肾脏特异表达新基因Collectrin在大鼠5/6肾切除残余肾中的表达

目的　探讨肾脏特异性表达新基因Collectrin在大鼠 5 / 6肾切除残余肾组织中的表达变化 ,为Collectrin基因功能研究提供线索。方法　建立慢性肾衰大鼠 5 / 6肾切除模型 ,分为对照组( 10只 )、手术组 ( 12只 )和依那普利治疗组 ( 12只 ) ,采用逆转录 PCR和Western蛋白印迹、免疫组织化学技术检测手术后 2、8和 16周大鼠肾组织Collectrin的表达变化。结果　在对照组中 ,随着大鼠周龄的增长大鼠CollectrinmRNA表达逐渐减少。 2 ,8,16周分别为 ,1 6 9± 0 0 9,1 38± 0 0 4,1 2 1± 0 0 9,(P <0 0 5 ) ;在术后 2 ,8,16周 ,手术组 ( 2 33± 0 0 7,1 85± 0 2 0 ,1 47± 0 17)Collectrin表达明显高于对照组 ( 1 6 9± 0 0 9,1 38± 0 0 4,1 2 1± 0 0 9,P <0 0 5 ) ;经依那普利治疗后 ,Collectrin表达明显减少 ;手术组Collectrin的表达在手术后 2周明显增加 ,随着慢性肾衰的进展Collectrin的表达逐渐减少。 2 ,8,16周分别为 2 33± 0 0 7,1 85± 0 2 0 ,1 47± 0 17(P <0 0 5 )。Collectrin蛋白的表达情况与CollectrinmRNA表达情况相一致。结论　Collectrin的表达随大鼠周龄的增长而减少 ;在 5 / 6肾切除残余肾组织中 ,Collectrin的表达与肾脏的增生、肥大的病生理变化相关。     

缺锌对生长期小鼠肾脏金属硫蛋白-1表达的影响

目的在成功制备缺锌小鼠动物模型的基础上,观察缺锌对生长期小鼠肾脏中金属硫蛋白-1(MT-1)定位、定量表达的影响,初步探讨锌缺乏影响肾发育的机制。方法应用免疫组织化学技术观察缺锌小鼠肾组织中MT-1的定位表达变化。应用蛋白印迹技术检测缺锌小鼠肾组织中MT-1蛋白表达量变化。结果免疫组化结果显示:在小鼠肾脏MT-1定位表达于近端小管上皮细胞胞浆内,分布较均匀,少量分布在远端小管和集合管上皮细胞胞浆,肾小球无明显表达。蛋白印迹结果显示:与对照组相比,缺锌组小鼠肾脏MT-1表达量明显下降。结论发育期锌缺乏可使肾组织中MT-1蛋白表达降低,从而影响肾脏的发育和功能。     

生后小鼠肾脏发育过程中Ⅳ型胶原表达的实验研究

目的 观察Ⅳ型胶原在生后小鼠肾脏发育过程中的表达规律,探讨Ⅳ型胶原在小鼠肾发育成熟过程中的作用.方法 采用免疫组织化学方法检测生后不同日龄小鼠肾组织中Ⅳ型胶原的表达,用细胞图像分析技术和体视学方法对结果 进行分析.结果 Ⅳ型胶原表达于生后各日龄小鼠肾脏肾小体、肾小管和集合管的基膜,且随着肾脏的发育成熟,Ⅳ型胶原表达量逐渐增加.结论 在生后肾发育成熟过程中,Ⅳ型胶原表达于基膜存在的部位,可能对基膜的发育成熟起一定的作用.     

缺锌对生长期小鼠肾脏Bcl-2表达的影响

目的构建缺锌小鼠动物模型,观察缺锌对生长期小鼠肾脏细胞凋亡相关因子Bcl-2表达的影响,进而探讨锌离子对肾细胞凋亡的调控机制。方法应用免疫荧光技术观察缺锌条件下生长期小鼠肾组织中Bcl-2的定位表达。应用蛋白印迹技术半定量检测缺锌条件下生长期小鼠肾组织中Bcl-2蛋白表达变化。结果免疫荧光结果显示:在小鼠肾脏Bcl-2定位表达于近端肾小管和远端肾小管上皮细胞胞浆内,肾小球无明显表达。蛋白印迹结果显示:与对照组相比,缺锌组小鼠肾脏Bcl-2表达量明显下降。结论发育期锌缺乏可使肾组织中Bcl-2蛋白表达降低,从而促进肾细胞凋亡的发生。     

DARPP-32在小鼠肾脏中的表达分布

目的研究DARPP-32在小鼠肾脏组织的表达和分布.方法免疫印记和免疫组化方法检测DARPP-32在小鼠肾脏组织的表达和分布.结果在小鼠组织中,抗DARPP-32多克隆抗体可检测到32×103蛋白的表达;DARPP-32染色阳性细胞位于髓质远曲小管、皮质层近曲小管及髓放射区集合管.结论DARPP-32很可能是多巴胺调节肾脏钠离子重吸收的一个重要中间环节.     

肾血管性高血压大鼠肾脏A型心房肽受体的表达及意义

目的 研究高血压大鼠肾脏A型心房肽受体（ANPR—A）的蛋白表达并探讨其意义。方法 采用狭窄单侧肾动脉的方法建立二肾一夹（2K1C）肾血管性高血压大鼠模型。用尾套法测血压,免疫组织化学染色法观察缩窄术后不同时期。肾脏组织各部位ANPR—A蛋白的表达,并用计算机图像分析系统半定量检测ANPR—A蛋白的表达水平。结果 肾动脉缩窄术后4周,模型组大鼠肾脏ANPR—A蛋白在肾小球表达增加,在肾小管表达降低,与对照组的差异有统计学意义（P〈0．01）,在髓质集合管表达无明显改变（P〉0．05）。缩窄术后8周．模型组大鼠肾脏ANPR—A蛋白在肾小管和髓质集合管的表达均降低,与对照组的差异有统计学意义（P〈0．01）．在肾小球有微弱表达,与对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 随着高血压的发展,肾脏组织中的ANPR—A表达显著减少,提示高血压的发展与肾脏ANPR—A的表达下降有关。     

大鼠5/6肾切除肾脏中血红素氧合酶-1免疫组织化学及病理学研究

目的:探讨血红素氧合酶-1(HO-1)在慢性肾功能不全(CRF)大鼠肾脏中的表达、活性变化以及对肾脏病理学的影响。方法:将5/6肾切除大鼠分为假手术组、CRF组和Hemin组。第2次术后8周观察肾组织病理学改变，免疫组化方法检测HO-1在大鼠肾脏中的表达、分布，检测血清及肾组织中HO-1活性。结果:HO-1主要分布于肾皮质的近端、远端小管以及肾髓质的集合管、髓袢的上皮细胞内；HO-1在CRF大鼠肾脏中表达及活性降低。病理学检查显示，Hemin组大鼠肾小球系膜增生程度明显低于CRF组大鼠，同时肾间质炎性细胞浸润及纤维化程度也较CRF组轻。结论:HO-1在CRF大鼠肾脏中表达及活性降低，HO-1可明显减轻CRF大鼠肾脏病理学损伤，延缓肾脏病变。     

Collectrin的研究现状

Collectrin特异性表达于肾脏近端小管和集合管以及胰岛β细胞,在肾脏Collectrin参与集合管初级纤毛的形成并保持其极性,并且在肾脏氨基酸的转运中发挥重要作用。在胰腺Collec-trin不仅可以增强胰岛素的分泌,而且还可以刺激胰岛β细胞增殖。在体内Collectrin的表达主要受肝细胞核因子1α的调节,并通过与可溶性NSF附着蛋白受体复合体相互作用而发挥上述作用。     

核转录因子KLF4在肾脏缺血再灌注损伤中的表达与保护机制探讨

目的 研究核转录因子KLF4在肾脏缺血再灌注损伤中的表达,并对其保护作用的可能机制进行探讨.方法 Realtime-RT-PCR方法检测大鼠双肾在缺血1h,再灌注后不同时间点的KLF4表达情况,Western Blot方法检测KLF4在过氧化氢(H2O2)刺激的人胚肾细胞HEK293中的表达情况,采用基因转染技术过表达KLF4或抑制HEK293细胞中KLF4表达,观察KLF4的表达改变对H2O2损伤引起HEK293细胞死亡率的影响.结果 KLF4在大鼠肾脏缺血-再灌注时表达显著增高,在遭受H2O2损伤时,人胚肾细胞HEK293中KLF4的mRNA与蛋白表达也显著增高.过表达KLF4基因则能显著降低H2O2所致的HEK293细胞株的死亡率.抑制KLF4的表达能明显增加H2O2导致的HEK293肾细胞的死亡率.结论 KLF4极有可能是一个在肾脏缺血再灌注损伤过程中具有保护作用的核转录因子.     

小鼠Collectrin正反义真核表达载体的构建及其功能

目的:构建新基因Collectrin的正反义真核表达载体,研究其与细胞生长的关系.方法:以PCR的方法扩增Collectrin的开放阅读框序列,与载体pcDNA3.1/V5-His相连构成融合基因表达质粒.将重组后的质粒进行细菌转化,质粒扩增、纯化后,测序鉴定Collectrin的正义及反义序列.以脂质体介导的方法体外转染肾皮质集合管细胞系(M-1).以β-Gal staining的方法测定转染效率.分别行逆转录-PCR和Western blot,检测不同融合基因转染后细胞Collectrin mRNA和蛋白水平的表达变化.以四甲基偶氮唑蓝(MTF)参入法分别在第24小时、第48小时测定不同融合基因转染后细胞增殖活性.结果:M-1细胞在融合基因转染第24小时转染效率最高.Collectrin正义转染组较反义、空载体和正常对照组在核酸和蛋白水平表达量都显著增高,Collectrin反义转染组蛋白表达较其他组明显下调.反义转染组细胞较其他组明显减少.结论:成功构建了Collectrin正义及反义真核表达载体,Collectrin是维持细胞生长存活的重要元件.     

THE LOCALIZATION OF ADRENOMEDULLIN IN RAT KIDNEY TISSUE AND ITS INHIBITORY EFFECT ON THE GROWTH OF CULTURED RAT MESANGIAL CELLSA

Objective:To observe the localization of adrenomedullin(AM) in rat kidney tissue and its inhibitory effect on the growth of cultured rat mesangial cells (MsC).Methods:A monoclonal antibody against AM developed by our laboratory was used to detect the localization of AM protein in rat kidney tissue by avidin-biotin complex immunohistochemistry.The expressions of AM and its receptor CRLR mRNA on cultured glomerular epithelial cells (GEC)and MsC were investigated by Northern blot assay,and the possible effect of AM secreted by GEC on MsC proliferation was observed using [^3H] thymidine incorporation as an index.Results:A specific monoclonal antibody against AM was successfull developed.AM was immunohistochemically localized mainly in glomeruli (GEC and endothelial cells),some cortical proximal tubules,medullary collecting duct cells,interstitial cells,vascular smooth muscle cells and endothelial cells.Northern blot assay showed the AM mRNA was expressed only on cultured GEC,but not on MsC,however,AM receptor CRLR mRNA was only expressed on MsC.GEC conditioned medium containing AM can inhibit MsC growth and AM receptor blocker CGRP8-37 may partially decreased this inhibitory effect.Conclusion:AM produced by GEC inhibits the proliferation of MsC,which suggests that AM as an important regulator is involved in glomerular normal physiological functions and pathologic processes.     

水通道蛋白及其mRNA在正常大鼠肾脏的表达

目的 :明确水通道AQP2在正常大鼠肾脏的表达情况。方法 :采用免疫组化及RT PCR方法检测AQP2蛋白及其mRNA水平的表达。结果 :表明AQP2仅在大鼠集合管表达 ,肾脏其它部位无表达 ,其它组织器官亦无表达。结论 :集合管是肾脏唯一将钙和水代谢机制联系起来的部位 ,推测此部位信号传导异常可能导致结石形成。     

维生素D，维生素K，雌二醇和睾酮对结石模型大鼠肾骨桥蛋白表达的影响

目的 :探讨骨桥蛋白的表达和调控与尿石症的关系。方法 :分别用维生素D、维生素K、雌二醇和睾酮处理正常大鼠和结石模型大鼠 ,连续用药 7d ,免疫组化和Northernblot技术检测大鼠肾骨桥蛋白及其mRNA的表达 ,偏光显微镜观察大鼠肾晶体沉积情况 ,并测定尿晶体成分的含量。结果 :维生素K、雌二醇和睾酮均可上调骨桥蛋白及其mRNA的表达 ,减少大鼠肾草酸钙晶体的沉积。维生素D增加尿钙的排泄量 ,促进晶体沉积。结论 :维生素K、雌二醇和睾酮可上调肾骨桥蛋白的表达 ,抑制结石的形成 ,维生素D过量则可促进结石形成     

严重体表烧伤早期大鼠肾脏内皮素－1的基因表达

应用分子斑点杂交、原位杂交技术，观察了大鼠烧伤早期肾脏各时相点的内皮素－１（ＥＴ－１）ｍＲＮＡ的表达和定位变化。结果表明：烧伤早期肾脏ＥＴ－１ｍＲＮＡ含量明显上升，分布有所变化，且为肾脏自身分泌释放（自分泌／旁分泌）。文中还简要讨论了上述变化的原因     

缺氧诱导因子-1αmRNA和蛋白在妊高征胎盘组织中表达定位

目的 :探讨缺氧诱导因子 1α( HIF- 1α)在妊高征胎盘组织细胞中的定位。方法 :收取 1 0例妊高征孕妇的胎盘组织 ,应用免疫组织化学方法 ,观察 HIF- 1α蛋白在妊高征胎盘组织细胞中的定位表达 ;应用原位杂交的方法 ,观察 HIF- 1α m RNA在妊高征胎盘组织细胞中的定位表达。结果 :在妊高征胎盘中 ,HIF- 1α蛋白主要表达在合体滋养细胞、血管内皮细胞的胞核和胞浆中 ;HIF- 1 α m RNA主要表达在合体滋养细胞和血管内皮细胞的胞浆中。结论 :HIF- 1 α在妊高征胎盘组织中表达主要集中在胎盘的合体滋养细胞和血管内皮细胞。妊高征胎盘中合体滋养细胞和血管内皮细胞表达 HIF- 1 α,可能与妊高征的发病及病理生理有关     

Egr—1在小鼠和人体正常组织中的表达及其生理学功能

目的：探讨早期生长反应基因-1（Egr-1)在小鼠和人体正常组织细胞中的表达情况及其生理学功能,方法：用原位杂交和免疫组织化学方法对小鼠和人的不同组织进行Egr-1检测。结果：Egr-1mRNA和Egr-1蛋白阳 性信号呈棕褐色,位于细胞浆和细胞核,组织中生长活跃的细胞可见相对高水平的Egr-1表达。结论：Egr-1mRNA和Egr-1蛋白的高表达主要在生长活跃的组织并有重要的生理学功能。     

姜黄素对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及对血红素加氧酶表达的影响

目的:探讨姜黄素对糖尿病大鼠肾脏病变的作用及对肾脏血红素加氧酶-1(HO-1)表达的影响。方法:诱导大鼠糖尿病后,随机分为对照组(n=10)及治疗组(n=10),比较各组的血生化、尿微量白蛋白排泄量。采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测HO-1 mRNA。用免疫组化检测HO-1蛋白的定位和表达水平。结果:糖尿病大鼠内生肌酐清除率(Ccr)、尿微量白蛋白(mAlb)排泄量较正常鼠增多,HO-1 mRNA和蛋白表达无明显上调。HO-1蛋白主要分布于肾小管、髓质的集合管及髓袢的上皮细胞中,肾小球表达极少。姜黄素治疗能明显降低Ccr,减少mAlb排泄量,诱导HO-1 mRNA和蛋白的表达。结论:姜黄素对糖尿病大鼠肾脏病变具有明显的防治作用,其机制可能是通过诱导HO-1的表达。