HIV感染长期不进展者与艾滋病患者HIV-1 gag特异性CD+8 T细胞应答

目的探讨欧美流行的人类免疫缺陷病毒(HIV)-1 B亚型株与我国HIV感染和艾滋病(AIDS)病人 gag特异性CD+8 T细胞应答交叉反应性.方法研究对象为长期不进展者(LTNP)7例和艾滋病患者9例,将覆盖HXB2 HIV-1 gag全长的125个重叠肽段组成11个肽段库作为抗原,用γ干扰素刺激原酶联免疫斑点试验方法检测LTNP和AIDS病人的特异性CD+8 T细胞应答,观察两组病人间的差异及其与CD+4 T细胞和病毒载量的相关性.结果 LTNP组和AIDS组HIV-1 gag特异性CD+8 T细胞应答强度分别为(1212±796)斑点形成细胞数(SFC)/106外周血单个核细胞(PBMC)和(182±203) SFC/106PBMC,识别肽段库的个数(间接反应了细胞毒性T淋巴细胞应答的宽度)分别为3.0±0.8和0.8±0.7,LTNP组显著高于AIDS组.CD+8 T细胞应答的强度和宽度与CD+4 T细胞计数呈正相关,与病毒载量呈负相关.结论欧美流行株与我国病毒株之间具有交叉反应性,HIV-1 gag特异性CD+8 T细胞应答在阻止疾病进展中可能发挥重要作用.     

性传播艾滋病患者抗艾滋病毒治疗后的HIV-1 pol区基因突变研究

目的分析河北省正在参加抗艾滋病毒治疗的通过性接触感染HIV者耐药性。方法采集辖区内正在接受抗艾滋病毒治疗的性接触感染HIV者的血浆,进行HIV基因型检测,分析基因突变。结果研究发现231例患者中有68例患者发生了基因突变,对抗艾滋病毒药物产生了不同程度的耐药性,耐药发生率为29.44%(68/231)。逆转录酶抑制剂的耐药发生率(29.00%,67/231)远高于蛋白酶抑制剂的耐药发生率(0.87%,2/231)。结论抗病毒药物的诱导作用是导致耐药突变的主要原因,在治疗过程中适时进行耐药监测是必要的,可为制定最佳治疗方案提供数据。     

不同病期HIV-1感染者的血浆中和抗体研究

目的了解HIV-1感染者体内中和抗体状况,探讨HIV-1感染的病理机制.方法病毒的分离和培养采用共培养(co-culture)方法,从29例HIV-1感染者的外周血淋巴细胞(PBMC)分离了29株HIV-1原代病毒,中和实验采用病例血浆中和分离的相应病毒株,再感染经PHA刺激活化后的正常人PBMC,培养5天检测其HIV-1 p24抗原含量以判断中和效果.结果29例研究时象中,24例是无症状感染者,5例为AIDS患者.我们发现17例无症状感染者的ID50≥8,其中10例ID90≥8,4例产生高滴度中和抗体ID90≥64,交叉中和实验结果表明这4例感染者的血浆对异体病毒均有不同程度的中和效应,其中尤以s7,s28作用最强.而AIDS患者中仅2例ID50≥8,其中1例ID90≥8,无1例产生高滴度中和抗体.结论通过对HIV-1感染者血浆中和效应的观察,表明多数感染者对自身同血源病毒的中和抗体滴度较低,但也有少数感染者能产生较高滴度的中和抗体,有必要深入研究其广泛的中和病毒效应;此外,早期无症状的感染者似比晚期有症状者对自体病毒的中和效应强,提示抗病毒治疗应于感染早期进行,以免机体体液免疫反应的进一步恶化.     

在重组痘苗病毒中共表达HIV-1env与hIL-6基因

本实验以 HIV- 1env与 h IL - 6基因在重组痘苗病毒中的共表达研究为目的 ,将痘苗病毒复制非必需区血凝素(HA )基因作为侧翼 ,把编码人白细胞介素 6 (h IL - 6 )的基因片段克隆到真核表达质粒 p J38env的下游 ,构建成含有 HIV- 1env与 h IL - 6两种外源基因的重组表达质粒 PJ38E- IL 6 ,经同源重组和血凝素阴性空斑筛选 ,获得了重组痘苗病毒 v J38E- IL 6。经间接免疫荧光试验、Dot- EL ISA和 Western bolt等检测证明 ,重组病毒能同时表达 env蛋白和 IL - 6蛋白 ,表达产物的分子量分别为 98k Da、2 6 k Da     

深圳地区未经治疗艾滋病患者蛋白酶和逆转录酶耐药基因变异检测

目的 了解广东省深圳地区部分未经治疗的AIDS患者蛋白酶和逆转录酶耐药基因变异的发生频率和类型。方法 收集深圳市45例未经治疗的AIDS患者血浆，用RT-PCR及套式PCR扩增HIV-1pol区蛋白酶基因全序列与逆转录酶基因部分序列，将反应产物直接进行序列测定，并分析耐药基因的突变情况。结果 从45份血浆标本中扩增出41份pol区基因并进行序列测定与分析，蛋白酶基因耐药的主要突变发生率为12．2％（5／41），次要突变发生率为100％（41／41）；逆转录酶基因的耐药基因突变发生率为39．0％（16／41）。对上述耐药基因突变的评分表明，对蛋白酶类药物的耐药率为9．8％（4／41）；对逆转录酶类药物的耐药率为19．5％（8／41）；有1份标本对蛋白酶抑制剂、2份标本对逆转录酶抑制剂潜在耐药。结论 深圳地区未经治疗的AIDS患者中存在HIV-1耐药株，但多数患者对现有抗病毒药物敏感。应用抗病毒治疗必须加强监测，保持较好的依从性，防止耐药性毒株的流行。     

早期诊断围产期HIV-1感染几种方法的比较

在一儿科AIDS临床试验里,早期诊断用齐多夫定治疗的婴儿HIV 1感染的三种方法是:1)血浆HIV 1RNA扩张试验(RNA试验) ;2 )外周血定量单核细胞(PBMC)的微量培养法(培养法) ;3)PBMCHIV 1DNA扩张试验(DNA试验)。这三种方法用于2 4名感染HIV 1的婴儿和10 0名非感染婴儿。HIV 1感染的定义是多于或等于2次培养阳性;在≥18个月时显示HIV 1抗体阳性。婴儿出生时和于6周与2 4周龄时进行PBMC培养;冷冻保存的标本则作RNA和DNA试验。婴儿出生时,培养方法、DNA和RNA试验的敏感性分别为2 0 8%、10 5 %和2 6 7%。年龄较大时,敏感性…     

不同HIV-1病毒载量定量检测方法的比较研究

目的 评价不同方法检测Ⅰ型艾滋病病毒(HIV-1)病毒载量的相关性及一致性,探讨国产实时荧光核酸定量检测试剂盒用于临床检测HIV-1病毒载量的可行性.方法 收集61份未治疗的HIV感染者/艾滋病(AIDS)病人血浆标本及57份抗病毒治疗后的血浆标本,使用深圳匹基生物工程股份有限公司实时荧光聚合酶链反应(实时荧光-PCR...     

HIV-1感染引起的细胞凋亡机制及相关的病毒基因

艾滋病 (ＡＩＤＳ)的一个重要病理特征是ＨＩＶ - 1感染以后 ,ＣＤ 4 Ｔ细胞数目的持续减少 ,导致其相关的免疫功能缺陷 ,进而引起机体机会性感染和肿瘤。有关ＨＩＶ - 1感染后ＣＤ 4 Ｔ细胞数的减少及其功能衰竭的机制和原因有几种可能 :1)病毒感染后 ,病毒ＤＮＡ在细胞内蓄     

中国部分地区应用高效抗逆转录病毒治疗HIV-1患者的耐药性检测

目的了解我国应用高效抗逆转录病毒治疗的人类免疫缺陷病毒（HIV）感染者中耐药情况.方法收集我国上海、河南及安徽等地116份应用抗病毒治疗患者的血浆标本,采用逆转录聚合酶链反应扩增pol基因片段并进行序列测定,通过HIV耐药性数据库进行耐药相关性突变分析,并构建进化树.结果共获得44例HIV-1分离株的pol基因序列,有70%（31/44）的标本发现了针对常用的三类抗逆转录病毒药物的主要耐药性突变,其中有34%（15/44）的标本发现了针对核苷类逆转录酶抑制剂（NRTIs）的耐药性突变;有68%（30/44）的标本发现了针对非核苷类逆转录酶抑制剂（NNRTIs）的耐药性突变;仅有2%（1/44）的标本发现了对蛋白酶抑制剂（PIs）类药物的主要耐药性突变.亚型分析表明91%（40/44）为B亚型.结论在我国应用抗逆转录病毒治疗的患者中耐药性的产生已经十分严重,尤其是针对NNRTIs的高度耐药性较为突出,迫切需要应用耐药性检测进行指导.     

深圳市HIV—1B亚型感染毒株env基因序列测定和分析

应用巢式－ＰＣＲ方法，对深圳检出的２份ＨＩＶ－１感染者的外击血单核细胞样本进行扩增，获得ＨＩＶ－１膜蛋白基因核酸片段，并对其Ｃ２－Ｖ３区及邻区３５０￣４５０个核苷酸序列进行测定和分析。     

HIV-Ⅰ gag基因在大肠杆菌中的表达

目的表达HIV-1型鹳基因蛋白。方法将编码HIV-1型gag的部分序列,克隆到表达载体pET-28a后,进行IPTG诱导在E．coli BL21（DE3）表达,表达产物分别经SDS-PAGE和Western-Blot进行检测。结果表达产物为分子量约50kD的融合蛋白,并可与HIV-1型病人阳性血清发生特异性反应。结论鹳基因在大肠杆菌中得到表达,且表达产物具有良好的抗原性。     

套式PCR对HIV—l env基因检测的敏感度分析

采用套式PCR对含HIV—1膜蛋白基因的B亚型质粒和HIV—1感染者外周血单核细胞(PBMC)进行env基因部分片断的扩增,套式PCR可使常规PCR的敏感性提高100至1000倍,常规PCR只扩增出12份PBMC中的2份样品,套式PCR则扩增出全部样品中HIV—1膜蛋白基因片断.     

Humoral immune responses to gag and env proteins from human immunodeficiency virus type 1 in hemophiliac patients

Solid-phase enzyme immunoassays using recombinant gag and env proteins were developed to study humoral immune responses to HIV infection in a cohort of 105 hemophiliac patients. Thirteen patients with ARC or AIDS and 92 asymptomatic patients were studied. A cross-sectional study showed a wide range of antibody responses to gag and env proteins; however, the differences between the ARC/AIDS and asymptomatic patients were statistically significant for both antigens (P less than .0004). In a longitudinal study, antibody levels in sera from 11 asymptomatic patients with gag antibody log units less than or equal to 1.5 were compared to levels in sera from 10 ARC/AIDS patients and 8 asymptomatic patients with gag antibody greater than 1.5. These patient groups were followed for comparable periods of time (67.1-71.7 mo). The asymptomatic patients with low gag antibody and the ARC/AIDS patients showed a similar pattern of antibody response to gag protein overtime. In hemophiliac patients with HIV-1 infection a low titer of antibody to gag protein is not invariably associated with clinical deterioration and is not a useful serologic marker of impending progression to AIDS.     

广东省吸毒人群新发HIV-1感染pol基因多态性和耐药分析

目的研究广东省部分吸毒人群2007年新发现的艾滋病病毒Ⅰ型（HIV-1）感染者pol基因的多态性耐药突变。方法选取2007年吸毒人群中新发现的HIV感染者63例,从血浆中提取病毒RNA,运用一步法逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和套式聚合酶链反应（Nested—PCR）扩增HIV pol基因段,并对扩增的目的片段进行测序,将测序结果与斯坦福大学耐药数据库比对,获得耐药和基因多态性相关信息。结果在63例HIV感染者中,有效扩增并且测序成功49例。检出耐药者2例,占4．1％,分别为低度和潜在耐药,耐药突变类型分别为V179D和Q151LQ。pol基因耐药突变的发生率为38．7％,主要突变类型为：L33I、A71V、A71T、T69S。其中T69S为主要的耐药突变位点,占耐药突变的33％。在不同的基因亚型中,pot基因蛋白酶区和逆转录酶区的突变的多态差异较大。结论广东省吸毒人群2007年新发现HIV感染者耐药发生率仍处于较低水平,为4．1％,但耐药突变的发生率较高。     

深圳市HIV—1B亚型感染毒株env基因序列测定和分析

应用巢式-PCR方法,对深圳检出的2份HIV-1感染者的外周血单核细胞样本进行扩增,获得HIV-1膜蛋白(env)基因核酸片段,并对其C_2-V_3区及邻区350～450个核苷酸序列进行测定和分析.结果表明这2份血样为HIV-1B亚型毒株感染(sz-B),彼此间的基因离散率为10.2%;与A-E国际参考亚型序列比较,sz-B与A及C-E参考亚型共享序列间的基因离散率均大于22%,而与欧美B亚型(Boon)间的基因离散率仅为7.5%;与国内部分地区流行的B亚型代表株比较其基因离散率为11%～12%.提示HIV-1B亚型在深圳的流行时间约为10年,主要经性途径由境外传入,且经性传播途径在人群中流行.     

Genetic diversity of HIV-1 non-B strains in Sicily: evidence of intersubtype recombinants by sequence analysis of gag, pol, and env genes

The molecular epidemiology of HIV-1 strains in Sicily (Italy) was phylogenetically investigated by the analysis of HIV-1 gag, pol, and env gene sequences from 11 HIV-1 non-B strains from 408 HIV-1-seropositive patients observed from September 2001 to August 2006. Sequences suggestive of recombination were further investigated by bootscanning analysis of various fragments. Overall, we identified several second-generation recombinant (SGRs) strains, which contained genetic material of CRF02_AG in at least one gene. Notably, three individuals were found to be infected with subsubtype A3, and one of them showed genetic recombination with subsubtype A4. The current study emphasizes the genetic analysis of gag, pol, and env genes as a powerful tool to trace the spread of complex HIV-1 recombinant forms, and highlight the genetic diversity of HIV-1 non-B strains in Italy.     

Identification and characterization of transmitted and early founder virus envelopes in primary HIV-1 infection

The precise identification of the HIV-1 envelope glycoprotein (Env) responsible for productive clinical infection could be instrumental in elucidating the molecular basis of HIV-1 transmission and in designing effective vaccines. Here, we developed a mathematical model of random viral evolution and, together with phylogenetic tree construction, used it to analyze 3,449 complete env sequences derived by single genome amplification from 102 subjects with acute HIV-1 (clade B) infection. Viral env genes evolving from individual transmitted or founder viruses generally exhibited a Poisson distribution of mutations and star-like phylogeny, which coalesced to an inferred consensus sequence at or near the estimated time of virus transmission. Overall, 78 of 102 subjects had evidence of productive clinical infection by a single virus, and 24 others had evidence of productive clinical infection by a minimum of two to five viruses. Phenotypic analysis of transmitted or early founder Envs revealed a consistent pattern of CCR5 dependence, masking of coreceptor binding regions, and equivalent or modestly enhanced resistance to the fusion inhibitor T1249 and broadly neutralizing antibodies compared with Envs from chronically infected subjects. Low multiplicity infection and limited viral evolution preceding peak viremia suggest a finite window of potential vulnerability of HIV-1 to vaccine-elicited immune responses, although phenotypic properties of transmitted Envs pose a formidable defense.     

河北省不同途径感染人群HIV-1基因亚型分析

目的了解河北省不同途径感染人群艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)亚型分布特点。方法从感染者的血浆样品中提取病毒RNA,反转录后采用套式聚合酶链反应(Nested PCR)扩增HIV-1 gag和env基因的部分片段,对PCR产物直接进行核苷酸序列测定,所获序列与各亚型国际参考株序列比对,进行系统进化树分析,确定基因型。结果对154份HIV-1感染者的样品进行扩增,得到了146份样品的HIV-1基因片段。发现6种HIV-1亚型和重组型,其中B’亚型61例(41.8%),CRF01_AE 59例(40.4%),CRF07_BC 16例(11.0%),CRF08_BC 6例(4.1%),C亚型和B01重组株各2例(1.4%)。血液途径传播为B’亚型,男男性行为传播以CRF01_AE和B’亚型为主。结论河北省不同途径感染人群HIV-1亚型分布具有明显的人群特征。血液途径传播者为单一B’亚型,性传播人群中亚型分布较广。