失重状态下共育大鼠成骨与破骨细胞中护骨素表达的变化

目的:通过观察失重状态下共育的大鼠成骨与破骨细胞中护骨素的表达及其变化特点,探讨失重状态下骨结构的生物学变化。方法:实验于2004-07/12在哈尔滨医科大学附属二院科研中心完成。体外分离培养1周龄15只Wistar大鼠的颅骨成骨细胞及四肢骨破骨细胞,随机分为4组:成骨细胞+破骨细胞共育组,成骨细胞组,失重下成骨细胞+破骨细胞共育组,失重下成骨细胞组。前两组为空白对照。后两组均在回转加速器中48h。倒置相差显微镜下观察鉴定成骨细胞、破骨细胞,采用多聚酶链反应方法测定各组护骨素的表达。结果:①护骨素在各种情况下的表达:总RNA电泳条带28s,18s,5s,表明RNA完整。吸光度比A260/A280在1.8～2.0,失重共育组护骨素较非失重共育组明显低表达,失重单纯成骨细胞组护骨素表达较失重共育组明显低表达(P<0.05)。单纯成骨细胞组明显低于失重单纯骨细胞组(P<0.05)。②5天后成骨细胞与破骨细胞在倒置相差显微镜下观察:成骨细胞呈多角形、三角形,胞浆丰富,邻近细胞中突起与之相联,胞核大,圆形,含一两个核仁;破骨细胞细胞核核大,4～6个,胞浆伸出丝状或片状伪足。结论:失重状态下共育成骨与破骨细胞中护骨素低表达,成骨作用减弱,说明力学作用参与了成骨细胞与破骨细胞之间的信号传递。     

儿童骨代谢变化与甲状腺功能亢进症

目的 观察甲状腺功能亢进儿童的骨代谢变化。方法 采用双能X线吸收法测量了42例甲状腺功能亢进儿童和30例健康儿童的腰椎2～4和右侧桡骨中远1／3处的骨密度(BMD)，并同时检测其血清骨生化代谢指标．结果 甲状腺功能亢进儿童的BMD明显低于正常对照组(t=3．46,2．87；P&;lt;0．001)，其成骨细胞活性指标和破骨细胞功能指标的检测水平明显高于对照组(t=4．34，3．28，4．56；P&;lt;0．001)，而甲状旁腺素和25-羟维生素D水平正常(t=0．16，0．21；P&;gt;0．05)。甲状腺功能亢进儿童成骨细胞活性指标之间(r=0．43；P&;lt;0．001)，以及与破骨细胞功能指标之间呈显著正相关(r=0．34，0．41；P&;lt;0．001)。结论 甲状腺功能亢进儿童破骨细胞功能增强，成骨细胞活性增高。无继发性甲状旁腺功能亢进，无维生素D代谢异常。     

脂联素对成骨细胞护骨素和核转录因子κB受体活化素配体表达的影响

背景:在骨组织中,护骨素的主要作用是抑制破骨细胞的形成和活性,核转录因子κB受体活化素配体的主要作用为刺激破骨细胞的分化和活性,抑制破骨细胞的凋亡.护骨素/核转录因子κB受体活化素配体在破骨功能调控中起重要作用.近来研究发现脂联素促进成骨细胞增殖和分化,脂联素与骨代谢相互偶联.但脂联素对破骨细胞的作用不明.目的:观察脂联素对成骨细胞核转录因子κB受体活化素配体和护骨素表达的影响,进一步分析其对破骨细胞生成的作用.设计、时间及地点:对比观察实验,于2007-0612008-12在中南大学湘雅二医院代谢内分泌研究所实验室完成.材料:外科手术取正常成人髂前上棘松质骨用于细胞培养,临床标本由湘雅医院提供.方法:分别用0,3,10和30 mg/L脂联素干预人成骨细胞48 h,检测护骨素和核转录因子κB受体活化素配体mRNA与蛋白表达.并用脂联素干预成骨细胞与外周血单核细胞共同培养系统,观察其对破骨细胞生成的影响.主要观察指标:分别采用荧光定量聚合酶链反应和酶联免疫吸附法检测人成骨细胞护骨素和核转录因子κB受体活化素配体mRNA与蛋白表达.抗酒石酸磷酸酶染色确定为破骨细胞.结果:脂联素呈剂量依赖性抑制人成骨细胞护骨素mRNA与蛋白质的表达(P<0.05).脂联素呈剂量依赖性促进人成骨细胞核转录因子κB受体活化素配体mRNA与蛋白的表达(P<0.05).脂联素干预成骨细胞与外周血单核细胞共同培养系统可诱导破骨细胞生成.结论:脂联素可通过诱导成骨细胞核转录因子κB受体活化素配体表达、抑制护骨素表达,诱导破骨细胞生成.     

骨保护素对破骨细胞分化和骨吸收活性的抑制作用

背景：骨保护素(osteoprotegerin，OPG)可抑制破骨细胞的分化，抑制成熟破骨细胞的骨吸收活性并诱导其凋亡，在骨质疏松、类风湿性关节炎、癌症骨转移的领域有潜在的应用价值。目的：鉴定在CHO细胞中表达的人骨保护素生物学活性。设计：随机对照的实验研究。地点和对象：实验在解放军第四军医大学西京医院骨科研究所完成，研究对象：人骨肉瘤细胞株MG63、中国仓鼠CHO细胞株、克隆质粒pUC19及真核表达质粒pcDNA3为本室保存，12只6～8周龄BABL／c雄性小鼠由本校动物中心提供。干预：RT-PCR法获得人OPG编码区cDNA并构建真核表达载体，在脂质体介导下转染CHO细胞，经Western blot鉴定筛选稳定表达OPG的细胞系。获取含有OPG蛋白的条件培养基浓缩液，实验组：体外培养的鼠破骨细胞培养基中加人含有OPG蛋白的条件培养基浓缩液。对照组1只加入转染pcDNA3空载体的CHO细胞培养基的浓缩液。对照组2只加入完全培养基。主要观察指标：观察人OPG对破骨细胞的分化和骨吸收的影响。结果：转染人OPG编码区基因的CHO细胞能分泌表达OPG。小鼠骨髓细胞在la，25(OH)zD3(1&;#215;10^-8mol／L)的存在下可稳定分化出具有骨吸收功能的破骨细胞样细胞，在该培养体系中加入含有OPG的CHO细胞培养上清浓缩液，TRAP染色阳性细胞数明显减少(t=5．547，p&;lt;0．01)，骨吸收陷窝的数量显著减少(t=3．409，P&;lt;0．01)。结论：人骨保护素可在CHO细胞中分泌表达，并对体外培养状态下的破骨细胞的分化和骨吸收功能有抑制作用。     

大鼠成骨细胞增殖及护骨素蛋白含量与甲状旁腺激素的调节效应

目的:体外观察甲状旁腺激素对大鼠成骨细胞增殖和护骨素分泌的调节作用。方法:实验于2005-06/2006-05在四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室完成。采用酶消化法和骨组织块法联合分离培养新生SD大鼠颅骨成骨细胞,间歇加药方法将不同浓度0,10-6,10-7,10-8,10-9mol/L甲状旁腺激素作用于大鼠成骨细胞(0mol/L作为空白对照组),经碱性磷酸酶染色及钙结节茜素红染色证实培养的成骨细胞后,采用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞增殖能力,蛋白免疫印迹测定护骨素的分泌量。结果:①成骨细胞的形态变化:倒置相差显微镜下可见培养的成骨细胞呈短梭形、三角形和多边形。碱性磷酸酶染色光镜下可见成骨细胞胞浆中分布特征性蓝紫色细颗粒;成骨细胞的钙结节在镜下可见部分细胞聚集一起呈"集落状"生长。②成骨细胞增殖率:10-6～10-9mol/L浓度甲状旁腺激素对成骨细胞增殖均显示刺激作用,与空白对照组相比,差异显著(P<0.05),增殖率以10-8mol/L甲状旁腺激素组最高。③成骨细胞护骨素的表达:甲状旁腺激素下调成骨细胞中护骨素的分泌,与空白对照组相比,10-6mol/L甲状旁腺激素组抑制作用最明显(P<0.01),无显著剂量依赖性。结论:甲状旁腺激素对体外培养成骨细胞的增殖具有明显促进作用,通过下调成骨细胞中护骨素的分泌,促进破骨细胞生成、活化,促进骨吸收。     

激素诱发骨坏死的机制：随机对照研究

目的：探讨糖皮质激素诱发骨坏死的机制。方法：将兔复制Yamamoto氏骨坏死模型，分为对照组(4只)，2，4，6和8周组，每组各5只，按照不同时间处死取材。利用双光子骨密度仪测量股骨头部的骨质密度值。收集激素性骨坏死患者的病理标本21例，以无骨代谢疾病患者的股骨标本为对照，免疫组化染色观察激素性骨坏死股骨头局部骨保护素(OPG)／破骨细胞生成抑制因子(OCIF)蛋白的表达改变。结果：糖皮质激素给药后，继发于OPG表达减低(P&;lt;0．01)和破骨细胞异常增生后，局部出现渐进性骨丢失(P&;lt;0．05)；与正常对照比较，激素性骨坏死患者的股骨头局部OPG表达明显减低(P&;lt;0．05)。结论：糖皮质激素抑制骨骼局部的OPG表达，使破骨细胞异常增殖，从而出现骨丢失。     

糖皮质激素诱发骨丢失的机制

背景：糖皮质激素(Glucoconicoid，Gc)是目前治疗自身免疫性、结缔组织性疾病的主要方法之一，但治疗后部分患者常发生骨坏死，对其病理机制的深入研究对该病的预防很有必要。目的：探讨糖皮质激素诱发骨丢失的机制。设计：随机对照实验研究。地点和对象：实验在解放军总医院骨科完成，研究对象为成年新西兰白兔31只，雌雄不限，体质量3.0～4.0kg，购于解放军总医院实验动物中心。本院确诊为激素性骨坏死并行髓芯减压或全髋关节置换术患者的病理标本21例，年龄(48.30&;#177;6.09)岁。干预：①复制Yarnamoto氏骨坏死模型，通过病理学、骨丢失检测：印免疫组化染色观察骨保护素(OPG)／破骨细胞生成抑制因子(OCIF)：表达改变与破骨细胞分化、骨丢失的关系。②收集激素性骨坏死患者的病理标本21例，以无骨代谢疾病患者的股骨标本为对照，免疫组化染色了解激素性骨坏死股骨头局部0PG／0cIF蛋白的表达改变。主要观察指标：各实验组骨密度，激素性骨坏死股骨头局部OPG／OCIF蛋白的表达。结果：糖皮质激素给药后，继发于OPG表达减低(P&;lt;0.01)和破骨细胞异常增生后，局部出现渐进性骨丢失(P&;lt;0.05)；与正常对照比较，激素性骨坏死患者的股骨头局部OPG表达明显减低(P&;lt;0.05)。结论：动物模型和临床资料均表明：糖皮质激素抑制骨骼局部的OPG表达，使破骨细胞异常增殖．从而出现骨丢失。     

联合应用骨保护素和阿伦膦酸钠对破骨前体细胞分化的影响

目的：探讨联合应用重组人骨保护素活性片断和阿伦膦酸钠对破骨细胞前体细胞（RAW264.7）分化的抑制效果，并探讨二者是否具有抑制破骨细胞前体细胞（RAW264.7）分化的协同作用。方法：实验于2004-06／12在解放军总医院骨科研究所完成。酶消化法获取新生小鼠颅骨成骨细胞，与破骨细胞前体细胞（RAW264.7）按照4：1比例混合，培养于96孔板中和6孔板骨磨片体系中。分别使用1&;#215;10^-5g／L重组人骨保护素活性片断、10mol／L阿伦膦酸钠、1&;#215;10^-5g/L重组人骨保护素活性片断＋10mol／L阿伦膦酸钠作用于96孔板和6孔板混合细胞体系，并设空白对照。9d后，观察破骨细胞数目和形态，计算单位面积内重酒石酸盐抗酸性磷酸酶染色阳性细胞个数，并行骨磨片吸收陷窝计数。统计学分析评价其抑制破骨细胞分化效果。结果：①破骨细胞常规形态及重酒石酸盐抗酸性磷酸酶染色阳性细胞计数：小鼠成骨细胞与RAW264．7混合培养并加入药物后9d，空白列照组出现大量多核成熟破骨细胞，重酒石酸盐抗酸性磷酸酶染色证实为成熟破骨细胞。②骨磨片吸收陷窝形态及计数：与空白对照组相比，其余各组破骨细胞重酒石酸盐抗酸性磷酸酶染色阳性细胞个数，骨磨片吸收陷窝计数均明显减少，以1&;#215;^-5g／L重组人骨保护索糟性片断＋10mol/L阿伦膦酸钠组减少最为显著。③重组人骨保护素活性片断组与阿伦膦酸钠组析因设计的方差分析：加药后9d重组人骨保护素活性片断与阿伦膦酸钠存在交互作用（F=19．878，623．57；P〈0．05）。结论：联合应用重组人骨保护素活性片断和阿伦膦酸钠可以发挥交互协同作用，更有效地抑制RAW264．7向成熟破骨细胞的分化。     

雌孕激素合用对去卵巢骨质疏松大鼠的骨保护效果

背景：有报道雌激素和孕激素联合应用对防治绝经后骨质疏松症有协同作用，且副作用较小。目的：观察炔诺酮和炔雌醇联合应用对去卵巢大鼠骨量的影响。设计：随机对照验证性实验观察。单位：广东医学院药理教研室。对象：清洁级4个半月龄未交配的雌性SD大鼠24只，体质量(230&;#177;15)g。方法：实验于2002-05／11在广东医学院药理教研究空完成。大鼠随机分成3组：假手术组，去卵巢组，复方炔诺酮组，每组8只，前2组采用体积分数为0．056的乙醇溶液5ml／(kg&;#183;d)灌胃，复方炔诺酮组采用炔诺酮60μg／(kg&;#183;d)和炔雌醇3．5μg／(kg&;#183;d)灌胃(实验用药剂量参照人的用药20～35μg雌激素+孕激素)。所有动物给药时间为90d。给药结束后取胫骨标本，采用全自动图像分析系统对胫骨近端次级骨小梁形成区进行破骨细胞和有关动静态参数的测量；另取肱骨标本用电感偶合等离子体直读光谱仪测定钙含量和测定羟脯氨酸含量。同时测定尿中的钙和羟脯氨酸的含量。主要观察指标：①各组大鼠骨小梁面积、骨小梁厚度、骨小梁数目、骨小梁分离度、破骨细胞周长的静态参数变化。荧光周长百分数、矿化沉积率、骨形成率动态参数变化。②血清碱性磷酸酶、骨和尿中钙含量和羟脯氨酸含量变化。结果：24只大鼠均进入结果分析。①去卵巢大鼠与假手术组大鼠相比，骨小梁面积百分数下降，骨小梁数目降低和骨小梁分离度增加，伴随明显的破骨细胞周长增加(P&;lt;0．01)；骨形成指标明显增加：荧光周长百分数和矿化沉积率增加(P&;lt;0．05)，骨形成率(BFR／BV)明显增加(P&;lt;0．01)。②复方炔诺酮组与去卵巢组比较，骨量和骨小梁数目增加，骨小梁面积增加82％和骨小梁数目增加83％(P&;lt;0．05)，骨小梁分离度降低51％(P&;lt;0.05)；破骨细胞周长降低52．5％(P&;lt;0．01)；同时骨有机质含量增加和尿羟脯氨酸排出量减少(P&;lt;0．05)。结论：炔诺酮和炔雌醇联合应用可防治去卵巢大鼠骨质疏松，增加骨量和骨有机质含量，且不明显抑制骨形成。实验提供的药物剂量参照人的用量，20～35μg雌激素结合一种孕激素，其效果良好时即可提供一种最好的骨保护作用。     

骨保护素的研究进展

骨保护素是一种新发现的分泌型糖蛋白和缺乏跨膜结构域的肿瘤坏死因子受体超家族成员，主要通过与骨保护素配体结合而起作用。骨保护素不仅抑制破骨细胞生成，还抑制破骨细胞的骨吸收功能。骨保护素转基因(骨保护素^ / )致过量表达骨保护素的小鼠呈现骨硬化症表型；而骨保护紊基因敲除(骨保护素^ / )致骨保护紊缺乏小鼠在成熟前即显示严重骨质疏松及主动脉和肾动脉钙化。用重组骨保护素治疗可预防骨质疏松和血管钙化及逆转骨质疏松，骨保护素与代谢骨病和血管钙化之间的关系正日益引起重视。     

成骨细胞和破骨细胞衰老改变及其在增龄性骨丢失中的作用

背景：认识增龄过程中成骨细胞和破骨细胞变化规律，特别是高龄人群成骨细胞和破骨细胞的生物学特点，对骨质疏松有效合理的防治具有十分重要的意义。目的：回顾关于成骨细胞和破骨细胞数量和活性增龄变化的实验及临床研究结果，明确增龄过程中成骨细胞和破骨细胞的变化规律和衰老特点。数据来源：1995／2003 PubMed，2002／2004年万方数据库，本实验室研究结果。数据提取：PubMed 16篇，万方数据库1篇，本实验室数据。主要观察指标：细胞数量、酶活性、基因表达水平。结果：高龄人群成骨细胞骨形成作用和破骨细胞骨吸收作用对骨骼的影响都逐渐下降，但表现出不同的特点。①骨形成功能持续降低，主要表现为：成骨细胞分裂增生能力降低、基质合成减少、对钙调激素的敏感性降低。这些变化与骨髓中前体细胞的快速减少有关，使高龄人群骨骼中成骨细胞群由于缺乏新生细胞的不断补充而功能退化。②骨吸收功能短暂激活，主要表现为：破骨细胞数量一度增加，而其泌酸和蛋白酶功能基本得以保持。③成骨细胞调节能力降低，主要表现为成骨细胞中RANKL和OPG表达失偶联。结论：破骨细胞激活的机制和破骨细胞二次活跃产生不同骨平衡的意义值得探讨。作为建议，作提倡在基础领域重视骨髓微环境中前体细胞分化增殖的研究。     

不同剂量骨保护素对破骨细胞内一氧化氮生成及内皮型一氧化氮合酶的影响

背景：骨保护素和一氧化氮在防治骨质疏松方面有重要作用,但目前关于两者在抑制破骨细胞增殖分化方面的关系研究较少。
　　目的：验证不同剂量的骨保护素对破骨细胞内生成一氧化氮量及内皮型一氧化氮合酶活性的影响。
　　方法：用抗酒石酸酸性磷酸酶染色验证诱导生成的破骨细胞;将诱导生成的破骨细胞分成6个组,空白对照组不加任何试剂;阴性对照组培养液中加入培养液;骨保护素组分为4组分别加入10,25,50,75μg/L不同剂量的骨保护素试剂。采用Annexinv-FITC细胞凋亡检测试剂盒,利用流式细胞仪测定破骨细胞凋亡率;荧光定量PCR检测破骨细胞标志基因抗酒石酸酸性磷酸酶mRNA及蛋白激酶K mRNA 的表达量变化;一氧化氮检测试剂盒检测破骨细胞中内一氧化氮浓度;内皮型一氧化氮合成酶活力试剂盒检测破骨细胞内一氧化氮合酶的活力;骨保护素各组加入内皮细胞型一氧化氮合酶抑制剂;荧光定量PCR检测破骨细胞特异性酶抗酒石酸酸性磷酸酶 mRNA及蛋白激酶K mRNA表达量的变化。
　　结果与结论：①骨保护素可以抑制破骨细胞的分化生成并诱导其凋亡。②骨保护素的质量浓度与诱导生成的破骨细胞数量及其标志酶mRNA的表达量呈负相关,与破骨细胞凋亡率呈正相关。③骨保护素可以增加破骨细胞内一氧化氮的生成以及内皮型一氧化氮合酶活性的升高;骨保护素的质量浓度与破骨细胞生成的一氧化氮浓度及内皮型一氧化氮合酶活性呈正相关。④Raw264.7细胞在体外培养条件下,骨保护素与一氧化氮在抑制破骨细胞生成及促进其凋亡方面有协同作用,推测两者之间可能存在骨保护素/内皮型一氧化氮合酶/一氧化氮信号通路。     

不同质量浓度阿仑膦酸钠干预牙槽骨吸收模型兔牙周组织破骨细胞分化因子和骨保护素的表达

背景：有研究表明阿仑膦酸钠能够防治骨质疏松症,但其应用到口腔牙周组织干预牙槽骨吸收较为罕见。目的：建立兔牙槽骨吸收模型,观察不同质量浓度阿仑膦酸钠干预下炎症牙周组织破骨细胞分化因子和骨保护素的表达。方法：将大耳白兔建立牙槽骨吸收模型,建模成功后随机分成5组,胶原＋0.5g/L阿仑膦酸钠组、胶原＋1g/L阿仑膦酸钠组、胶原＋2g/L阿仑膦酸钠组、胶原组、对照组。各组分别于用药后2和4周用免疫组织化学方法检测破骨细胞分化因子和骨保护素表达情况,并进行药效评价。结果与结论：破骨细胞分化因子和骨保护素阳性细胞在5组成骨细胞、破骨细胞、成纤维细胞中均有表达,胞浆呈棕色或棕褐色颗粒状着色。对照组和胶原组牙槽嵴吸收区破骨细胞分化因子和骨保护素比率明显大于其他3组（P〈0.05）,胶原＋1g/L阿仑膦酸钠组在用药后2和4周均高于胶原＋0.5g/L阿仑膦酸钠组（P〈0.05）。结果证实,阿仑膦酸钠能够降低牙槽骨破骨细胞分化因子和骨保护素的比率,应用含1g/L阿仑膦酸钠胶原海绵载体更适合抑制牙槽骨吸收。     

RNA干扰技术抑制成骨细胞核激活因子受体配体基因对破骨细胞生成的影响

目的:利用RNA干扰技术抑制大鼠成骨细胞核激活因子受体配体(Ligand of receptor activator of NF-κB,RANKL)的表达,观察成骨细胞RANKL/骨保护素(osteoprotegerin,OPG)比值变化,探讨成骨细胞与破骨细胞生成的相关性。方法:实验于2006-05/10在四川大学华西医院移植免疫实验室(国家重点实验室)完成。①实验材料:体外化学合成4条RANKL序列特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),用Lipofectin2000TM转染成骨细胞。②实验方法:采用荧光实时定量聚合酶链反应检测RANKL mRNA的表达,筛选出最有效的干扰序列。③实验分组:分为最有效的siRNA转染组、阴性对照组和空白对照组,每组设5个平行样本。采用免疫组织化学染色检测成骨细胞中RANKL、OPG蛋白的表达,观察RANKL/OPG比值变化。④实验评估:采用成骨细胞、破骨细胞共培养技术观察以上3组转染后的成骨细胞对破骨细胞生成的影响。结果:①4种siRNA敲除RANKL基因后mRNA的表达:4种siRNA转染成骨细胞后,相对空白对照组,siRNA4分子对RANKLmRNA的抑制作用最为明显,达到89%。siRNA1,siRNA3对RANKLmRNA的抑制作用大于50%,而siRNA2对RANKLmRNA的也有相当的抑制作用。②各组成骨细胞中RANKL和OPG蛋白水平:RANKL和OPG的阳性表达均显示为棕黄色颗粒,RANKL主要分布于成骨细胞的胞浆和胞膜,OPG主要分布于成骨细胞的胞浆。siRNA4转染组RANKL表达(平均积分光密度值)低于空白对照组(分别为3.05±2.17,11.31±1.26),差异有显著性意义(P<0.01);阴性对照组与空白对照相比,差异无显著性意义(P>0.05)。siRNA4转染组、阴性对照组OPG表达与空白对照组比较,差异均无显著性意义(P>0.05)siRNA4转染组RANKL/OPG比值低于空白对照组(分别为0.12±0.03,0.45±0.04),差异有显著性意义(P<0.01)。③转染的成骨细胞对破骨细胞生成的影响:各组共培养形成的破骨细胞形态与分离的成熟破骨细胞相似,为不规则形,胞浆红染,并有伪足形成。siRNA4转染组破骨细胞形成低于空白对照组、阴性对照组[分别为(12±2),(31±7),(28±5)个/孔],差异有显著性意义(P<0.01);阴性对照组与空白对照相比,差异无显著性意义(P>0.05)。结论:RNA干扰沉默RANKL表达可下调成骨细胞RANKL/OPG比值,抑制破骨细胞的生成。     

伊班膦酸钠对成骨细胞分泌骨保护素的调节

背景：在正畸治疗期间,如何提高成骨速度对缩短正畸时间有很大的帮助。骨保护素能间接抑制破骨细胞成熟,加速牙周骨组织形成。目的：观察分析局部注射伊班膦酸钠对正畸保持阶段牙周组织的影响。方法：选取8周龄雄性SD大鼠55只,随机分为实验组、对照组、空白组。均以50g力牵引上颌右侧第一磨牙近中移动,加力21d。空白组牵引后麻醉处死,实验组和对照组分别于保持前1d局部注射伊班膦酸钠和生理盐水后进入保持期,分别于保持开始后1,3,7,14,21d,每组取5只大鼠麻醉后处死。组织经苏木精-伊红染色,免疫组织化学染色后观察。结果与结论：苏木精-伊红染色观察见实验组破骨细胞少于对照组,相同时间的实验组与对照组比较,实验组骨保护素表达量高于对照组;实验组与对照组中,第1天与第3天骨保护素的表达量无显著性差异（P〉0．05）,第7,14,21天骨保护素的表达量差异有显著性（P〈0．05）。在表达强度上,实验组骨保护素的表达呈逐渐增强的趋势,实验组与对照组骨保护素的表达均强于空白组（P〈0．05）。局部注射伊班膦酸钠能使成骨细胞分泌骨保护素增多,间接抑制破骨细胞生成,从而加速骨组织修复形成。     

强骨抗萎方对骨细胞代谢及血液流变学的影响

目的：研究中药复方强骨抗萎方对尾吊大鼠血液流变学的影响。方法：用大鼠尾吊-30&;#176;21d模拟失重，观察强骨抗萎方对大鼠血沉、血细胞比容、纤维蛋白原、血液黏度及红细胞变形性、聚集性等指标的作用。结果：悬吊大鼠纤维蛋白原明显升高(P&;lt;0．01)，全血还原黏度及全血黏度明显增加(P&;lt;0．01或P&;lt;0．05)，红细胞刚性指数升高(P&;lt;0．01)，最大变形指数降低(P&;lt;0．01)，最大聚集指数增加(P&;lt;0．01)。该方不同剂量显示了不同的作用。低剂量组(10g／Kg)可降低各个切变率下的全血还原黏度和全血黏度(P&;lt;0．01或P&;lt;0．05)，以及异常的红细胞刚性指数和最大聚集指数(P&;lt;0．01)；中剂量组(20g／kg)可使纤维蛋白原含量减少(P&;lt;0．01)；高剂量组(30g／Kg)可降低高切变率下的全血还原黏度和全血黏度(P&;lt;0．01或P&;lt;0．05)，降低红细胞刚性指数(P&;lt;0．01)，并可升高红细胞最大变形指数(P&;lt;0．01)。结论：该方具有改善尾吊大鼠血液流变学的作用，但无明显的量效关系。     

黄芪三仙汤干预成骨细胞护骨素及护骨素配体的表达

背景：长期临床研究表明黄芪三仙汤对骨质疏松症有一定的治疗作用,基础实验研究也表明黄芪三仙汤能改善实验动物的生物力学指标。在此基础上实验拟从细胞分子水平上探讨黄芪三仙汤对成骨细胞的相关作用。目的：观察黄芪三仙汤对体外培养成骨细胞护骨素、护骨素配体基因调节的作用,探讨黄芪三仙汤治疗骨质疏松的作用机制。方法：制备黄芪三仙汤和仙灵骨葆胶囊含药血清及空白血清,对体外培养新生SD大鼠成骨细胞进行干预,应用细胞形态观察、MTT、Westernblot分析法及蛋白浓度测定法,观察各含药血清对体外培养成骨细胞的增殖及成骨细胞护骨素、护骨素配体表达的影响。结果与结论：经药物干预后成骨细胞变为长梭形、条索状,融合成片,分界较为模糊,细胞生长较密集。黄芪三仙汤可明显促进成骨细胞护骨素蛋白浓度的提高（P〈0．01）,同时也提高了护骨素配体蛋白浓度（P〈0．01）,而护骨素,护骨素配体浓度比例水平明显升高（P〈0．01）。结果可见黄芪三仙汤可能是通过调节成骨细胞分化调控因子护骨素、护骨素配体的表达来调节成骨细胞的增长,从而实现其对骨质疏松症的治疗作用。     

唑来膦酸对大鼠成骨细胞护骨素及肿瘤坏死因子αmRNA表达的影响

背景：唑来膦酸属于第3代双瞵酸盐类药物,在临床上被广泛应用于治疗骨吸收增加类疾病,其对破骨细胞的作用及影响已取得了共识,而对于成骨细胞的影响尚有争议。目的：观察唑来膦酸对大鼠成骨细胞增殖、分化和护骨素及肿瘤坏死因子αmRNA表达的影响。方法：体外培养新生24h内SD大鼠颅盖骨来源的成骨细胞,用10-5～10-9mol/L唑来膦酸进行干预,分别于干预后第3,5,7天采用MTT法来测吸光度值,以检测唑来膦酸对大鼠成骨细胞增殖的影响;硝基苯基质动力学法和RT-PCR在干预后72h,测量细胞碱性磷酸酶活性和护骨素及肿瘤坏死因子αmRNA的表达。结果与结论：较高浓度（10-5mol/L）的唑来膦酸明显抑制成骨细胞增殖,10-7～10-9mol/L唑来膦酸不影响成骨细胞的分化。10-5～10-9mol/L唑来膦酸能使成骨细胞护骨素mRNA表达增加,肿瘤坏死因子αmRNA表达下降。说明唑来膦酸在低浓度时不影响成骨细胞的增殖及分化,其可通过调节成骨细胞护骨素、肿瘤坏死因子αmRNA的表达,来发挥其抗骨吸收的作用。     

跟骨定量超声对绝经后糖尿病肾病患者骨密度变化与骨代谢特征的直线相关分析

目的：以跟骨定量超声为评估依据，探讨绝经后糖尿病肾病患者骨密度变化及其骨代谢特征，并做两者关系的直线相关分析。方法：选择2003-01／2004—06上海杨浦区中心医院内分泌科住院2型糖尿病患者84例，年龄60～80岁，均为绝经后女性。根据尿白蛋白排泄率分为2组，尿白蛋白排泄率&;lt;20μg／min为单纯糖尿病组(n=44)，尿白蛋白排泄率≥20μg／min为伴有糖尿病肾病组(n=40)。观察两组患者定量跟骨超声传导速度、振幅衰减和骨硬度指数的变化，同时测定空腹血糖、糖化血红蛋白、体质量指数、尿白蛋白排泄率、甲状旁腺素、骨钙素等指标。结果：按意向处理分析，进入结果分析病例84例。①伴有糖尿病肾病组跟骨定量超声振幅衰减、超声传导速度及骨硬度指数明显低于单纯糖尿病组[(61．25&;#177;10．56)dB／MHz．(1480．25&;#177;112．11)m／s，(53．12&;#177;10，25)％；(68．93&;#177;13，24)dB／MHz，(1600．23&;#177;120．41)m／s．(62．65&;#177;11．45)％，t=2．9198，4．7126，4．0036，P&;lt;0．01]。②伴有糖尿病肾病组患者甲状旁腺素、骨钙素水平明显高于或低于单纯糖尿病组[(18，01&;#177;5．62)ng／L，(3．05&;#177;2．63)μg／L；(12．16&;#177;4．76)μg／L，(4．96&;#177;3．08)μg／L，t=5．1626，3．0412，P&;lt;0．01，0．05]。⑧直线相关分析表明糖尿病肾病患者骨密度与甲状旁腺素水平呈负相关(r=-0．376，-0．382，-0．354，P&;lt;0．01)，与骨钙素水平呈正相关(r=0．398，0．346，0．342，P&;lt;0．01)。结论：绝经后女性2型糖尿病伴有肾病患者较单纯糖尿病患者骨质疏松情况更加严重；其发生与糖尿病肾病时甲状旁腺素升高所致骨吸收增加及骨钙素降低引起的骨形成减少有关。     

益骨胶囊含药血清对成骨细胞骨保护蛋白mRNA表达的影响

目的：观察益骨胶囊含药血清对体外培养的大鼠成骨细胞骨保护蛋白mRNA的影响。方法：实验于2004—05／2005—02在广州暨南大学生命科学技术学院细胞与蛋白质工程实验室完成。选取12月龄SD雌性大鼠20只，随机分为2组。中药给药组(益骨胶囊由淫羊藿、当归、白芍、枸杞子等8味中药组成)和蒸馏水对照组，每组10只。运用大鼠灌胃的方法制备含药血清和对照血清，分离、培养新生大鼠的颅骨成骨细胞，传代后分为2组(含药血清组和空白血清对照组)，每组8孔，分别在培养24，48h时用反转录聚合酶链反应技术测定特异性电泳条带所显示成骨细胞中骨保护蛋白mRNA的相对表达量，酶联免疫法检测48，72和96h时200mL／L终浓度培养上清中骨保护蛋白的浓度。结果：两组动物各10只，均无亡失，所取血清正常用于细胞培养。①成骨细胞在接种4h后可见部分细胞贴壁、伸展。随培养时间延长，细胞伸出较多突起，细胞形态为单核，多边形及梭形，培养2d细胞基本全部贴壁，主要为梭形或多边形，培养6d左右基本贴满瓶壁，呈铺路石样排列。单层铺满培养瓶后可出现重叠生长，传代细胞大约15d天左右开始形成矿化结节。②特异性电泳条带显示益骨胶囊含药血清培养后24h和48h成骨细胞骨保护蛋白mRNA的表达均高于空白血清对照组【(0．196&;#177;0．015，0．236&;#177;0．016)，(0．152&;#177;0．018，0．206&;#177;0．022)，P&;lt;0．01】；③200mL／L终浓度的益骨胶囊含药血清培养后48，72和96h成骨细胞骨保护蛋白的表达明显高于空白血清对照组【(0．1230&;#177;0．0128．0．1681&;#177;0．0130，0．1983&;#177;0．0186)，(0．1067&;#177;0．0106，0．1385&;#177;0．0126．0．1588&;#177;0．0121)，P&;lt;0．01或P&;lt;0．05】。结论：益骨胶囊含药血清具有促进成骨细胞表达骨保护蛋白的作用。提示益骨胶囊能够通过对成骨细胞的影响而对骨吸收环节具有抑制作用，但是否对其他信号通路也有作用尚待研究。