HepG2与HepG2．2．15细胞中P53表达及活性的比较

目的探讨HBV对抑癌基因P53表达及活性的影响。方法选用HepG2及转染了HBV表达质粒的HepG2．2．15细胞，采用Western blotting法检测两种细胞P53的表达状况；磷酸钙法将报告基因质粒PG13-CAT和P21-LUC分别转染细胞，通过检测报告基因的表达观察各细胞中P53的活性。结果HepG2．2．15细胞中P53蛋白表达水平高于HepG2细胞，而且两种报告基因的表达在HepG2．2．15细胞中也较高。结论HBV在肝癌细胞内的复制对P53的表达及功能具有一定的增强作用。     

P53与肿瘤

ｐ５３与肿瘤王厚力，陈元方（中国协和医科大学北京协和医院北京１０００００）恶性肿瘤是一大类严重威胁人类健康的疾病，对肿瘤发病机理和治疗的研究是非常重要的医学领域。近二十年应用分子生物学和生物化学的方法研究肿瘤取得了丰硕的成果。自１９７６年Ｂｉｓｈｏｐ...     

P53基因网络在HBV相关肝细胞癌发生机制中的作用

肿瘤抑制基因P53在乙型肝炎病毒相关肝细胞癌的发生中起着关键作用。研究乙型肝炎病毒基因组编码蛋白对P53基因网络的调控作用,有助于阐明两者在肝细胞癌发病中的作用机制。本文重点对P53基因网络的调控、P53基因突变、凋亡调节异常及乙型肝炎病毒x蛋白对P53基因网络调控的影响进行了综述。     

SMMC-7721肝癌细胞系中p53与乙型肝炎病毒相互作用的研究

目的 进一步观察乙型肝炎病毒(HBV)与p53的作用关系，以便更深入地了解HBV对原发性肝细胞癌发生的影响。方法 选用SMMC-7721肝癌细胞系(表达野生型p53，HBV阴性)为靶细胞，采用脂质体转染法，将pCMVp53单独或者与野生型HBV质粒(pCMVHBVa)、变异型HBV质粒(pCMVHBVb)共转染细胞，用annexin V-FITC标记及流式细胞仪检测细胞凋亡的变化；各组分别共转染报告基因：PG13-CAT，含有p21基因启动子的p21-LUC，通过CAT酶以及荧光素酶的检测，观察p53活性情况以及对p21启动子的活化情况；western blot方法检测各转染组p53蛋白表达情况。结果 单独的pCMVp53质粒转染SMMC-7721细胞系能够促进p21报告基因的表达，细胞凋亡率升高；HBVa质粒与pCMVp53共同转染可使细胞中p53蛋白表达水平，p53对报告基因PG13-CAT的活化作用以及对p21基因启动子的激活作用增强，细胞凋亡率增加，细胞生长受到抑制，而与pCMVHBVb共转染时则不能。结论 HBV在细胞内的复制可能通过使p53蛋白半衰期延长，及p53蛋白的表达及作用增强，促进p53下游基因p21的转录，导致细胞凋亡率增强，细胞生长受到抑制;p53可能通过某种机制对HBV的复制具有一定的促进作用。     

抑癌基因P53与HBV相关性肝细胞癌研究进展

肿瘤的发生是一个多基因的作用过程,包括原癌基因激活和抑癌基因失活,p53基因已成为抑癌基因中研究最为深入的基因之一。研究表明p53基因的变异与肝细胞癌的发生密切相关。本文就p53基因结构、功能与肝细胞癌的关系及治疗应用作一简述。     

肺癌抑癌基因1对HepG2细胞生长的抑制效应

目的探讨肺癌抑癌基因1（TSLC1）对人肝癌细胞株HepG2生长的影响。方法RT-PCR法制备TSLC1全长cDNA并克隆至真核表达载体pCI-neo，稳定转染至肝癌细胞系HepG2中。以转染空质粒pCI-neo的HepG2细胞为对照组，野生型HepG2细胞为空白组，显微镜下观察细胞形态，MTT法检测细胞增殖，FACSort流式细胞仪检测细胞周期，AnnexinV／PI双染法检测细胞凋亡情况。结果实验建立了高表达TSLCI蛋白的稳定细胞株。实验组细胞呈多角形，聚集成团，细胞之间的黏附非常紧密，对照组和空白组细胞呈梭形，细胞与细胞之间较疏散。与对照组和空白组相比，实验组细胞株细胞生长速度减慢，增殖受到明显抑制，G0／G1期细胞为63．66%±3．83％，高于对照组（47．45％±0．91％）和空白组（54．47％±0．96％）；S期细胞数为22．90％±6．04％，低于对照组（36．58％±0．61％）和空白组（33．61％±2．99％），P〈0．01，实验组细胞周期发生了G0/G1期阻滞。实验组细胞早期凋亡率和晚期凋亡率分别为17．09%±0．20％和16．11％±0．40％，与对照组和空白组细胞相比均明显升高（P〈0．01）。结论TSLC1基因明显抑制HepG2细胞生长，并诱导细胞发生凋亡。     

河南省肝细胞癌患者P53基因点突变研究

肝细胞癌(HCC)与抑癌基因P~(53)突变的关系是近年来分子生物学研究的一个热点,特别是其第7外显子(E7)第249编码区(cd249)的高频率点突变引起了许多学者的兴趣。1999年6月至2000年4月我们对49例HCC患者的癌组织标本进行了P~(53)基因     

P53抑癌基因突变产物在胆囊腺癌中的表达

Ｐ５３基因位于１７号染色体短臂上，Ｐ５３基因野生型具有肿瘤抑制作用，而具有肿瘤转化作用的是Ｐ５３基因的突变体。野生型Ｐ５３蛋白不稳定，含量低，用抗Ｐ５３蛋白单克隆抗体检测，有Ｐ５３蛋白的过量表达显示Ｐ５３基因的空变，本实验检测３４例胆囊腺癌，结果表明不同分化的腺癌都有不同程度的Ｐ５３基因突变，说明Ｐ５３基因蛋白在肿瘤早期诊断和作为预后观察是一项辅助指标。     

中国成人动脉粥样硬化病变中P53抑癌基因的结构突变及与病…

应用ＰＣＲ－ＳＳＣ方法，系统地研究了中国成人动脉粥样硬化（ＡＳ）病变组织中Ｐ５３抑癌基因结构的突变及与病变程度之间的关系。结果：受检的８９例ＡＳ组织中的９例 ＰＣＲ－ＳＳＣＰ的异常，其中６例经测序证实Ｐ５３基因突变的具体内容。在此基础上，应用高特异性的Ｐ５３蛋白单克隆抗体，证实在有Ｐ５３基因突变的ＡＳ组织中也同时有Ｐ５３突变蛋白的异常表达；对动脉管腔狭窄面积、斑声的相对厚度及二乾与Ｐ５３基因突变之     

The effect of desacetyluvaricin on the expression of TLR4 and P53 protein in Hepg 2.2.15

Background

Previous studies suggest that annonaceous may cause permeability glycoprotein (P-gp) function to abate, leading to cell apoptosis. It has also been reported that annonaceous acetogenins affect hepatocellular carcinoma (HCC) cells in the G1 phase, leading to apoptosis. Desacetyluvaricin (Des), a new type of annonaceous acetogenin monomer, has a significant effect on HCC, with few side effects.

Objectives

To investigate the effect of Des on the expression of Toll-like receptor 4 (TLR4) and P53 protein in HCC.

Materials and Methods

HCC HepG2.2.15 cell was cultured by routine method. HepG2.2.15 cells were divided into three groups: control group, treated with Des and DDP (cisplatin) which were examined by immunofluorescence flow cytometry for expression of TLR4 and P53.

Results

TLR4 was expressed by more cells in the Des group than in the cisplatin or serum-only groups (71.94%, 42.64%, and 37.16%, respectively; Des vs.cisplatin: p < 0.05; Des vs. serum only: p < 0.05), with no difference between the cisplatin and serum-only groups (p > 0.05). P53 was expressed by more cells in the Des and cisplatin groups than in the serum-only group (32.6%, 31.5% and 3.3%, respectively; Des vs. serum only, p < 0.05; cisplatin vs. serum only, p < 0.05), with no difference between the Des and cisplatin groups (p > 0.05).

Conclusions

Des increases TLR4 and P53 expression in HCC cells. Improved immune recognition by the former effect and induction of apoptosis by the latter could be the mechanisms of Des''s clinical effects on HCC.     

HBV感染对原发性肝细胞癌生物学行为及p53蛋白的表达影响

探讨在原发性肝细胞癌(HCC)中乙型肝炎病毒(HBV)的感染对肿瘤生物学行为以及突变型p53蛋白的表达影响。利用血清学指标检测60例HCC的HBV感染情况,采用抗生蛋白链霉素-过氧化酶法(S-P)检测癌组织中突变p53蛋白的表达。38例HBV感染HCC中突变p53蛋白的表达率为73.68%(28/38),22例非HBV感染表达率为45.45%(10/22),两者有显著差异(P<0.05)。在HCC中,HBV感染与肿瘤的Edmondson分级、AFP值增高、门静脉癌栓形成、肝内转移以及转氨酶增高相关(P<0.05)。HBV的感染可能与p53基因的突变共同作用导致HCC的发生及发展。同时检测以上二种指标可以为认识HCC的生物学特性,制定合理的综合治疗方案提供依据。     

PTEN在HepG2细胞中诱导凋亡发生及上调p53表达

目的 研究肿瘤抑制基因PTEN对HepG2细胞凋亡及p53蛋白表达的影响,并探讨相关机制。方法 将携带有野生型PTEN基因及突变型G129E-PTEN,C124A-PTEN基因的真核表达载体转染HepG2细胞,利用western印迹杂交检测PTEN表达、蛋白激酶B(PKB/Akt)和焦点粘附激酶(FAK)的磷酸化状态,以及野生型p53蛋白表达水平的变化,并应用流式细胞仪,激光共聚焦技术检测细胞周期及细胞凋亡情况。结果 与对照细胞相比,转染野生型PTEN和G129E-PTEN的HepG2细胞中磷酸化FAK(-65％,-65％)与磷酸化Akt(-93％,-35％)表达均存在不同程度的下调,而细胞凋亡率分别增加至19.8％±1.2％和9.2％±0.6％,并且p53蛋白表达上调( 120%,, 50％);然而转染C124A-PTEN的细胞中各项检测指标均无明显变化。 结论 PTEN依赖其蛋白磷酸酶活性抑制FAK的磷酸化;并主要通过脂质磷酸酶活性抑制Akt的磷酸化,并诱导HepG2细胞凋亡和p53蛋白表达上调。     

HDV核酶对乙型肝炎病毒抑制作用的研究

目的研究HDV核酶在细胞内对乙型肝炎病毒(HBV)复制及其抗原表达的抑制作用。方法1)以HBV前基因组mRNA为靶基因,体外筛选出HDV核酶有效作用位点,构建HDV核酶并进行体外测活;2)分别选用tRNA-Val、U6和hCMV 3种真核启动子,重组构建HDV核酶真核表达载体ptVHRz、pSURz和pcDHRz,分别用3种载体转染HepG2.2.15细胞;3)用点杂交、ELISA和实时荧光定量PCR方法分别检测核酶在细胞内的表达及对HBV的抑制作用。结果在HBV C基因区筛选到一位点,所构建的HDV核酶在体外条件下对该位点能产生有效切割。3种核酶表达载体在细胞内均能高效表达,在转染48 h后,ptVHRz和pcDHRz对HBeAg的表达产生了明显的抑制作用,而对HBsAg没有抑制作用。三者对HBV的复制均未产生明显影响。结论HDV核酶在细胞内对HBV抗原的表达能产生特异性抑制作用,但未能有效抑制HBV的复制,对其原因需进一步深入研究。     

Effect of HCV NS3 protein on P53 protein expression in hepatocarcinogenesis

ＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮＨｅｐａｔｏｃｅｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＨＣＣ）ｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｍｏｓｔｃｏｍｍｏｎｈｕｍａｎｃａｎｃｅｒｓｉｎｔｈｅｗｏｒｌｄ．Ｒｅｃｅｎｔｌｙ,ｔｈｅＨＣＶｉｎｆｅｃｔｉｏｎｗａｓｆｏｕｎｄｔｏｂｅａｎｅｔｉｏｌｏ...     

Alterations of the RB tumour suppressor gene in hepatocellular carcinoma and hepatoblastoma cell lines in association with abnormal p53 expression

SUMMARY. Alterations in the expression of the RB tumour suppressor gene were found by Western immunoblot in three of seven hepatocellular carcinoma and hepatoblastoma cell lines. Abnormalities were detected by single-strand conformation polymorphism (SSCP) within exons 17–21 in RB cDNA from two of these three cell lines and within exons 20–21 in the third cell line. In these three cell lines with abnormal RB expression, abnormal expression of the p53 tumour suppressor gene was also found, apparently the product of a mutant gene. Thus, mutations within the RB gene (or splice-site mutations with exon-skipping) and apparent mutations of the p53 gene together may have contributed to the development of three of these tumours or to the establishment of these cell lines.     

胃癌相关基因表达与其生物学行为关系研究

目的探讨P21、细胞周期素D1(CyclinD1)及P53基因表达与胃癌生物学行为的关系。方法应用原位杂交免疫组化技术检测74例胃癌组织及癌旁正常粘膜P21和CyclinD1mRNA及P53蛋白表达,分析三者与胃癌生物学行为的关系。结果74例胃癌组织和癌旁正常粘膜中,P21、CyclinD1及P53表达阳性率分别为43.2%和55.4%、40.5%和78.4%、25.7%和1.4%,三者比较均有显著性差异(P<0.01)。P21、CyclinD1及P53表达与患者性别、年龄、分期无明显相关性(P>0.05),与淋巴结转移显著相关(P<0.05);胃癌分化程度与P21阳性表达呈正相关,与CyclinD1阳性表达呈负相关。结论胃癌中P21低表达、CyclinD1和P53过表达可能促使胃癌细胞增殖,且具有更强的侵袭力;多基因表达异常可作为评价胃癌预后的重要参考指标。     

核定位信号突变型P21真核表达载体的构建及其对HepG2.2.15细胞病毒复制的影响

目的构建核定位信号突变型P21基因的真核表达载体并初步探讨其对HBV复制的影响。方法采用基因定点诱变技术突变P21基因的核定位信号序列,采用DNA重组技术,亚克隆突变型P21基因至pDsRed1-C1真核表达载体中,重组为pDsRed1-C1-p21NLS-,酶切鉴定及DNA测序,脂质体转染HepG2.2.15细胞,RT-PCR检测目的基因pDsRed1-C1-p21NLS-的表达,荧光显微镜观测目的基因亚细胞定位,ELISA法检测培养上清液中HBsAg、HBeAg的水平。结果 pDsRed1-C1-p21NLS-质粒构建成功,与野生型相比,主要在胞浆表达,促进病毒的复制。二者差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 P21的亚细胞定位,对HepG2.2.15细胞中病毒复制的影响具有明显差异。胞核P21抑制病毒的复制,而胞浆P21促进病毒复制。