苹果提取物抑制肝癌细胞系生长的实验性研究

目的观察苹果提取物在体外对肝癌细胞系(HepG2)生长的抑制作用.方法新鲜富士苹果利用丙酮法提取,不同浓度苹果提取物与Hepg2细胞系混合培养,利用MTS法检测提取物对于肿瘤细胞生长的抑制程度.结果富士苹果提取物对于HepG2细胞生长有一定程度的抑制作用,在50mg/ml时,抑制率达39.03%.结论苹果提取物在体外具有抑制肝癌细胞系生长的作用.     

淫羊藿苷与黄芩苷联合多柔比星对肝癌细胞APRIL表达和血管内皮细胞生长抑制的研究

目的:探讨中药单体淫羊藿苷(ICA)、黄芩苷(BAI)联合化疗药多柔比星(ADM)抑制肝癌HepG2细胞APRIL、VEGF的表达,进而抑制血管内皮细胞生长的作用机制.方法:MTT法检测血管内皮细胞ECV304的增殖活性;RT-PCR法检测HepG2细胞APRIL表达水平和ECV304细胞中APRIL受体HSPG的表达情况;免疫细胞化学检测HepG2细胞VEGF表达水平.结果:HepG2细胞中VEGF蛋白、APRIL和ECV304细胞中APRIL受体HSPG的mRNA均呈高表达状态,且APRIL与VEGF两者高表达呈显著正相关(P＜0.001);HepG2细胞经25 μg/mL ICA、200 μg/mL BAI、2 μg/mL ADM以及12.5 μg/mL ICA+1 μg/mL ADM、100 μg/mL BAI+1 μg/mL ADM 5组药物处理后,与未用药对照组相比,APRIL mRNA表达水平明显下降;HepG2细胞经5组药物处理后的上清液与未用药对照组相比,对ECV304细胞具有明显的增殖抑制作用,抑制率分别为(2.79±5.57)%、(15.20±3.79)%、(12.10±4.50)%、(19.34±8.17)%和(20.27±4.77)%(P均＜0.05);HepG2细胞经5组药物处理后,与未用药对照组相比,VEGF的表达水平明显下降.结论:APRIL具有促进静脉内皮细胞ECV304增殖的作用.ICA、BAI联合ADM能降低HepG2细胞中APRIL与VEGF的表达水平,从而发挥其抑制血管内皮细胞ECV304生长的作用.     

红树莓提取物抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖的实验研究

摘 要：［目的］ 探讨红树莓提取物抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖的具体机制,为红树莓提取物预防并治疗肝癌提供理论依据。［方法］ 体外培养SMMC-7721细胞,应用CCK8方法及集落形成实验检测不同浓度的红树莓提取物对肝癌SMMC-7721细胞增殖活性的影响;通过流式细胞术检测SMMC-7721细胞经不同浓度的红树莓提取物作用72h后细胞周期的变化;应用Western blot方法检测红树莓提取物处理SMMC-7721细胞72h后细胞周期相关蛋白的表达变化,以及红树莓提取物对肝癌细胞AKT通路的影响。［结果］ 红树莓提取物能够抑制SMMC-7721细胞的增殖活性;不同浓度红树莓提取物处理SMMC-7721细胞72h后,与对照组相比,随着浓度的增高,G0/G1期细胞数比例降低（P＜0.05）,S期细胞数比例升高（P＜0.05）;红树莓提取物能够降低周期相关蛋白cyclinA及CDK2的表达（P＜0.01）;同时使P-AKT(Ser473)表达下降（P＜0.01）。［结论］ 红树莓提取物能够抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖,这种抑制作用可能与AKT通路调控的cyclinA-CDK2介导的S期阻滞相关。     

肝癌细胞中血管内皮生长因子的自分泌及其意义

目的 研究人肝癌细胞中血管内皮生长因子(VEGF)的自分泌及其意义。方法：反转录PCR(RTPCR)检测体外培养的人肝细胞肝癌细胞系SMMC7721、HHCC和HepG2中VEGF受体的表达。采用人工合成的反义寡核苷酸(ODN)抑制肝癌细胞VEGF的表达后，分别检测肝癌细胞增殖活性和超微结构的变化，流式细胞仪分析肝癌细胞周期以及VEGF’受体蛋白表达的变化。结果：VEGF受体1(Flt-1)在SMMC7721细胞中有表达，而HHCC和HepG2细胞则表达VEGF受体2(KDR)。反义ODN对HHCC细胞的增殖有抑制作用，且与ODN的作用浓度呈线性关系，浓度为2．5μmol／L、5 μmol／L和10μmol/L时细胞增殖抑制率分别为26％、41％和50％。反义ODN对SMMC7721细胞则无此作用，而正义ODN对上述2种细胞均无作用。反义ODN作用后，HHCC细胞出现S期比率下降，并且在细胞周期曲线中出现凋亡前期峰，而SMMC7721细胞无上述变化。反义0DN能降低HHCC细胞膜表面KDR的表达(阳性率分别为：反义组19.2％，正义组29.8％，对照组31.2％)，对于SMMC7721细胞Flt-1的膜表面表达则无明显影响。结论：人肝癌细胞中存在VEGF的自分泌途径，其机制可能为通过诱导肝癌细胞膜表面KDR的表达及其信号转导作用，从而调节肝癌细胞的分裂增殖。     

沉默AFP基因可抑制肝癌HepG2细胞Survivin mRNA的表达

  目的  探讨肝癌HepG2细胞AFP基因沉默对Survivin表达的影响。  方法  通过siRNA技术下调肝癌HepG2细胞中AFP的表达,采用ELISA法测定转染前后上清液AFP浓度,MTT法检测转染前后细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞凋亡率,RT-PCR检测转染前后细胞Survivin mRNA水平。  结果  转染48 h后,实验组上清液中AFP浓度显著下降,肝癌细胞生长活性下降43.1%,凋亡率增加24.3%,HepG2细胞中Survivin mRNA表达降低78.0%。对照组和空白组的上述指标均无明显变化。  结论  沉默肝癌HepG2细胞AFP的表达,能有效抑制肝癌细胞生长、促进细胞凋亡,这一作用可能与细胞内Survivin mRNA水平降低有关。      

pIRES-IL-24对Bel-7402肝癌细胞抑制的实验研究

目的:观察白细胞介素-24(IL24)基因对肝癌细胞系Bel-7402生长的抑制作用,为肝癌的基因治疗提供理论基础.方法:将真核分泌表达载体pIRES-IL-24转染肝癌细胞系Bel-7402.RT-PCR检测IL-24基因的表达,蛋白质印迹法及ELlSA检测IL-24蛋白的表达,MTT法检测IL-24对肝癌细胞的生长抑制和杀伤作用,流式细胞仪检测细胞的凋亡和细胞周期.结果:pIRES-IL-24能够在Bel-7402中高效表达.细胞培养上清液中IL-24蛋白表达浓度为124.1 ng/mL.IL-24能明显抑制Bel-7402肝癌细胞的生长,转染后第4天抑制率为46.3%,与对照组比较,P＜0.05.IL-24促进肝癌细胞的凋亡,凋亡率41.0%,与对照组比较,P＜0.05.细胞周期分析显示,IL-24阻滞肝癌细胞在G2/M期.结论:重组表达载体pIRES-IL-24介导IL-24基因在人肝癌细胞中高效表达,可杀伤肝癌细胞Bel-7402,促进细胞增殖阻滞及诱导肿瘤细胞凋亡.     

Aes对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

背景与目的:Aes(amino-terminal enhancer of split,Aes)是一种能够与转录因子结合调节转录活性的蛋白,以往的研究显示其在发育过程中起重要作用,近期研究发现Aes可参与结肠癌转移。本研究旨在观察外源Aes在肝癌细胞中的定位以及其对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法:构建pEGFP-Aes表达载体,并通过LipofectamineTM2000将其转入Aes低表达的肝癌细胞系HepG2中,蛋白质印迹法(Westernblot)检测外源Aes的表达,荧光显微镜观察pEGFP-Aes在细胞中的定位,应用细胞计数盒(Cell CountingKit)-8检测转染Aes后细胞增殖活力变化;划痕实验检测转染前后细胞迁移能力的变化;Transwell实验检测Aes对细胞侵袭能力的影响。结果:Aes在HepG2中表达较低,将Aes转入肝癌细胞系HepG2,Aes在细胞核和细胞质中都有表达,并且在细胞核中形成点状浓积,Aes对肝癌细胞HepG2的增殖无显著影响,但能抑制HepG2的侵袭和迁移能力(P<0.05)。结论:Aes对肝癌细胞恶性表型的影响主要是抑制其侵袭和迁移能力。     

三羟异黄酮对肝癌细胞HepG2的ADAM17表达的调节

目的:观察三羟异黄酮(genistein)对肝癌细胞HepG2的生长增殖及ADAM17基因表达的影响. 方法: 培养肝癌细胞HepG2,加入三羟异黄酮特异性阻断酪氨酸蛋白激酶(TPK),MTT法观察genistein对HepG2细胞生长增殖的影响,PCR分析ADAM17基因水平变化,免疫组化法观察细胞水平ADAM17蛋白表达的变化. 结果:经过genistein处理的肝癌细胞HepG2生长增殖受到明显抑制,在48、72和96小时有统计学意义(P＜0.01);而且ADAM17的基因表达和蛋白表达都受到明显抑制(P＜0.05),抑制程度呈现时间依赖性关系.结论: 三羟异黄酮可以通过抑制TPK通路抑制肝癌细胞HepG2的生长增殖,并且抑制ADAM17基因和蛋白表达水平,从而间接调节HepG2细胞生长信号的传递.     

组织因子途径抑制物-2表达与肝癌细胞体外侵袭能力的实验研究

目的:研究肝癌组织中组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2 ,TFPI-2)基因的表达,同时探讨TFPI-2对肝癌细胞侵袭能力的影响.方法:应用原位杂交法和免疫组织化学法检测30例肝癌患者的癌组织和癌旁正常肝组织中TFPI-2基因和蛋白的表达;通过脂质体法将TFPI-2基因转染人HepG2细胞,RT-PCR检测转染前后TFPI-2 mRNA的表达;Transwell小室法测定TFPI-2基因转染前后肝癌细胞体外侵袭迁移能力的变化.结果: 肝癌组织中TFPI-2 mRNA与蛋白的表达水平明显低于癌旁正常肝组织(P < 0.05);成功转染TFPI-2基因的肝癌细胞HepG2中证实有TFPI-2 mRNA的表达;与未转染的细胞相比,转染TFPI-2的细胞体外侵袭能力明显下降,穿膜细胞数分别为45.2±5.6和 87.8±4.5 ,差异有统计学意义(P < 0.05);而迁移能力无明显变化,转染前后HepG2细胞的穿膜细胞数分别为140.4±7.4和152.8±9.6,差异无统计学意义( P > 0.05).结论:肝癌组织中TFPI-2表达明显降低,TFPI-2基因表达可明显抑制肝癌细胞的体外侵袭能力.     

花椒提取物诱导肝癌细胞凋亡作用和分子机制研究

目的：研究花椒提取物ZBME诱导的肝癌细胞凋亡作用及其分子机制。方法：体外培养肝癌细胞HepG2细胞株。分为对照组（生理盐水）和ZBME处理组。不同浓度的ZBME处理体外培养肝癌细胞,通过相差倒置显微镜观察对照组和处理组细胞失巢凋亡和生长抑制。免疫印迹（ Western blotting）方法检测ZBME对细胞内抗凋亡蛋白Mcl-1、Survivin和Bcl-xL以及促凋亡蛋白Bax表达调控,基于Annexin V-PI双染的流式细胞分析统计 ZBME 诱导的细胞凋亡率。结果：在相差显微镜下,可以观察到 ZBME 能够显著诱导HepG2肝癌细胞株发生细胞凋亡和生长抑制。MTT检测细胞相对活性结果显示ZBME能诱导HepG2细胞增殖抑制。8μg/ml ZBME处理细胞48h增殖抑制率约40%（P﹤0.05）。Annexin V-PI染色表明ZBME能诱导细胞显著凋亡,8μg/ml ZBME 处理细胞48h凋亡诱导率约90%（P﹤0.05）。结论：ZBME能够诱导肝癌细胞凋亡和增殖抑制。ZBME抗癌作用可能通过下调致癌蛋白Mcl-1、Survivin和Bcl-xL以及上调抑癌蛋白Bax实现。     

岩黄连水提物对肝癌HepG2细胞增殖和迁移能力的影响及其可能机制

目的 观察岩黄连水提物对原发性肝癌HepG2细胞增殖和迁移能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 将含不同浓度（0.4 mg/mL、0.8 mg/mL、1.6 mg/mL）的岩黄连水提物100 mL作用于肝癌 HepG2 细胞,以等量未处理培养基培养的肝癌HepG2细胞为对照组。采用CCK-8法检测肝癌HepG2细胞的增殖能力,Transwell法检测细胞迁移能力,Western blot和荧光定量PCR分别检测NF-κBp65蛋白和mRNA的表达水平。结果CCK-8实验结果显示,24 h、48 h和72 h不同浓度岩黄连水提物作用肝癌HepG2细胞的增殖抑制率组内差异均有统计学意义（P<0.01）,且0.8 mg/mL、1.6 mg/mL干预的细胞增殖抑制率均高于0.4 mg/mL（P<0.01）。Transwell实验结果显示,不同浓度岩黄连水提物作用肝癌HepG2细胞48 h后的细胞迁移数均低于对照组（P<0.001）,且可上调NF-κBp65蛋白和mRNA的表达（P<0.001）。结论 岩黄连水提物能抑制肝癌HepG2细胞增殖、迁移能力,其作用机制可能与上调NF-κBp65表达有关。     

水蛭素对肝细胞癌HepG2细胞抑制作用机制探讨

目的 研究水蛭素对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC,简称肝癌）HepG2细胞抑制作用及其抗肝癌的分子机制。方法 将含不同浓度（1 U/mL、2 U/mL、4 U/mL和8 U/mL）水蛭素的培养液作用于肝癌HepG2细胞,采用MTT法检测水蛭素对肝癌HepG2细胞增殖的影响,流式细胞仪检测水蛭素对肝癌HepG2细胞凋亡的影响,Transwell法检测水蛭素对肝癌HepG2细胞迁移、侵袭的影响,荧光定量PCR检测血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）基因的mRNA表达水平,Western blot检测VEGF基因的蛋白表达水平。结果 与空白对照组比较,肝癌HepG2细胞增殖抑制率随水蛭素浓度（1 U/mL、2　U/mL、4 U/mL和8 U/mL）增加及作用时间（24　h、48　h、72　h）延长而增加,呈剂量-时间依赖效应（P<0.05）。不同浓度（2 U/mL、4 U/mL和8 U/mL）水蛭素作用48 h后,肝癌HepG2细胞凋亡率分别为（28.37±1.16）%、（40.27±0.97）%、（76.17±1.5）%,细胞侵袭个数分别为（204±9）个、（163±6）个、（94±4）个,细胞迁移个数分别为（86±5）个、（54±7）个、（20±5）个,细胞凋亡率、侵袭及迁移个数随水蛭素浓度增加而增加,呈浓度依赖性（P<0.05）。VEGF mRNA、蛋白的表达量随水蛭素浓度增加而明显下调（P<0.05）。结论 水蛭素能抑制肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭,其机制可能是通过下调VEGF表达。     

重组生长激素体外干预人肝癌细胞膜GHR密度变化

目的体外环境下,针对人肝癌细胞生长激素受体（GHR）的不同表达状态,研究重组人生长激素（rhGH）对其胞膜表面GHR密度变化的影响。方法采用免疫细胞化学方法分别半定量测定人肝癌细胞株HepG2、SMMC7721、和QGY7701的GHR表达情况,采取50ng／mLrhGH,100ng／mLrhGH,200ng／mLrhGH干预和未处理4种干预方式体外培养上述3种细胞,然后利用放射性受体分析方法定量检测胞膜表面GHR密度变化。结果免疫细胞化学检测细胞株HepG2呈GHR高表达状态,50ng／mLrhGH、100ng／mLrhGH、200ng／mLrhGH干预后胞膜表面GHR位点数分别为8．4350±0．2396、9．3957±0．5143、8．3297±0．3133（10^3／cell）,较空白对照组7．5137±0．5352（10^3／cell）明显增加（P〈0．05）;细胞株SMMC7721呈GHR弱表达状态,50ng／mLrhGH、100ng／mLrhGH、200ng／mLrhGH干预后胞膜表面GHR位点数分别为3．8343±0．2590、3．8213±0．2276、3．6947±0．2722（10^3／cell）,与空白对照组3．7190±0．2824（10^3／cell）差异无统计学意义（P〉0．05）;细胞株QGY7701未表达GHR,各种rhGH干预后均未出现GHR表达的现象。结论rhGH明显促GHR高表达细胞株HepG2胞膜表面GHR密度增加,对GHR低表达细胞株SMMC772胞膜表面GHR密度无影响。rhGH不会改变细胞株QGY7701的GHR不表达状态。     

Biglycan及VEGF对结肠癌细胞增殖、凋亡能力的影响及分子机制

[目的]观察Biglycan及VEGF对结肠癌细胞系HCTll6增殖、凋亡的影响并探讨其可能机制。[方法]向转染Biglycan的细胞系HCTll6中转染VEGFsiRNA．设对照组（Mock）、空载和干扰对照组（Vector＋siRNA-NC）、BiglycancDNA和干扰对照组（Biglycan＋siRNA-NC）及BiglycancDNA和VEGF干扰组fBiglycan＋siRNA-VEGF）。Western Blot检测Biglycan、VEGF及Ki67、PCNA、P21的表达：MTT检测细胞增殖情况：流式细胞术检测细胞凋亡及周期。[结果]过表达Biglycan后,Ki67、PCNA和VEGF显著上调,P21显著下调。干扰VEGF后,上述3种周期蛋白的表达正好相反;Biglycan上调后,细胞增殖能力显著提高,下调VEGF后增殖能力又显著降低（P〈0．05）;Biglycan过表达后S期细胞总数（44.39％±1.80％）较Mock组（31．41％±1．81％）和Vector＋siRNA．NC组（32．56％±1．07％）显著提高fP〈0．01）,凋亡率（0．12％±O．01％）较Mock组（1．75％±0．17％）和Veetor＋siRNA-NC组（1．83％±0．16％）显著下降（P〈0．01）;下调VEGF后S期细胞（20．76％±1．23％）显著降低（P〈0．01）,凋亡率（8．30％±0．71％）显著上升（P〈0．01）。[结论]Biglycan通过促进VEGF的表达来促进结肠癌细胞的增殖并抑制其凋亡。     

洛铂对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡作用的实验研究

目的 探讨洛铂（LBP）对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其可能机制。方法取对数生长期HepG2细胞,分别采用不同浓度LBP（0、2.5、5、10、20 μmol／L）处理48 h。普通光镜观察细胞形态学改变;MTS法检测细胞增殖,并计算半数抑制浓度（IC50）;Annexin Ⅴ-FITC／PI双染法及Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;Western blotting检测Bax、Bak、Bcl-2、Bid、Bcl-XL、Survivin及PARP-1蛋白表达。结果 随着LBP浓度的升高HepG2细胞密度减少,离巢死亡细胞数目增多;光镜下可见典型核固缩、碎裂的凋亡细胞。LBP能显著抑制HepG2细胞增殖,且呈浓度和时间依赖性（P＜0.05）;2.5、5、10、20 μmol／L的LBP作用HepG2细胞48 h后的增殖率分别为（92.11±1.79）％、（65.87±1.78）％、（51.57±0.81）％及（33.11±1.47）％; LBP作用HepG2细胞48 h的IC50为13.28 μmol／L。2.5、5、10、20 μmol／L LBP作用48 h HepG2细胞的凋亡率分别为（11.64±0.85）％、（20.99±2.21）％、（33.02±2.30）％和（40.77±1.58）％,与LBP 0 μmol／L 的（3.29±0.43）％比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。2.5、5、10、20 μmol／L LBP能够下调HepG2细胞中的Bcl-2、Mcl-1蛋白表达,上调Bax、Bid、PARP-1蛋白表达, 对Bcl-XL、Bak及Survivin蛋白表达无影响。结论 LBP能够诱导HepG2细胞凋亡、抑制细胞增殖,其可能机制与上调Bax、Bid和PARP-1蛋白以及下调Bcl-2、Mcl-1蛋白表达有关。     

奥曲肽致裸鼠肝癌原位移植瘤坏死的实验研究

背景与目的：生长抑素类似物奥曲肽可抑制肝癌的生长,但能否使其坏死、获得更好的抗肿瘤效果呢？本研究旨在观察奥曲肽在体内、外对肝癌细胞株HepG2的作用,探讨其致肿瘤坏死的机制。方法：采用四甲基偶氮唑蓝法检测体外HepG2细胞的增殖,建立裸鼠肝癌HepG2细胞原位移植瘤模型．奥曲肽组裸鼠皮下注射奥曲肽100μg／（kg·d）;对照组皮下注射相同体积的生理盐水,连续用药8周。组织学评估肿瘤坏死程度,免疫组化检测移植瘤中血管内皮生长因子（VEGF）的表达,Western blot和免疫组化检测生长抑素受体2（SSTR2）的表达。结果：奥曲肽（0．1—1000nmol/L）作用24h,不影响HepG2细胞增殖。奥曲肽组裸鼠肝癌移植瘤重[（7．15±2．96）g]高于对照组[（4．21±3．11）g],移植瘤坏死体积[（81．86％±0．05）％]大于对照组[（43．75±0．06）％],两组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。与对照组明显不同的是．奥曲肽组移植瘤中未见VEGF表达。两组移植瘤组织血窦中SSTR2表达无显著性差异（P〉0．05）。结论：在肝癌细胞活跃增殖条件下,奥曲肽通过移植瘤血窦中SSTR2介导,仅仅抑制肿瘤血管生成,可致裸鼠肝癌显著坏死的良好效应。     

罗非昔布对裸鼠人胃癌组织中新生血管及血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨罗非昔布对裸鼠人胃癌组织中新生血管及血管内皮生长因子（vascular endothelial growthfactor,VEGF）表达的影响。方法建立BALB/C nu/nu裸鼠人胃腺癌SGC-7901细胞株原位种植转移模型,在种植术后1周以罗非昔布0.2 mL,5 mg.kg-1.d-1给裸鼠灌胃,连续8周后,对荷瘤鼠行彩色多普勒探查,观察胃肿瘤新生血管的形态和数量,通过免疫组织化学Envision法及RT-PCR方法检测胃癌组织中的VEGF蛋白及VEGFmRNA的表达。结果各治疗组肿瘤血管体积[罗非昔布组（9.96±3.58）,5-FU组（9.74±2.83）及联合组（8.25±3.14）]与生理盐水对照组（13.10±4.00）比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。VEGF蛋白表达及VEGFmRNA检测结果显示,各治疗组与生理盐水对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论环氧合酶-2抑制剂罗非昔布可以通过降低胃癌肿瘤组织中VEGF蛋白及VEGFmRNA的表达,减少肿瘤血管数量,抑制胃癌细胞的生长和转移。     

ＶＥＧＦ与肿瘤血管生成拟态关系的研究

【摘　要】　目的：了解ＶＥＧＦ与肿瘤形成血管生成拟态之间的关系。方法：在三维细胞培养模型中观察细胞株ＬＯ２、ＨｅｐＧ２、ＳＭＭＣ-７７２１和Ａ５４９细胞形成血管生成拟态现象的能力;ＲＴ-ＰＣＲ半定量检测以上４种细胞株中ＶＥＧＦ表达情况。结果：在三维细胞培养模型中,ＨｅｐＧ２和Ａ５４９细胞可以出现血管生成拟态现象,而ＬＯ２和ＳＭＭＣ-７７２１细胞不能出现血管生成拟态现象;ＲＴ-ＰＣＲ结果显示,ＬＯ２、ＨｅｐＧ２、ＳＭＭＣ-７７２１和Ａ５４９细胞中ＶＥＧＦ１６５／ＧＡＰＤＨ分别为０.２１２±０.０１１、０.２０８±０.０１３、０.１１７±０.００９、０.２１４±０.０１２;ＶＥＧＦ１２１／ＧＡＰＤＨ分别为０.１８６±０.０１８、０.１９２±０.０１４、０.０５０±０.０１０、０.１９６±０.０１７。ＬＯ２、ＨｅｐＧ２和Ａ５４９细胞中ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１２１表达明显较ＳＭＭＣ-７７２１细胞高（Ｐ＜００５）。结论：ＶＥＧＦ低表达的细胞株不出现血管生成拟态现象,ＶＥＧＦ高表达的细胞株不一定出现血管生成拟态现象,而有血管生成拟态现象的细胞株ＶＥＧＦ表达高,说明ＶＥＧＦ与血管生成拟态形成有一定关系,只有ＶＥＧＦ表达高的细胞才有形成血管生成拟态的潜能,但是,其不一定为独立的关键影响因素。     

低分子肝素对肿瘤细胞分泌血管内皮生长因子的影响

目的 研究低分子肝素(LIVIWH)对不同肿瘤细胞系分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响,以及其对VEGF所诱导的肿瘤血管内皮细胞增殖的作用.方法 采用酶联免疫吸附(ELISA)法,检测LIVIWH和肝素对肺腺癌A549细胞、肝癌HepG2细胞、结肠腺癌HCT116和HCT8细胞分泌VEGF和肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白的影响.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和实时定量PCR法,检测LMWH和肝素对HepG2细胞表达VEGF mRNA的影响.采用非放射性细胞增殖检测试剂盒和流式细胞仪,检测肿瘤条件培养基在有无LMWH作用时对脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖和细胞周期的影响.结果 对照组、IMWH组和肝素组A549细胞中,VEGF蛋白的表达量分别为(1045.89±165.30)pg/ml、(782.45±67.17)pg/ml和(916.54±71.25)pg/ml;对照组、LMWH组和肝素组HCT116细胞中,VEGF蛋白的表达量分别为(955.76±51.14)pg/ml、(822.89±142.39)pg/ml和(951.77±188.22)pg/ml;对照组、LMWH组和肝素组HCT8细胞中,VEGF蛋白的表达量分别为(1290.62±41.23)pg/ml、(1063.34±63.82)pg/ml和(1257.14±11.40)pg/ml;对照组、LMWH组和肝素组HepG2细胞中,VECF蛋白的表达量分别为(1083.00±134.35)pg/ml、(758.00±84.85)pg/ml和(874.00±22.62)pg/ml.LMWH可抑制不同肿瘤细胞系中VEGF蛋白的表达(均P＜0.05),但对TNF-α蛋白的表达没有影响.LNWH可抑制HepG2细胞中VEGF mRNA的表达.肿瘤条件培养基可以诱导HUVEC增殖,加入LMWH的肿瘤条件培养基中,HUVEC增殖减少,G_0+G_1期细胞比例增加.结论 LMWH可抑制不同的肿瘤细胞系分泌VEGF,并具有抑制VEGF诱导的血管内皮细胞增殖的作用.