阿托伐他汀对Aβ损伤的神经元细胞的保护作用

目的:探讨阿托伐他汀(Ato)对β样淀粉蛋白25~35(Aβ25~35)诱导的神经元细胞活力改变、氧化指标的影响。方法:选用SD大鼠脑皮层组织建立不同浓度的Ato干预的AD细胞模型。通过MTS法测定神经元细胞活力,通过硫代巴比妥法和WST-1法分别测定神经元细胞培养基的丙二醛(MDA)含量和SOD活力。结果:与空白对照组比较,不同浓度Ato组各项指标差异无统计学意义(P>0.05);与空白对照组和不同浓度Ato组比较,Aβ组、Aβ+不同浓度Ato组细胞活力降低,MDA含量升高,SOD活性降低,差异有统计学意义(P<0.05);与Aβ组比较,Aβ+不同浓度Ato组神经元细胞活力上升,MDA含量下降,SOD活性上升,差异有统计学意义(P<0.05);Aβ+1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L Ato 3组间比较,Aβ+10μmol/L Ato组神经元细胞活力最高,MDA含量最低,SOD活性最高,Aβ+5μmol/L Ato组次之,Aβ+1μmol/L Ato组最低。结论:阿托伐他汀可以减轻Aβ25~35造成的细胞氧化损伤,保护神经元细胞。     

HD、HP+HD、HDF三种血液净化治疗慢性维持性血液透析患者慢性并发症的疗效分析

目的:血液透析(HD)、血液透析联合灌流(HP+HD)、血液透析滤过(HDF)三种血液净化方式治疗慢性维持性血液透析(MHD)患者慢性并发症的疗效。方法:选取180例MHD患者,均采取基础治疗法,然后随机分成HD(对照组)、HP+HD(A组)、HDF(B组)三组进行治疗,均持续3个月,对比三组患者β2微球蛋白(β2-MG)、营养状态、并发症、C-反应蛋白、ALB、钙磷乘积、补体C_3,血常规等指标情况及治疗费用。结果:A、B组治疗后β_2-MG与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),A组患者治疗后β_2-MG明显低于B组,差异有统计学意义(P<0.05);三组患者治疗前后血常规WBC、RBC、PLT对比差异均无统计学意义(P>0.05);A、B组营养状态、BMI、ALB、Ca P乘积均高于对照组,并发症低于对照组,A组并发症少于B组,差异均有统计学意义(P<0.05);A组、B组治疗后C反应蛋白与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),A组低于B组,差异有统计学意义(P<0.05);三组患者总费用对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:HP+HD、HD+HDF均可缓解MHD远期并发症,HD+HP对比HDF具有明显优势,更可以调节内环境,临床应用价值较高。     

高通量筛选酸敏感离子通道1a抑制剂研究

目的 建立体外稳定过表达酸敏感离子通道1a（ASIC1a）的Fisher大鼠甲状腺上皮细胞（FRT细胞）,采用Ca2+敏感荧光染料Fura-2/AM和细胞毒性检测〔乳酸脱氢酶（LDH）释放法〕测定ASIC1a活性,探讨高通量筛选ASIC1a抑制剂的可行性。方法 2014年1月-2016年2月,利用分子生物学方法,构建ASIC1a过表达载体pcDNA3.1/myc-His-mASIC1a,通过细胞转染技术建立了稳定过表达ASIC1a的Fisher大鼠FRT细胞。将细胞分成两组,对照组（FRT细胞）和实验组（稳定过表达ASIC1a的FRT细胞）,并分别未负载和负载Ca2+敏感荧光染料Fura-2/AM,采用酶标检测仪测定双波长（340 nm和380 nm）的值,计算F340/F380。对照组和实验组细胞经不同pH值酸液（pH值7.5、7.0、6.5、6.0、5.5）刺激后,采用酶标检测仪测定450 nm波长处LDH释放量。结果 对照组与实验组未负载Fura-2/AM细胞F340/F380比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;实验组负载Fura-2/AM细胞F340/F380较对照组升高（P＜0.05）;对照组和实验组负载Fura-2/AM细胞F340/F380较未负载Fura-2/AM细胞升高（P＜0.05）。pH值6.5、6.0、5.5时,实验组细胞LDH释放量大于对照组（P＜0.05）;对照组和实验组细胞不同pH值时LDH释放量比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 本研究成功建立稳定过表达ASIC1a的FRT细胞,Ca2+敏感荧光染料Fura-2/AM和细胞毒性检测（LDH释放法）两种方法测定ASIC1a活性,使高通量筛选ASIC1a抑制剂成为可能,为发现高选择性和高活性的天然小分子ASIC1a抑制剂奠定了基础。     

糖化β-淀粉样蛋白对阿尔茨海默病样大鼠认知功能的影响

目的探讨糖化β-淀粉样蛋白(Aβ-AGE)对阿尔茨海默病样大鼠认知功能的影响。方法将β-淀粉样蛋白(Aβ)与甲基乙二醛于37℃下温育1个月合成Aβ-AGE。将40只Sprague Dawley大鼠随机分为Aβ组、Aβ+小鼠单克隆高级糖化终产物受体抗体(Anti-RAGE)组、Aβ-AGE组、Aβ-AGE+Anti-RAGE组,每组10只。行立体定向左侧侧脑室注射制备阿尔茨海默病样模型,其中Aβ组大鼠给予Aβ5μg,Aβ+Anti-RAGE组大鼠给予Aβ5μg和RAGE抗体Anti-RAGE 50μg,Aβ-AGE组大鼠给予Aβ-AGE 5μg,Aβ-AGE+Anti-RAGE组大鼠给予Aβ-AGE 5μg和Anti-RAGE 50μg。注射后第2～7天进行Morris水迷宫实验,记录大鼠寻找隐匿平台的潜伏期;注射后第9天,记录各组大鼠穿越平台次数和目标象限停留时间; Western blot法检测各组大鼠海马组织中高级糖化终产物受体(RAGE)蛋白的表达,免疫组织化学染色法检测各组大鼠大脑皮层中RAGE的表达。结果在注射后第2天,各组大鼠潜伏期比较差异无统计学意义(F=3. 767,P> 0. 05)。注射后第3～7天,各组大鼠潜伏期比较差异均有统计学意义(F=9. 167、25. 050、56. 980、62. 380、122. 200,P <0. 05); Aβ-AGE组大鼠潜伏期显著长于Aβ组(P <0. 05),Aβ+AntiRAGE组大鼠潜伏期显著短于Aβ组(P <0. 05),Aβ-AGE+Anti-RAGE组大鼠潜伏期显著短于Aβ-AGE组(P <0. 05)。注射后第9天,各组大鼠穿越平台次数和目标象限停留时间比较差异有统计学意义(F=12. 930、13. 560,P <0. 05); Aβ-AGE组大鼠穿越平台次数和目标象限停留时间显著短于Aβ组(P <0. 05),Aβ+Anti-RAGE组大鼠穿越平台次数和目标象限停留时间显著长于Aβ组(P <0. 05),Aβ-AGE+Anti-RAGE组大鼠穿越平台次数和目标象限停留时间显著长于Aβ-AGE组(P <0. 05)。注射后第9天,各组大鼠海马组织中RAGE蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=8. 626,P <0. 05); Aβ-AGE组大鼠海马组织中RAGE蛋白相对表达量显著高于Aβ组(P <0. 05),Aβ+Anti-RAGE组大鼠海马组织中RAGE蛋白相对表达量与Aβ组比较差异无统计学意义(P> 0. 05),Aβ-AGE+AntiRAGE组大鼠海马组织中RAGE蛋白相对表达量显著低于Aβ-AGE组(P <0. 05)。免疫组织化学染色结果显示,各组大鼠大脑皮层中RAGE阳性细胞数比较差异有统计学意义(F=76. 370、P <0. 01); Aβ-AGE组大鼠大脑皮层中RAGE阳性细胞数显著高于Aβ组(P <0. 01),Aβ+Anti-RAGE组大鼠皮层中RAGE阳性细胞数显著低于Aβ组(P <0. 01); Aβ-AGE+Anti-RAGE组大鼠皮层中RAGE阳性细胞数显著低于Aβ-AGE组(P <0. 01)。结论 Aβ-AGE可能通过激活RAGE信号转导通路介导加重AD样大鼠的认知功能障碍,Aβ-AGE和RAGE可能成为治疗AD的新靶点。     

Koch三角心肌细胞瞬间外向钾电流电生理学特征研究

目的 探讨Koch三角区心肌细胞瞬时外向钾电流(Ito)电生理学特征.方法 采用单细胞膜片钳技术研究家兔Koch三角区心肌细胞Ito电流-电压及电流密度-电压关系曲线、稳态激活以及稳态失活特征.结果 ①起搏细胞(PC)、过渡细胞α(TCα)、过渡细胞β(TCβ)、心房肌细胞(AC)和浦肯野样细胞(PL) +20 mV时的最大峰值电流(pA)幅值及峰值电流密度(pA/pF)任意两类细胞间差异均有统计学意义(P<0.05);除TCα、TCβ与PL相比外(P>0.05),各类细胞两两比较电流密度(pA/pF)差异均有统计学意义(P<0.05).②五种细胞稳态激活曲线之半数激活电压(VmIto1/2,mV)在各组细胞间差异均有统计学意义(P<0.05).但TCα与PC以及TCβ与AC和PL相比差异无统计学意义(P>0.05).③五种细胞稳态失活曲线之半数失活电压(VhIto1/2,mV)TCα、TCβ与PC和PL分别相比以及PC、AC、PL间相比差异均有统计学意义(P<0.05);TCα与TCβ、TCβ与PC、AC和PL以及PC与PL之间相比差异均有统计学意义(P<0.05),但TCα与PC、AC相比差异无统计学意义(P>0.05).结论 家兔Koch三角区各种心肌细胞之Ito存在异质性;不同心肌细胞间又具有相对特殊性及Ito梯度.     

颞叶癫痫患者治疗前后海马代谢改变的相关性研究

目的：探讨颞叶癫痫患者治疗前后海马代谢变化情况。方法：入组55名颞叶癫痫患者和20名健康受试者，分析颞叶癫痫患者海马NAA/(Cr+Cho)值在治疗前后的变化情况。结果：治疗前，癫痫组患侧海马NAA/(Cr+Cho)值低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05),对侧海马NAA/(Cr+Cho)值与对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05);治疗后，癫痫组患侧、对侧分别与对照组海马NAA/(Cr+Cho)值比较，差异均无统计学意义(P>0.05);与治疗前比较，癫痫组治疗后患侧海马头、海马体和海马NAA/(Cr+Cho)值升高(P<0.05);治疗后，癫痫治疗无效组患侧海马头NAA/(Cr+Cho)值低于有效组(P<0.05);治疗前，癫痫组癫痫发作频率与患侧海马NAA/(Cr+Cho)值呈负相关。结论：癫痫患者海马的异常代谢可在有效抗癫痫治疗后恢复至正常水平，其中海马头代谢改变可能对于癫痫控制情况最为敏感。     

出生前后慢性铝暴露对大鼠海马长时程增强及细胞内Ca2+浓度的影响

目的 研究出生前后慢性铝暴露对年轻大鼠海马长时程增强(LTP)及细胞Ca2+浓度的影响,进一步探讨铝损害学习与记忆的突触机制.方法 对照组、0.2%Al组和0.4%Al组大鼠从孕期始分别自由饮用蒸馏水、Al3+浓度为15 mmol/L和30 mmol/L的AlCl3水溶液.采用细胞外微电极记录法测定海马LTP;以Fura-2/AM为荧光指示剂,检测实施LTP诱导后海马神经元内Ca2+浓度的变化.结果 与对照组相比,铝暴露组群体锋电位平均相对幅值增强率均明显下降(P<0.01),海马细胞内Ca2+浓度降低(P<0.05).2个铝暴露组间Ca2+浓度的差异也有统计学意义(P<0.05).结论 出生前后慢性铝暴露损害了海马LTP的诱导与维持的机制之一可能是Ca2+浓度的降低.     

乌鸡白凤丸有效成分对Aβ1-40诱导的电压门控性钙通道电流增强作用的影响

①目的研究β-淀粉样蛋白(Aβ1-40)对大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤(PC12)细胞电压门控性钙通道(VGCC)电流的影响,以及乌鸡白凤丸有效成分(BFP)对此效应的干预作用.②方法将PC12细胞分成空白对照组、Aβ1-40组、BFP组、Aβ1-40+BFP组,分别应用培养液、含1μmol/L Aβ1-40的培养液、含100 mg/L BFP的培养液以及含1 μmol/L Aβ1-40和100 mg/L BFP的培养液进行孵育6 h.在膜片钳全细胞记录模式下,记录各组细胞VGCC电流峰值,计算细胞的电流密度(电流值/膜电容),作为Ca2+内流指标.③结果 Aβ1-40组VGCC平均电流密度为(45.26±29.29)pA/pF,对照组为(23.00±21.35)pA/pF,两组相比,差异有极显著性(t=286, P<0.01);Aβ1-40+BFP组的平均电流密度为(12.67±11.55)pA/pF,与Aβ1-40组比较,差异有显著意义(F＝29.326,q＝7.554,P<0.01).④结论 Aβ1-40能够促进VGCC开放,使Ca2+内流增多,引起细胞损伤;BFP能有效抑制Aβ1-40所引起的VGCC电流增强效应,在一定程度上避免了细胞内钙超载,从而阻止Aβ1-40的毒性作用.     

针药结合干预大鼠局灶性脑缺血组织ATP酶活性及能量代谢的研究

目的探讨针药结合干预大鼠局灶性脑缺血组织ATP酶活性及能量代谢的研究。方法将大鼠大脑中动脉阻塞(M CAO)持续脑缺血模型为研究对象,实验设假手术组、模型组、血塞通组、针刺组、针药组,观察术后4、24、72 h的神经功能缺损评分,比较各组的脑梗死体积,用分光光度法检测钠钾离子泵(Na ,K -ATPase)、钙离子泵(Ca2 -ATPase)、镁离子泵(M g2 -ATPase)的活性,用高效液相色谱法检测三磷酸腺苷(ATP)、总腺苷酸(TAN)的含量。结果①各治疗组梗死灶体积明显小于模型组(P<0.01);针药组梗死灶体积明显小于血塞通组、针刺组(P<0.01)。②除假手术组外,各组动物从4h至72h神经功能缺损评分均有所降低,其中针药组神经功能缺损评分较针刺组低(P<0.01)。③假手术组、治疗组Na ,K -ATPase,Mg2 -ATPase,Ca2 -ATPase活性均较模型组高(P<0.05);针刺组与假手术组比较差异有统计学意义(P<0.05),针药组、血塞通组与假手术组比较差异无统计学意义(P>0.05)。④模型组、血塞通组、针刺组ATP均较假手术组低(P<0.01),针药组ATP值比假手术组低,但差异无统计学意义(P>0.05),与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);针药组ATP较血塞通组、针刺组高(P<0.05)。模型组、血塞通组TAN较假手术组和针药组低(P<0.05)。结论血塞通组、针刺组、针药组均能改善急性脑缺血大鼠神经功能。针药组优于针刺组和血塞通组。     

人参皂苷Rg3与顺铂对高转移人卵巢癌细胞系HO-8910PM细胞周期和转移抑制的影响

目的 探讨人参皂苷(Rg3)对高转移人卵巢癌细胞系HO-8910PM的体外抑制杀伤作用.方法 用流式细胞仪和基底膜侵袭实验观察不同浓度的Rg3和/或顺铂(DDP)对高转移人卵巢癌细胞系HO-8910PM细胞的DNA含量、细胞转移抑制和细胞形态的影响.结果 细胞DNA含量分析示:在G0/G1期HO-8910PM对照组与Rg3组、DDP组、Rg3+DDP组比较差异均有统计学意义(F=54.416,P<0.01),低浓度与高浓度组差异有统计学意义(P<0.05);S期对照组除与低浓度Rg3组外其余各组比较差异均有统计学意义(F=67.810,P<0.01),低浓度Rg3组与高浓度Rg3组比较差异有统计学意义(P<0.05),;G0/G1期和G2/M期DDP组与Rg3+DDP组比较差异均统计学意义(均P<0.05).基底膜侵袭实验结果示:对照组分别与中浓度Rg3组、高浓度Rg3组、DDP组、Rg3+DDP组比较差异均有统计学意义(F=15.052,P<0.01);低浓度与中、高浓度Rg3组比较差异有统计学意义(均P<0.01).结论 中、高浓度的Rg3和Rg3+DDP联合用药可以产生较好的抑制肿瘤细胞分化和转移作用并呈一定的剂量依赖性,Rg3与DDP的联合用药可能会产生药效增强作用.     

高通量血液透析治疗尿毒症患者的临床效果

目的 探讨高通量血液透析治疗尿毒症患者的临床效果.方法 78例行维持性血液透析的脓毒症患者分为高通量透析组(HFHD)38例及低通量透析组(LFHD)40例.比较两组患者入组前及治疗1年后血钙(Ca2+)、血磷(P3+)、β2微球蛋白(β2-MG)、甲状旁腺素(PTH)水平的改变,并比较患者高血压、骨关节疼痛、皮肤瘙痒等症状发生率及生活能力改善情况.结果 两组治疗前β2-MG、PTH、Ca2+、P3+比较,差异无统计学意义(P＞0.05);治疗1年后,LFHD组β2-MG、PTH、Ca2+、P3+水平与治疗前比较,差异无统计学意义(P＞0.05);但HFHD组β2-MG、PTH、P3+水平较治疗前降低,且低于LFHD组(P＜0.05),两组Ca2+水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).治疗前两组高血压、骨关节疼痛、皮肤瘙痒发生率比较,差异无统计学意义(P＞0.05);治疗1年后,HFHD组高血压、骨关节疼痛、皮肤瘙痒发生率较治疗前降低,且低于LFHD组(P＜0.05).治疗前两组的生活能力比较,差异无统计学意义(P＞0.05);治疗1年后,HFHD组患者生活能力较前改善,且优于LFHD组(P＜0.05).结论 HFHD能改善钙磷代谢紊乱,清除β2-MG、PTH等较大分子的毒素物质,对患者生活质量的改善优于LFHD.     

钾通道阻断剂四乙铵对氧葡萄糖剥夺诱导大鼠海马神经元死亡的保护作用

目的研究钾通道阻断剂四乙铵(TEA)对氧葡萄糖剥夺(OGD)诱导的培养海马神经元死亡的保护作用。方法培养12 d的海马神经元培养基更换为Earle′s平衡盐溶液(EBSS)后置于37℃三气缺氧(N2:CO2:O2=94%:5%:1%)培养箱内培养,4 h后恢复正常条件培养,同时在培养液内加入不同浓度钾通道阻断剂TEA,继续培养24 h后噻唑蓝(MTT)比色法检测神经元死亡情况。结果OGD组、OGD+不同浓度TEA组与对照组比较,海马神经元细胞存活率明显降低(P<0.05);OGD+10μmol.L-1TEA组和OGD+500μmol.L-1TEA组与OGD组比较,海马神经元细胞存活率明显升高(P<0.05);而OGD+1μmol.L-1TEA组和OGD+5 mmol.L-1TEA组与OGD组比较,海马神经元细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05)。结论钾通道阻断剂TEA能保护OGD诱导的培养海马神经元免于死亡,提示某些类型的钾通道活动增强可能参与了OGD诱导的培养海马神经元死亡。     

大鼠肝缺血/再灌注损伤时心肌组织能量代谢的变化

目的:探讨大鼠肝缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusioninjury,I/RI)过程中心肌能量代谢的变化及其机制。方法:选健康雄性Wistar大鼠48只,建立肝脏缺血/再灌注动物模型,每组8只,共分6组。测肝组织LDH及心肌组织LDH、CPK、ATP酶活性。结果:在肝缺血/再灌注过程中,肝组织LDH在缺血组升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);随着再灌注时间的延长,LDH活性逐渐降低,I/R2h组与I/R1h组、I/R4h组与I/R2h组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。心肌组织LDH缺血组、I/R组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),I/R1h组升高与I/R组比较差异有统计学意义(P<0.05),I/R4h组与I/R1h组比较差异有统计学意义(P<0.05)。心肌组织CPK在缺血组、I/R组、I/R1h组虽有波动,但无统计学意义(P>0.05);随着再灌注时间延长开始下降,I/R2h组与I/R1h组、I/R4h组与I/R2h组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。心肌组织匀浆Na+-K+ATP酶和Ca2+ATP酶在I组、I/R组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);I/R2h组降低,与I/R组比较差异有统计学意义(P<0.05);Na+K+ATP酶I/R4h组降低,与I/R1h组比较差异有统计学意义(P<0.05),与I/R2h组比较差异无统计学意义(P>0.05);而Ca2+ATP酶在I/R4h组降低,与I/R1h组、I/R2h组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结     

过表达miRNA-224骨髓间充质干细胞对卵巢颗粒细胞增殖和氧化应激的影响

目的:探讨过表达miRNA-224骨髓间充质干细胞(BMSCs)对卵巢颗粒细胞的作用及其机制。方法:构建miRNA-224慢病毒载体,转染BMSCs,qRT-PCR法验证转染效率。将转染后的BMSCs与卵巢颗粒细胞共培养后分为六组:对照组、BMSCs组、miRNA-224-BMSCs组、顺铂组、BMSCs+顺铂组和miRNA-224-BMSCs+顺铂组。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)试剂盒检测氧化应激水平。结果:qRT-PCR法结果表明,转染后BMSCs miRNA-224的表达显著上调,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,顺铂组细胞存活率显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),而与顺铂组相比,BMSCs+顺铂组和miRNA-224-BMSCs+顺铂组细胞存活率显著升高,且相较于BMSCs+顺铂组,miRNA-224-BMSCs+顺铂组细胞存活率进一步升高,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,顺铂组细胞MDA和ROS水平升高,差异有统计学意义(P<0.05),而与顺铂组相比,BMSCs+顺铂组和miRNA-224-BMSCs+顺铂组细胞MDA和ROS水平显著降低,且相较于BMSCs+顺铂组,miRNA-224-BMSCs+顺铂组细胞MDA和ROS水平进一步降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:过表达miRNA-224的BMSCs可明显降低顺铂诱导的卵巢颗粒细胞凋亡,其机制与氧化应激有关。     

丁苯酞对β淀粉样蛋白诱导的U87细胞自噬性死亡的影响

目的 观察丁苯酞对β淀粉样蛋白(Aβ1-42)处理后U87细胞自噬性死亡的影响.方法 方法将U87细胞分为Aβ组、Aβ+丁苯酞组和对照组(空白对照).Aβ组细胞用Aβ1-42(20 μmol/L)处理24 h;Aβ+丁苯酞组细胞用丁苯酞(10μmol/L)预处理0.5h后再加入Aβ1-42(20 μmol/L)处理24 h.采用MTT法测定细胞活力,检测Caspase 3活性,采用CM-H2 DCFDA检测胞内活性氧(ROS)水平,Western blotting检测LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ蛋白表达.结果 与对照组比较,Aβ组U87细胞活力显著下降(P＜0.01);Aβ+丁苯酞组U87细胞活力显著高于Aβ组(P＜0.05).对照组、Aβ组和Aβ+丁苯酞组之间Caspase 3活性的差异均无统计学意义(P＞0.05).与对照组比较,Aβ组U87细胞ROS水平显著升高(P＜0.01);Aβ+丁苯酞组U87细胞ROS水平显著低于Aβ组(P＜0.01).与对照组比较,Aβ组U87细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著升高(P＜0.01);Aβ+丁苯酞组U87细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著低于Aβ组(P＜0.01).结论 丁苯酞通过抑制ROS介导的自噬性死亡发挥神经保护作用.     

CircHIPK3低表达调控miR-124/STAT3轴抑制Aβ诱导的海马神经元凋亡的机制研究

目的探讨环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circ HIPK3)低表达对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导的海马神经元凋亡的影响。方法采用生物信息学软件预测和双荧光素酶报告基因实验验证微小RNA-124(mi R-124)与HIPK3、信号转导和转录激活因子3(STAT3)的靶向关系;将体外培养的原代海马神经元分为对照组(正常培养)、Aβ组(给予Aβ刺激)、Aβ+si STAT3-NC组(转染si STAT3-NC后给予Aβ刺激)、Aβ+si HIPK3组(转染si HIPK3后给予Aβ刺激)、Aβ+si HIPK3+antimi R-NC组(共转染si HIPK3和inhibitor-NC后给予Aβ刺激)、Aβ+si HIPK3+antimi R-124组(共转染si HIPK3和mi R-124 inhibitor后给予Aβ刺激)、Aβ+si HIPK3+antimi R-124+si STAT3-NC组(共转染si HIPK3、mi R-124 inhibitor和si STAT3-NC后给予Aβ刺激)和Aβ+si HIPK3+antimi R-124+si STAT3组(共转染si HIPK3、mi R-124 inhibitor和si STAT3后给予Aβ刺激)。采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测HIPK3和mi R-124表达水平,免疫印迹法(Western blot)检测STAT3蛋白表达水平,噻唑蓝(MTT)法和流式细胞仪分别检测海马神经元存活率和凋亡率,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性检测试剂盒检测Caspase-3活性。结果生物信息学软件预测、双荧光素酶报告基因实验证实HIPK3可与mi R-124靶向结合;生物信息学软件预测、双荧光素酶报告基因实验和Western blot实验证实,mi R-124可靶向调控STAT3蛋白表达。与对照组比较,Aβ组海马神经元中HIPK3表达水平、STAT3蛋白表达水平、凋亡率和Caspase-3活性明显升高,而海马神经元存活率和mi R-124表达水平明显降低(P0.05);与Aβ+si HIPK3-NC组比较,Aβ+si HIPK3组中上述各指标明显逆转(P0.05);与Aβ+si HIPK3+antimi R-NC组比较,Aβ+si HIPK3+antimi R-124组中各指标呈明显变化(P0.05),且趋势与Aβ+si HIPK3组相反;与Aβ+si HIPK3+antimi R-124+si STAT3-NC组比较,Aβ+si HIPK3+antimi R-124+si STAT3组中各指标呈明显变化(P0.05),且趋势与Aβ+si HIPK3+antimi R-124组相反;而Aβ组与Aβ+si HIPK3-NC组之间、Aβ+si HIPK3组与Aβ+si HIPK3+antimi R-NC组之间以及Aβ+si HIPK3+antimi R-124组与Aβ+si HIPK3+antimi R-124+si STAT3-NC组之间各指标差异无统计学意义(P0.05)。结论 Circ HIPK3低表达可抑制Aβ诱导的海马神经元凋亡,其作用机制与调控mi R-124/STAT3轴有关。     

降钙素原在大鼠脓毒症引起认知功能障碍中的关系研究

目的:探讨降钙素原(PCT)在大鼠脓毒症引起认知功能障碍中的作用。方法:60只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组(C组)、脓毒症组(S组)、脓毒症+米诺环素组(SM组),每组各20只。采用盲肠结扎穿孔(CLP)术建立脓毒症模型,造模后观察各组大鼠7 d生存率,应用Morris水迷宫实验和条件恐惧实验检测各组大鼠认知情况,RT-PCR和Western Blot检测各组大鼠海马组织中PCT表达量。结果:与C组相比,S组存活率显著降低(P<0.001);与S组比较,SM组存活率增加(P<0.05);C组和S组存活率比较,差异无统计学意义(P>0.05);各组大鼠7 d生存率为:C组100%、S组54.5%、SM组85.0%。Morris水迷宫实验结果显示,与C组比较,S组和SM组跨越目标象限次数减少(P<0.01),平台潜伏期延长(P<0.01);与S组比较,SM组平台潜伏期缩短(P<0.01),跨越目标象限次数增多(P<0.01)。恐惧记忆测试结果显示,在情景测试和声音测试中,与C组比较,S组大鼠静止时间明显缩短(P<0.01);与S组比较,SM组大鼠静止时间延长(P<0.01),C组和S组比较差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR和Western Blot结果显示,与C组比较,S组和SM组海马PCT表达明显升高(P<0.01);与S组比较,SM组海马PCT表达明显下降(P<0.05)。结论:脓毒症可引起大鼠认知功能损害,其机制可能与脑内海马PCT表达上调引起的中枢神经系统损害有关,有效抑制PCT可改善脓毒症引起的认知功能障碍。     

血液透析联合血液灌流治疗血液透析患者肾性骨病的临床疗效观察

目的:探讨血液透析联合血液灌流治疗血液透析患者肾性骨病的临床疗效。方法:选取70例维持性血液透析合并肾性骨病患者,按随机数字表法分为观察组和对照组,每组各35例,对照组患者给予血液透析治疗(HD),观察组给予血液透析联合血液灌流治疗(HD+HP)。比较两组患者治疗效果,以及治疗前后的BUN(血液内尿素)、SCr(血肌酐)、Ca2+(钙)、P3+(磷)、PTH(甲状旁腺激素)以及β2-MG(β2微球蛋白)等指标变化情况。结果:观察组治疗总有效率为88.57%,对照组治疗总有效率为71.43%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组Ca2+较治疗前明显上升,PTH、β2-MG、P指标均较治疗前显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),而对照组的Ca2+、PTH、β2-MG、P3+指标较治疗前无明显改善,差异无统计学意义(P>0.05),观察组与对照组Ca、PTH、β2-MG、P3+指标比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:针对血液透析并发肾性骨病患者的治疗,采用血液透析联合血液灌流治疗效果确切,能有效改善患者临床症状,降低血磷和PTH、提高血钙,达到理想治疗效果。     

三磷腺苷损伤PC12细胞的剂量和时间依赖性观察

目的探讨细胞外三磷腺苷(ATP)对PC12细胞损伤作用的剂量和时间依赖性特点。方法将对数生长期的PC12细胞分别用0.00、0.03、0.10、0.30、0.50、1.00、2.00、3.00、5.00、7.00和9.00 mmol·L-1ATP处理3 h后,光学显微镜下观察细胞形态的变化,甲氮甲唑蓝(XTT)比色法检测细胞死亡率,锥虫蓝染色检测细胞存活率。将对数生长期的PC12细胞分别在7.00 mmol·L-1ATP作用0、1、2、3、6、12、24 h时,用XTT比色法检测细胞死亡率。结果 (1)XTT比色法检测结果显示,0.03、0.10、0.30、0.50、1.00和2.00 mmol·L-1ATP组PC12细胞死亡率与0.00 mmol·L-1ATP组比较差异无统计学意义(P>0.05)。随着浓度升高,ATP诱导PC12细胞死亡作用逐渐增强,3.00、5.00、7.00和9.00 mmol·L-1ATP明显增加细胞的死亡率,与0.00 mmol·L-1ATP组比较差异有统计学意义(P<0.05)。(2)锥虫蓝染色检测结果显示,0.03、0.10、0.30、0.50和1.00 mmol·L-1ATP组细胞存活率与0.00 mmol·L-1ATP组比较差异无统计学意义(P>0.05);2.00、3.00、5.00、7.00和9.00 mmol·L-1ATP组细胞存活率与0.00 mmol·L-1ATP组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。(3)XTT法检查7.00 mmol.L-1ATP处理细胞死亡率显示,1、2 h组与0 h组比较差异有统计学意义(P<0.05),3、6、12、24 h组与0 h组比较差异更显著(P<0.01),3、6、12、24 h组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ATP对PC12细胞毒性作用具有剂量和时间依赖性特点。     

牛磺酸对急性应激性骨骼肌损伤大鼠内质网应激作用的研究

目的 研究牛磺酸对离心运动大鼠骨骼肌中SOD、MAD、GRP78、GADD153的影响,以期解释牛磺酸通过减少内质网氧化应激保护骨骼肌损伤的机制。 方法 选取成年SD大鼠36只,分为空白对照1组(A组)、空白对照2组(B组)、1 d离心运动组(C组)、2 d离心运动组(D组)、1 d离心运动+牛磺酸组(E组)、2 d离心运动+牛磺酸组(F组)。培养后分别收集6组大鼠骨骼肌,采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法测定SOD、MAD含量,采用Western 印迹方法测定GRP78、GADD153表达,比较6组大鼠SOD、MAD、GRP78、GADD153的差异。 结果 A组、B组大鼠SOD含量高于C组、D组、E组、F组大鼠,与C组、D组大鼠比较差异具有统计学意义(均P<0.05),但与E组、F组大鼠比较差异无统计学意义(均P>0.05);E组、F组大鼠SOD含量高于C组、D组大鼠,差异无统计学意义(均P>0.05)。C组、D组大鼠MDA含量高于A组、B组、E组、F组大鼠(均P<0.05)。A组、B组、E组、F组大鼠SOD/MDA值均高于C组、D组大鼠(均P<0.05),E组、F组SOD/MDA值低于A组、B组(均P<0.05)。C组、D组大鼠GRP78、GADD153表达量高于A组、B组(均P<0.05),但低于E组、F组大鼠(均P<0.05);E组、F组大鼠GRP78、GADD153表达量高于A组、B组(均P<0.05)。 结论 牛磺酸可能是通过提高内质网的抗氧化应激能力,从而维持骨骼肌抗氧化能力,加快骨骼肌中氧自由基的清除,减少剧烈运动后机体骨骼肌的氧化应激损伤,有利于骨骼肌功能的恢复。