氯化钴作用人脐带间充质干细胞的差异蛋白质组学分析

目的 用蛋白质二维凝胶电泳图谱,结合质谱技术鉴定、分析化学低氧模拟剂氯化钴( CoCl2)作用人脐带间充质干细胞(MSC)前后蛋白质组的差异表达.方法 CoCl2作用人脐带MSC,应用双向凝胶电泳技术(2-DE)分离细胞总蛋白.ImageMaster 2D Platinum软件分析差异蛋白质点,用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱对差异表达蛋白做质谱鉴定,对差异蛋白进行功能分类.结果建立了CoCl2作用人脐带MSC的蛋白质组图谱,鉴定出26个差异表达蛋白,其中11个表达上调,15个表达下调.其生物学功能涉及糖代谢、蛋白质代谢和修饰、脂类代谢、辅酶与辅基、细胞周期、免疫和防御、细胞结构和运动、信号转导、蛋白靶向和定位、神经细胞的活动、肌肉收缩等.其中过氧化物还原酶-1(Prdx1)表达下调,α-烯醇化酶(ENO1)、单胺囊泡转运蛋白1(VAT1)表达上调.结论 低氧对人脐带MSC的影响涉及多蛋白及多个功能通路.     

急性脊髓损伤蛋白质的双向电泳分析和质谱鉴定

目的 建立急性脊髓损伤双向凝胶电泳图谱，初步观察急性脊髓损伤组织中蛋白质组的变化与差异表达，为进一步探讨急性脊髓损伤分子机制奠定了基础。方法 采用双向凝胶电泳分离脊髓总蛋白，银染显色，Image Master图象分析系统分析，从胶中选取分离蛋白质点，基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）分析获取肽质量指纹图谱（PMF），Mascot软件搜索MSDP、SWISS-PROT数据库鉴定蛋白质。结果 获得重复性和分辨率较好的脊髓双向凝胶电泳图谱。质谱分析了12个蛋白质点，获取6张肽质量指纹图谱。通过查询数据库鉴定了9个蛋白质。通过对过表达脊髓损伤中蛋白质表达谱改变的研究，鉴定出9个差异表达蛋白质，这些蛋白质包括等。这些差异蛋白质涉及基因为上调蛋白钙蛋白酶Calpin、神经丝蛋白M Neurofilament triplet αl-糖蛋白αl-Acid-glycoprotein、Oxygen regulated protein 1在脊髓损伤组下调。钙蛋白酶抑制剂Calpain inhibitor，假象蛋白-10 Hypotherical protein cgi-10在脊髓损伤组消失。并在损伤组出现新蛋白预测蛋白Hypothetical 152．1 kDa protein和核内寡聚肽酶Endooligopeptidase A related protein。结论 成功构建脊髓损伤与正常脊髓双向凝胶电泳图谱。并应用质谱技术鉴定了特异蛋白质点。在我们所鉴定的脊髓损伤过程中发生最显著变化的蛋白质中，有7种蛋白具有与一致的变化趋势，其中钙蛋白酶、神经丝蛋白、神经营养素低亲合力受体（p75NTR）、αl-糖蛋白、氧调节蛋白1、钙蛋白酶抑制剂、假想蛋白-10表达上调、下调与消失变化在脊髓损伤中居极其重要地位。     

大鼠骨髓间充质干细胞向内皮细胞分化过程中蛋白质表达差异分析

目的 探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)体外向内皮细胞分化过程中差异性表达的蛋白质.方法 用血管内皮生长因子(VEGF)联合上皮生长因子(EGF)诱导MSC向内皮细胞分化,提取细胞蛋白进行双向凝胶电泳,通过Imagemaster 5.0软件筛选差异性表达的蛋白质点,并应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱对其进行鉴定.结果 诱导后的MSC高表达内皮细胞相关标志,流式细胞术检测CD31、CD34和凝血因子Ⅷ相关抗原(FⅧAg)阳性细胞率分别为56.8％、38.8％和14.5％.与培养的原代MSC比较,诱导后细胞差异表达91个蛋白质点,鉴定了其中的19个,11个表达上调,8个表达下调.主要包括肌球蛋白、肌丝蛋白、波形蛋白、钮蛋白等细胞骨架蛋白;线粒体醛脱氢酶、EROl-α、线粒体乙酰辅酶异构酶、二硫化物异构酶3、脂肪酸合成酶、烯醇酶3等细胞代谢酶;TAR脱氧核糖核酸结合蛋白、鸟苷酸结合蛋白和缺氧诱导因子1等核转录因子和血管内皮生长因子受体2(KDR)等.结论 细胞骨架蛋白、细胞代谢酶类、核转录因子和KDR等均与MSC向内皮细胞分化有关,这些蛋白可能是MSC向内皮细胞分化过程的调控靶点.     

双向电泳技在筛选膀胱癌特异标志蛋白中的应用

目的建立高分辨率的膀胱移行上皮癌不同时期的双向凝胶电泳图谱,并初步分析其蛋白质表达情况,寻找其差异表达蛋白,为寻找癌变相关蛋白奠定实验基础.方法用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离膀胱移行上皮癌不同分期的组织,凝胶考马斯亮蓝染色,然后利用GS-800Calibrated Densitometer凝胶成像系统获取图像,用PDQuest2D分析软件对图像进行背景消减、斑点检测、匹配、斑点位置重复性的系统分析,寻找差异表达蛋白.在此基础上应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)得到相应的肽质指纹图谱,然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质.结果获得了背景清晰、分辨率和重复性较好的双向凝胶电泳图谱,三块胶的平均蛋白质匹配率达76%,蛋白质点在位置上有较好的重复性,不同胶间的蛋白质点在等电聚焦IEF方向偏差是(0.98±0.26)mm,SDS-PAGE方向偏差是(1.23±0.22)mm,并且得到了若干与细胞增生、分化、周期调控信号转导或肿瘤发生有关的蛋白质,例如SFN,热休克蛋白-27等.结论为进一步探讨癌变机理及筛选其特异性分子标志物打下方法学基础.     

亚健康疲劳状态血清对骨骼肌细胞蛋白质表达的影响

背景;前期研究表明亚健康疲劳状态时血清对体外培养骨骼肌细胞的生存活力、细胞超微结构、细胞线粒体膜细胞色素C氧化酶活性和线粒体能量负荷具有显著影响.目的:进一步运用二维凝胶电泳和质谱技术观察亚健康疲劳状态血时清对骨骼肌细胞蛋白质表达谱的影响.设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-03/05在南方医科大学中医证候研究实验室和天津生物芯片技术有限责任公司蛋白质组学实验室完成.材料:亚健康疲劳状态时血清和正常状态时血清为自制:人骨骼肌细胞为Sciencell公司产品.方法:体外培养骨骼肌细胞,随机分为正常组和亚健康组,分别用含30%正常血清和30%亚健康疲劳者血清的DMEM/F12细胞培养液培养72 h,收集细胞,提取细胞总蛋白.主要观察指标:通过PDQuest7.3.0软件分析二:维凝胶电泳图谱,比较各组间蛋白表达量,然后利用质谱制作差异蛋白点的肽谱,确定差异蛋白,通过生物信息学分析所得蛋白的功能.结果:在2组凝胶中有15个蛋白质点显著差异表达,亚健康组中表达升高的蛋白质点有10个,下降有5个,其主要涉及能量代谢,核苷酸合成,细胞修复,应激等相关蛋白.结论:亚健康疲劳状态时血清可影响人骨骼肌细胞相关蛋白的表达.     

Bcl-2高表达转基因小鼠脊髓损伤后差异表达蛋白的蛋白质组学分析

目的 通过建立B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)高表达转基因小鼠与野生型小鼠急性脊髓损伤组织的双向电泳图谱,比较蛋白质组的变化和差异表达,初步探讨Bcl-2保护脊髓损伤的分子机制.方法 转基因(A组)及同窝非转基因小鼠(B组)各15只,随机分为三组(1 d、7 d、14 d),采用垂直打击(weight dropping,WD)方法,以2.5×3.0 g·cm致伤力致伤小鼠脊髓.于术后1 d、7 d、14 d处死,取脊髓标本进行检测:①采用双向凝胶电泳分离脊髓总蛋白,建立双向凝胶电泳图谱;②用ImageMaster 软件分析图像,基质辅助激光解析电离飞行时间,质谱(MALDI2TOF2MS) 分析获取肽质量指纹图谱(PMF);③用Mascot软件系统和NCBIMS数据库检索确定蛋白质.结果 鉴定出差异蛋白质33个,其中1 d 8个,7 d 12个,14 d 13个.与B组小鼠比较,A组小鼠表达上调的蛋白质有热休克蛋白、含缬酪肽蛋白、peroxiredoxin 6等,下调的蛋白质为钙蛋白酶、泛素羧基末端水解酶-1等.多数差异蛋白质涉及到应激保护、抗氧自由基损伤、促进神经修复等过程,具有神经保护功能.结论 除了抗凋亡作用,Bcl-2蛋白可能还具有抗氧自由基损伤、促进神经修复、加强应激等多方面的神经保护功能.     

肝癌切除肝缺血再灌注损伤前后的蛋白质组学变化◆

背景:肝癌切除肝缺血再灌注损伤可促进微小转移灶的侵袭转移并引起线粒体损伤.目的:比较肝癌切除手术过程中肝正常组织缺血再灌注损伤前后蛋白质表达谱的改变,筛查发生肝缺血再灌注损伤应激的相关蛋白质分子标志物并探讨可能机制.方法:应用双向等电聚焦/聚丙烯酰胺凝胶电泳建立20例肝癌切除患者肝缺血再灌注前与灌注后15 min肝正常组织的全细胞蛋白质和线粒体蛋白质表达图谱,并进行差异分析,应用基质辅助激光解吸离子化串联时间质谱对差异蛋白质点进行鉴定,并进行生物信息学分析.结果与结论:相同条件下对各组全细胞和线粒体蛋白样品分别进行3次双向电泳,筛选在3次电泳中均存在的差异点进行分析,在全细胞蛋白质图谱中共鉴定出5个差异蛋白,在线粒体蛋白质图谱中未鉴定出明显的差异蛋白.结果可见肝癌切除手术过程中肝缺血再灌注15 min即可使细胞骨架蛋白、热休克蛋白等细胞保护蛋白表达发生改变,同时有促进肿瘤转移的风险,需要采取预防措施降低影响,但线粒体蛋白表达基本未发生改变.     

男性不育患者精浆中差异表达蛋白的筛选与鉴定

目的:初步探讨蛋白质组技术在精浆研究中的应用,建立男性少精、无精症患者及健康者精浆双向凝胶电泳图谱;筛查并鉴定三者间的差异表达蛋白质。方法:采用双向凝胶电泳(2-DE)分离少精症、无精症患者和健康者精浆总蛋白,银染显色,ImageMaster 2D Elite软件分析,从中选取差异表达蛋白质,通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质。结果:获得分辨率较好的精浆双向凝胶电泳图谱;得到5个在少精症、无精症患者与健康者精浆中差异有显著性的蛋白质斑点,进行鉴定,结果表明这些特异蛋白分别为Serpin B6(Placental thrombin inhibitor)(Cytoplasmic antiproteinase)(CAP)(Protease inhibitor6)(PI-6)、Septin-1(LARP)(Serologically defined breast cancer antigen NY-BR-24)、Kallikrein-6 precursor(Protease M)(Neurosin)(Zyme)(SP59)、Hemoglobin beta chain、...     

血清蛋白双向电泳图谱早期诊断肺鳞状细胞癌价值

目的:建立肺鳞状细胞癌及正常人血清蛋白双向凝胶电泳图谱,寻找肺鳞状细胞癌早期特异性分子标志物。方法:利用双向凝胶电泳分离出肺鳞状细胞癌及正常人血清蛋白,用图像分析软件比较分析,识别差异表达的蛋白质并进行质谱分析鉴定。结果:共识别出12个差异表达的蛋白质,其中5个与肺鳞状细胞癌相关。结论:建立人肺鳞状细胞癌及正常人血清蛋白双向电泳图谱,鉴定出与肺鳞状细胞癌相关的差异表达蛋白质,可为肺鳞状细胞癌的早期诊断及发病机理研究提供崭新方法。     

窄范围pH梯度干胶条可提高胃癌细胞蛋白质组表达谱分辨率

目的探讨不同pH梯度干胶条在提高胃癌细胞蛋白质表达谱分辨率中的作用,为深入研究胃癌的蛋白质组学奠定基础。方法提取胃低分化腺癌细胞MGC-803的蛋白质,分别采用pH 3~10和pH 4~7不同pH梯度干胶条建立胃低分化腺癌细胞MGC-803蛋白质双向凝胶电泳图谱,与相对应pH区域的蛋白质斑点进行比较。结果成功地构建出两种不同pH梯度MGC-803细胞的双向凝胶电泳图谱,经比较两种图谱蛋白质斑点结果显示,运用窄范围pH 4~7干胶条可更有效分辨出pH 3~10部分区域内聚积的蛋白质斑点。结论采用窄范围pH的干胶条可提高双向电泳图谱分辨率,优化了胃癌细胞蛋白质组学研究的技术体系,可有效获取待测靶蛋白。     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感，不同性别孤独感发生率无差异性，不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）；随年级增加，孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970，P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题，老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童，以减少其孤独感的发生。     

产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

Determination of loss of quality of life

Physiatrists are a valuable resource in legal settings, where assessment of functional capacity to perform work and of future medical needs must be determined. Physiatrists help determine what future medical care is needed to restore and maintain an individual at the maximum level of life function. This article focuses on the use of a quality of life (QOL) rehabilitation model, rather than a medical model, for enhancing functional performance, modifying environments, and facilitating patient coping. We discuss use of the QOL model to describe and influence a patient's physical, psychological, cognitive, vocational/economic, and social/leisure domains.     

护士选择性应用静脉留置针现状分析

[目的]了解护士选择性应用留置针的现状以及主要影响因素,为指导临床留置针合理应用提供理论依据。[方法]采用自设问卷对138名护士留置针选择性使用情况及其影响因素进行调查。[结果]约1／4的护士并不知道应选择性使用留置针,近60％的护士在实际工作中选择留置针的意识较差;护士选择性应用留置针的决策受多因素影响;不同科室、职称及是否具有带教资格选择性应用留置针的影响因素不尽相同;绝大部分护士希望参加选择性应用留置针相关内容的培训。[结论]临床护士操作前考虑留置针选择的意识有待加强。建议实施有针对性的培训以提高护士选择性应用留置针的能力。     

血液透析患者家庭护理提供者的生活质量调查

目的:了解江汉油田血液透析(血液透析)患者家庭护理提供者(护理者)的生活质量。方法:对60例血液透析患者的家庭护理提供者进行一般情况和生活质量综合评定问卷(QOLI-74)调查,并进行相关性和多因素回归分析。结果:家庭护理提供者各维度的主观生活满意度与其客观指标相关,但也与其需求、年龄、文化程度、与患者的关系有关。结论:客观状态是影响主观生活满意度的重要因素,同时应考虑护理者的需求、年龄、文化程度、与患者的关系对护理者主观生活满意度的影响。