金黄色葡萄球菌及其肠毒素B对慢性实验性哮喘小鼠的影响

目的 探索金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)对实验性支气管哮喘小鼠肺组织Th0细胞分化的在体调节和对气道炎症的作用.方法 32只15～17 d BALB/c小鼠,随机分为4组:对照组、模型组、金黄色葡萄球菌组、金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)组.用卵蛋白(OVA)致敏和激发建立小鼠慢性哮喘模型,在致敏前14 d对幼年鼠做金黄色葡萄球菌或SEB预防性腹腔注射.观察记录小鼠的耗氧量、肺组织切片、支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞及相关细胞因子等的改变.结果 金黄色葡萄球菌组与模型组相比.肺组织病理切片结构紊乱减轻、炎症细胞明显减少,小鼠耗氧量降低(5.24±0.12 vs 5.59±0.18),BALF中IL-4水平明显下降(44.94±4.51 vs 29.37±4.17),IFN-γ水平明显增加(19.61±3.83 vs 29.33±4.04),SEB组也有上述作用(耗氧量:5.09±0.20;细胞介素4:36.68±5.10;γ干扰素:24.27±3.46).结论 金黄色葡萄球菌能明显减轻实验性哮喘的气道炎症,纠正哮喘小鼠肺组织中Th1/Th2细胞因子的失衡,其作用可能是通过其分泌的SEB.     

金黄色葡萄球菌肠毒素B基因克隆、表达及其抗血清在食物中毒快速检测上的应用

目的克隆和表达金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）基因,制备金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）的多克隆抗体,应用于金黄色葡萄球菌引起的食物中毒的诊断。方法用核酸扩增技术从金黄色葡萄球菌菌株中分离产生肠毒素B的标准菌株,采用高保真PCR技术从金黄色葡萄球菌野生株中扩增全长SEB,目的片段经TA克隆后DNA序列测定,重组质粒pGEM—SEB经酶切获得的SEB基因片段与真核表达载体pGEX-4T-3连接,将重组真核载体pGEX-4T-3-SEB转化人E．coli BL21（DE3）株,在0．1mmol／LIPTG诱导下,诱导SEB基因在E-coli BL21（DE3）株中表达,用谷光苷肽Sepharose4B柱分离纯化GST融合蛋白,用SDS—PAGE检测重组SEB（rSEB）的表达,重组蛋白免疫BALB／c小鼠获得抗血清,并用抗血清与天然的SEB和rSEB进行Westembolt分析。结果成功克隆了822bpSEB基因,编码272个氨基酸,在E．coli BL21（DE3）株中表达了rSEB,分离纯化的rSEB能够诱导小鼠产生IgG抗体,此抗体不仅能够与rSEB反应,而且能够与天然的SEB特异性的反应。结论重组SEB具有抗原特性,制备的特异性抗体可应用于金黄色葡萄球菌引起的食物中毒的快速诊断,将能够建立特异性强、敏感性高的金黄色葡萄球菌的诊断体系,同时也有助于对SEB在抗肿瘤机制、炎症过程中的作用等方面研究。     

抗原特异性CD4+CD25+ T细胞的制备及功能鉴定

目的: 制备供体抗原特异性CD4+CD25+调节性T细胞,并对诱导的细胞进行免疫生物学功能鉴定?方法:分离供体ICR小鼠的脾细胞经尾静脉免疫BALB/cByJ小鼠,每周1次,连续3周?第4周,体外免疫磁珠分离技术(MACS)分选被免疫小鼠CD4+CD25+ T细胞和CD4+CD25-T细胞?混合淋巴细胞反应和ELISA检测细胞的功能?结果:体外共培养实验显示,被免疫BALB/cByJ小鼠的脾细胞呈低增殖反应?CD4+CD25+T细胞能够抑制同种异体抗原刺激的天然(na?觙ve)BALB/cByJ小鼠CD4+CD25-T细胞的增殖反应和γ干扰素(IFN-γ)的分泌?结论:供体特异性脾细胞输注后分选的CD4+CD25+调节性T细胞是抗原特异性的,在体外具有免疫无能性和免疫抑制性?     

调节性T细胞研究进展

调节性T细胞(Treg细胞)是机体调控不适当或者过强免疫应答的关键机制之一,它们可以主动地抑制普通T细胞的功能,维持免疫系统对自身成分的耐受。目前认为CD4+CD25+FOXP3+T细胞为Treg细胞的特征性表型。1995年,Sakaguchi等完成了一项划时代的研究,他们将去除了CD25+细胞的正常BALB/c小鼠脾细胞输入到BALB/c裸鼠     

MRL/lpr小鼠中CD4+CD25+调节性T细胞含量、增殖能力及抑制能力的研究

目的探讨MRL/lpr小鼠中CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)的含量、增殖能力及其对效应性T淋巴细胞(Teff细胞)的抑制能力及意义。方法流式细胞检测法检测8只MRL/lpr小鼠及8只BALB/c小鼠脾脏中Treg细胞的水平;磁珠分选法分选出脾脏中的Treg细胞与Teff细胞,离体培养2周后,分别测量Treg细胞数量,并比较差异;用Treg细胞与Teff细胞组成共培养体系,5 d后检测Teff细胞的水平,计算Treg细胞对Teff细胞的抑制率并比较差异。结果 MRL/lpr小鼠脾脏中Treg细胞的总含量与BALB/c小鼠无统计学差异[(4.88±0.55)%vs(5.03±0.34)%,P>0.05];离体培养2周后MRL/lpr小鼠的Treg细胞数量显著低于BALB/c小鼠[(6.61±0.92)×105vs(13.25±1.91)×105,P<0.05];共培养5 d后MRL/lpr小鼠Treg细胞对Teff细胞的抑制率显著低于BALB/c小鼠Treg细胞(P<0.05)。结论 MRL/lpr小鼠体内Treg细胞增殖能力、抑制能力的下降可能导致体内免疫平衡的破坏、自身抗原-抗体反应,参与MRL...     

小鼠嗜酸粒细胞性慢性鼻-鼻窦炎模型的建立

目的 嗜酸粒细胞性慢性鼻-鼻窦炎(ECRS)发病机制尚不明确.文中旨在探讨用普通抗原卵清蛋白(OVA)联合超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)来诱导小鼠ECRS,建立小鼠ECRS实验模型.方法 将24只雌性小鼠随机分成4组:PBS组[腹腔注射及鼻腔滴入磷酸缓冲盐(PBS)]、SEB组(腹腔注射PBS,鼻腔滴入SEB)...     

参芪扶正注射液对肺癌小鼠化疗后免疫功能调节的影响

目的探讨参芪扶正注射液对肺癌小鼠化疗后免疫功能调节的影响。方法选取20只健康纯系BALB/c雄性小鼠,采用简单随机法分为实验组和对照组各10只,自接种后第14天使用注射用顺铂3 mg/(kg.d)连续腹腔注射7 d,建立肺癌小鼠化疗后动物模型。实验组给予参芪扶正注射液60 mL/(kg.d)腹腔注射给药,对照组给予0.9%氯化钠注射液60 mL/(kg.d)腹腔注射,疗程为10 d。末次给药后24 h检测胸腺指数、脾脏指数,脾淋巴细胞中T细胞亚群、B淋巴细胞、脾淋巴细胞膜、CD3+CD25+百分率及脾淋巴细胞转化能力。结果实验组小鼠脾脏指数、脾CD3+、CD3+CD4+CD8-诱导的脾淋巴细胞比对照组均显著升高(P<0.05)。结论参芪扶正注射液可提高肺癌小鼠化疗后机体免疫功能。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在糖尿病发病中作用的研究

目的：探讨CD4＋CD25＋调节性T细胞在糖尿病发病中的作用及机制。方法：选取BALB/c小鼠,每日腹腔注射链脲佐菌素（STZ）40mg/kg,连续5天,建立1型糖尿病模型;从小鼠内眦静脉采血,检测血糖;取小鼠尿液,检测尿糖;流式细胞术检测两种小鼠感染不同时间脾细胞悬液中CD4＋T细胞和CD4＋CD25＋T细胞百分含量;ELISA法检测脾细胞培养上清IFN-γ和IL-10水平。结果：BALB/c小鼠的IFN-γ水平在注射STZ第2周和4周明显增高（P〈0.05）;IL-10水平在注射STZ第2周和4周明显降低（P〈0.05）;CD4＋T细胞数量在注射STZ第2周未见明显升高,第4周水平明显升高（P〈0.05）;CD4＋CD25＋T细胞数量在注射STZ第2周和4周明显降低（P〈0.05）。结论：CD4＋CD25＋调节性T细胞通过抑制Th1型细胞因子分泌,分泌IL-10等细胞因子,防止糖尿病的发生,维持自身耐受。     

CD4+CD25+调节性T细胞在糖尿病发病中作用的研究

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞在糖尿病发病中的作用及机制。方法:选取BALB/c小鼠,每日腹腔注射链脲佐菌素(STZ)40mg/kg,连续5天,建立1型糖尿病模型;从小鼠内眦静脉采血,检测血糖;取小鼠尿液,检测尿糖;流式细胞术检测两种小鼠感染不同时间脾细胞悬液中CD4+T细胞和CD4+CD25+T细胞百分含量;ELISA法检测脾细胞培养上清IFN-γ和IL-10水平。结果:BALB/c小鼠的IFN-γ水平在注射STZ第2周和4周明显增高(P<0.05);IL-10水平在注射STZ第2周和4周明显降低(P<0.05);CD4+T细胞数量在注射STZ第2周未见明显升高,第4周水平明显升高(P<0.05);CD4+CD25+T细胞数量在注射STZ第2周和4周明显降低(P<0.05)。结论:CD4+CD25+调节性T细胞通过抑制Th1型细胞因子分泌,分泌IL-10等细胞因子,防止糖尿病的发生,维持自身耐受。     

Tf-SEB偶合蛋白对荷瘤小鼠的疗效及其机理探讨

目的研究人转铁蛋白(Tf)与金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)偶联后,在体内对肿瘤的治疗效果及其机理.方法采用化学方法将Tf与SEB偶联成Tf-SEB偶联蛋白,观察该偶联蛋白对荷瘤小鼠的疗效;采用免疫细胞化学方法初步探讨该偶联蛋白在体内的抗肿瘤机理.结果偶联蛋白处理组动物的肿瘤发生率和死亡率及肿瘤体积均显著低于单体SEB处理组和其它各组;免疫细胞化学结果显示,偶联蛋白处理的动物肿瘤组织内有更为明显的CD4+T细胞和CD8+T细胞浸润.结论经化学偶联的Tf-SEB偶联蛋白在体内比单体SEB具有更强的激活T细胞的抗肿瘤作用,该作用可能部分是由于具有导向效应的超抗原Tf-SEB偶联蛋白诱导了超抗原依赖细胞介导的细胞毒效应所致.