鲍曼不动杆菌喹诺酮类耐药基因突变分析

目的调查鲍曼不动杆菌对喹诺酮类药物的耐药情况,并对喹诺酮类耐药基因突变进行分析。方法对中南大学湘雅附二医院2002~2008年间鲍曼不动杆菌临床分离株的耐药情况进行统计。同时于2008年7~12月随机收集50株鲍曼不动杆菌,PCR扩增gyrA基因和parC基因,并对扩增产物进行限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP),选取部分PCR扩增产物进行测序和分析。结果鲍曼不动杆菌对喹诺酮类药物的耐药率呈逐年上升的趋势。50株鲍曼不动杆菌对环丙沙星耐药率为62%,对左氧氟沙星耐药率为46%。gyrA基因及parC基因扩增分别获得305 bp和400 bp的基因产物。PCR-RFLP结果显示,对gyrA基因,耐药株100%不能被HinfⅠ酶切,敏感株53%能被HinfⅠ酶切;对parC基因,耐药株29%能被HinfⅠ酶切,敏感株有63%能被HinfⅠ酶切。分析测序结果,耐药株中的gyrA基因和parC基因存在突变,未被酶切的敏感株也存在突变,使HinfⅠ的识别序列GACTC变为GACTT,酶切位点GANTC消失。被酶切耐药株中发现parC基因新的突变点,第89碱基密码子GAA中的A突变成G,被酶切敏感株的parC基因出现多个位点的同义突变。结论鲍曼不动杆菌临床分离株对喹诺酮类药物耐药情况严重,呈逐年上升的趋势。鲍曼不动杆菌对喹诺酮类药物产生耐药与gyrA基因突变和parC基因突变有关。     

60株鲍曼不动杆菌喹诺酮类耐药基因分析

目的探究鲍曼不动杆菌喹诺酮类耐药的机制。方法收集2009年1-12月天津市三所三甲医院各类标本分离的鲍曼不动杆菌60株。采用聚合酶链反应（PCR）扩增技术对质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS、acc（6’）．Ib．cr、qepA及染色体基因gyrA和parC进行基因检测,并对阳性结果进行酶切和测序鉴定。结果60株鲍曼不动杆菌中qnrA、qnrB、qmS和qepA基因均为阴性,acc（6’）-Ib基因12株阳性,经测序证实均未出现变异。37株环丙沙星耐药的鲍曼不动杆菌中30株（81．0％）gyrA基因不被HinfI酶切,26株（70％）parc基因不被Hinf I酶切,证实有基因突变存在。结论天津地区尚未发现鲍曼不动杆菌中存在质粒介导的喹诺酮耐药机制,gyrA和parC基因变异仍为鲍曼不动杆菌喹诺酮耐药的主要原因,但同时亦有其他喹诺酮耐药机制的存在。     

我院2009～2010年鲍曼不动杆菌的临床分布及耐药性分析

目的了解鲍曼不动杆菌在我院各临床科室的分布情况以及耐药性,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法对我院2009年1月～2010年12月住院患者标本进行鲍曼不动杆菌分离、鉴定及耐药性分析。结果①共分离出非重复鲍曼不动杆菌243株,主要分离自痰标本,其次是血和创面分泌物;病区分布依次是ICU、呼吸内科和神经外科。②鲍曼不动杆菌对阿米卡星耐药率最低,为14.5%;对其他12种抗菌药物的耐药率均>70.0%;已出现大量多重耐药菌株及少数泛耐药菌株。结论我院鲍曼不动杆菌感染主要见于ICU、呼吸内科病房等,且对抗菌药物已产生明显多药耐药性;应警惕并重视该菌感染及耐药性监测,预防医院感染的发生。     

颅脑外伤病人痰液中鲍曼不动杆菌gyrA基因突变与环丙沙星耐药关系研究

目的了解分离自颅脑外伤病人痰液中鲍曼不动杆菌gyrA基因突变与环丙沙星耐药性的关系。方法用ATB药敏试验条板微量肉汤法测定27株鲍曼不动杆菌对14种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析gyrA基因序列。结果27株菌中除HZ16号菌株对环丙沙星敏感外,其余26株均耐药。序列分析表明HZ16号菌株gyrA基因无突变,其序列已登录GenBank(accessionAY642140),其余26株耐药菌均存在gryA基因突变,导致耐喹诺酮决定区(QRDR)第83位的丝氨酸被亮氨酸取代。其中HZ28号菌株gyrA基因序列也已登录(GenBankAY642141)。结论gyrA基因突变是导致分离自颅脑外伤病人痰液中鲍曼不动杆菌对环丙沙星耐药的主要原因。     

我院重症医学科耐药细菌分布及耐药性分析

目的了解该院重症医学科住院患者感染病原菌分布及耐药情况,为指导临床科室合理使用抗菌药物,减少耐药性的发生提供依据。方法收集2014~2015年该院重症医学科住院患者采集的各类标本,对检出的病原菌分布及细菌耐药性进行回顾性分析。结果 2年间送检标本1 684份,分离出病原菌1 156株,细菌检出阳性率为68.65%。在分离菌株中革兰氏阴性菌897株,占77.60%;革兰氏阳性菌125株,占10.81%;真菌134株,占11.59%。其中感染的优势菌为肺炎克雷伯杆菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌,分别占到检出细菌的20.8%、15.1%和15.0%。肺炎克雷伯杆菌对氨苄西林的耐药率最高为97.5%,铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物左氧氟沙星和环丙沙星的耐药率分别为48.0%和41.7%;鲍曼不动杆菌对美罗培南、头孢曲松、头孢他啶、环丙沙星和哌拉西林他唑巴坦的耐药率均超过了70.0%。结论该院重症医学科患者感染细菌以革兰氏阴性杆菌为主,耐药率较高,特别是鲍曼不动杆菌对多种抗菌药物耐药,要引起重视。应进一步加强预防和控制,建立细菌耐药监测制度和规范抗菌药物使用,减少细菌耐药性的发生。     

心脏外科鲍曼不动杆菌感染病原学特征分析

目的分析心脏外科鲍曼不动杆菌感染病原学,以指导临床诊疗。方法收集心脏外科感染鲍曼不动杆菌患者样本,K-B纸片法分析鲍曼不动杆菌的耐药性。PCR扩增检测耐药基因,统计学分析鲍曼不动杆菌产生耐药株的相关因素。结果从心脏外科患者样本分离87株鲍曼不动杆菌,呼吸道、手术切口、纵隔、血液、泌尿道及其他感染部位分别分离37、14、11、9、6和10株。鲍曼不动杆菌对头孢吡肟、头孢噻肟、头孢他啶、阿米卡星、亚胺培南、左氧氟沙星、环丙沙星、庆大霉素、氨苄西林、氨曲南的耐药率分别为55.17%、66.67%、68.97%、27.59%、28.74%、55.17%、50.57%、33.33%、65.52%和100.00%。鲍曼不动杆菌OXA-23基因、OXA-58基因、TEM基因、PER基因、IMP基因检出率分别为41.38%、8.05%、29.89%、10.34%和17.24%。鲍曼不动杆菌耐药与患者性别无关(χ~2=0.1010,P=0.7506),与年龄(χ~2=5.3454,P=0.0208)、合并糖尿病(χ~2=4.8619,P=0.0275)、住院天数(χ~2=8.7139,P=0.0032)、是否采用人工气道(χ~2=8.7139,P=0.0032)、抗生素使用(χ~2=9.2104,P=0.0024)相关。结论心脏外科鲍曼不动杆菌感染部位主要是呼吸道,病原菌对常用抗菌药物都产生了一定程度的耐药性,耐药性发展可能与耐药基因的传播关系密切。临床应注意合理用药。     

多重耐药鲍曼不动杆菌主动外排泵基因abeM的测定及耐药性分析

目的了解临床分离株鲍曼不动杆菌对16种抗菌药物的耐药性,为抗耐药菌药物选择提供依据,并扩增外排泵蛋白编码基因abeM,以探讨鲍曼不动杆菌多重耐药与主动外排作用的关系。方法采用纸片扩散法(Kirby-Bauer)对收集的65株不重复鲍曼不动杆菌进行药物敏感性试验。应用聚合酶链反应测定多重耐药鲍曼不动杆菌主动外排系统abeM基因,并进行序列分析。结果收集的鲍曼不动杆菌对头孢哌酮/舒巴坦敏感,耐药率15.38%,对亚胺培南耐药率为52.31%,对其余抗菌药物的耐药率在60.00%~73.85%之间;经PCR扩增,65株鲍曼不动杆菌中adeB基因阳性60株(92.31%),序列分析显示与Genbank登录的鲍曼不动杆菌ATCC 19606药物外排蛋白编码基因abeM(AB204810)的同源性为98.00%。结论 abeM主动外排作用可能是多重耐药鲍曼不动杆菌多重耐药的重要机制之一。     

下呼吸道鲍曼不动杆菌感染的临床分布及耐药性分析

目的了解下呼吸道鲍曼不动杆菌感染的临床分布及其对常用抗生素的耐药情况。方法分析我院132例下呼吸道感染住院患者分离的鲍曼不动杆菌的药物敏感试验结果及其分布情况。结果鲍曼不动杆菌主要分布在重症监护病房、儿科、神经外科,药敏试验显示对碳青霉烯类、含酶抑制剂、氨基糖苷类药物敏感性较高,对β-内酰胺类药物普遍耐药。2009年至2011年鲍曼不动杆菌耐药率与2002年～2004年相比,呈上升趋势,尤以对氟喹诺酮类抗生素耐药率升高显著。结论鲍曼不动杆菌主要侵犯重症监护病房、儿科、神经外科患者,鲍曼不动杆菌对各抗菌药物的耐药性呈上升趋势。     

左氧氟沙星体外诱导马耳他布鲁杆菌耐药后gyrA基因的变异

目的 探讨马耳他布鲁杆菌对喹诺酮类抗菌药物耐药性的产生机制,为指导临床合理用药提供依据.方法 使用左氧氟沙星分别对6株马耳他布鲁杆菌(Bru1、Bru2、Bru3、Bru4、Bru5、Bru6)进行体外耐药诱导并筛选耐药菌株.采用琼脂稀释法测定左氧氟沙星对6株马耳他布鲁杆菌及诱导耐药菌株的最低抑菌浓度(MIC),采用纸片扩散法(K-B法)测定6株马耳他布鲁杆菌和诱导耐药菌株对喹诺酮类抗菌药物(左氧氟沙星、环丙沙星、洛美沙星、诺氟沙星、氟罗沙星、氧氟沙星)的敏感性.应用PCR技术扩增6株马耳他布鲁杆菌及诱导耐药菌株的gyrA基因,并对获得的基因进行同源性分析及氨基酸序列推导.结果 左氧氟沙星对Bru1,Bru2,Bru3,Bru4,Bru6菌株MIC为0.50 μg/ml,对Bru5菌株为0.25 μg/ml,菌株Bru3、Bru4经左氧氟沙星诱导后转变成耐药菌株,分别命名为LEVR3及LEVR4,其MIC分别为64.00、128.00 μg/ml,与诱导前比较,增加了128倍和256倍,6株马耳他布鲁杆菌对上述喹诺酮类药物均敏感,2株诱导耐药菌株对上述喹诺酮类药物均耐药,并且其GyrA亚单位的喹诺酮耐药性决定区(Quinolone resistance-determing region,QRDR)发生突变:Ala87(GCU)置换为Val(GUU)、Asp91(GAU)置换为Gly(GGU).结论 马耳他布鲁杆菌可在左氧氟沙星短期作用后获得耐药性,诱导的耐药菌株gyrA基因发生突变,且对其他喹诺酮类药物产生交叉耐药.     

呼吸与危重症医学科鲍曼不动杆菌感染情况及耐药性分析

目的分析北京安贞医院呼吸与危重症医学科鲍曼不动杆菌感染情况及耐药性变迁。方法回顾性分析2005年1月-2016年12月北京安贞医院呼吸与危重症医学科住院患者感染的鲍曼不动杆菌感染以及耐药性等情况,分三个阶段(Ⅰ阶段为2005-2008年,Ⅱ阶段为2009-2012年,Ⅲ阶段为2013-2016年)进行分析。结果 2005-2016年共分离出鲍曼不动杆菌1382株,其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ阶段分别为206、496、680株。鲍曼不动杆菌在标本中的分布以呼吸道分泌物为主,达98. 22%,其次血液为1. 37%,尿液为1. 30%。在药敏结果中,鲍曼不动杆菌对替加环素耐药率最低为1. 35%。在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ阶段,鲍曼不动杆菌对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率较低,分别为26. 00%、15. 08%、25. 73%;对亚胺培南的耐药率分别为27. 18%、84. 01%、83. 04%,对美罗培南耐药率分别为51. 52%、83. 49%、77. 62%。在Ⅲ阶段,鲍曼不动杆菌对左氧氟沙星的耐药率为60. 86%,对哌拉西林/他唑巴坦、环丙沙星、头孢他啶及头孢曲松的耐药率均在80%以上。结论鲍曼不动杆菌对多种抗菌药物呈严重耐药,治疗困难。临床需通过加强细菌的耐药性监测,根据药敏试验结果合理选择抗菌药物,并加强院感管理等措施,有效控制耐药菌株的流行及医院感染。     

Activities of pefloxacin and ofloxacin against mycobacteria: in vitro and mouse experiments

The minimal inhibitory concentrations for 90% of strains (MIC90) of ofloxacin against Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium xenopi was 2 mg/l. This was three dilutions lower than that of pefloxacin and was well within the range of drug concentrations achievable in man. The antituberculosis activities of both quinolones were independent of resistance of the strains to other antimycobacterial agents. Mycobacterium avium-intracellulare was resistant to both compounds with MIC90s greater than 16 mg/l. The maximum serum levels (Cmax) of both compounds increased proportionally with increasing dose size. The terminal elimination half-life (T1/2) of pefloxacin was longer than that of ofloxacin, but the T1/2 of both compounds in mice were much shorter than in man. The area under the concentration curve (AUC) of pefloxacin was double than that of ofloxacin. In the mouse, pefloxacin at doses up to 150 mg/kg daily was inactive against M. tuberculosis infection: in terms of survival rate the minimal effective dose of ofloxacin against M. tuberculosis infection was 150 mg/kg daily when given by gavage or by incorporation into the mouse diet at a concentration of 0.1%, but in terms of cfu counts, ofloxacin 150 mg/kg daily only displayed a moderate degree of activity similar to ethambutol 100 mg/kg daily. The therapeutic effects of ofloxacin against M. tuberculosis infection were dose-related: 300 mg/kg daily by gavage or 0.4% in mouse diet displayed much better therapeutic effects than lower dosages. Since the AUC in mice treated with ofloxacin 150 mg/kg daily is close to that in man treated with a clinically tolerated dose--600 mg daily--such a dosage may be only moderately effective against human tuberculosis.     

2006—2008年鲍曼不动杆菌耐药性变迁分析

目的：通过分析鲍曼不动杆菌耐药性的变化,为临床治疗鲍曼不动杆菌感染提供帮助。方法：收集2006年1月—2008年12月我院所分离出的鲍曼不动杆菌,采用K-B琼脂扩散法进行药敏试验。结果：2006—2008年,呼吸道分离的鲍曼不动杆菌占分离的81.4%;鲍曼不动杆菌头孢哌酮/舒巴坦的耐药性较低,亚胺培南和美诺培南的耐药性上升很快,ICU和非ICU病房对抗生素的耐药率有较大的差异。结论：鲍曼不动杆菌耐药现象呈明显上升趋势,特别是亚胺培南和美诺培南。非ICU病房鲍曼不动杆菌的耐药率低于ICU病房。     

Emergence and properties of fluoroquinolone resistant Salmonella enterica serovar Typhi strains isolated from Nepal in 2002 and 2003

A total of 171 Salmonella enterica serovar Typhi strains isolated from Nepal, mostly from patients with typhoid fever in 2002-2003, were tested for antimicrobial susceptibility by disk diffusion assay. Selected S. enterica serovar Typhi isolates were tested for MICs by E-test for ceftriaxone, ciprofloxacin and ofloxacin. Mutations of DNA gyrase gyrA and gyrB and topoisomerase IV parC and parE were identified by sequencing of PCR amplicons. By disk diffusion assay, 75/171 S. enterica serovar Typhi isolates were resistant to nalidixic acid, ampicillin, choramphenicol, streptomycin, tetracycline, sulfisoxazole, and trimethroprim/sulfamethoxazoles. Multiple drug resistance to the 7 antimicrobials was most predominant among S. enterica serovar Typhi isolates in this study. Resistance to nalidixic acid was detected in 76/111 and 56/60 of total isolates collected in 2002 and 2003, respectively. Nalidixic acid-resistant isolates in 2002 and 2003 showed MIC range for ciprofloxacin of 0.125-0.250 mg/l. Nalidixic acid-resistant isolates contained point mutations in gyrA and parC but not gyrB and parE. The gyrA mutation of nalidixic acid-resistant isolates obtained in 2002 and 2003 had amino acid substitution at position 83 of Serine-->Tyrosine and Serine-->Phenylalanine, respectively. Two different mutations of gyrA were detected among nalidixic acid-resistant isolates. Thus it is necessary to monitor mutation in DNA topoisomerase associated with increases in quinolones resistance.     

鲍曼不动杆菌感染的临床分布及耐药性分析

目的 了解鲍曼不动杆菌的临床分布及其对常用抗生素的耐药情况.方法 收集我院2007年7月至2010年7月的临床标本,进行鲍曼不动杆菌分离培养及药敏试验.结果 3年共分离出鲍曼不动杆菌373株,在临床标本中,痰液分布率最高,占78.6％,感染分布以ICU为主,占36.2％.药敏试验显示对碳青霉烯类、含酶抑制剂、多粘菌素E敏感性较高,对氨基糖苷类、喹诺酮类、β-内酰胺类耐药率较高,多重耐药性明显.结论 鲍曼不动杆菌主要侵犯ICU患者、慢性呼吸系统疾病患者及术后感染者.     

铜绿假单胞菌抗菌物质体外对鲍曼不动杆菌的抑制作用研究

目的观察铜绿假单胞菌抗菌物质对鲍曼不动杆菌的体外抑菌活性。方法用交叉条带试验方法测定铜绿假单胞菌对15株鲍曼不动杆菌的体外抑制活性。结果铜绿假单胞菌对鲍曼不动杆菌体外抑菌活性良好,15株产色素铜绿假单胞菌中,除4、8、14、15号菌株外,其余铜绿假单胞菌对鲍曼不动杆菌的抑制率均为100％。并发现铜绿假单胞菌产色素菌株的抗菌活性显著优于不产色素菌株。铜绿假单胞菌主要通过产生的绿脓素抑制鲍曼不动杆菌的生长。结论铜绿假单胞菌产生的抗菌物质对鲍曼不动杆菌具有较强的抗菌活性,具有广阔的开发前景。     

单耐氧氟沙星的结核分枝杆菌耐药机制研究

目的探讨单耐氧氟沙星的结核分枝杆菌中耐药相关基因突变及外排泵基因风坦两种不同耐药机制的作用。方法从国家结核病参比实验室2007年全国耐药基线调查菌株库中挑选单耐氧氟沙星的菌株17株。采用直接测序法检测利福平耐药相关基因删似和gyrB突变情况。提取gyrA和gyrB无突变菌株的RNA后反转录并采用Real—timePCR方法检测20个药物外排泵基因的表达量，对比菌株最低抑菌浓度（MIC）试验结果，筛选可能与氧氟沙星药物外排泵的相关基因，并选用大肠埃希菌为模式生物构建表达载体，检测过表达目的外排泵蛋白的大肠埃希菌对氧氟沙星的耐药程度加以验证。结果在17株单耐氧氟沙星的菌株中，有4株（4／17）检测到gyrA突变，其中包括90位点突变1株及94位点突变3株，上述突变均表现为高浓度耐药，其MIC均不低于4μg/ml。在gyrA和gyrB未突变菌株中，通过real-timePCR检测发现在高浓度耐药的2株菌株中，Rv0933和Rv2938的转录水平显著高于其他低浓度耐药菌株，较对照株H37Rv转录水平高16倍和5倍。在对照组和转入pEASY-E1-Rv2938的大肠埃希菌中MIC均小于0．125μg／ml，而转入pEASY-E1-Rv0933的大肠埃希菌的MIC为2μg／ml。结论本研究结果显示，gyrA耐药决定区基因突变与氧氟沙星高浓度耐药相关，PstB可能是氧氟沙星特异性的药物外排泵基因，其高水平表达与氧氟沙星高浓度耐药相关。     

深圳地区结核分枝杆菌耐药及广泛耐药分离株的分子特征

目的 研究2007-2008年深圳地区MTB耐药和广泛耐药分离株的分子特征.方法 参照世界卫生组织和同际防痨与肺部疾病联盟的标准,使用改良罗氏药敏培养基,用1%比例法药敏试验,筛选出针对异烟肼、利福平、链霉素、氧氟沙星和卡那霉素5种药物耐药或敏感的临床分离株,通过PCR扩增筛选菌株的rpoB、katG、rpsL、rrs~((1))、gyrA/B和rrs~((2))基因的相关序列,运用DNAStar和Blastn进行序列分析.结果 筛选出实验菌株123株,其中耐药株73株,全敏感株50株.异烟肼耐药株katG基因突变率为44/52,突变位点全部为S315T或S315N.利福平耐药株rpoB基因突变率为44/47,突变位点主要集中在S531L(30/44)、H526D(9/44)和H526R(1/44).链霉素耐药株以rpsl基因突变为主,突变位点为K43R(19/28)和KS8Q(6/28);rrs(1)基因突变较少见,仪有491C→T(2/28)和513A→C(1/28),2个基因突变率合计为28/41.氧氟沙星耐药株突变率为11/11,以gyrA基因突变为主,突变位点包括D94A(2/11)、S91P(4/11)和A90V(3/11),3个突变位点总突变率为9/11;     

宁波地区耐多药结核分枝杆菌喹诺酮耐药gyr基因突变研究

目的 为阐明宁波地区耐多药结核分枝杆菌(Multiple drug-resistant tuberculosis, MDR-TB)的gyr基因突变特征,深入研究MDR-TB对喹诺酮类药物耐药与gyr基因突变特征的关系。方法 采用1%比例法对MDR-TB进行氧氟沙星药敏检测实验,通过 DNA直接测序法分析MDR-TB的gyr基因突变情况。结果 120株MDR-TB临床分离株中有34株对喹诺酮耐药,总耐药率为28.33%(34/120)。34株耐喹诺酮菌株中,30株gyr基因发生突变,突变率为88.24%(30/34)。30株gyr基因发生突变的菌株中gyrA基因突变有29株,占96.67%(29/30),突变位点包括90、91和94位氨基酸;gyrB基因突变有2株,其中1株均合并gyrA基因突变,占6.67%(2/30),突变位点包括499和502位氨基酸。结论 宁波地区MDR-TB对喹诺酮类药物耐药形势较为严峻,gyrA基因突变与MDR-TB对喹诺酮类药物耐药相关。