脾胃湿热证大鼠湿偏重、热偏重模型尿液AQP2的变化及其在肾组织的表达

目的:研究脾胃湿热证湿、热偏重型之间AQP2在尿液中的变化及在肾脏组织中表达的变化规律,揭示清香散、白虎加苍术汤分别治疗脾胃湿热证湿、热偏重型的作用机制。方法:采用Bradford方法测定尿液中AQP2含量,采用SABC免疫组化法检测肾脏内外髓集合管、远曲小管管壁上AQP2的表达。结果:湿偏重组尿液AQP2含量明显减少,热偏重组尿液AQP2含量明显增加,而且热偏重组尿液AQP2含量更高。AQP2在肾脏的表达中,湿偏重组肾脏内外髓集合管、远曲小管管壁上AQP2表达明显比正常组、白虎加苍术汤组及清香散组减少,热偏重组表达最多。结论:AQP2对于脾胃湿热证"湿"的形成,湿、热的量化,判断湿、热的偏重具有重要的作用。白虎加苍术汤及清香散祛湿的作用可能是通过调节AQP2对细胞内外体液平衡的功能而达到的。     

三仁汤对脾胃湿热证、湿偏重证大鼠胃动素、胃泌素作用的实验研究

目的：观察三仁汤对脾胃湿热证、湿偏重证大鼠模型血液中胃动素（MTL）、胃泌素（GAS）的调控作用。方法：将32只大鼠随机分为4组各8只。正常对照组：正常温、湿度下予以普通饲料喂养；湿热组：在湿热环境下予以肥甘饮食饲料喂养；湿偏重组：在湿热组饲养基础上灌服北京产二锅头；三仁汤组：在湿偏重组饲养基础上予以三仁汤。采用放免法测定各组大鼠血液中MTL、GAS的变化。结果：MTL、GAS湿热组、湿偏重组与正常对照组、三仁汤组比较，差异均有非常显著性意义（P〈0．01）；湿偏重组与湿热组比较，差异有非常显著性意义（P〈0．01）；三仁汤组与正常对照组比较，差异无显著性意义（P〉0．05）。结论：三仁汤能对抗湿热证大鼠模型血浆胃动素的升高作用，亦具有调节湿热证大鼠模型血浆胃泌素低下的功能。     

三仁汤对脾胃湿热证大鼠血清醛固酮、血浆抗利尿激素影响的研究

目的:观察脾胃湿热证大鼠醛固酮(ALD)和抗利尿激素(ADH)改变情况,探讨三仁汤的作用机理。方法:将50只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、三仁汤(高、中、低剂量)组,通过复合因素(外部湿热环境加肥甘饮食加病原微生物)造模,采用放射免疫法检测大鼠血清ALD和血浆ADH的水平。结果:模型组大鼠血清ALD及血浆ADH升高明显,三仁汤(高、中、低剂量)组可以降低血清ALD和血浆ADH水平(P0.05,P0.01)。结论:醛固酮、抗利尿激素升高,可能是脾胃湿热证发生的机理之一;三仁汤调节ALD、ADH的释放水平,可能是其清热祛湿的作用机制之一。     

清香散对脾胃湿热模型大鼠尿液中AQP2的影响

目的:探讨清香散对脾胃湿热模型大鼠尿液中AQP2的影响。方法:选用清洁级SD大鼠24只随机分成3组:正常对照组、脾胃湿热模型组、清香散组,每组8只。采用肥甘饮食、湿热环境及病原微生物等复合因素建立脾胃湿热证的动物模型。采用Bradford方法测定各组动物尿液中AQP2的含量。结果:脾胃湿热模型组AQP2含量明显低于正常对照组和清香散组,差异均有非常显著性意义(P<0.01);清香散组与正常对照组比较,差异无显著性意义(P>0.05)。结论:清香散可以调节脾胃湿热模型大鼠尿液中AQP2的降低水平,能较好地恢复AQP2在机体内的含量至正常水平。     

三仁汤化裁治疗功能性消化不良脾胃湿热证疗效观察

目的：观察三仁汤化裁治疗功能性消化不良脾胃湿热证的临床疗效。方法：62例随机分为治疗组32例和对照组30例,治疗组给予三仁汤化裁,对照组给予莫沙必利分散片,7天为一疗程,治疗4个疗程。结果：总有效率治疗组96.9%、对照组86.7%,两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：三仁汤化裁治疗功能性消化不良脾胃湿热型疗效确切。     

慢性胃炎脾胃湿热证大鼠胃黏膜蛋白质组与三仁汤治疗的实验研究

目的研究慢性胃炎脾胃湿热证大鼠胃黏膜的蛋白质表达,探讨慢性胃炎脾胃湿热证的相关发病机制,观察三仁汤治疗后慢性胃炎脾胃湿热证大鼠胃黏膜蛋白质的表达差异,探讨三仁汤治疗慢性胃炎脾胃湿热证作用机制。方法将36只SD雄性大鼠适应性喂养3天后,随机分为3组:正常对照组(对照组)、慢性胃炎脾胃湿热证模型组(模型组)、三仁汤治疗组(治疗组),每组12只。采用复合因素复制慢性胃炎脾胃湿热证大鼠模型,运用双向凝胶电泳分离大鼠胃黏膜蛋白,考马斯亮蓝染色,使用PDQuest8.0软件分析差异蛋白质点,基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)鉴定仪进行蛋白鉴定。结果在对照组、模型组、治疗组凝胶图谱中检测到蛋白质斑点数分别为(1025±39)、(994±51)、(1087±33)个。经PDquest8.0软件分析,与对照组比较,模型组有差异表达蛋白质点74个,其中上调30个,下调44个;与模型组比较,治疗组有差异表达蛋白质点75个,其中上调49个,下调26个。成功鉴定了5个差异蛋白质点,分别为热休克蛋白72(heat shock protein 72,HSP72)、热休克蛋白60(heat shock protein 60,HSP60)、蛋白质二硫键异构酶(protein disulfide-isomerase,PDI)、苹果酸脱氧酶(malate dehydrogenase,MDH)、未命名蛋白(unnamed protein)。结论慢性胃炎脾胃湿热证的发病机制可能与应激反应及能量代谢障碍有关,三仁汤治疗慢性胃炎脾胃湿热证的作用机制可能是调节胃黏膜蛋白质的差异表达。     

水通道蛋白2在脾胃湿热证大鼠湿、热偏重模型中表达的研究

目的:观察脾胃湿热证大鼠湿、热偏重模型及在三仁汤、白虎加苍术汤的干预下大鼠尿液中水通道蛋白2(aquaporin2,AQP2)的变化,以探讨脾胃湿热证湿、热偏重型之间尿液中AQP2的变化规律及三仁汤、白虎加苍术汤的作用机理。方法:将40只大鼠随机分成5组各8只:正常对照组、湿偏重组、热偏重组、三仁汤组、白虎加苍术汤组,采用肥甘饮食、湿热环境及病原微生物等复合因素建立脾胃湿热证湿、热偏重型的动物模型。分别用三仁汤、白虎加苍术汤对湿偏重、热偏重型大鼠模型进行干预,采用双抗夹心ELISA法检测各组大鼠尿液中AQP2的变化。结果:湿偏重组、热偏重组大鼠胃窦尿液中AQP2含量较正常对照组明显增高;湿偏重组AQP2水平较热偏重组增高更明显;三仁汤组、白虎加苍术汤组分别与湿偏重组、热偏重组比较,AQP2的含量降低,三仁汤组、白虎加苍术汤组与正常对照组比较,无显著性意义。结论:脾胃湿热证大鼠湿、热偏重模型存在AQP2含量增高;三仁汤、白虎加苍术汤对大鼠尿液中的AQP2含量具有调节作用,能降低已增高的AQP2的含量。     

三仁汤对脾胃湿热型大鼠NLRP3、Caspase-1蛋白的影响＊

目的 探究三仁汤对脾胃湿热型大鼠NLRP3、Caspase-1蛋白的调控及胃黏膜细胞焦亡的影响。方法 将50只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、三仁汤高、中、低剂量组，每组各10只。根据前期的研究方法，利用高脂、高糖、湿热的条件，复制脾胃湿热证的模型，给予三仁汤干预，高、中、低剂量分别为16.4 g/kg，8.2 g/kg，4.1 g/kg。HE染色观察胃黏膜病理变化，免疫印迹法检测大鼠胃黏膜细胞NLRP3、Caspase-1蛋白的表达。结果HE结果显示，三仁汤高、中、低剂量组均对胃黏膜细胞焦亡有所改善。免疫印迹的结果显示模型组大鼠NLRP3和Caspase-1高表达，三仁汤高、中、低剂量组下调NLRP3和Caspase-1蛋白的表达，具有统计学差异（P < 0.05）。结论 三仁汤可能通过降低脾胃湿热大鼠的NLRP3、Caspase-1蛋白的表达，减少胃粘膜细胞焦亡，抑制胃粘膜炎症的爆发，从而防治脾胃湿热证模型大鼠，为临床治疗脾胃湿热证的胃痛提供了理论依据。     

脾胃湿热证湿偏重、热偏重型大鼠模型脾脏超微结构观察

目的:观察脾胃湿热证湿、热偏重型脾脏超微结构的改变,及清香散、白虎加苍术汤分别对脾胃湿热证湿、热偏重型脾脏超微结构的影响.方法:采用JEM-1200EX型扫描电镜观察脾胃湿热证湿、热偏重型脾脏脾窦、内皮细胞、淋巴滤泡、巨噬细胞、浆细胞超微结构的改变.结果:湿偏重组和热偏重组大鼠脾脏超微结构发生了明显改变,而清香散组、白虎加苍术汤组改变较轻.结论:脾胃湿热证湿、热偏重型均可使大鼠脾脏超微结构发生改变,由此可能导致其免疫功能发生改变.而清香散、白虎加苍术汤能有效修复大鼠脾脏各结构的异常,调整机体的免疫功能.     

清浊安中汤对慢性胃炎脾胃湿热证大鼠模型环氧合酶-2的影响

目的:探讨清浊安中汤治疗脾胃湿热证作用机制及脾胃湿热证大鼠模型的建立.方法:50只大鼠随机分为正常对照组、胃炎脾虚证组、胃炎湿热证组、清浊安中汤高、低剂量防治组,不同组用不同药物灌胃,连续20 d.采用“病证结合”方法,以2％水杨酸钠+高脂高糖+人工气候箱复制脾胃湿热证大鼠模型,并用清浊安中汤对脾胃湿热证大鼠模型防治,常规HE胃黏膜病理组织染色、免疫组化(SABC)法检测环氧合酶-2(COX-2)蛋白表达.结果:脾胃湿热证组10只大鼠均有轻-重度炎症,COX-2蛋白表达为0.289±0.036;脾胃湿热证大鼠模型表现出的症状、体征与临床相符,胃黏膜炎症较正常组重而与脾虚证组无差异,COX-2蛋白表达大于脾虚组与正常组(P＜0.05),COX-2蛋白表达与炎症程度呈正相关,相关系数为0.662,P＜0.01,清浊安中汤防治组对此有改善治疗作用.结论:大鼠模型符合脾胃湿热证属性,调节COX-2蛋白表达可能是清浊安中汤治疗脾胃湿热证作用机制之一.     

脾胃湿热证模型大鼠胃黏膜AQP3、AQP4基因的表达

目的 探讨脾胃湿热证大鼠动物模型建立方法及脾胃湿热证模型大鼠胃黏膜水通道蛋白AQP3、AQP4基因表达。方法 40只大鼠随机分为四组，造模20d，对照组正常喂饲；脾虚组隔日喂饲，非喂饲日灌喂番泻叶水煎液；模型组20％蜂蜜水自由饮用，隔日灌服油脂，每日2％水杨酸钠灌胃。造模开始后第16～20日每日20：00至次日8：00将大鼠置入人工气候箱中；治疗组前20d处理同模型组，第21～25日灌服清热化湿方。观察结束后，FQ—PCR方法测定大鼠胃黏膜AQP3、AQP4基因表达。结果 模型大鼠在造模过程中出现脾胃湿热证的特征性表现；模型组AQP3、AQP4基因表达水平高于对照组、脾虚组、治疗组。结论通过对大鼠施加内、外湿因素的造模方法可复制出临床脾胃湿热证的证候特征；AQP3、aQP4的异常表达可能是脾胃湿热证的发生机制之一。     

湿热证大鼠模型的复制及三仁汤对其影响的实验观察

目的复制大鼠湿热证模型.方法采用多因素复合造模法.以饮食失调造成内湿环境,以提高空气温度与湿度,外加感染鼠伤寒杆菌模拟外感湿热病邪,内外合邪造模.结果造模大鼠体温、饮食量、饮水量、尿量、体重、二便、舌象、精神状态出现变化,符合湿热证的特点,舌、肠、肝、脾也出现病理变化,运用三仁汤治疗有效.结论用以上方法可成功地复制湿热证模型.     

柴胡三仁汤治疗慢性萎缩性胃炎脾胃湿热证临床研究

目的:观察柴胡三仁汤治疗慢性萎缩性胃炎脾胃湿热证的临床疗效。方法:选取90例慢性萎缩性胃炎脾胃湿热证患者,随机分为对照组和观察组各45例,对照组服用浓缩型摩罗丹进行治疗,观察组根据患者病情辨证使用柴胡三仁汤进行治疗,2组均连续治疗4周,治疗前后对2组患者的临床症状进行评分,观察2组的临床疗效和不良反应发生情况。结果:治疗后,观察组总有效率95.6%,对照组总有效率71.1%,2组比较,差异有统计学意义(P0.05)。2组胃脘胀痛、痞满烦闷、食少纳呆及嘈杂反酸症状积分均较治疗前降低,差异均有统计学意义(P0.05);观察组4项症状积分均低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:辨证使用柴胡三仁汤对慢性萎缩性胃炎脾胃湿热证患者进行治疗,可有效缓解患者的临床症状,提高临床治疗效果,且安全性较好。     

脾胃湿热证湿、热偏重型大鼠模型血浆淋巴细胞HSP70的表达

目的:研究脾胃湿热证湿偏重型、热偏重型之间血浆淋巴细胞HSP70表达的变化,揭示清香散、白虎加苍术汤分别治疗脾胃湿热证湿、热偏重型的作用机制。方法:采用复合因素研制脾胃湿热证湿、热偏重型大鼠模型,并在清香散、白虎加苍术汤的干预下观察大鼠血浆淋巴细胞HSP70的变化,采用流式细胞仪检测细胞浆内HSP70。结果:湿偏重组、热偏重组淋巴细胞HSP70表达明显增加,且热偏重组比湿偏重组增高明显(P<0.05),同时清香散组、白虎加苍术汤组与正常组比较有显著性差异(P<0.05),与湿偏重组、热偏重组亦有显著性差异(P<0.05)。结论:复合因素特别是大肠杆菌的作用下,湿、热偏重型血浆中淋巴细胞HSP70表达明显增加,清香散、白虎加苍术汤组具有保持细胞结构完整,维持细胞正常功能的作用。     

胃康舒对实验性慢性胃炎脾胃湿热证大鼠胃黏膜前列腺素E2含量的影响

目的：观察胃康舒对实验性慢性胃炎脾胃湿热证大鼠胃黏膜前列腺素E2（PGE2）含量的影响。方法：实验分设正常对照组、模型组、胃复春组、胃康舒低剂量组、胃康舒高剂量组。除正常对照组外,其余各组均采用脱氧胆酸钠结合湿热环境、饮食不节等综合因素诱发“病证结合”大鼠慢性胃炎脾胃湿热证模型。灌胃法给药,实验结束后采用放射免疫法分别检测各组胃黏膜PGE2的含量。结果：模型组大鼠胃黏膜PGE2含量低于正常组（P〈0．01）,各给药组均高于模型组（P〈0．05～0．01）,尤以胃康舒高剂量组更显著,但各给药组间差异无显著性（P〉0．05）。结论：胃康舒可促进胃黏膜PGE,合成,对胃黏膜细胞具有保护作用。     

两种胃肠激素在脾胃湿热证大鼠湿、热偏重模型中表达的研究

目的：观察脾胃湿热证大鼠湿、热偏重模型及在三仁汤、白虎加苍术汤的干预下大鼠胃窦P物质（Sub-stance P,SP）、生长抑素（Somatostatin,SS）指标的变化,以探讨脾胃湿热证湿、热偏重型之间胃窦SP、SS的变化规律及三仁汤、白虎加苍术汤的作用机理。方法：将40只大鼠随机分成5组各8只：正常对照组、湿偏重组、热偏重组、三仁汤组、白虎加苍术汤组,采用肥甘饮食、湿热环境及病原微生物等复合因素建立脾胃湿热证湿、热偏重型的动物模型。分别用三仁汤、白虎加苍术汤对湿偏重、热偏重型大鼠模型进行干预,采用放免法检测各组大鼠胃窦中SP、SS的变化。结果：湿偏重组、热偏重组大鼠胃窦SP、SS含量较正常对照组明显降低;湿偏重组SP、SS水平较热偏重组降低更明显;三仁汤组、白虎加苍术汤组分别与湿偏重组、热偏重组比较,SP、SS的含量提高,三仁汤组、白虎加苍术汤组与正常对照组比较,差异无显著性意义,说明三仁汤、白虎加苍术汤能提高已降低的SP、SS的含量。结论：脾胃湿热证大鼠湿、热偏重模型存在胃肠激素的紊乱,SP、SS含量降低;三仁汤、白虎加苍术汤对大鼠胃窦的SP、SS含量具有调节作用,能提高已降低的SP、SS的含量。     

清浊安中汤对慢性胃炎脾胃湿热证大鼠模型细胞凋亡及Bcl-2的影响

目的:探讨清浊安中汤治疗脾胃湿热证作用机制及脾胃湿热证大鼠模型建立.方法:50只大鼠随机分为正常对照组、胃炎脾虚证组、胃炎脾胃湿热证组、清浊安中汤高、低剂量组,以2％水杨酸钠、番泻叶100％水煎液10 mL·kg-1 ·d-1灌胃,连续20 d,复制胃炎脾虚证.采用“病证结合”方法,以2％水杨酸钠(10 mL·kg-1 ·d-1灌胃)+高脂(20％蜂蜜水)高糖(10g·kg-1·d-1)+人工气候箱复制脾胃湿热证大鼠模型并用清浊安中汤(2,1 g·kg-1·d-1)对脾胃湿热证大鼠模型防治,常规HE胃黏膜病理组织染色、TUNEL(原位末端标记法)检测细胞凋亡、SABC(免疫组化)法检测Bcl-2蛋白表达.结果:脾胃湿热证组10只大鼠均有轻-重度炎症,细胞凋亡指数0.236±0.021,Bcl-2蛋白表达0.247±0.041;脾胃湿热证大鼠模型表现出症状、体征与临床相符,胃黏膜炎症较正常组重而与脾虚证组无差异,细胞凋亡较脾虚组轻而Bcl-2蛋白表达大于脾虚组(P＜0.05),清浊安中汤防治组对此有改善治疗作用.结论:大鼠模型符合脾胃湿热证属性,调节细胞凋亡和Bcl-2蛋白表达可能是清浊安中汤治疗脾胃湿热证作用机制之一.     

王氏连朴饮对脾胃湿热证模型大鼠胃黏膜P53、Bcl-2和COX-2蛋白表达的影响

目的 观察王氏连朴饮对脾胃湿热证模型大鼠胃黏膜增殖与凋亡相关P53、Bcl-2和COX-2蛋白表达的影响,探讨该方治疗脾胃湿热证获效的可能作用机制。方法 取SD大鼠50只,随机分为正常对照组,模型组,王氏连朴饮高、中、低剂量组（1.94,0.97,0.48 g·mL-1）,共5组,每组10只。除正常组饲以普通饲料外,其余4组均以湿热环境加高脂高糖饮食和白酒综合法复制脾胃湿热证模型,连续灌胃给药7 d,观察该方对模型大鼠胃黏膜P53、Bcl-2及COX-2蛋白表达的影响。结果 本实验P53、Bcl-2、COX-2基因蛋白表达定位于胞质,模型组大鼠表达明显升高,与正常对照组比较,有显著性差异（P＜ 0.01）。王氏连朴饮高、中、低剂量组P53、Bcl-2及COX-2蛋白表达有一定程度下调,与模型组比较,具有显著性差异（P＜ 0.01）,尤以中剂量组作用最明显。结论 王氏连朴饮可能通过下调脾胃湿热模型大鼠胃黏膜P53、Bcl-2及COX-2蛋白水平的表达,在一定程度上调节其胃黏膜细胞增殖与凋亡的失衡,进而达到对胃黏膜损伤的修复作用。     

湿热证大鼠模型的复制及三仁汤对其影响的实验观察

目的：复制大鼠湿热证模型。方法：采用多因素复合造模法。以饮食失调造成内湿环境，以提高空气温度与湿度，外加感染鼠伤寒杆菌模拟外感湿热病邪，内外合邪造模。结果：造模大鼠体温、饮食量、饮水量、尿量、体重、二便、舌象、精神状态出现变化，符合湿热证的特点，舌、肠、肝、脾也出现病理变化，运用三仁汤治疗有效。结论：用以上方法可成功地复制湿热证模型。     

脾胃湿热证大鼠模型血清蛋白质组学差异表达研究

目的:通过分析脾胃湿热证模型大鼠血清蛋白质的差异表达,从蛋白质组学角度探讨脾胃湿热证的证候实质。方法:应用血清蛋白质组学、生物信息学等系统生物学方法,采用二维凝胶电泳(2-DE)分离技术分离脾胃湿热证模型大鼠血清蛋白质,获得差异表达蛋白质,利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和数据库鉴定差异表达蛋白质。结果:发现12个具有明显表达差异的蛋白质斑点,经鉴定可以确定的9个蛋白质分别是备解素B因子、凝血因子Ⅱ、C-反应蛋白、alpha-胰蛋白酶抑制剂重链H4、载脂蛋白AI、重组人载脂蛋白AI、血小板凝血酶敏感蛋白、α-巨球蛋白、补体3。结论:筛选出来的差异表达蛋白质主要涉及机体免疫、物质代谢、炎症反应及血液流变学等,通过对脾胃湿热证模型大鼠蛋白质组差异表达的研究,从理论和技术的角度为运用蛋白质组学对脾胃虚实证候实质的深入研究提供了借鉴。