 mmol/L葡萄糖),以上各组细胞培养48小时,采用流式细胞术及Hoechst 33258核染色观察各组细胞凋亡情况.(2)人脐静脉内皮细胞分为3组:正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(33 mmol/L葡萄糖)、高糖+雷帕霉素组(雷帕霉素预处理24小时后加入33 mmol/L葡萄糖),以上分组细胞均培养48小时,Western blot分析各组马铃薯球蛋白(Tuberin)、P-Tuberin、核糖体蛋白S6激酶(P70S6K)、P-P70S6K、bcl-2、Bax蛋白表达水平.结果 (1)与正常对照组早期凋亡率(2.9200 +0.0159)％相比,高糖组明显增加,且呈剂量依赖性[(4.8400 ±0.0092)％、(6.7200±0.0041)％、(8.4900 ±0.0047)％、(9.9500±0.0124)％,P均＜0.05)];高渗对照组早期凋亡率(2.9200±0.0023)％与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);与正常对照组晚期凋亡率(2.3700±0.0059)％比较,高糖组晚期凋亡率显著增加,且呈剂量依赖性[(3.2500±0.0280)％、(4.3600±0.0191)％、(5.9800±0.0083)％、(7.0100±0.0099)％,P均＜0.05];高渗对照组细胞凋亡率为(2.3600±0.0205)％,与正糖对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).(2)与正常对照组比较,高糖组P-Tuberin/Tuberin(1.2774±0.0026比1.0052±0.0012)、P-P70S6K/P70S6K(1.2129 ±0.0065比0.8157 ±0.0030)、Bax/β-actin (0.7484±0.0004比0.3966 ±0.0029)表达水平均显著升高,差异有统计学意义(P均＜0.05),bcl-2/β-actin表达明显降低(0.2949±0.0010比0.6398±0.0011,P＜0.05);高糖+雷帕霉素组P-P70S6K/P70S6K(0.9287±0.0019)、Bax/β-actin(0.5558±0.0052)表达水平低于高糖组(P＜0.05),bcl-2/β-actin (0.4546±0.0023)表达高于高糖组(P＜0.05).结论 高糖可能通过激活Tuberin/mTOR活性,从而降低bcl-2、增加Bax表达而导致血管内皮细胞凋亡.