海龙蛋白质提取物诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的机制

目的 研究海龙蛋白质提取物对宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的诱导作用.方法 采用MTT法检测蛋白质提取物对细胞生长的抑制情况,采用Annexin WPI流式细胞分析法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2、P53的表达.结果 不同浓度海龙蛋白质提取物对Hela细胞的增殖有抑制作用,具有时间和浓度依赖性.Annexin V/PI流式细胞分析显示,加药组早期凋亡率分别为29.18±0.65、39.32±0.78、51.21±1.13、61.56±1.09,与对照组（9.82±0.18）差异有统计学意义（P＜0.05）;晚期凋亡率加药组分别为3.20±0.03、7.48±0.06、11.11±0.07、14.60±0.03,与对照组（1.12±0.09）差异有统计学意义（P＜0.05）.Western blot检测发现随着蛋白质提取物浓度的升高,Bax、P53蛋白的表达逐渐升高,Bcl-2蛋白的表达逐渐降低.结论 海龙蛋白质提取物在一定浓度范围内可在体外抑制Hela细胞增殖并诱导其凋亡,且随蛋白质提取液浓度的升高,凋亡率显著增加,可能的机制是增强促凋亡蛋白Bax、P53的表达,降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达.     

TLR7激活上调细胞周期蛋白表达促进Hela细胞增殖

目的 探讨Toll样受体7(TLR7)信号通路激活对人宫颈癌Hela细胞周期蛋白表达及对细胞增殖的影响.方法 使用不同浓度的Gardiquimod经过不同的时间刺激Hela细胞,采用MTS比色法分析其对Hela细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测同一浓度的TLR7激动剂Gardiquimod经过不同的时间刺激Hela细胞后对Hela细胞周期的影响; Western blot分析Gardiquimod经过不同的时间刺激Hela细胞后对细胞周期蛋白CyclinB1、Cyclin E表达水平的影响.结果 TLR7的激活促进Hela细胞增殖,并呈时间和浓度依赖性;Gardiquimod可时间依赖性增加细胞周期在S期的比例;Cyclin B1、Cyclin E的表达水平随着Gardiquimod作用时间的增加而增加.结论 TLR7激动剂Gardiquimod可能通过上调细胞周期蛋白Cyclin B1、Cyclin E表达水平,进而促进Hela细胞增殖.     

白花蛇舌草抑制Hela细胞肿瘤活性的体外实验研究

目的探讨中药白花蛇舌草抑制人宫颈癌Hela细胞肿瘤活性的作用及分子生物学机制。方法MTT法检测白花蛇舌草对宫颈癌Hela细胞生长的影响,采用倒置显微镜观察细胞形态学变化,化学比色法测定Hela细胞活性氧（ROS）产生状态,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化染色并用计算机图像分析观察p53基因表达。结果白花蛇舌草可抑制Hela细胞的生长,其效果与药物的浓度和作用的时间相关,倒置显微镜下Hela细胞出现细胞凋亡的形态学改变,流式细胞仪检测到凋亡峰,白花蛇舌草作用后细胞内ROS水平下降,而突变型p53表达降低。结论一定浓度的白花蛇舌草对人宫颈癌Hela细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用,其机制可能与细胞内ROS水平和p53基因调控有关。     

小檗碱对宫颈癌Hela细胞Caspase-3基因表达的影响

目的:研究小檗碱(berberine)对人宫颈癌Hela细胞体外增殖、凋亡及凋亡相关基因Caspase-3表达的影响。方法:MTT法测定不同浓度(0～40μmol/L)berberine干预Hela细胞后的凋亡率;RT-PCR检测Caspase-3mR-NA表达水平。结果:berberine呈剂量-时间依赖方式抑制Hela细胞的生长(P<0.01);且随着berberine浓度增高,细胞凋亡增加,Caspase-3mRNA表达上调(P<0.001)。结论:berberine抑制人宫颈癌Hela细胞生长、诱导凋亡的机制可能与上调Caspase-3mRNA表达有关。     

丙戊酸钠调控组蛋白乙酰化对人宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡影响

目的探讨组蛋白乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠(VPA)对人宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的作用及其可能机制。方法不同浓度的VPA处理Hela细胞,应用Western blot法检测细胞内组蛋白H4乙酰化水平,荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测p21基因mRNA表达,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果经VPA作用后,人宫颈癌Hela细胞内组蛋白H4乙酰化水平增加,p21基因mRNA表达增加;同时细胞生长受到抑制,细胞凋亡增加。结论 VPA通过提高组蛋白乙酰化水平,增加p21基因表达,抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖和诱导细胞凋亡。     

顺铂对人宫颈癌Hela细胞超弱发光影响的观察

目的：探讨人宫颈癌Hela细胞株经顺铂（DDP）作用后其超弱发光与细胞增殖活性变化的关系．方法：选择DDP诱导人宫颈癌Hela细胞株,比较人宫颈癌Hela,Hela＋DDP细胞株形态变化．MTT比色法、流式细胞仪检测细胞生长周期变化及凋亡情况;用IFFM-D型流动式化学发光仪检测Hela,Hela＋DDP细胞的超弱发光强度变化．结果：DDP对Hela细胞有生长抑制作用,并呈时间和浓度依赖性,其48h的Ic5。值为3mg,／L,当DDP浓度在3mg／L以下时,对Hela细胞无明显毒性作用,超过此浓度时,其毒性呈剂量效应关系（P〈0．01）．流式细胞仪结果表明,与Hela细胞相比较,Hela＋DDP细胞G2期细胞数增多,而G1,S期的细胞数明显减少（P〈0．01）;细胞凋亡率在24,48,72h分别为（11．4±5．8）％,（21．8±7．9）％,32．5±11．6）％．在1×10^-4mol／L鲁米诺及3mL／L双氧水（H2O2）条件下超弱发光强度随着时间的变化,Hela＋DDP细胞明显降低（P〈0．01）．结论：在DDP非毒性剂量作用后,Hela＋DDP细胞超弱发光强度降低,提示超弱发光检测可能作为筛选敏感化疗药物的一项指标．     

刺参黏多糖对人宫颈癌Hela细胞caspase表达影响

目的 探讨刺参黏多糖对人宫颈癌Hela细胞株体外生长、凋亡的影响及可能机制.方法 以0～8.0 g/L刺参黏多糖分别处理Hela细胞24～120 h后,以四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)测定细胞生长活性,透射电镜观察细胞形态,RT-PCR法检测凋亡相关基因caspase-3、caspase-9 mRNA的表达.结果 刺参黏多糖对Hela细胞的生长具有抑制作用,电镜下可观察到凋亡小体等细胞凋亡的形态学改变.随着药物浓度及作用时间的增加,caspase-3及casepase-9 mRNA表达增加.结论 刺参黏多糖可抑制Hela细胞生长,诱导Hela细胞的凋亡,其机制可能是通过诱导caspase-3及caspase-9 mRNA表达增多实现的.     

蛇床子素对宫颈癌Hela细胞凋亡的作用研究

目的 探讨蛇床子素对人宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡的作用及可能的机制.方法 经不同浓度蛇床子素处理体外培养的宫颈癌Hela细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞内活性氧(ROS)水平,半定量RT-PCR法检测Bcl-2和Bax mRNA的表达.结果 与对照组比较,不同浓度的蛇床子素均可明显抑制人宫颈癌Hela细胞增殖、诱导细胞凋亡,增高细胞内ROS水平,降低Bcl-2/Bax的表达比例,且具有一定的剂量依赖性.结论 蛇床子素抑制人宫颈癌Hela细胞增殖并促进细胞凋亡,与升高细胞ROS水平、促进激活促凋亡因子Bax的表达和抑制抗凋亡因子Bcl-2的表达有关.     

原花青素对宫颈癌Hela细胞livin和caspase-3基因表达的影响

目的探讨原花青素对宫颈癌Hela细胞livin和cospose-3基因表达的影响。方法用不同终浓度原花青素（0～600μmol／L）处理宫颈癌Hela细胞24h，采用MTT比色法分析细胞存活率，Hoechst 33258-PI荧光染色法检测凋亡，RT—PCR检测livin、cospose-3 mRNA表达变化，Western blot检测livin、cospose-3 P17蛋白表达的变化，用比色法检测caspose-3相对活性。结果随着原花青剂量的增加，宫颈癌Hela细胞存活率降低，凋亡明显增加，livin mRNA表达和蛋白表达水平逐渐减少，而cospose-3逐渐增加；随原花青素浓度从75—600μmol／L增加，caspase-3相对活性增加（P〈0．05），在600μmol／L原花青素时caspose-3相对活性达最大值。结论原花青素可剂量依赖性的减少livin mRNA和蛋白表达；原花青素可剂量依赖性的增加caspose-3 mRNA、蛋白表达和增加cospose-3活性。     

TRAIL诱导人肝星状细胞系LX-2凋亡及DR5与Bax调节作用

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导肝星状细胞凋亡情况及DR5与Bax的调控作用.方法 RT-PCR检测LX-2中α-SMAmRNA和DR5mRNA的表达;MTT比色法、流式细胞术检测外源性TRAIL对LX-2细胞增殖和诱导细胞凋亡的影响;采用Western blot检测Bax、Caspase-3表达.结果 培养的LX-2表达αSMA mRNA和DR5mRNA逐渐增加,TRAIL可抑制其细胞增殖.TRAIL与对照组比较可以诱导活化的LX-2细胞凋亡明显增加(P<0.05),在TRAIL作用下,LX-2线粒体Bax、细胞浆Caspase-3表达上调.结论 外源性TRAIL可以诱导活化的LX-2凋亡,DR5及线粒体Bax表达上调与此过程密切相关.     

TLR9 expression and its role in chemosensitivity to DDP in human cervical cancer cells in vitro

Inflammation and infection play an important role in the pathogenesis of many cancers.Toll-like receptors(TLRs) are a class of pattern recognition receptors that recognize conserved components of microbes and trigger the immune response against invading microorganisms.Toll-like receptor 9(TLR9) recognizes non-methylated cytosine-phosphateguanosine(CpG) DNA sequences which are the surrogate for viral DNA.TLR9 may react to tumor development and progression during chronic inflammation that involves the tumor microenvironment.In order to study the role of TLR9 in cervical cancer,we analyzed the TLR9 expression in different types of HPV infection cervical cancer cells.Then we detected if CpG sequences influenced the TLR9 expression and the sensitivity to cisplatin(DDP) of these cervical cancer cells in vitro.The expression of TLR9 mRNA and protein in SiHa,Hela and C33A cells was detected by RT-PCR and Western blotting.Real-time PCR was used to examine the TLR9 expression changes induced by CpG.Chemosensitivity of the cervical cancer cells to cisplatin(DDP) was measured by MTT.It was observed that the expression of TLR9 mRNA and protein was increased gradually in SiHa(HPV16+),Hela(HPV18+) and C33A(HPV-) cells.Low doses of CpG increased the TLR9 expression only in C33A(HPV-) cells,but not in SiHa(HPV16+) and Hela(HPV18+) cells.Furthermore,low dose of CpG significantly increased the sensitivity of C33A(HPV-) cells,but not that of SiHa(HPV16+) and Hela(HPV18+) cells.These results indicated that TLR9 may serve as a protective agent in HPV negative cervical cancer cells.It was concluded that TLR9 could improve the sensitivity to DDP in HPV negative cervical cancer cells and might represent a potential therapeutic option in clinical practice.     

CpG-ODN对肺癌A549细胞化疗的协同作用

目的 研究CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)对肺癌A549细胞化疗的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 将肺癌A549细胞分为空白对照组、DDP组、CpG-ODN组、DDP+CpG-ODN组、CpG-ODN+DDP组。采用CCK-8比色法检测细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,RT-PCR检测TLR9 mRNA的表达,Western印迹法检测TLR9信号通路中MyD88、AP-1的表达。结果 TLR9激活CpG ODN后,能显著提高细胞的增殖能力(P<0.05);CpG-ODN与CpG-ODN+DDP两组细胞生长无明显差异(P>0.05);CpG-ODN+DDP组细胞凋亡率较DDP组低(P<0.05),DDP+CpG-ODN组细胞凋亡率较DDP组明显升高(P<0.05);DDP+CpG-ODN组TLR9 mRNA较DDP组明显升高(P<0.05);DDP+CpG组AP-1蛋白表达上调(P<0.05)。结论 CpG-ODN激活TLR9信号通路后,可协同DDP促进细胞凋亡,提高顺铂化疗的敏感性。     

miR-21负向调控宫颈癌HeLa细胞株中hTERT的表达

  目的  通过观察在miR-21作用下hTERT的表达情况，探讨在宫颈癌HeLa细胞中miR-21对hTERT的调控作用。  方法  利用RT-PCR 法及West Blot 法分别检测HeLa中miR-21 的表达，以及hTERT蛋白的表达情况；通过实验设计，生成miR-21模拟物和 miR-21抑制剂，并分别设立两组的空白对照序列；将空转liposome2000 （lipo2000）设为对照组，利用脂质体 liposome2000包裹宫颈癌细胞株 HeLa并予以转染。在转染后24 h及时检测hTERT及蛋白的表达量。  结果  HeLa细胞株中miR-21及hTERT表达阳性；转染后24 h模拟物组、模拟物对照组、抑制剂组、抑制剂对照组、脂质体组 hTERT mRNA相对表达水平分别为（0.51±0.33）、（0.69±0.19）、（1.33±0.39）、（0.83±0.26）和（0.58±0.16）；蛋白相对表达水平分别为（0.41±0.18）、（0.62±0.18）、（1.45±0.60）、（0.83±0.15）和（0.82±0.30）；模拟物组与其对照组及脂质体组相比较，hTERT mRNA及蛋白表达情况均较低且差异有统计学意义（P < 0.05）；相反，在抑制剂组与其对照组及脂质体组相比较中，hTERT mRNA及蛋白表达情况明显升高，差异有统计学意义（P < 0.05）。  结论  通过检测发现miR-21及hTERT基因在HeLa细胞株中均呈现高表达状态；miR- 21可以调节hTERT mRNA 和蛋白表达水平，从而发挥负向调控hTERT的作用。     

CTGF基因转染对宫颈癌细胞MMP-2、MMP-9表达及细胞增殖的影响

目的:研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)基因对人宫颈癌Hela细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达及细胞增殖的影响,探讨CTGF在宫颈癌侵袭和转移中的作用机制。方法:经脂质体介导将含有CTGF重组表达质粒转染人宫颈癌Hela细胞株,用G418筛选阳性细胞克隆及实时荧光定量PCR、蛋白质印迹鉴定;采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测阳性克隆细胞MMP-2及MMP-9的表达;噻唑盐(MTT)比色法检测阳性细胞克隆的增殖活性。结果:成功建立稳定高表达CTGF的阳性Hela细胞克隆,证实其MMP-2、MMP-9表达及细胞增殖活性均显著增高。结论:CTGF转染可显著增加宫颈癌细胞MMP-2及MMP-9的表达并促进其细胞增殖,CTGF可能是宫颈癌基因治疗的潜在靶点。     

宫颈癌组织中microRNA-506表达及临床病理意义

目的:探讨宫颈癌组织中微小RNA(microRNA,miR)-506表达与临床病理参数的关系。方法:采用茎环实时荧光逆转录聚合酶链反应检测46例宫颈癌组织及相应的癌旁组织中miR-506表达,根据其表达情况对临床病理参数进行分析。Transwell well方法检测转染miR-506寡核苷酸对Hela细胞运动和侵袭影响,Western blot方法检测E-cadherin和vimentin表达。结果:46例宫颈癌组织中miR-506相对表达量显著低于癌旁组织(P<0.01)。在Ⅲ/Ⅳ期宫颈癌组织中miR-506相对表达量明显低于Ⅰ/Ⅱ期宫颈癌组织(P<0.01);在低分化癌组织中相对表达量明显低于中高分化癌组织(P<0.01)。且miR-506在有淋巴结转移组相对表达量明显低于无淋巴结转移组(P<0.01);但在患者年龄、绝经与否和肿瘤直径间miR-506相对表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。miR-506转染组Hela细胞运动和侵袭均明显低于未转染组(P<0.01),miR-506转染组抑制Hela细胞vimentin表达,而促进E-cadherin表达。结论:宫颈癌组织中存在miR-506低表达,miR-506表达缺失可能与宫颈癌的肿瘤生长和侵袭发展相关,在宫颈癌预后判断中可能有一定价值。     

三氧化二砷通过抑制NF-κB增强TRAIL诱导A549细胞凋亡的作用研究

【摘要】 目的 研究三氧化二砷(As2O3)联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及对核转录因子-kappaB(NF-κB)表达的影响。方法 采用As2O3、TRAIL单用和联合作用于体外培养的A549细胞,以四甲基偶氮唑蓝比色法测细胞增殖抑制率和流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测NF-κB mRNA的表达,Western blot检测NF-κB蛋白的表达,酶联免疫吸附(ELISA)检测NF-κB的活性。结果 As2O3与TRAIL联用对A549细胞增殖的抑制作用均比单药组强(P<0.05);联合用药组诱导凋亡作用强于单药组(P<0.05);联合用药组明显抑制NF-κB表达,并抑制其活性(P<0.05)。NF-κB mRNA、蛋白及其活性与细胞凋亡率呈负相关（P均<0.05）。结论 As2O3可能通过NF-κB通路,增强TRAIL诱导A549细胞凋亡的作用。     

Hsp90特异性抑制剂对宫颈癌细胞存活机制的探讨

目的:研究Hsp90的特异性抑制剂格尔德霉素(GA)在宫颈癌Hela细胞存活中的作用,并对其机制进行探讨。方法:培养人宫颈癌细胞株Hela,MTT法检测GA作用后细胞抑制率,RT-PCR方法检测GA作用后Bcl-2 mRNA的表达。结果:MTT法显示GA对Hela细胞有生长抑制作用,用药浓度越高,抑制率越高。不同浓度的GA处理宫颈癌Hela细胞后,Bcl-2 mRNA呈剂量依赖性降低,10μmol/L的GA抑制作用最强。10μmol/L的GA处理Hela细胞不同时间点后,Bcl-2 mRNA的表达呈时间依赖性降低。结论:在宫颈癌Hela细胞应用特异性Hsp90抑制剂GA,能够抑制宫颈癌细胞的生长,并通过抑制Bcl-2来促进其凋亡,Hsp90可以成为宫颈癌治疗中的一个新靶点     

hAG(K1～3)联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因真核表达质粒对裸胃癌皮下移植瘤的作用

目的 探讨hAG(K1-3)联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因在体内对裸鼠胃癌皮下移植瘤的生长抑制作用.方法 通过亚克隆法构建重组质粒pBud-hAG及pBud-hAC-TRAIL,将人胃癌细胞SGC-7901注射裸鼠皮下形成移植瘤,并将移植瘤小鼠随机分为实验组和对照组.实验组包括pBud-hAG组和pBud-hAG-TRAIL组,各5只;对照组包括空质粒(pBud)组和生理盐水组,各5只.然后分别将2种重组质粒分次多点注入实验组移植瘤体内,并与对照组比较,通过检测移植瘤的体积和肿瘤微血管密度(MVD)研究其对肿瘤生长抑制情况及对肿瘤血管密度的影响.结果 pBud-hAG组和pBud-hAG-TRAIL组移植瘤的MVD分别是(4.6±1.2)个/高倍视野(HP)和(4.8±0.9)个/HP(P>0.05),而pBud组和生理盐水组分别是(17.4 ±2.4)个/HP和(18.2±2.7)个/HP,实验组和对照组之间差异有统计学意义(P<0.05).pBud-hAG组和pBud-hAG-TRAIL组的sTRAIL和hAG mRNA及蛋白表达均为阳性,其移植瘤体积分别是(1.862 ±0.017)cm3和(1.325±0.012)cm3(P<0.05),而pBud组和生理盐水组分别是(3.637±0.032)cm3和(3.521 ±0.028)cm3,实验组与对照组差异有统计学意义(P<0.05).结论 hAG(K1-3)通过抑制血管内皮细胞的生长而抑制肿瘤血管的生成,而TRAIL则通过诱导肿瘤细胞凋亡,从而抑制肿瘤细胞生长,因此hAG(K1-3)联合TRAIL具有更强的抗肿瘤作用.     

TLR9在 CpG寡脱氧核苷酸所致种属特异性免疫效应中的意义

目的：探讨TLR9在CpG寡脱氧核苷酸（CpG-ODN）种属特异性免疫效应中的意义。方法：CpG-ODN体外刺激人、猕猴、小鼠外周血单个核细胞（PBMC）,ELISA测培养液IFN-α含量;RT-PCR检测PBMC中TLR9的表达水平。结果：CpG-ODN 2216有效诱导人PBMC分泌IFN-α,而对猕猴和小鼠却无明显的免疫刺激活性;TLR9在人PBMC中均有表达,并且在CpG-ODN介导激活的人PBMC中表达上调;TLR9在猕猴PBMC中不表达。结论：TLR9是构成CpG-ODN种属特异性的重要分子基础。     

TRAIL及其受体DcR1和DR4在宫颈癌组织中的表达及意义

目的检测宫颈癌和正常宫颈组织中人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TNF related apoptosis inducing ligand, TRAIL）及其受体DcR1和DR4的表达,探讨TRAIL及其受体的表达与宫颈癌发生、发展的关系。方法免疫组织化学Envision法检测43例宫颈癌和30例正常宫颈组织中TRAIL及其受体DcR1、DR4的表达。结果TRAIL、DcR1、DR4免疫阳性产物为棕黄色,定位于胞浆或胞膜, TRAIL及DcR1在宫颈癌组织中的表达显著低于正常宫颈组织,DR4在宫颈癌组织中的表达显著高于正常宫颈组织(P＜0.05);TRAIL、DcR1、DR4在宫颈癌组织中的表达与患者的年龄、分期、淋巴结转移无关(P＞0.05)。结论TRAIL是肿瘤细胞分化差的标志之一;宫颈癌细胞由于DR4的高表达和DcR1的低表达而易被TRAIL诱导凋亡。