肝衰竭患者外周血单个核细胞hTERT mRNA水平及其与临床预后的关系

目的探讨肝衰竭患者外周血单个核细胞（PBMCs）中人端粒酶逆转录酶（hTERT） mRNA的变化对预后的评估价值.方法采用实时荧光定量RT-PCR法检测20例正常人和60例肝衰竭患者28天内PBMCs hTERT mRNA水平.结果39例生存患者PBMCs hTERT mRNA水平在入院后依次上调,在入院时、入院后7天、14天、21天和28天分别较正常人升高了2.87、4.27、9.23、23.35和30.50倍,而死亡患者在各时间点依次下降,分别是正常人的3.01、2.08、1.21、0.28和0.06倍;PBMC hTERT mRNA水平对判断预后的ROC曲线下面积在入院时及治疗后7天、14天、21天和28天分别为0.611±0.075、0.676±0.074、0.786±0.065、0.993±0.008和0.998±0.003.结论 PBMCs hTERT mRNA水平可作为肝衰竭患者的预后判断指标,特别是在治疗14天以后.     

人类端粒酶逆转录酶mRNA和蛋白在嗜铬细胞瘤中的表达及其意义

目的研究人类端粒酶逆转录酶（hTERT）在嗜铬细胞瘤中的表达及其作为预测生物学行为标志物的价值。方法采用原位杂交方法测定hTERT mRNA在45例嗜铬细胞瘤和副神经节瘤和9例正常肾上腺髓质中的表达；免疫组织化学方法检测hTERT蛋白的表达水平。结果hTERT mRNA在5例恶性（5／7）和5例可疑恶性（5／7）肿瘤中表达，表达均高于良性肿瘤（3／31），差异有统计学意义（P〈0．01）；hTERT蛋白的表达在良性（3／31）和可疑恶性（6／7）以及恶性（5／7）差异有统计学意义（P〈0．01）；9例正常肾上腺髓质细胞中未发现hTERT mRNA和蛋白的表达；肿瘤组织hTERT蛋白和mRNA的表达存在正相关性（r=0．951，P〈0．01）；hTERT蛋白和mRNA的表达与临床因素，如性别、肿瘤大小和血压无关联。结论hTERT mRNA和蛋白检测对良、恶性嗜铬细胞瘤和副神经节瘤的鉴别诊断有重要临床意义。     

急性白血病端粒酶活性及端粒酶基因表达的研究

目的 :研究初发急性白血病 (AL)患者骨髓、外周血单个核细胞端粒酶活性及端粒酶逆转录酶基因(hTERT)的表达 ,探讨其临床意义。方法 :采用端粒酶PCR ELISA法检测 2 4例初治AL患者的端粒酶活性 ;采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测hTERT基因mRNA的表达水平。结果 :在 2 4例初发AL患者骨髓、外周血样本中 ,18例 (75 .0 % )表达端粒酶活性 ,其吸光度 (A )均值分别为 0 .5 38± 0 .0 6 2和 0 .4 6 3± 0 .0 5 4 ,而 12例正常人外周血中只有 1例表达端粒酶活性 A 均值为 0 .16± 0 .0 12 ,前二者分别与后者比较差异有极显著性意义 (P <0 .0 1)。在 2 4例AL患者中 ,19例 (79.2 % )表达hTERT基因mRNA。 2 4例AL骨髓样本中 ,17例既有端粒酶活性表达 ,又有hTERT基因mRNA表达 ,端粒酶活性的表达和hTERT基因mRNA的表达具有明显的一致性。结论 :初发AL患者骨髓、外周血细胞端粒酶活性及hTERT基因mRNA表达明显高于正常 ;AL患者细胞端粒酶活化与其hTERT表达密切相关。     

重组人肿瘤坏死因子调节端粒酶活性的体外研究

目的：研究重组人肿瘤坏死因子（rhTNF)对端粒酶活性的调节作用,方法：将不同浓度rhTNF加入肝癌细胞株HepG2和HepG1-6细胞,以TRAP－ELISA方法测定其端粒酶活性,采用Liofect脂质体转染法将携带端粒酶催化亚单位一端酶逆转录酶（hTERT)启动力质粒转染至肝癌细胞株HepG2细胞,2h后加入不同浓度的rhTNF,孵育48h后,分别检测其报告基因萤虫素酶活性,结果：在10－1000IU／ml浓度范围内,rhTNF可抑制端粒酶活性,同时在浓度范围内,rhTNF可显著抑hTERT启动子的表达,其抑制作用与rhTNF剂量呈正相关,结论：rhTNF杀伤肿瘤细胞的机制可能与其抑hTERT的表达有关。     

AFP、h-TERT及VEGF基因在肝细胞癌患者外周血中的诊断价值

目的:探讨肝细胞癌(HCC)患者外周血中甲胎蛋白(AFP)、端粒酶逆转录酶(h-TERT)及血管内皮生长因子(VEGF) mRNA的表达及联合检测对诊断HCC的应用价值.方法:应用荧光定量PCR(FQ-PCR)对40例HCC、20例肝外良性疾病及10例正常体检人群的外周血AFP mRNA、h-TERT mRNA及VEGF mRNA的表达量进行检测.结果:3种指标在HCC患者中阳性率分别为77.5%、85%及72.5%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).且AFP mRNA、VEGF mRNA的阳性表达与HCC患者血清AFP水平无关(P>0.05),h-TERT mRNA与患者血清AFP水平存有相关性(P=0.01);3种指标与HCC患者的TNM分期高度相关(P<0.01).AFP mRNA在诊断HCC特异性较高,而AFP mRNA和h-TERT mRNA联合检测效果更好(敏感度92.%,特异度80%).结论:3种指标对诊断HCC均能起到良好的参考作用,联合检测AFP mRNA及h-TERT mRNA能增加诊断HCC的敏感度及特异度.     

肺癌患者外周血单个核细胞hTERT基因表达在诊断中的价值

目的探讨外周血单个核细胞(PBMCs)的人端粒酶反转录酶(hTERT)基因的表达水平对于肺癌的诊断意义。方法采用RT-PCR定量检测中国医科大学第二临床学院干诊科2002-03~2005-0230例肺癌住院患者及15名正常人外周血单个核细胞的hTERT的基因表达水平。结果肺癌患者和正常对照组的hTERTmRNA的吸光度值分别为0.906±0.112,0.407±0.104。两者比较差异有显著性(P<0.01)。结论定量测定PBMCs的hTERTmRNA的表达水平是诊断肺癌患者的有效方法。     

端粒酶及端粒酶逆转录酶在良、恶性胸腔积液中的表达及意义

目的 研究端粒酶及端粒酶逆转录酶(hTERT)在良、恶性胸腔积液中的表达,为临床诊断提供实验依据.方法 选择21例恶性胸腔积液(恶性组)及23例良性胸腔积液患者(良性组),应用重复序列扩增法-ELISA(TRAP-EUSA)法及免疫组化方法检测积液中端粒酶、hTERT及癌胚抗原(CEA)表达.结果 良性组和恶性组端粒酶表达阳性率分别为39.13%、76.19%,P<0.01;hTERT表达阳性率分别为0、80.95%,P<0.01.hTERT检测恶性胸腔积液的特异度(100%)显著高于端粒酶(60.87%),敏感度(80.95%)显著高于CEA(47.62%).结论 hTERT检测恶性胸腔积液的敏感度和特异度均较高,且其免疫组化检测方法简便易行,值得临床借鉴.     

Antitumor activity of an hTERT promoter-regulated tumor-selective oncolytic adenovirus in human hepatocellular carcinoma

INTRODUCTIONHepatocellular carcinoma (HCC) is one of the malignant diseases with a high incidence and mortality in China. Today, malignant tumors have already become the first death cause in Chinese city residents, and the second in country residents. Amo…     

人外周血AFPmRNA的定性检测和原发性肝细胞癌转移的关系

目的　为探讨人外周血ＡＦＰｍ ＲＮＡ 与肝癌转移之间的关系。方法　采用分子生物学反转录—巢式ＰＣＲ 技术,检测了３８ 例不同肝病患者和９ 例非肝病患者外周血中的ＡＦＰｍ ＲＮＡ。结果　其检出结果分别为：对照组０／９ ;肝硬化组２／１１ ;肝癌未发生转移组２／７ ;局部转移组６／１２ ;远处转移组７／８ 。其中良性组与恶性组之间、肝癌无远处转移与远处转移组之间有显著性差异（ Ｐ＜ ０ ．０１ 及 Ｐ＜ ０ ．０５） 。另外,肝癌患者中,直径＞ ５ ｃｍ 组外周血中ＡＦＰｍ ＲＮＡ 阳性率明显高于直径＜ ５ｃｍ 组（ Ｐ＜ ０ ．０５） 。肝癌患者血清ＡＦＰ＞ ４００ｎｇ／ｍｌ 组外周血中ＡＦＰｍ ＲＮＡ 阳性率具有明显高于ＡＦＰ＜ ４００ｎｇ／ｍｌ组（Ｐ＜ ０ ．０１） 。肝功能分级与外周血中ＡＦＰｍ ＲＮＡ 阳性率无关。结论　人外周血中ＡＦＰｍ ＲＮＡ 的检测具有重要的临床指导意义,可用于预测肝癌远处转移,并为临床治疗提供实验依据     

TAE术前后外周血肝癌播散细胞的变化及随访观察

目的研究原发性肝癌患者 TAE 术前后外周血中微转移变化情况,并评价 AFP mRNA 的预后诊断价值。方法应用巢式 RT-PCR 方法,检测32例肝癌患者 TAE 术前后外周血中 AFP mRNA 的表达,并对其预后进行随访观察。结果 32例 TAE 患者术前 AFP mRNA 阳性21例,阳性率为65.6％;术后 AFP mRNA 阳性23例,阳性率为71.9％。其中21例术前阳性者依然全部阳性,未发现有转阴性;11例阴性患者中有2例转为阳性。随访观察发现 AFP mRNA 阳性患者肝内、肝外转移发生率和 AFP mRNA 阴性患者差异显著(p<0.01)。结论 TAE 可能促使原发性肝癌发生血道播散。检测肝癌患者外周血中的 AFP mRNA,是一种灵敏预后诊断方法。     

端粒酶逆转录酶和c-myc基因在肺癌中表达的研究

目的　研究端粒酶逆转录酶 (hTERT)和c myc基因在肺癌中的表达及其与端粒酶活性的关系。方法　采用端粒重复序列扩增 (TRAP)法对肺癌组织以及癌旁非癌肺组织的端粒酶活性进行测定。用原位逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)和免疫组织化学技术分别检测上述组织标本中hTERTmRNA与c myc蛋白表达。结果　端粒酶活性在肺癌组织中阳性率为 73 .2 % (3 0 /4 1) ,在癌旁非癌肺组织为 6.3 % (2 /3 2 ) ,P <0 .0 1。肺癌及癌旁非癌肺组织中hTERTmRNA阳性表达率分别为 78.0 % (3 2 /4 1)和 9.4% (3 /3 2 ) ,P <0 .0 1,c myc蛋白阳性表达率分别为 80 .5 % (3 3 /4 1)和 15 .6% (5 /3 2 ) ,P <0 .0 1。肺癌组织hTERTmRNA表达与端粒酶活性呈显著正相关 (r =0 .70 7,P <0 .0 1) ,同时c myc蛋白与hTERTmRNA表达亦呈明显正相关 (r =0 .60 9,P <0 .0 1)。 结论　hTERTmRNA表达增强不仅参与肺癌的发生 ,而且可能是调节肺癌端粒酶活性的限速步骤。c myc蛋白可能通过激活hTERTmRNA表达而促进肺癌的形成     

Dendritic cell infiltration and prognosis of human hepatocellular carcinoma

Aim: To elucidate the relationship between local immunocompetent cells and prognosis of human hepatocellular carcinoma (HCC) after resection. Methods: HE staining and immunohistochemical study were carried out on specimens from patients underwent surgical resection. Local immunocompetent cells, such as dendritic cells (DCs), memory T cells, CD3+ T lymphocytes and CD8+ T lymphocytes, were counted and their relationships with tumor-free survival rate were analyzed by grouping DCs with the T lymphocytes retrospectively. Results: The number grade of infiltrating immunocompetent cells in HCC nodules and pericancerous tissues under HE staining had no significant correlation with tumor-free survival time (P=0.054, 0.071, respectively). DCs were mainly among tumor cells, encircling tumor cells with their pseudopodia and were in contact with T lymphocytes. A certain number of DCs in HCC nodules (≥25/10HPF) statistically correlated to tumor-free survival time (P=0.005), while a certain number of DCs in pericancerous tissues (≥28/10HPF) had no correlation with tumor-free survival time (P=0.329). The number of memory T cells, CD3+ T lymphocytes and CD8+ T lymphocytes in HCC nodules strongly correlated to tumor-free survival time (P=0.003, 0.005, 0.037, respectively). The tumor-free survival rate curves revealed that the more DCs or together with memory T cells/CD3+ T lymphocytes or that the more CD8+ T lymphocytes were detected in HCC nodules, the better the prognosis would be. Conclusions: Marked infiltration of DCs in HCC nodules was closely related to the prognosis of HCC after surgical resection and can be served as a predictive index for recurrence and metastasis of HCC. Xiao-Yan Cai and Qiang Gao contributed equally to this paper.