人卵丘细胞与卵母细胞发育及成熟的关系

卵丘细胞与卵母细胞共处于同一个卵泡液微环境中,卵丘细胞与卵母细胞之间复杂的"对话机制"调控着卵母细胞的成熟和卵丘细胞的增殖延伸。在窦卵泡阶段,卵丘细胞由颗粒细胞分化而来,通过缝隙连接与卵母细胞共同形成一个结构和功能上的合胞体。卵泡发育不同时期,卵丘细胞对卵母细胞的代谢调控主要表现为:在窦卵泡期,卵丘细胞为卵母细胞发育提供必需的营养,而卵母细胞分泌的信号因子亦调控着卵丘细胞的增殖和延伸;在排卵前卵泡中,卵丘细胞主要通过调控卵母细胞中cAMP水平,促使卵母细胞恢复减数分裂;在排卵后卵泡中,卵丘细胞亦影响着精-卵结合及胚胎发育的过程。另外,伴随卵泡内微环境的变化,卵丘细胞与卵母细胞间发生着复杂的信号传递,从而对卵母细胞的发育实现分子水平的调控,其中部分基因可能作为卵母细胞发育成熟、胚胎发育及妊娠结局的分子标志物。     

人卵丘颗粒细胞凋亡与卵子发育潜能关系的研究

目的:探讨人卵子周围卵丘颗粒细胞的凋亡状态与卵子发育潜能的关系。方法:收集130例接受体外受精(IVF)患者卵子周围的卵丘颗粒细胞,包埋后切片进行透射电镜观察,研究其凋亡状态与不孕原因、取卵数、受精数、优质胚胎数及治疗结局的关系。结果:子宫内膜异位症导致的不孕症患者卵丘颗粒细胞的凋亡率高于其他原因导致的不孕,差异有显著性(P<0.05)。卵丘颗粒细胞的凋亡率与取卵数有关,取卵数≤5个的患者与取卵数>5个的比较,卵丘颗粒细胞的凋亡率高,差异有显著性(P<0.05);卵丘颗粒细胞的凋亡与卵子受精密切相关,无或受精卵≤2个与受精卵>2个的患者两两比较,前者卵丘颗粒细胞凋亡率增高,差异有显著性(P<0.01);卵丘颗粒细胞的凋亡与胚胎质量有关,无或优质胚胎≤2个与优质胚胎>2个的患者两两相比,前者卵丘颗粒细胞凋亡率增高,差异有显著性(P<0.01);卵丘颗粒细胞的凋亡与移植结局有关,妊娠组卵丘颗粒细胞凋亡率与未妊娠组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论:卵丘颗粒细胞的生长状态与卵子的发育潜能密切相关,卵丘颗粒细胞的凋亡影响卵子的成熟、受精和卵裂。卵丘颗粒细胞凋亡的检测可以作为预测IVF结果的指标。     

人卵丘颗粒细胞凋亡与卵子发育潜能的关系

目的:探讨人卵子周围卵丘颗粒细胞的凋亡状态与相应卵子发育潜能的关系。方法:收集卵泡浆内单精子注射(ICSI)患者每个卵子周围的卵丘颗粒细胞,流式细胞仪检测卵丘颗粒细胞的凋亡率,研究其凋亡率与卵子的成熟度、受精率及相应胚胎质量的关系。结果:MⅡ期卵子周围卵丘颗粒细胞的凋亡率明显低于GV期、MⅠ期及退变死亡的卵子周围卵丘颗粒细胞的凋亡率(P<0.05);MⅡ期受精卵子的卵丘颗粒细胞凋亡率显著低于未受精的卵子(P<0.01);发育成优质胚胎的MⅡ期卵子周围卵丘颗粒细胞的凋亡率低于发育成评分较低胚胎的卵子的卵丘颗粒细胞(P<0.05)。结论:卵巢刺激周期获取的卵子的成熟状态和发育潜能与相应卵丘颗粒细胞的凋亡程度相关。     

多囊卵巢综合征患者卵丘形态与未成熟卵母细胞发育潜能关系

目的 研究多囊卵巢综合征患者无刺激周期取出的不同形态未成熟卵母细胞的发育潜能。方法 43例PCOS不孕患者进行了47个未成熟卵母细胞体外成熟培养（IVM）周期。所有患者均未经促卵泡素刺激,予以HCG36h后取卵。根据取出的卵-冠-丘复合物形态将其分为3组：卵丘紧密组、卵丘松散组、无卵丘组。比较3组的体外成熟率、受精率和优质胚胎率。结果 47个IVM周期共收集未成熟卵母细胞874枚,体外成熟率61.19%,受精率71.07%,着床率13.13%。卵丘松散组的体外成熟率明显高于卵丘紧密组（72.26%vs49.54%,P〈0.05）,受精率、优质胚胎率三组间无差异。结论 PCOS患者无刺激周期取出的未成熟卵母细胞中,卵丘松散、扩张的卵母细胞具有更好的体外成熟潜力。     

卵母细胞分泌因子在人卵丘颗粒细胞中的表达及其与卵母细胞发育潜能的关系

目的:探讨单卵母细胞所对应的卵丘颗粒细胞(cumulus cells,CCs)中生长分化因子-9(GDF-9)、骨形成蛋白-15(BMP-15)、转化生长因子β1(TGFβ1)、Smad3的表达与对应单卵母细胞质量及其发育潜能的关系以及在不同促排卵方案中的表达。方法:因男方因素或曾有过体外受精(IVF)不受精史接受卵胞质内单精子显微注射(ICSI)治疗的患者41例,单卵母细胞的CCs 332份(Gn RH-a组21例172份CCs,非垂体降调节组20例160份CCs)。拣卵后机械法剥离单卵子周围的CCs,将卵母细胞与收集的CCs一一对应进行分析。M_Ⅱ卵均采用ICSI授精,并观察其受精、卵裂及囊胚发育情况。采用Real-time PCR方法检测,比较各组CCs中GDF-9、BMP-15、TGFβ1和Smad3的相对含量。结果:1 CCs收集及PCR扩增产物可满足实验要求。2 Gn RH-a组及非垂体降调节组中,上述4种卵母细胞分泌因子,在正常受精组的相对含量均显著高于异常受精组;优质卵裂胚形成组的相对含量均显著高于非优质卵裂胚形成组;优质囊胚形成组中的相对含量显著高于非优质囊胚形成组。3 Gn RH-a组的CCs中BMP-15的表达量相对更高;而GDF-9、TGFβ1和Smad3在非降调节组的CCs中相对表达量较高。结论:1采用单卵母细胞的CCs的RNA进行研究,实际操作是可行的,RNA的质量和数量可达到实验要求。2 GDF-9、BMP-15、TGFβ1、Smad3可作为评价卵母细胞质量、预测卵母细胞发育潜能的客观指标。3降调节与否可能影响CCs中的卵母细胞分泌因子的表达水平,且与M_Ⅱ期卵母细胞发育潜能有关。     

人卵丘细胞线粒体膜电位与卵母细胞成熟度相关关系的研究

目的:通过检测人类卵母细胞周围卵丘细胞的线粒体膜电位(△Ψm),研究其与卵母细胞成熟度的关系。方法:收集卵母细胞质内单精子注射(ICSI)的166个卵母细胞周围的卵丘细胞,根据卵母细胞的成熟度及受精情况分为3组:不成熟卵母细胞组23例;成熟卵母细胞未受精组18例;成熟卵母细胞受精组103例。分别测定线粒体膜电位。用透射电镜观察3例未成熟卵母细胞、3例成熟卵母细胞周围卵丘细胞线粒体的变化。结果:未成熟卵母细胞组、成熟卵母细胞未受精组、成熟卵母细胞受精组线粒体膜电位分别为1．5±0．43,3．9±1．68,5．8±2．24,两两比较差异有统计学意义。透射电镜观察发现未成熟卵母细胞周围卵丘细胞质内线粒体肿胀、嵴减少、嵴消失、空泡化的发生率较成熟卵母细胞周围卵丘细胞高。结论:卵丘细胞线粒体膜电位与相应卵母细胞的成熟度相关。     

表皮生长因子卵丘细胞对卵母细胞体外成熟的影响

目的：探讨表皮生长因子（EGF）、卵丘细胞人类生殖泡（germinal vesicle ,GV)期不成熟卵母细胞体外成熟的影响，方法：将EGF和促性激素（gonadotropin,Gn）联合应用于不成熟卵母细胞的体外培养，并同单纯应用Gn相对照观察EGF的影响。同时将卵母细胞分为卵丘卵母细胞复合物（CEO组）及裸卵（DO组）进行培养，了解卵丘细胞在体外培养中的作用。结果：EGF可以提高DO组的MⅡ期率（P＜0．01），对于CEO组应用EGF后可以促进胞质的成熟，提高受精能力（P＜0．05）。关于卵丘细胞的作用，CEO组的MⅡ期率为68．8％，明显高于DO组的46．7％（P＜0．01），CEO组的卵裂率为72．7％，高于DO组的35．7％（P＜0．05）。结论：EGF可以直接促进不成熟裸卵体外成熟，提高其MⅡ期率，与Gn联合应用后可进一步促进卵丘卵母细胞复合物胞质的成熟，提高受精率，保留卵丘细胞利于卵母细胞质的发育，提高不成熟卵母细胞的体外成熟能力，使MⅡ期率，卵裂率升高。     

IVF周期中MⅡ末期卵子形态与胚胎发育潜能的关系

目的:探讨IVF周期中MⅡ末期卵子形态与胚胎发育潜能的关系。方法:收集IVF周期中受精后5～6h脱颗粒细胞MⅡ末期卵子,依据透明带、卵泡浆及两极体形态在光镜下对排出两个极体的卵子进行形态评分分级(Ⅰ～Ⅲ级),统计不同分级组间的高评分原核形成率、卵裂率、优质胚胎率及临床妊娠率和种植率,分析卵子形态与受精及胚胎发育潜能的关系。结果:形态评分较高的卵子与形态评分较低的卵子间受精率和卵裂率均无显著差异(P>0.05),但优质胚胎率显著增高(P<0.05);随着移植胚胎中由高形态评分卵子发育而来的胚胎数目增多,周期临床妊娠率、种植率显著增高(P<0.05)。结论:IVF周期中,早期脱颗粒细胞后MⅡ末期卵子形态对受精率及卵裂率没有影响,但可预测早期胚胎质量及妊娠结局。     

慢速冷冻对人成熟卵与未成熟卵发育潜能的影响

目的 :探讨慢速冷冻保存对人成熟卵子和未成熟卵子发育潜能的影响。方法 :在行宫腔配子移植和多囊卵巢综合征患者未成熟卵穿刺周期中收集不同成熟期的卵子 10 5个 ,其中成熟卵 (MII) 6 9个 ,未成熟卵 (MI和GV) 36个。各成熟期卵子经慢冻 速融后进行形态学和存活力观察 ,并进一步观察体外成熟、受精及胚胎培养情况。结果 :经慢速冷冻后各个成熟期卵子的形态都发生了改变。冷冻后的未成熟卵子可以体外成熟 (76 6 7% )。冻融成熟卵子受精后的分裂率 (76 92 % )高于体外成熟卵受精后的分裂率 (P <0 .0 1) ,只有冻融成熟卵子经胚胎培养获得优质胚胎 (33 33% )。结论 :用慢速冷冻法保存成熟卵子可以得到较好的胚胎发育结果 ,未成熟卵子的冷冻保存仍然存在相当的难度。     

有无卵丘细胞对玻璃化冷冻后小鼠卵母细胞细胞骨架及体外发育能力的初步研究

目的:探讨卵丘细胞在玻璃化冷冻中对小鼠卵母细胞发育潜能及细胞骨架的影响。方法:采用玻璃化冷冻技术,保存带卵丘细胞或完全剥除卵丘细胞的小鼠MⅡ期和GV期卵丘复合体/裸卵(COC/DO),复苏且GV卵体外培养成熟后分别作体外受精或免疫荧光标记检查纺锤体和染色体的完整性。结果:MⅡ-COC和GV-COC的复苏率均显著高于MⅡ-DO和GV-DO(分别为86.49%vs60.92%和85.94%vs64.93%,P<0.01)。GV-COC组的受精率、囊胚率均高于GV-DO组,且MⅡ-COC组和GV-COC组的纺锤体和染色体均正常率均分别高于MⅡ-DO组和GV-DO组,但无显著性差异(P>0.05)。结论:卵丘细胞在玻璃化冷冻卵母细胞中能有效减少冷冻对细胞骨架的损伤,并改善卵子复苏及胚胎发育潜能。     

Biomarkers of human oocyte developmental competence expressed in cumulus cells before ICSI: a preliminary study

Purpose  

To identify reliable genomic biomarkers expressed in cumulus cells that accurately and non-invasively predict the oocyte developmental competence and reinforce the already used morphological criteria.     

The cumulus cell gene expression profile of oocytes with different nuclear maturity and potential for blastocyst formation

Purpose  

Gene expression in human ART cumulus cell (CC) has been related to oocyte maturity and competence but requires further validation. Expression dynamics were investigated in CC of oocytes at different maturational stages and with different developmental competence in a standard in vivo mouse superovulation model.     

The effect of human cumulus cells on the maturation and developmental potential of immature oocytes in ICSI cycles

Purpose  

To investigate the effect of human cumulus cells on the maturation and developmental potential of immature oocytes in ICSI cycles.