免疫磁珠荧光量子点技术检测结核分枝杆菌

目的 筛选结核分枝杆菌(MTB)免疫磁珠荧光量子点检测方法的最佳配体组合。方法 将本室筛选获得的MTB结合肽H8和商业化抗MTB多克隆抗体(Pab)与纳米磁珠偶联,多肽H8、商业化抗MTB单克隆抗体(Mab)和抗热休克蛋白65单克隆抗体(Mabc)与荧光量子点偶联,分别获得2种免疫磁珠和三种功能化荧光量子点,两两组合用于MTB检测,通过显微镜下观察荧光信号以及激光诱导荧光仪测量荧光值,判断不同配体组合与MTB的亲和性及特异性,获得最佳组合及其检测下限。结果 偶联Mabc的荧光量子点与免疫磁珠MNP-Pab组合检测MTB结果为阴性,其余5组均为阳性。测量荧光值,检测效果较好的两组组合分别是MNP-Pab+QD-H8和MNP-H8+QD-H8,阳性荧光值与阴性对照组比值分别是4.394和3.956,检测下限均是10²条菌/mL。6组组合与12种非结核分枝杆菌(NTM)的亲和性各异,而与3种非分枝杆菌均不结合。结论 MNP-Pab+QD-H8和MNP-H8+QD-H8 两组检测效果较好,与MTB亲和性较高,特异性较好,可作为MTB免疫磁珠荧光量子点检测技术的最佳配体组合。     

结核分枝杆菌的培养分离及耐药性分析

目的探讨结核杆菌分离培养及其耐药性。方法收集2006年1-11月本院就诊的疑似结核患者的标本,采用美国BD公司BACTEC MGIT960全自动分枝杆菌快速鉴定仪培养鉴定及药敏试验。结果从654份送检标本分离到结核分枝杆菌361株,结核杆菌耐药情况为链霉素29.4%、利福平17.5%、异烟肼32.1%、乙胺丁醇11.9%,多耐药结核杆菌为24.7%（89/361）。结论结核杆菌耐药情况非常严峻,必须加大力度狠抓结核病防治工作,加强合理用药,遏止多耐药结核杆菌的蔓延。     

不同痰标本处理方法对结核分枝杆菌罗氏培养检测结果的影响

目的 分析采用简单法和离心法处理痰标本,以及采用离心法处理痰标本时不同离心条件对罗氏培养检测结果的影响。方法 收集2010年9-11月北京市结核病胸部肿瘤研究所国家结核病临床实验室进行细菌学检查的疑似结核病患者痰标本198份,其中涂片阳性的痰标本99份,涂片阴性的痰标本99份。同时应用简单法和离心法对198份痰标本进行罗氏培养;离心法培养时分别采用5种不同的离心条件：3000×g离心15 min、3000×g离心8 min、3000×g离心25 min、2000×g离心15 min、5000×g离心15 min。结果 任何一种方法培养阳性即认定标本培养阳性,198份痰标本中共有126份培养阳性,其中97份来自涂阳痰标本,29份来自涂阴痰标本;简单法的阳性率为93.65%（118/126）,离心法最高的阳性率为96.03%（121/126）。简单法的平均初生长时间为（20±8.56） d,离心法（3000×g离心15 min）的平均初生长时间为（22±9.10）d,两者间差异有统计学意义（Z=-4.81, P<0.001）。在125份离心法培养阳性的标本中,3000×g离心15 min、3000×g离心8 min、3000×g离心25 min、2000×g离心15 min、5000×g离心15 min,5种不同离心条件下的培养阳性率分别为96.03%（121/126）、89.68%（113/126）、95.24%（120/126）、92.06%（116/126）和96.03%（121/126）。 结论 罗氏培养过程中,简单法的阳性率与离心法接近,但由于简单法操作简单、污染率较低,初生长时间较短,因而可能更符合临床的需要;应用离心法进行罗氏培养时,离心力或离心时间的变化可能会影响培养的阳性率。     

变色培养法检测结核分枝杆菌耐药性的研究

目的 建立一种快速、廉价、方便的结核分枝杆菌药敏方法，缩短结核分枝杆菌药敏试验时间。方法 采用变色培养法与绝对浓度法对照实验，验证新方法的灵敏度和特异性。结果 两试验可比性好，特异性为100％，新方法比传统绝对浓度法平均缩短时间2～3周。结论 变色培养法优于传统绝对浓度法，适用于在基层推广。     

酸性罗氏培养基加大豆汁快速培养结核分枝杆菌的研究

结核分枝杆菌生长缓慢，营养要求比较高。为了能较快地分离出结核分枝杆菌，国内外科研机构和临床试验室都在不断探索，改良、研制、合成组分不同的结核分枝杆菌分离培养基。我们发现用大豆汁取代蒸馏水制备的酸性罗氏培养基培养结核分枝杆菌生长较快，菌落典型，时间大为缩短，具有一定的实用价值，现报告如下。     

应用磁纳米捕获-PCR技术检测痰液结核分枝杆菌的研究

目的采用磁纳米捕获技术富集痰液中的结核分枝杆菌,以提高PCR检测的灵敏度,快速诊断结核病。方法以普通PCR为对照,采用磁纳米捕获技术富集187份结核和非结核呼吸系统疾病患者痰标本中的结核分枝杆菌,进行PCR检测。结果 152份肺结核患者痰标本41份(27.0%)涂片抗酸染色阳性,72份(47.4%)普通PCR检测阳性,126份(82.9%)磁纳米捕获-PCR检测阳性。35份非结核呼吸系统疾病患者,痰标本中抗酸染色均为阴性,1份普通PCR和磁纳米捕获-PCR检测均阳性,该患者临床诊断肺部感染合并陈旧性肺结核。结论采用磁纳米捕获技术富集痰液中的结核分枝杆菌,可显著提高PCR检测的灵敏度。     

噬菌体生物扩增法检测痰结核分枝杆菌的临床研究

目的评价噬菌体生物扩增(PhaB)法检测痰中结核分枝杆菌的应用价值。方法分别应用PhaB法、直接涂片法、集菌涂片法和BACTECMGIT960快速培养法检测2005年8月至10月沈阳市胸科医院53例疑诊肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌,并对检测结果进行比较。结果PhaB法、直接涂片法、集菌涂片法、BACTECMGIT960快速培养法检出阳性标本数分别为24,11,17和22份;以培养结果为评价标准,PhaB法的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为86.4%,83.9%,79.2%和89.7%;集菌涂片法和PhaB法联合检测的敏感性为90.9%,特异性为83.9%,阳性、阴性预测值分别为80.0%和92.9%。结论PhaB法检测痰中结核菌操作简便,具有较高的敏感性和特异性,可作为临床结核分枝杆菌的快速检测方法;PhaB法联合集菌涂片法进行检测可进一步提高敏感性,减少漏诊率。     

国产免疫磁珠分离细胞的方法学研究及初步应用

探讨以国产免疫磁珠进行细胞分离的方法,并评价直接包被法的特异性和敏感性及其在脐血和骨髓Ｃ＾＋３４细胞分离的应用,方法直接包被法、ＳＰＡ法、生物素－亲和素法。结果直接包被法、ＳＰＡ法和生物素－亲合素法均可有效地分离细胞,但以直接包被法最具优势,并证明其有较高特异性和敏感性。     

结核分枝杆菌感染的免疫学检测技术研究进展及临床应用现状

结核病仍然是全球和我国重点防控的传染病之一。尽管目前已将结核分枝杆菌核酸检测阳性纳入结核病确诊依据之一,但临床仍然存在大量病原学阴性的结核病患者,需要依靠免疫学检测技术进行辅助诊断。结核分枝杆菌入侵宿主后引发的免疫病理反应及抗结核免疫应答反应是开发免疫学检测技术的基础,参与免疫应答不同阶段的各类细胞、细胞因子、趋化因子、抗体等都是潜在的免疫学诊断靶标。近年来,基于这些靶标开发了多项免疫学检测新技术,包括γ-干扰素释放试验、新型结核菌素皮肤试验、干扰素诱导蛋白-10(IP-10)检测、γ-干扰素/白细胞介素-2(IFN-γ/IL-2)双因子检测等,为结核分枝杆菌感染和结核病的诊断带来了新的希望。此外,尚有一些处在研发过程的新型蛋白标识物、多功能淋巴细胞等也表现出较好的潜在诊断价值。笔者将对已用于临床的免疫学诊断技术的应用现状及优缺点进行综述,并探讨未来可能进入临床应用的标识物和其他潜在靶标。     

免疫磁珠法分离培养小鼠原代骨骼肌微血管内皮细胞及鉴定

目的 旨在建立一种有效分离、培养、扩增小鼠原代骨骼肌微血管内皮细胞（MMECs）的方法。方法 采用胶原酶消化法、差速贴壁法以及免疫磁珠法分离纯化骨骼肌微血管内皮细胞,贴壁培养进行体外扩增。利用相差显微镜观察培养细胞的形态、MTT法测定细胞的生长情况、CD31免疫荧光染色对其表型进行鉴定、流式细胞术鉴定细胞纯度。结果 实验成功获取小鼠骨骼肌微血管内皮细胞,小鼠原代骨骼肌微血管内皮细胞在培养24 h后迅速贴壁,(3～6) d内迅速生长,呈梭形,单层排列,培养(6～8) d可长满培养皿底,呈铺路石样排布。MTT法测得培养第2代小鼠骨骼肌微血管内皮细胞的生长曲线呈倒“S”形。流式细胞术检测经差速贴壁联合磁珠纯化的CD31+的MMECs细胞可达97%以上。结论 成功建立了一种简单、高效的分离小鼠骨骼肌微血管内皮细胞的方法,为开展与骨骼肌微血管内皮细胞相关研究提供了良好的实验方法和技术手段。     

免疫磁珠捕获法分离抗酸杆菌的实验研究

目的建立免疫磁珠捕获法,用于分离抗酸杆菌,以提高痰菌阴性肺结核的诊断率。方法选取浸润型肺结核患者19例作为实验组,对照组6例,为肺部普通细菌感染者。受检者留取痰液,分别做直接涂片抗酸染色检查及免疫磁珠分选后抗酸染色检查。结果 19例浸润型肺结核患者中,7例痰涂片抗酸染色检查阳性,免疫磁珠分选后抗酸染色仍阳性;在12例痰涂片阴性肺结核患者中,经免疫磁珠分选后6例抗酸染色阳性。6例普通细菌性肺炎患者经免疫磁珠分选后抗酸染色均为阴性。结论用免疫磁珠捕获法分离抗酸杆菌能显著提高痰菌阴性肺结核的诊断效率。     

痰结核菌培养检出时间与肺结核治疗效果关系探讨

目的　探讨痰结核菌培养检出时间 (DTP)和肺结核病人抗结核疗效之间的关系。方法 对 56例住院肺结核病人,于疗程 0、7、14、30及 60d留痰行快速痰结核菌培养,记录培养阳性检出时间并追踪临床疗效以评价两者关系。结果 抗结核治疗后 40例病人对治疗显现良好反应同时其结核杆菌在培养管中的DTP逐渐延长。 16例痰菌仍阳性病人,其结核杆菌在培养管中的DTP没有变化或增长很少。结论 在预测治疗效果上DTP与肺结核治疗反应关系密切,可能是临床预测病人疗效的一种方法。     

结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的二重PCR快速检测

目的建立一种鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的二重PCR快速检测方法。方法根据已发表的结核分枝杆菌23SrRNA和牛分枝杆菌特殊基因序列,设计并合成了两对可扩增结核分枝杆菌和牛分枝杆菌特异性基因片段的引物,建立二重PCR快速检测结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的方法,测定其特异性和敏感性,并对238份牛临床样品的DNA分别进行了检测。结果该方法对牛分枝杆菌能扩增出838bp和631bp的特异性基因片段,结核分枝杆菌只扩增出838bp基因片段而扩增不出631bp的特异性基因片段,对参试的其它牛菌株的DNA扩增结果均为阴性。敏感度检测可达到50pg的DNA含量。临床样品检测结核分枝杆菌阳性有21份,牛分枝杆菌阳性有1份,其它临床样品扩增结果全部为阴性。结论本方法可作为牛分枝杆菌的快速检测和流行病学调查的工具。     

二代测序技术检测临床痰标本中结核分枝杆菌的初步评价CSCD

目的:评价二代测序(NGS)技术对临床痰标本中结核分枝杆菌的检测效能。方法:采用前瞻性研究方法,选取北京市疾病预防控制中心(北京结核病控制研究与防治所)2021年8—10月接诊的49例疑似肺结核患者痰标本,同时进行抗酸杆菌涂片镜检(简称“涂片”)、分枝杆菌培养(包含罗氏培养和MGIT 960液体培养;简称“培养”)、GeneXpert MTB/RIF(简称“Xpert”)和NGS技术检测结核分枝杆菌,比较4种方法检测不同分类患者阳性率差异,并以最终临床诊断为参照标准,评价4种检测方法的检测效能。结果:49例疑似肺结核患者中,最终肺结核诊断者40例(包括病原学确诊患者25例、病原学阴性临床诊断患者15例),非肺结核患者9例(包括肺炎6例,非结核分枝杆菌感染、慢性阻塞性肺疾病和哮喘各1例)。NGS技术检测49例疑似肺结核患者的阳性率[69.4%(34/49)]明显高于涂片[44.9%(22/49)]、培养[51.0%(25/49)]和Xpert[49.0%(24/49)],差异均有统计学意义(χ^(2)=17.614、17.018、20.753,P值均=0.000);检测病原学阴性肺结核患者的阳性检出率为46.7%(7/15)。以临床诊断结果为参照标准,涂片、培养、Xpert、NGS技术对49例疑似患者痰标本的检测敏感度分别为55.0%(22/40)、60.0%(24/40)、60.0%(24/40)、80.0%(32/40),特异度分别为9/9、8/9、9/9、7/9,一致率分别为63.3%(31/49)、65.3%(32/49)、67.3%(33/49)、79.6%(39/49),Kappa值分别为0.310、0.297、0.355、0.459。结论:以临床诊断为参考标准,NGS技术检测的敏感度最高,与临床诊断的一致性也最高,能够快速、高效检测痰标本中的结核分枝杆菌,可早期辅助诊断疑似肺结核患者。     

二代测序技术检测临床痰标本中结核分枝杆菌的初步评价

目的 评价二代测序(NGS)技术对临床痰标本中结核分枝杆菌的检测效能。方法采用前瞻性研究方法,选取北京市疾病预防控制中心(北京结核病控制研究与防治所)2021年8—10月接诊的49例疑似肺结核患者痰标本,同时进行抗酸杆菌涂片镜检(简称“涂片”)、分枝杆菌培养(包含罗氏培养和MGIT 960液体培养;简称“培养”)、GeneXpert MTB/RIF(简称“Xpert”)和NGS技术检测结核分枝杆菌,比较4种方法检测不同分类患者阳性率差异,并以最终临床诊断为参照标准,评价4种检测方法的检测效能。结果49例疑似肺结核患者中,最终肺结核诊断者40例(包括病原学确诊患者25例、病原学阴性临床诊断患者15例),非肺结核患者9例(包括肺炎6例,非结核分枝杆菌感染、慢性阻塞性肺疾病和哮喘各1例)。NGS技术检测49例疑似肺结核患者的阳性率[69.4%(34/49)]明显高于涂片[44.9%(22/49)]、培养[51.0%(25/49)]和Xpert[49.0%(24/49)],差异均有统计学意义(χ²=17.614、17.018、20.753,P值均=0.000);检测病原学阴性肺结核患者的阳性检出率为46.7%(7/15)。 以临床诊断结果为参照标准,涂片、培养、Xpert、NGS技术对49例疑似患者痰标本的检测敏感度分别为55.0%(22/40)、60.0%(24/40)、60.0%(24/40)、80.0%(32/40),特异度分别为9/9、8/9、9/9、7/9,一致率分别为63.3%(31/49)、65.3%(32/49)、67.3%(33/49)、79.6%(39/49),Kappa值分别为0.310、0.297、0.355、0.459。结论以临床诊断为参考标准,NGS技术检测的敏感度最高,与临床诊断的一致性也最高,能够快速、高效检测痰标本中的结核分枝杆菌,可早期辅助诊断疑似肺结核患者。     

显微镜观察药敏法检测结核分枝杆菌耐药性

目的评价显微镜观察药敏法(microscopic observation drug susceptibility,MODS)检测结核分枝杆菌临床分离株异烟肼(INH)和利福平(RFP)耐药性的可行性。方法使用MODS技术对本医院的共201株结核菌临床分离株分别进行INH、RFP的耐药性检测,并与罗氏比例法作比较。结果 MODS法检测平均时间为8d,以罗氏比例法为金标准,INH的灵敏度和特异性分别为98.5%和100.0%,RFP的灵敏度和特异性分别为99.3%和100%。结论 MODS法检测结核分枝杆菌对异烟肼和利福平的耐药性具有成本低、快捷、操作简便、准确等优点,为结核耐药检测提供了一种较好的方法 。     

昆明地区结核分枝杆菌标本培养检测及耐药情况分析

目的 了解昆明地区结核病患者和疑似结核病患者中Mtb培养检测情况和耐药情况。方法 收集1928例结核病患者和疑似结核病患者2046份标本,包括痰、支气管刷检物或肺泡灌洗液、胸腹腔积液、脑脊液、尿液、脓液、其他标本（淋巴液、心包积液、分泌物、穿刺液等）。使用BACTEC MGIT 960全自动分枝杆菌快速培养仪和中性罗氏培养基进行培养,分别记录初始抗酸涂片结果,BACTEC MGIT 960全自动分枝杆菌快速培养仪、中性罗氏培养基报告阳性后的涂片结果。分别对培养时间、培养阳性率、培养污染率及5种一线抗结核药物（S、INH、RFP、EMB和PZA）的耐药情况作统计分析。结果 BACTEC MGIT 960全自动分枝杆菌快速培养仪和中性罗氏培养基阳性率分别为38.2%（782/2046）和32.6%（666/2046）;结核诊断率37.3%（719/1928）;抗结核一线药耐药率为41.9%（212/506）,耐多药率（至少同时耐INH和RFP）为20.0%（101/506）。结论 昆明地区结核病患者对一线抗结核药物耐药情况严重。     

Toll样受体与结核病的免疫反应

结核分枝杆菌是结核病的致病菌.目前机制尚未完全明确.Toll样受体(Toll-like recepTIR)能够感知结核杆菌感染,同时对先天免疫和获得性免疫都具有调控作用.与抗结核有关的主要是TLR2、TIR9和TLR4.但是,结核杆菌也能够利用TLR逃避免疫监视,促进慢性感染.对TIR的研究有助于阐明结核分枝杆菌诱导先天免疫反应机制,并为治疗方法提供新的思路.