雌激素对大鼠胸腺细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的:探讨苯甲酸雌二醇对大鼠胸腺Bcl-2和Bax表达及细胞凋亡的影响及其机制.方法:雌性大鼠行卵巢切除术,给予苯甲酸雌二醇后,观察胸腺指数的变化,Hochest33342荧光染色及透射电镜标本观察胸腺细胞凋亡情况,免疫组织化学检测胸腺组织中Bcl-2和Bax的表达情况,原位杂交技术检测Bcl-2、Bax m RNA的表达情况.结果:双侧卵巢切除组大鼠胸腺指数较假手术组增加,双侧卵巢切除+雌激素组大鼠胸腺指数较双侧卵巢切除组减小;假手术组和双侧卵巢切除组大鼠胸腺组织中以正常胸腺细胞为主,偶见凋亡细胞或凋亡小体,双侧卵巢切除+雌激素组可见较多凋亡细胞和凋亡小体;双侧卵巢切除+雌激素组大鼠胸腺组织中Bcl-2表达较双侧卵巢切除组和假手术组增高明显降低,而Bax表达呈现相反趋势;Bcl-2 mRNA、Bax mRNA的表达与Bcl-2、Bax的表达呈一致性.结论:雌激素可以降低大鼠胸腺指数,抑制胸腺组织中Bcl-2的表达,促进Bax的表达,从而诱导大鼠胸腺细胞凋亡,促进雌性大鼠胸腺退化.     

右归丸对糖皮质激素诱导的胸腺细胞凋亡的保护作用

目的：探讨右归丸对激素诱导的小鼠胸腺细胞凋亡的保护作用及机制。方法：采用Annexin V／PI双染法检测糖皮质激素及右归丸干预后小鼠胸腺细胞凋亡比例变化；同时采用RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2、BaxmRNA的表达状态。结果：激素处理小鼠的胸腺细胞凋亡比例较正常对照小鼠明显上升（P〈0．01），右归丸干预后小鼠胸腺细胞凋亡率则明显下降（P〈0．01）；同时，激素处理小鼠胸腺细胞Bcl-2的表达下调，Bcl-2／BaxmRNA比值随之下降；而右归丸干预后Bcl-2mR-NA转录水平明显高于激素处理小鼠（P〈0．01），Bax的表达虽无明显改变，Bcl-2／Bax比值较激素处理小鼠明显增高（P〈0．05）。结论：右归丸可明显抑制激素诱导的胸腺细胞凋亡，其机制与逆转激素诱导的Bcl-2／Bax表达失衡密切相关。     

苯甲酸雌二醇致雌性大鼠胸腺退化作用的研究

目的探讨苯甲酸雌二醇对大鼠胸腺bcl-2和bax蛋白表达的影响。方法雌性大鼠行卵巢切除后给以苯甲酸雌二醇皮下注射,分别于注射后1、4、7天取胸腺,计算胸腺指数,用半薄切片甲苯胺蓝染色检测胸腺细胞凋亡情况,免疫组织化学法检测胸腺组织中bcl-2和bax蛋白的表达情况,统计学处理采用t检验。结果卵巢切除组大鼠胸腺指数明显增加,给雌二醇组大鼠胸腺指数明显减小（P〈0．05）;雌二醇处理组大鼠胸腺中可发现凋亡细胞和凋亡小体;大鼠胸腺中bcl-2蛋白表达量均低于对照组,（P〈0．001）,而bax蛋白表达量均高于对照组,（P〈0．001）。结论苯甲酸雌二醇可抑制胸腺组织中bcl-2蛋白的表达,促进bax蛋白的表达,促进雌性大鼠胸腺退化,诱导大鼠胸腺细胞凋亡。     

甲状腺激素缺乏对大鼠胸腺细胞凋亡的影响

目的:探讨甲状腺激素缺乏对大鼠胸腺细胞凋亡及其相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响.方法:采用放射免疫技术测定甲巯咪唑组仔鼠血清中三碘甲状腺原氨酸(T3)、四碘甲状腺原氨酸(T4)、促甲状腺激素(TSH)水平;应用光镜、透射电镜技术和共聚焦激光扫描显微镜观察胸腺组织细胞形态学改变;免疫组织化学法检测胸腺组织中Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果:甲巯咪唑组仔鼠体小,行动迟缓,胸腺绝对质量明显低于对照组,差异有统计学意义.对照组大鼠血清中T3、 T4值均高于甲巯咪唑组,TSH值低于甲巯咪唑组.甲巯咪唑组胸腺组织中出现大量的凋亡细胞和凋亡小体.Bcl-2蛋白表达的平均光密度值低于对照组;胸腺组织中Bax蛋白表达的平均光密度值高于对照组.结论:甲状腺激素缺乏可抑制胸腺组织中Bcl-2蛋白的表达和促进Bax蛋白的表达,诱导大鼠胸腺细胞凋亡,促进胸腺退化.     

肾上腺素、去甲肾上腺素对小鼠胸腺的影响

目的探讨肾上腺素、去甲肾上腺素对小鼠胸腺的影响。方法取5-6周雄性小鼠,随机分为4组,每组15只,腹腔注射生理盐水（对照组）、肾上腺索和去甲肾上腺素（NE＋E）,分别于5、7、9天后取胸腺,HE染色观察胸腺组织学变化,免疫组织化学法检测胸腺组织中相关凋亡基因Bcl-2和Bax产物的表达,原位末端标记法（TUNEL）计算胸腺组织凋亡细胞数。结果药物处理组的胸腺细胞凋亡均高于对照组（P〈0．05）,而各药物组无显著性差异（P2〉0．05）。结论肾上腺素和去甲肾上腺素可促进小鼠胸腺组织退化,诱导小鼠朐腺细胞凋亡。     

粉防己碱对缺血-再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的探讨粉防己碱对缺血-再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法结扎大鼠左冠状动脉前降支（LAD）30min后松开,再灌注24h建立心肌缺血-再灌注损伤模型。将48只雄性SD大鼠随机分为：假手术组（Sham组）,缺血-再灌注损伤组（IRI组）,粉防己碱预处理组（Tet组）。再灌注结束后检测血清肌酸激酶同工酶MB（CK-MB）和心肌梗死范围（IS/AAR,%）。应用原位末端标记法（TUNEL法）检测各组凋亡细胞,计算凋亡指数（AI）,应用免疫组化法检测心肌Bcl-2、Bax蛋白表达,计算Bcl-2/Bax值,进行组间比较。结果与IRI组相比,Tet可明显降低CK-MB值（976.57±160.69）vs（1910.38±221.10）U/L,P〈0.01,减小心肌IS/AAR%,（23.28±4.38）%vs（43.76±6.30）%,P〈0.01。与IRI组比较,粉防己碱预处理可显著减少心肌细胞凋亡,AI显著降低（8.62±2.45%vs19.36±5.28%,P〈0.01）。粉防己碱预处理使Bcl-2表达增加,Bax表达下降,Bcl-2/Bax值显著升高（P〈0.01）。结论粉防己碱能明显抑制缺血-再灌注损伤引起的心肌细胞凋亡,其作用机制可能与促进Bcl-2蛋白表达,减少Bax蛋白表达、升高Bcl-2/Bax比值有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对缺血再灌注心肌细胞凋亡的作用

目的：观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响。 方法： 采用结扎大鼠左冠状动脉前降支30 min，然后松开再灌注60 min的方法，复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。实验分假手术组、缺血再灌注组（IR）、EGCG不同剂量治疗组和丹参（SM）组。用原位缺口末端标记法（TUNEL）检测心肌凋亡细胞，用链酶亲和素-生物素-酶复合物（SABC）免疫组化法检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达。 结果： 在假手术组未发现凋亡细胞，IR组细胞凋亡明显，Bcl-2和Bax蛋白表达增加，但以Bax更明显，Bcl-2/Bax值显著低于假手术组（P<0.01）；EGCG组凋亡细胞明显少于IR组，Bcl-2表达显著大于而Bax表达显著少于IR组，Bcl-2/Bax值显著高于IR组（P<0.01）。 结论： EGCG能明显抑制IR引起的心肌细胞凋亡，其作用机制可能与下调Bax和上调Bcl-2蛋白表达，提高Bcl-2/Bax值有一定关系。     

穴位埋线对血管性痴呆大鼠海马CA1区神经细胞凋亡的影响

目的 观察穴位埋线疗法对血管性痴呆（VD）大鼠海马CA1区神经细胞凋亡和Bcl-2 mRNA及Bax mRNA表达的影响,探讨穴位埋线对VD大鼠脑缺血性损伤的神经保护机制。 方法 采用改良Pulsinelli’s 4血管阻断法建立VD大鼠模型,随机数表法分为VD模型组、穴位埋线组、尼莫地平组,并设置假手术组作为对照。两个治疗组分别施行穴位埋线和尼莫地平治疗。Morris 水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力后,取含海马的脑组织,TUNEL法检测海马CA1区神经细胞凋亡,原位杂交法检测其Bcl-2 mRNA及Bax mRNA表达,观察并比较各组大鼠海马神经细胞凋亡、蛋白表达的变化。 结果 VD模型组大鼠海马CA1区可见大量凋亡细胞、Bcl-2 mRNA 表达降低、Bax mRNA 的表达增高,与假手术组比较差异均有统计学意义（P＜0.01）。VD模型组表现出明显的学习记忆障碍,与假手术组相比差异有统计学意义（P＜0.01）;与VD模型组比较,穴位埋线组大鼠学习记忆能力显著提高（P＜0.01）,CA1区凋亡细胞明显减少（P＜0.01）,可见一定数量的Bcl-2 mRNA阳性细胞表达,而Bax mRNA阳性细胞表达较少。 结论 穴位埋线可通过上调VD大鼠海马CA1区Bcl-2 mRNA的表达、下调Bax mRNA 的表达,抑制海马神经细胞凋亡,改善VD大鼠学习记忆能力。     

胰岛素对烟雾吸入性损伤大鼠肺组织细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的 探讨胰岛素对烟雾吸入性损伤大鼠肺组织细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.方法 将成年清洁级雌性SD大鼠66只随机分为3组,正常对照组6只、吸入性损伤组和胰岛素治疗组各30只.胰岛素治疗组于烟雾吸入性损伤后皮下注射胰岛素5 U/kg,吸入性损伤组同样致伤后于相同部位注射等体积的生理盐水,正常对照组不做任何处理.各组均在伤在2 h、6 h、12 h、24 h、48 h监测血糖值.光镜进行肺组织切片病理形态学观察.采用原位末端标记法TUNEL观察肺组织细胞凋亡,免疫组织化学染色法检测抗凋亡蛋白Bcl-2及Bax的表达变化.结果 光镜观察HE切片,正常对照组大鼠肺泡结构清晰完整.吸入性损伤组大鼠肺组织肺泡间隔增宽、炎细胞浸润,胰岛素治疗组与吸入性损伤组比较病理表现有所减轻.凋亡指数（AI）、Bax 和 Bcl-2在各时间点均明显高于正常对照组（P〈0.01）.胰岛素治疗组伤后2 h AI、Bax和Bcl-2和吸入性损伤组间差异无统计学差异（P〉0.05）,但12 h以后两组AI、Bax和Bcl-2比较时差异均有高度统计学意义（P〈0.01）,24 h各值达高峰,差异也具有高度统计学意义（P〈0.01）.结论 吸入性损伤后早期给予胰岛素可以直接促进Bcl-2蛋白表达,抑制Bax等促凋亡蛋白的表达,对吸入性损伤后肺脏组织细胞的凋亡有抑制作用,在肺损伤早期起到保护肺组织作用.     

大鼠免疫性肝损伤中细胞凋亡和铁的作用

目的：研究细胞凋亡和低铁处理在实验性免疫性大鼠肝损伤中的作用，进一步阐明肝细胞损伤的机制。 方法： 通过放血或去铁胺(DFO)处理复制低铁动物模型; 采用卡介苗加脂多糖（BCG+LPS）诱导法复制免疫性肝损伤模型; 检测血清铁（SI）、转铁蛋白（TRF）、总蛋白（TP）含量及天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性，肝组织中丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、肝组织中铁（HIC）含量、细胞凋亡调节蛋白 bal-2基因和Bax基因表达的变化，计算细胞凋亡指数（AI）和Bax与Bcl-2（Bax/Bcl-2）比值。 结果： 结果表明：（1）在免疫性肝损伤中，调控细胞凋亡基因中的Bax表达量显著增大，而Bcl-2表达量并无显著改变，因而Bax/Bcl-2比值和AI均增大，细胞凋亡增强，同时伴有AST活性增加、MDA含量增高。（2）用静脉放血或注射DFO复制低铁的动物模型。这种铁缺失大鼠的Bax和Bcl-2的表达量均显著高于空白对照，Bax/Bcl-2比值和AI亦显著增大。但该比值和AI的增大与免疫性肝损伤组比较，前者显著低于后者。这表示铁缺失的动物虽然肝细胞的细胞凋亡也增强，但程度上较免疫性肝损伤要低的多。（3）免疫性肝损伤加放血或注射DFO，虽然Bcl-2和Bax表达量均明显升高，但Bax/Bcl-2比值和AI均显著低于单纯免疫性肝损伤组，与空白对照组比较，已无显著差别。这提示铁通过对Bcl-2和Bax表达量的调节，在免疫性肝损伤的细胞凋亡发生中起重要作用。低铁大鼠发生免疫性肝损伤后，MDA含量均低于单纯免疫性肝损伤组，而SOD活性则高于免疫性肝损伤组，提示铁在免疫性肝损伤中的自由基代谢失控发生过程中也起了一定的作用。 结论： 在免疫性肝损伤时，细胞凋亡过程增强,易化肝细胞的损伤；铁在免疫性肝损伤的细胞凋亡发生中起重要作用。     

转染Akt-1基因对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的保护作用研究

目的通过观察转染Akt-1基因对大鼠心肌缺血-再灌注（I-R）损伤心脏功能及细胞凋亡相关蛋白的影响,探讨Akt-1基因对心肌I-R损伤保护作用的机制。方法使用结扎／松解左冠状动脉前降支法,结扎冠状动脉前降支30min,再灌注2h,建立大鼠在体心肌I-R模型。40只雄性SD大鼠随机分为五组：假手术组（S组）,缺血-再灌注组（I—R组）,转染Akt-1基因组（Gene组）,空载体组（VC组）,抑制剂组（AB组）,每组8只。Gene组术前48h开胸心肌内直接分点注射脂质体Akt-1质粒复合物,S组和I-R组分别注射同等体积PBS,VC组注射等体积脂质体,AB组注射等体积脂质体Akt-1质粒LY294002混合物。所有大鼠经颈动脉插管至左心室记录HR、LVSP、LVEDP和±do／dtmax变化,TTC染色法测定心肌梗死范围,TUNEL法原位标记凋亡心肌细胞,Western Blot测定Akt-1、Casepase-3蛋白表达,免疫组化检测Bcl-2、Bax表达。结果1．Gene组较I—R组、VC组和AB组左室心功能（HR、LVSP、LVEDP、±dp／dtmax）改善（P〈0．05）。2．Gene组凋亡指数（AI）及心肌梗死范围较I-R组、VC组及AB组均显著减少（P〈0．05）,但仍高于S组（P〈0．05）;S组细胞凋亡阳性细胞几无表达,心肌细胞凋亡指数（AI）明显低于其余各组（P〈0．05）。3．各组均可见Akt-1、Casepase-3蛋白表达,但S组中蛋白较其余各组减少（P〈0．05）;Gene组Akt-1蛋白表达较I-R组、VC组及AB组均增加（P〈0．05）;Gene组Casepase-3蛋白表达则较I-R组、VC组及AB组减少。4．S组Bcl-2和Bax表达较其余各组减少（P〈0．05）;Gene组较I-R组、VC组及AB组Bcl-2表达上调而Bax表达下调（P〈0．05）。结论Akt-1基因转染对I—R心肌具有保护作用,该作用可能与促进Bcl-2表达,抑制Bax和Casepase-3表达从而抑制凋亡的发生有关。     

中药六味地黄汤对衰老大鼠卵巢组织Bax/Bcl-2及Caspese-3蛋白表达的影响

目的探讨六味地黄汤对衰老大鼠卵巢组织凋亡相关基因Bax/Bcl-2及Caspese-3蛋白表达的影响。方法D-半乳糖连续腹腔注射致亚急性衰老动物模型,造模后灌胃何首乌饮连续60天后,大鼠断头取卵巢。采用免疫组织化学分析方法检测各组大鼠凋亡相关基因Bcl-2,Bax的表达;Western Bloting法检测各组大鼠卵巢Caspese-3蛋白表达的变化。结果模型组较正常组卵巢细胞Bax、Caspse-3表达量增加,Bcl-2表达减弱;六味地黄汤可使卵巢Bax、Caspse-3表达量降低,Bcl-2表达增加。差异有统计学意义(P<0.05)。结论六味地黄汤剂能延缓衰老大鼠卵巢细胞凋亡的发生,其机制可能是通过干预凋亡相关基因Bax/Bcl-2及Caspese-3蛋白表达抑制卵巢细胞的凋亡。     

黄芪总黄酮对高糖下牛视网膜血管周细胞凋亡及凋亡基因表达的影响

目的探讨不同浓度黄芪总黄酮对高糖下原代培养的牛视网膜血管周细胞凋亡及凋亡基因表达的影响。方法以在体外培养3代近融合的牛视网膜血管周细胞为对象，分别在对照组（5．5mmol／L葡萄糖）、高糖模型组（25mmol／L）、干预组（在高糖组基础上分别加入0．5、1．0、2．0mg／ml黄芪总黄酮）中孵育6d，采用TUNEL法检测周细胞的凋亡率；RT—PCR测定Bcl-2、Bax基因的表达。结果（1）高糖下血管周细胞出现明显凋亡现象，高糖组血管周细胞凋亡率与对照组有显著差异（P〈0．01）。（2）高糖组诱导凋亡调节基因Bax表达增加，Bcl-2表达下降，与对照组有显著差异（P〈0．01）。（3）黄芪总黄酮各组血管周细胞凋亡率明显低于高糖组（P〈0．01），凋亡调节基因Bax表达下降，Bcl-2表达增加。在TFA各干预组之间，1．0mg／ml组与0．5mg／ml相比凋亡率低，Bax表达下降，Bcl-2表达增加（P〈0．01），但1．0mg／ml与2．0mg／ml组间凋亡率及凋亡基因表达无明显差异（P〉0．05）。结论黄芪总黄酮可能通过促使凋亡调节基因Bax表达下降，Bcl-2表达增加，抑制高糖诱导的牛视网膜微血管周细胞凋亡。     

大鼠Ⅱ型糖尿病心肌细胞凋亡及其调控基因表达的变化

目的:探讨Ⅱ型糖尿病大鼠模型心肌细胞细胞凋亡及其调控基因表达的变化,为进一步研究NIDDM的发病机制提供实验资料。方法:建立NIDDM大鼠模型,TUNEL法观察凋亡的心肌细胞。抽提心肌组织DNA进行琼脂糖凝胶电泳。免疫组织化学方法观察心肌细胞内Bax、Bcl-2、c-fos、c-jun蛋白染色强度。结果:TUNEL法染色可见核呈棕色反应的阳性凋亡细胞,NIDDM组与对照组比较,凋亡率有高度显著差异(P<0.01)。琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯带。NIDDM组较对照组Bax蛋白阳性平均光密度值(OD值)显著增高(P<0.01);对照组较NIDDM组Bcl-2/Bax光密度比值增高(P<0.05);NIDDM组较对照组c-fos、c-jun表达显著增高(P<0.01)。结论:实验性Ⅱ型糖尿病大鼠部分心肌细胞显示凋亡;细胞凋亡与Bax、c-fos、c-jun表达增强及Bcl-2/Bax比值降低有关。     

黄芪皂甙Ⅳ联合骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血/再灌注损伤海马神经元凋亡及相关基因表达的影响

目的 探讨黄芪皂甙Ⅳ联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对缺血再灌注大鼠海马神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响.方法 实验动物随机分为假手术组、模型组、BMSCs组、BMSCs+黄芪组.采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,BMSCs组、BMSCs+黄芪组分别于建模成功后3 h...