葛根素对过氧化氢诱导平滑肌细胞凋亡的保护作用

目的探讨葛根素对过氧化氢(双氧水)H2O2诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞凋亡保护作用的机制。方法在过氧化氢(双氧水)H2O2诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞凋亡模型的基础上,以噻唑兰(MTT)法测定细胞存活率;用流式细胞术和Hoechst33258荧光染色法观察细胞受损和凋亡;用DNA琼脂糖凝胶电泳法观察细胞凋亡过程中DNA断裂程度;用免疫细胞组织化学染色法检测细胞内Caspase-3的表达。结果过氧化氢(双氧水)H2O2诱导无血清培养的平滑肌细胞凋亡,葛根素可显著降低平滑肌细胞的凋亡,减少凋亡细胞DNA断裂,平滑肌细胞坏死减少,对Caspase-3的表达有明显抑制作用。结论葛根素对过氧化氢(双氧水)H2O2诱导血管平滑肌细胞凋亡有保护作用,其机制可能与抑制Caspase-3有关。     

枸杞多糖对高脂血症大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的研究枸杞多糖（LBP）对高脂血症大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的影响。方法采用高脂饲料喂养的方法建立高脂血症大鼠模型,将普通饲料喂养的大鼠设为正常对照组,成模大鼠随机分为高脂血症组、LBP（40、80、120mg/kg）组,药物干预4周后处死大鼠,取主动脉测定平滑肌细胞凋亡率。结果 LBP各剂量组主动脉平滑肌细胞凋亡率均明显下降（P〈0.05或P〈0.01）。结论 LBP能够降低高脂血症大鼠平滑肌细胞凋亡率,延缓动脉粥样硬化的发生。     

枸杞多糖预处理对APAP诱导L02细胞损伤的保护作用

目的 探讨枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides,LBP)预处理对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导的正常人肝细胞(L02)损伤的保护作用及机制。方法 将体外培养的L02细胞分为正常对照组、模型组(APAP组)、300、600μg·mL^-1LBP+APAP组、300、600μg·mL^-1LBP组,L02细胞经不同浓度的LBP预处理12 h后,300、600μg·mL^-1LBP+APAP组和模型组给予10 mmol·L^-1APAP诱导细胞24 h。CCK-8法检测细胞存活能力,光镜下观察各组细胞形态变化,qRT-PCR检测细胞色素P450 2E1(cytochrome P450 2E1,CYP2E1)和HNF4α的mRNA水平,Western blot检测IRE1α、eLF2α、Nrf2、Bax、Bcl-2、Caspase-12的蛋白表达。结果 与正常对照组相比,模型组细胞经APAP诱导后,出现细胞损伤改变,CYP2E1 mRNA水平升高、HNF...     

枸杞多糖对诱导树突状细胞成熟和增强T细胞增殖的影响

目的 观察枸杞多糖对诱导树突状细胞(DC)成熟和T细胞增殖的作用.方法 通过密度梯度离心法分离人外周血单核细胞,采用细胞因子体外培养7 d后分别加入枸杞多糖,观察细胞形态变化,用免疫细胞化学法检测DC分子的表达,通过混合淋巴细胞反应检测细胞提呈抗原的能力.结果 经枸杞多糖诱导的DC分子表达有明显变化(MHCⅡ+、CD86+、CD83+),差异有统计学意义(P＜0.05),而经RPMI 1640培养的DC分子表达与培养前无明显变化.经枸杞多糖诱导的DC能促进T细胞增殖能力(P＜0.05).结论 枸杞多糖能促进DC成熟和增强T细胞增殖能力.     

枸杞多糖诱导雄激素不依赖型人前列腺癌细胞凋亡及相关基因表达的研究

目的 研究枸杞多糖对诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法 体外培养的人前列腺癌PC-3细胞经枸杞多糖作用后，采用MTT法测定细胞的增殖情况。采用TUNEL观察PC-3细胞凋亡的变化，用免疫组化法检测其Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果 一定剂量的枸杞多糖可明显抑制PC-3细胞的生长，并能渍导人前列腺癌PC-3细胞凋亡，凋亡率为41．5％，同时PC-3细胞Bcl-2／Bax蛋白比值显著下降，呈明显的剂量／效应关系。结论 枸杞多糖能诱导人前列腺癌PC-3细胞的凋亡，其机制与调节人前列腺癌PC-3细胞Bcl-2和Bax蛋白表达有关。     

DNA损伤应答通路在高钙磷环境诱导的人主动脉血管平滑肌细胞钙化中的作用

目的 明确DNA损伤应答通路在高钙磷环境诱导的人主动脉血管平滑肌细胞(HVSMC)钙化过程中的作用。方法 将HVSMC培养分为对照组、模型组、共济失调毛细血管扩张突变激酶(iATM)组、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(iPARP)组,培养12 d。茜素红-S染色法定性和邻-甲酚酞法定量检测4组细胞钙化情况,彗星实验检测DNA损伤,Western blotting和免疫荧光方法检测组蛋白γH2AX磷酸化水平,酶联免疫吸附试验检测8-羟基-2’-脱氧鸟苷(8-OHDG)水平,NucleoCounterNC-3000^TM高级细胞分析仪分析4组细胞的存活率。结果 光学显微镜和茜素红S染色发现第9天开始,与对照组相比,模型组出现细胞内钙质沉积,第12天钙质沉积明显。对照组与模型组分别在第3、6、9、12天培养状态下Ca²⁺/蛋白比较,结果：(1)不同时间点Ca²⁺/蛋白有差异(F=168.970,P=0.000);(2)模型组与对照组Ca²⁺/蛋白有差异(F=203.040,P=0.000),模型组Ca^2+...     

枸杞多糖对神经元缺氧损伤的保护作用

【目的】观察枸杞多糖对神经元缺氧损伤的保护作用。【方法】建立原代培养神经元缺氧损伤模型,通过形态学观察以及细胞存活率、乳酸脱氢酶（LDH）释放量、细胞内SOD活性及MDA含量的测定,研究枸杞多糖对神经元缺氧损伤的保护作用。【结果】枸杞多糖能明显改善缺氧损伤神经元的形态改变,提高细胞存活率,减少细胞内LDH的漏出,并可显著提高细胞内SOD活性,减少脂质过氧化产物MDA的产生。【结论】枸杞多糖对神经元缺氧损伤具有明显的保护作用。     

枸杞多糖对中波紫外线致人皮肤成纤维细胞损伤的保护作用

目的探讨枸杞多糖（LBP）对中波紫外线（UVB）辐射致体外培养人皮肤成纤维细胞损伤的保护作用。方法采用强度30mJ／cm^2的中波紫外线照射体外培养的人皮肤成纤维细胞,实验分为对照组、紫外线照射模型组和四个不同浓度LBP保护组,用MTT法检测细胞增殖活性,酶生化法检测细胞内SOD活性、MDA含量,以及培养液中LDH漏出率。结果强度为30mJ／cm^2的中波紫外线可以造成体外培养的人皮肤成纤维细胞增殖活性降低,细胞内SOD活性降低,MDA含量升高,LDH漏出增加,与埘照组相比均P＜0．05。给定浓度范围的LBP能剂量依赖性地增加细胞的增殖活性,增加细胞内SOD活性、MDA含量,减少LDH的漏出。结论紫外线可以造成体外培养的人皮肤成纤维细胞氧化损伤,LBP对UVB致人皮肤成纤维细胞的损伤具有一定保护作用,其机制可能与它的抗氧化作用和促进细胞增殖作用有关。     

成人主动脉血管平滑肌细胞的体外培养

目的:建立成人主动脉血管平滑肌细胞的体外培养方法:方法:无菌条件下分离出成人胸主动脉的平滑肌层,剪成1 mm×1 mm×1 mm的碎片,用组织块贴壁法,以含胎牛血清的DMEM培养基进行培养,牛长融合的细胞用0.25%的胰酶消化、传代。观察培养细胞的形态学特点,并用免疫荧光的方法检测血管平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)的表达。结果:在贴壁培养10～12天后,组织块的边缘开始有少量细胞爬出,呈长梭形,胞浆透亮、丰富:继续培养1～2周后组织块边缘融合,呈典型的"峰谷"样表现。消化传至3～8代,细胞的生长特性未见明显改变,免疫荧光显示细胞α-SMA的表达丰富。结论:组织块贴壁法培养人主动脉血管平滑肌细胞是一种稳定、可行的实验方法。     

不同产地枸杞药材中多糖的含量测定

目的 建立枸杞多糖的含量测定方法,并测定不同产地枸杞药材中多糖的含量.方法 采用水提醇沉法制备枸杞多糖,将枸杞多糖脱蛋白后制得精制枸杞多糖,以精制枸杞多糖测得枸杞多糖对葡萄糖的换算因子后,用苯酚-硫酸法测定不同产地枸杞药材中多糖的含量.结果 平均回收率为98.8%,测得不同产地枸杞药材中多糖含量分别为4.03%、7.5...     

哈巴苷及哈巴俄苷对过氧化氢损伤血管内皮细胞的保护作用

目的探讨哈巴苷及哈巴俄苷对过氧化氢（H2O2）损伤人血管内皮细胞的保护作用及其机制。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞（HUVECS）,将生长良好的3代～5代细胞用于实验。实验分四组：对照组、H2O2组、哈巴苷干预组及哈巴俄苷干预组,光镜观察细胞形态,用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT法）检测细胞活力;取细胞上清液,比色法测定培养液中乳酸脱氢酶（LDH）和丙二醛（MDA）含量。结果哈巴苷及哈巴俄苷干预均使H2O2损伤的HUVECS形态趋于正常,活力增强,细胞膜损伤减轻,减少细胞LDH及MDA产生。结论哈巴苷及哈巴俄苷能对抗H2O2引起的损伤,保护血管内皮细胞。     

枸杞多糖对P38MAPK介导2型糖尿病大鼠背根神经节细胞凋亡的保护作用

目的探讨枸杞多糖对氧化应激激活P38MAPK信号转导通路诱导2型糖尿病大鼠背根神经元细胞凋亡的保护作用及其机制。方法取SD大鼠高脂高糖喂养8周后,腹腔小剂量注射STZ(35 mg/kg)诱导2型糖尿病大鼠模型后,分为模型组、枸杞多糖小剂量组、大剂量组及α-硫辛酸对照组,治疗10周后通过免疫组化方法检测大鼠背根神经节中pP38MAPK及其诱导的凋亡指标Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达。结果经图像分析处理,枸杞多糖大剂量组对糖尿病大鼠背根神经节中Bcl-2蛋白的表达有上调作用,对pP38MAPK、Bax和Caspase-3蛋白的表达有抑制作用,其平均光密度值与模型对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论枸杞多糖可调节机体内的氧化应激状态,通过抑制P38MAPK途径,上调背根神经元细胞中Bcl-2表达,抑制Bax及Caspase-3的表达,从而保护神经细胞免受氧化应激损伤导致的凋亡,这可能是其保护DPN的作用机制之一。     

枸杞多糖对小鼠红细胞免疫功能的影响

目的　研究枸杞多糖 (LBP)对小鼠红细胞免疫功能的影响。方法　用形态学方法测定LBP对正常小鼠及环磷酰胺 (CY)造成的免疫抑制小鼠的红细胞C3 b受体 (RBC -C3 bR)花环率和红细胞免疫复合物 (RBC -IC)花环率的影响。结果　LBP能明显增强正常小鼠RBC -C3 bR花环率及RBC -IC花环率 ,并能使CY(2 5mg/kg× 3次 )引起下降的RBC -C3 bR花环率及RBC -IC花环率显著回升。结论　LBP能增强小鼠红细胞免疫功能 ,并对CY所致的红细胞免疫功能的抑制具有明显的拮抗作用     

去甲乌药碱对过氧化氢引起的PC12细胞损伤的保护作用研究

目的 探讨去甲乌药碱对过氧化氢(H₂O₂)引起的PC12细胞损伤的保护作用。方法 将PC12细胞分为对照组、H₂O₂组(100 μM H₂O₂)、去甲乌药碱组(50 μM去甲乌药碱+100 μM H₂O₂),CCK8法检测细胞活力,TUNEL染色检测细胞凋亡情况,流式检测ROS水平,氧化应激标志物MDA、SOD分别采用TBA法和WST法检测,蛋白免疫印迹检测凋亡相关蛋白Caspase3、Bax和Bcl-2的表达情况。结果 与H₂O₂组比较,去甲乌药碱组细胞活力显著提高,ROS、MDA含量显著降低,SOD活性显著升高,Caspase3、Bax表达量减少,Bcl-2表达量增加。结论 去甲乌药碱能通过抗氧化及抗凋亡抑制H₂O₂引起的PC12细胞损伤。     

胃促生长素对人主动脉平滑肌细胞增殖及线粒体融合蛋白2表达的影响

目的 通过体外培养人主动脉平滑肌细胞(HASMCs),研究胃促生长素(ghrelin)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及线粒体融合蛋白2(Mfn-2)表达的影响.方法 体外培养HASMCs,第4～6代细胞用于试验.给予不同浓度(10-9、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L)的ghrelin 或10-6 mol/L ghrelin不同时间(0、6、12、18、24 h)处理,用四甲基偶氮唑蓝比色(MMT)法观察其对HASMC增殖的影响.RT-PCR,Western blot方法检测不同处理方法对Mfn-2表达的影响.结果 10-7～10-5 mol/L的ghrelin可明显抑制HASMC增殖,浓度为10-6 mol/L抑制作用最为明显(P<0.01).ghrelin在6～24 h内均能明显抑制HASMC增殖,在24 h达最高峰(P<0.01).10-6 mol/L ghrelin能明显上调Mfn-2 mRNA和蛋白的表达(P<0.01).10-6 mol/L ghrelin在18 h上调Mfn-2 mRNA和蛋白表达的作用最为明显(P<0.01).结论 ghrelin可能通过上调Mfn-2的表达来抑制HASMC增殖.     

枸杞多糖对高脂血症大鼠血脂及主动脉氧化应激的影响

目的研究枸杞多糖（LBP）对高脂血症大鼠血脂及主动脉氧化应激的影响。方法采用高脂饲料喂养的方法建立高脂血症大鼠模型,将普通饲料喂养的大鼠设为正常对照组,成模大鼠随机分为高脂血症组、LBP低、中、高剂量组和辛伐他汀组,药物干预4周后,处死大鼠取血测定血脂,取主动脉测定超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）。结果 LBP低、中、高剂量组和辛伐他汀组甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）及低密度脂蛋白（LDL）均较高脂组明显下降（P〈0.05或P〈0.01）,各药物组MDA较高脂组明显下降,SOD、SOD/MDA均明显升高（均P〈0.01）。结论 LBP能够降低高脂血症大鼠血脂TG、TC及LDL水平,改善高脂血症大鼠主动脉的氧化应激状态,延缓动脉粥样硬化的发生。     

MAD1基因在主动脉夹层中的表达及对主动脉平滑肌细胞的影响

收集病变的升主动脉中膜组织标本为主动脉夹层组;收集同期在本院行尸检且无手术史、大血管病变史的升主动脉壁内组织标本18份为对照组;RT-PCR和Western blot检测有丝分裂阻滞缺陷蛋白(MAD1) mRNA和蛋白表达水平。在体外建立MAD1基因高表达人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)模型,检测细胞增殖和凋亡情况以及凋亡相关蛋白。结果显示主动脉夹层组患者主动脉夹层中MAD1 mRNA和蛋白相对表达量明显高于对照组(P<0.05)。随着转染时间的延长,各组细胞增殖水平均逐渐增加,转染48 h、72 h后MAD1过表达组细胞增殖情况低于空白对照组及空载体转染组(P<0.01)。转染48 h后,MAD1过表达组细胞凋亡率明显高于空白对照组及空载体转染组(P<0.01)。MAD1过表达组含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 mRNA和蛋白相对表达量明显高于空白对照组及空载体转染组(P<0.05)。实验结果表明,MAD1过表达可通过抑制细胞增殖,激活细胞外凋亡途径和细胞内凋亡途径来促进人主动脉平滑肌细胞HA-VSMC细胞凋亡,参与主动脉夹层的发生与发展。