Th17/Treg平衡与正常妊娠及子痫前期关系的研究

目的:探讨Th17及CD4+CD25+Foxp3+调节性T(regulatory T,Treg)细胞介导的免疫反应在子痫前期发病中的作用。方法:选取在山东大学齐鲁医院进行产前检查的子痫前期患者25例及正常晚孕期妇女27例,并选取育龄期健康未孕妇女20例。利用流式细胞技术检测3组患者血样中分泌IL-17的Th17及CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞亚群占CD4+T淋巴细胞的百分比,并计算Th17/Treg比率,比较其在子痫前期与正常妊娠时的变化;再用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测3组患者外周血中IL-17、IL-10、TGF-β1等细胞因子的表达并进行比较。结果:(1)与正常未孕组及正常妊娠组相比,子痫前期患者外周血中分泌IL-17的Th17细胞占CD4+T淋巴细胞百分比明显升高(P<0.01),CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T淋巴细胞百分比明显降低(P<0.01);与正常未孕组相比,正常妊娠组Th17细胞的比例明显降低(P<0.01),Treg细胞比例明显升高(P<0.05);(2)子痫前期患者外周血中Th17/Treg比率明显高于正常未孕组及正常妊娠组(P<0.01),正常妊娠组外周血中Th17/Treg比率与健康未孕组相比明显降低(P<0.01);(3)子痫前期患者外周血中IL-17及TGF-β1的TGF-β1表达明显高于正常未孕组及正常妊娠组(P<0.05),而IL-10的表达未见明显差异(P>0.05);与正常未孕组相比,正常妊娠组外周血中IL-17、IL-10及TGF-β1的水平均未见明显变化(P>0.05)。结论:正常妊娠可能依赖于Treg细胞介导的免疫耐受状态,子痫前期患者外周血中Th17/Treg之间的平衡失调而倾向于Th17介导的促炎状态,这一机制可能参与了子痫前期的发生发展。     

静脉免疫球蛋白对新生儿脐血淋巴细胞干扰素γ和白细胞介素4分泌的影响

目的研究静脉免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)对新生儿淋巴细胞免疫功能的调节作用。方法分离8例新生儿的脐血单个核细胞和CD3+T细胞,并利用IVIG和植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)不同组合(即(1)对照组、(2)PHA刺激组、(3)IVIG先抑制组、 (4)PHA先活化组和(5)PHA+IVIG组)对细胞进行刺激培养,然后利用ELISA法检测细胞干扰素 (interferon,IFN)γ和白细胞介素(interleukin,IL)4的分泌,RT-CR法检测细胞IL-2 mRNA和IL-4 mRNA表达,并与8例成人外周血单个核细胞做比较。结果加入IVIG后,PHA诱导的脐血单个核细胞和CD3+T细胞IFN-γ的分泌下降,其中以单个核细胞下降的程度更为明显;并且单个核细胞IFN-γ分泌下降与IVIG加入的先后顺序无关PHA刺激组(313．34±108．00)pg／ml,先抑制组 (17．68±17．98)pg／ml,先活化组(170．72±38．25)pg／ml,PHA±IVIG组(11．10±8．92)pg／ml;但是CD3+T细胞IFN-γ的分泌下降只出现在先加入或同时加入IVIG时PHA刺激组(35．30±12．21) pg／ml,先抑制组(8．61±6．21)pg／ml,PHA±IVIG组(8．54±1．57)pg／ml。另外加入IVIG后,脐血单个核细胞IFN-γ分泌下降不如成人外周血单个核细胞明显,PHA刺激组(1121．11±344．58) pg／ml,先抑制组(29．08±11．20)pg／ml,先活化组(339．63±47．43)pg／ml,PHA±IVIG组(26．40± 21．97)pg／ml。单独加入PHA后,脐血单个核细胞和CD3+T细胞IL-4的分泌无明显变化,但是经过PMA、PHA和rIL-2反复刺激后脐血单个核细胞却能表达IL-2 mRNA和IL-4 mRNA,并且加入 IVIG后,脐血单个核细胞IL-2 mRNA和IL-4 mRNA表达明显下降。结论 IVIG除了可以直接抑制脐血T细胞分泌IFN-γ外,还可能通过其他免疫细胞或分子间接地介导这种抑制作用。IVIG 也可以抑制脐血单个核细胞IL-2 mRNA和IL-4 mRNA的表达。因此IVIG对脐血淋巴细胞增殖和 B细胞免疫球蛋白释放的影响可能与这些抑制作用有关。     

Th1/Th2类细胞因子与葡萄胎恶变的相关性研究

目的:通过对妊娠滋养细胞疾病患者外周血血清中Th1/Th2类细胞因子的测定,从免疫学角度探讨Th1/Th2类细胞因子预测葡萄胎恶变的价值。方法:收集1997至2001年首次以葡萄胎诊断进行清宫和手术的患者的外周血血清,采用酶联免疫吸附法检测血清中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10的水平来确定Th1/Th2的活性。结果:与侵葡+绒癌组相比,葡萄胎组IFN-γ含量明显增加(P<0.001),IL-10含量明显降低(P<0.001)。葡萄胎患者中,与非恶变组相比,恶变组Th1类细胞因子(IFN-γ,IL-2)含量呈下降趋势,而Th2类细胞因子(IL-4,IL-10)含量呈增加趋势,4种细胞因子变化均具有统计学差异(P<0.0001)。随着滋养细胞增生程度的增加,4种细胞因子的变化均具有统计学差异,除外IL-4的变化在轻、中度增生组中无统计学意义(P>0.05)。结论:Th1/Th2细胞因子向Th2漂移时,葡萄胎恶变倾向增高。     

人胎盘来源间充质干细胞对T淋巴细胞分泌白细胞介素-4和γ干扰素影响的实验研究

目的观察人胎盘来源间充质干细胞对活化的T淋巴细胞分泌白细胞介素-4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)能力的影响,推测人胎盘来源间充质干细胞应用于临床治疗多种疾病的可能性。方法分离两个健康人来源的T淋巴细胞,制备混合淋巴细胞培养(MLC)体系。再获取人胎盘来源间充质干细胞,将人胎盘来源间充质干细胞与MLC体系混合共培养。共分为4组,分别是同源T细胞Ⅰ组、同源T细胞Ⅱ组、共培养组、阳性对照组,每组接种10孔。培养72 h。采用ELISA法检测各组细胞培养上清液中IL-4、IFN-γ的含量。结果同源T细胞Ⅰ、Ⅱ组组间细胞培养上清液中IL-4和IFN-γ比较差异无统计学意义(P0.05);与同源T细胞Ⅰ、Ⅱ组比较,共培养组和阳性对照组细胞培养上清液中IL-4和IFN-γ浓度显著升高,差异有统计学意义(P0.01);与共培养组比较,阳性对照组细胞培养上清液中IL-4浓度显著升高,IFN-γ浓度显著降低,差异有统计学意义(P0.01)。结论人胎盘来源间充质干细胞可抑制活化的T淋巴细胞分泌IL-4的能力、促进IFN-γ的能力,胎盘间充质干细胞可能具有促进Th0向Th1细胞分化的作用。     

原因不明复发性流产患者调节性T淋巴细胞对树突状细胞的调控作用

目的 探讨原因不明复发性流产(URSA)患者外周血和蜕膜组织中CD+4CD+25调节性T淋巴细胞(Tr细胞)对树突状细胞(DC)的调控作用.方法 采集4例URSA患者(流产组)和4例正常早孕妇女(对照组)的外周血和蜕膜组织,密度梯度离心法、免疫磁珠分离法分选出Tr细胞和DC,培养6 d,培养方法分为DC单独培养和Tr细胞与Dc混合培养.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两种方法培养的细胞培养上清液中辅助性T淋巴细胞(Th)1型细胞因子--γ干扰素(IFN-γ)的Th2型细胞因子--白细胞介素10(IL-10)的蛋白含量.结果 (1)外周血:流产组细胞混合培养和单独培养后,细胞培养上清液中IFN-γ蛋白含量为(22.5±3.0)、(23.2±0.7)ng/L,两者比较,差异无统计学意义(P>0.05);IL-10蛋白含量分别为(35±4)、(37±7)ng/L,两者比较,差异也无统计学意义(P>0.05).对照组细胞混合培养和单独培养后,IFN-γ蛋白含量为(36±1.1)、(30.5±4.0)ns/L,两者比较,差异无统计学意义(P>0.05);IL-10蛋白含量分别为(36±9)、(54±20)ng/L,两者比较,差异有统计学意义(P<0.01).(2)蜕膜组织:流产组细胞混合培养和单独培养后,IFN-γ蛋白含量分别为(24.4±2.5)、(23.4±2.6)ng/L,两者比较,差异无统计学意义(P>0.05);IL-10蛋白含量分别为(25±5)、(28±7)ng/L,两者比较,差异也无统计学意义(P>0.05);对照组细胞混合培养后,IFN-γ蛋白含量为(22.6±3.8)ng/L,明显低于单独培养后的(30.7±4.6)ng/L,差异有统计学意义(P<0.01);对照组细胞混合培养后,IL-10蛋白含量为(31±9)ng/L,明显高于单独培养后的(27±6)ng/L,差异也有统计学意义(P<0.05).结论 URSA患者Tr细胞抑制性免疫功能下降,从而导致对DC调控失常,Th1/Th2平衡失调和母胎免疫耐受异常.     

新生儿IL-18对Th1/Th2类细胞免疫平衡的作用与HBV宫内感染相关性研究

目的:探讨新生儿IL-18对Th1/Th2类细胞免疫平衡的作用与HBV宫内感染的相关性。方法:选择HBsAg、HBeAg双阳性但肝功能正常孕产妇分娩的新生儿157例,以其中胎儿宫内感染21例为研究组,无宫内感染136例为对照组。用流式细胞仪检测两组脐血白细胞介素-18(IL-18)、γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)的表达水平。结果:(1)研究组IL-18及IFN-γ表达水平明显低于对照组,差异有显著性(P<0.05;P<0.05);研究组IL-4表达水平百分数高于对照组,但差异无显著性(P>0.05);研究组IFN-γ/IL-4高于对照组,差异有显著性(P<0.05);(2)研究组IL-18与IFN-γ、IL-4、IFN-γ/IL-4均呈显著正相关(P均<0.05)。结论:IL-18是Th1/Th2网络平衡的更高层次的调控者;IL-18水平下调,导致新生儿Th1/Th2细胞因子比例下降,以致不利于HBV的清除,IL-18水平下调可能是HBV宫内感染的危险因素之一。     

妊娠滋养细胞疾病中Th1/Th2类细胞因子的表达与葡萄胎恶变关系的探讨

目的：探讨妊娠滋养细胞疾病中Th1/Th2类细胞因子的表达及与葡萄胎恶变的关系。方法：以IL-2、IFN-γ代表Th1类细胞因子,以IL-4、IL-10、IL-13代表Th2类细胞因子,以β-actin为内参照,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测未恶变的葡萄胎12例,发生恶变的葡萄胎及绒癌38例中不同细胞因子的表达模式。结果：非恶变组IL-2及IFN-γ的表达率较恶变组高(P＜001),细胞因子的表达以Th1类占优势,而恶变组IL-4、IL-10及IL-13的表达率较非恶变组高(P＜005),细胞因子的表达以Th2类占优势。恶变组恶变前后相比较,恶变后IL-4、IL-10、IL-13的表达均有增高的趋势(P＜005)。侵蚀性葡萄胎与不同来源的绒癌之间细胞因子的表达差异无显著性(P＞005)。结论：Th2类细胞因子的高表达在妊娠滋养细胞疾病的发生、发展中起一定作用,Th1/Th2漂移对滋养细胞肿瘤的早期发现、患者预后判断及治疗有一定价值。     

复发性流产患者外周血T细胞亚群变化及相关转录因子的表达

目的:检测复发性流产患者外周血中Th1、Th2和Th17细胞的变化情况及相关转录因子T-bet、GATA-3和STAT-3mRNA的表达水平。方法:对30例复发性流产(RSA)非孕期患者和30例正常非孕(NNP)妇女抽取抗凝静脉血5ml,Ficoll分离外周血单个核细胞(PBMC),采用流式细胞术检测Th1、Th2和Th17细胞的比例,PBMC培养5小时后采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清中IFN-γ、IL-4和IL-17的水平,同时检测T-bet、GATA-3和STAT-3mRNA的表达水平。结果:RSA患者Th1细胞的百分比和Th17细胞的百分比均高于NNP组(P<0.05),Th2细胞的百分比低于NNP组(P<0.05)。RSA组PBMC培养上清中IL-4水平低于NNP组(P<0.05),而IFN-γ和IL-17水平明显高于NNP组(P<0.05)。RSA患者GATA-3mRNA表达较NNP组减少(P<0.05),而T-bet和STAT-3mRNA明显高于NNP组(P<0.01)。结论:RSA患者PBMC合成IFN-γ和IL-17的水平明显增高,合成IL-4的水平明显降低,表明存在T细胞亚群的分化失衡状态。这种失衡状态可能受到相应的核转录因子T-bet、GATA-3和STAT-3的调控。     

CD4~+T细胞亚群表达失衡在妊娠期哮喘发病中的作用及意义

目的:观察妊娠期哮喘小鼠模型中Th17及Treg细胞活性分布和表达变化,探讨Th17/Treg细胞免疫平衡在妊娠期哮喘小鼠发病中的作用机制。方法:24只6～8周龄,雌性BALB/c小鼠随机分为4组,每组6只。以OVA/Al(OH)3混悬液致敏与激发构建妊娠期哮喘组(AP组)和非妊娠期哮喘组(ANP组)小鼠模型;健康妊娠组(HP组)和健康非妊娠组(HNP组)小鼠致敏与激发均以只含Al(OH)3的生理盐水混悬液替代。光镜下观察小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞计数及分类;HE染色评价小鼠气道炎症程度及肺组织病理学变化;流式细胞术测定小鼠外周血Th17及Treg细胞所占CD4+T细胞比例,计算Th17/Treg细胞比值;RT-PCR检测小鼠肺组织中Th17及Treg细胞相关因子表达。结果:妊娠期哮喘小鼠BALF中炎症细胞分类及计数、肺组织病理学表现和活体肺功能气道高反应性Penh值等客观指标证实,妊娠哮喘小鼠模型构建成功。外周血中,AP组CD4+IL-17+T细胞(Th17)显著升高(P<0.01);Foxp3+T细胞(Treg)显著降低(P<0.01);与HP,HNP组相比,存在Th17/Treg比例失衡(P<0.01)。AP组小鼠肺组织中IL-17、IL-23,IL-10 mRNA表达水平均显著高于HP组及HNP组(P<0.01);IFN-γmRNA则显著低于HP组及HNP组(P<0.01);ANP组各因子mRNA水平变化与AP组一致,组间无显著差异。结论:妊娠期哮喘小鼠存在细胞免疫功能失调;Th17、Treg细胞数量及免疫平衡状态发生改变,可能是妊娠期哮喘发病过程中一个重要的决定因素。     

CD4＋T细胞在原因不明复发性流产中的研究进展

正常妊娠有赖于母体对胚胎半同种抗原的免疫耐受,一旦免疫耐受失衡,将导致免疫排斥、免疫攻击从而导致自然流产,原因不明复发性流产被认为与母胎免疫耐受失衡有关.CD4＋T在同种异体急性排斥反应中发挥重要作用,根据所分泌的细胞因子不同,CD4＋T 细胞分为Th1、Th2、调节性T细胞（Treg）及新近发现的Th17细胞.早期研究发现母体外周血、母胎界面CD4＋T细胞增高与复发性流产密切相关.随免疫耐受机制研究的不断深入,母胎免疫耐受的研究历经Th1/Th2平衡到Treg的免疫负调控作用,再到Th17/Treg平衡.综述CD4＋T细胞在原因不明复发性流产中的研究进展.     

乙型肝炎病毒感染孕妇IL-18对Th1/Th2细胞免疫平衡的作用与胎儿宫内感染相关性研究

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染孕妇外周血白细胞介素-18(IL-18)水平对Th1/Th2细胞免疫的平衡作用与胎儿宫内感染的相关性。方法:选择2006年1月至2006年10月在本院分娩孕产妇101例,合并HBV感染、肝功能正常,单胎、足月妊娠。检测新生儿脐血HBV-DNA及HBsAg,诊断胎儿宫内感染21例为研究组,无宫内感染80例为对照组。用双抗夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)检测孕妇外周血清IL-18、IFN-γ(γ-干扰素)、IL-4的水平。结果:(1)研究组孕妇外周血IL-18及IFN-γ明显低于对照组,而IL-4水平明显高于对照组,两组差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.05);研究组IFN-γ/IL-4比值较对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)两组孕妇外周血IL-18与IFN-γ均呈显著正相关、与IL-4水平均呈显著负相关、与IFN-γ/IL-4比值均呈显著正相关。结论:HBV宫内感染与孕妇Thl型特异性反应降低以及Th2型特异性反应增强有关,Th1/Th2免疫平衡失调可能是胎儿HBV宫内感染的机制之一;HBV宫内感染与孕妇外周血IL-18分泌下降有关,IL-18水平下调可能是HBV宫内感染的危险因素之一。     

CD4+CD25+调节性T细胞在妊娠免疫耐受中的研究

免疫抑制是母体成功妊娠必需的,近来研究认为CD4+CD25调节性T细胞(Treg)是免疫抑制机制中的关键成分.该类细胞是Treg的重要亚群,在体内自然存在,能分泌白细胞介素10(IL-10)、转化生长因子-β(TGF-β),表达IL-2Rα(CD25),细胞毒性T淋巴细胞抗原4(CTLA-4)分子等.在早、中期妊娠,母体全身和蜕膜的CD4+CD25Treg比率明显增加,通过细胞直接接触的方式抑制效应性T细胞的活性及分泌抑制性细胞因子等,可能在人类妊娠中扮演重要的角色.     

胆红素对脐血T淋巴细胞功能的影响

目的 探讨胆红素对新生儿T淋巴细胞功能的影响.方法 收集并分离21例正常足月新生儿脐血单个核细胞(cord blood mononuclear cell,CBMC),按培养液中胆红素的浓度相应分为A、B、C、D四组.A组:胆红素终浓度205.2 μmol/L(12 mg/d1);B组:胆红素终浓度153.9 μmol/L(9 mg/d1);C组:胆红素终浓度102.6 μmol/L(6 mg/d1);D组:胆红素终浓度0/μmol/L.培养后检测细胞凋亡率和CD25+细胞百分率,ELISA法检测培养上清液中可溶性Fas(soluble Fas,sFas)、可溶性Fas配体(soluble Fas ligand,sFasL)、IFN-γ及IL-4水平,并分析它们之间的相关性.结果 (1)A、B组细胞凋亡率分别为(61.49±8.93)%和(56.36±9.24)%,高于C、D组,分别为(32.44±8.72)%和(28.72±6.21)%,差异均有统计学意义(P《0.01);(2)A、B组CD25+细胞百分率分别为(19.89±6.72)%和(22.12±4.61)%,低于C、D组,分别为(61.28±4.87)%和(64.25±6.18)%,差异均有统计学意义(P《0.01);(3)A、B组sFas、sFasL水平低于C、D组,C组sFas、sFasL水平低于D组,差异均有统计学意义(P《0.01);(4)A、B组IFN-γ水平和IFN-γ/IL-4比值低于C、D组,差异有统计学意义(P《0.01)C组IFN-γ水平和IFN-γ/IL-4比值低于D组,差异有统计学意义(P《0.05);四组间IL-4水平差异无统计学意义(q=0.47～3.30,P》0.05);(5)CD25+细胞百分率、培养上清液sFas、sFasL、IFN-γ水平及IFN-γ/IL-4比值均与凋亡细胞百分率呈负相关(r=-0.79～-0.37,P《0.01),而IL-4水平与细胞凋亡率无相关性(r=-0.20,P》0.05).结论 胆红素具有明显的免疫抑制活性,在生理性黄疸状态的较高水平[血清蛋红素≥153.9 μmol/L(9 mg/d1)]即能促进T淋巴细胞凋亡,进一步加重新生儿时期辅助性T细胞亚群失衡状态,导致细胞免疫功能下降.     

负载HPV16 E7~(44-62)多肽的脐血DC-CIK细胞抗宫颈癌的免疫效应研究

目的:探讨HPV16 E7~(44-62)多肽对脐血DC-CIK细胞分化和功能调节,以及其对宫颈癌CaSki细胞的体外杀伤效应。方法:采集脐血单个核细胞在体外诱导成DC和CIK细胞,HPV16 E7~(44-62)多肽负载DC与CIK细胞以细胞比1∶5共同培养。流式细胞术(FCM)分析细胞表型。RT-qPCR及Western blot法检测T-bet、GATA-3及Foxp3表达水平。ELISA法检测共培养前后CIK细胞上清液中IFN-γ、IL-12、IL-10水平。CCK-8法检测体外DC-CIK细胞抗宫颈癌Caski细胞的细胞毒杀伤效应。结果:DC及CIK细胞体外诱导成功。共培养6天,HPV16 E7~(44-62)-DC-CIK组的CD3+CD56+、CD3+CD8+、CD3+CD4+细胞比例明显高于DC-CIK组及CIK组(P0.05),DC-CIK组较CIK组高(P0.05);HPV16 E7~(44-62)-DC-CIK组的CD4+CD25+(Treg)阳性率明显低于DC-CIK组及CIK组(P0.05)。HPV16 E7~(44-62)-DC-CIK组的T细胞转录因子T-bet、GATA-3、Foxp3表达与DC-CIK组及CIK组比较,差异有统计学意义(P0.05),其中T-bet表达最高,而GATA-3和Foxp3表达最低。HPV16 E7~(44-62)-DC-CIK组细胞上清液中IFN-γ、IL-12、IL-10与其余两组比较,差异有统计学意义(P0.05),IFN-γ、IL-12表达最高,IL-10表达最低。在各效靶比下,HPV16 E7~(44-62)-DC-CIK组对宫颈癌CaSki细胞杀伤率最高(P0.05)。结论:负载HPV16 E7~(44-62)多肽的DC可增强同源CIK细胞体外抗宫颈癌的免疫作用,本研究为宫颈癌DC-CIK细胞免疫治疗提供新的致敏方法。     

T细胞免疫参与母-胎免疫调节的研究进展

母-胎免疫调节中T细胞免疫起着重要作用,CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg细胞)、Th1/Th2型细胞因子、T细胞表达的CTLA-4是研究热点,孕早期CD4+CD25+调节性T细胞由外周血向母-胎界面迁移,妊娠期间外周血存在调节性T细胞数量的扩增,尤其是FOXP3+调节性T细胞的数量及免疫抑制活性对母-胎免疫调节起重要作用。协同刺激分子CTLA-4对T细胞免疫有负性调节作用,与Th型细胞因子、调节性T细胞之间相互联系、相互作用,共同参与母-胎免疫调节。     

黄芪对新生儿脐血Th1/Th2功能平衡的影响

目的　观察新生儿脐血单个核细胞 (CBMC) Th1/Th2的功能状态及黄芪 (AM)对新生儿 CBMC Th1/Th2功能平衡的影响。　方法　对 2 4例足月新生儿 CBMC体外分别经植物血凝素(PHA- P)和 PHA- P+AM刺激 (分为新生儿 PHA组和 AM组各 2 4例 ) ,培养 4 8h,用 EL ISA法检测培养上清液中白细胞介素 4 (IL - 4 )和γ干扰素 (IFN -γ)含量。以 15例正常儿童外周血单个核细胞(PBMC)为对照 (分为儿童 PHA组和 AM组各 15例 )。　结果　新生儿 PHA组 IFN-γ、IL - 4水平显著低于儿童 PHA组 (P均 <0 .0 1) ,IFN -γ/IL - 4比值也明显低于儿童 PHA组 (P<0 .0 5 ) ,与儿童比较呈现低水平的 Th2相对优势状态。新生儿 AM组 IFN -γ、IL - 4水平显著高于新生儿 PHA组 (P均 <0 .0 1) ,其中以 IFN-γ变化明显 ,IFN-γ/IL - 4比值明显高于 PHA组 (P<0 .0 5 )。儿童 AM组 IFN-γ水平较儿童 PHA组明显增高 (P<0 .0 1) ,IL - 4水平较 PHA组无明显变化 (P>0 .0 5 )。新生儿 AM组IFN-γ和 IL - 4水平明显高于儿童 PHA组 (P均 <0 .0 1) ,IFN-γ/IL - 4比值明显高于儿童 PHA组(P<0 .0 5 )。新生儿 AM组 IL - 4水平明显高于儿童 AM组 (P<0 .0 5 ) ,两组 IFN-γ水平差异无显著性(P>0 .0 5 ) ,IFN-γ/IL - 4比值明显低于儿童 AM组 (P<0 .0 1)     

CD4~+T细胞在甲状腺自身抗体阳性患者中的比例及其对IVF-ET治疗结局的影响

目的:探究甲状腺功能正常甲状腺自身抗体阳性(ATA~+)患者外周血中CD4~+T细胞的比例及其对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗结局的影响。方法:选择在青岛大学附属烟台毓璜顶医院生殖医学科就诊接受IVF治疗甲状腺功能正常的患者,其中行新鲜周期胚胎移植的ATA~+患者28例(ATA~+组),甲状腺自身抗体阴性(ATA~-)患者32例(ATA~-组)。取卵日、移植第5天、移植第14天抽取两组患者的外周血采用流式细胞学的方法检测CD4~+T细胞。结果:(1)ATA~+组的生化妊娠流产率明显高于ATA~-组(P0.05)。ATA~+组的着床率、囊胚率、临床妊娠率和活产率与ATA~-组比较有降低趋势,早期流产率与ATA~-组比较有升高趋势,差异无统计学意义(P0.05)。(2)取卵日外周血中Th1细胞的比例在ATA~+组明显高于ATA~-组;移植第14天外周血中Th2细胞的比例在ATA~+组显著低于ATA~-组;ATA~+组中Th17细胞的比例在取卵日、移植第5天、移植第14天的外周血中均显著高于ATA~-组;而ATA~+组中Treg细胞的比例在不同时间点外周血中均显著低于ATA~-组(P0.05)。(3)ATA~+组中Th1/Th2比值在取卵日、移植第14天外周血中明显高于ATA~-组;ATA~+组中Th17/Treg比值在取卵日、移植第5天、移植第14天外周血中均明显高于ATA~-组(P0.05)。结论:ATA~+患者不同时间点外周血中Th1细胞与Th2细胞、Th17细胞与Treg细胞之间的平衡被打破,使免疫反应倾向于细胞免疫应答,向加剧炎性反应方向发展,可能是导致ATA~+患者IVF-ET治疗不良妊娠结局的免疫学机制之一。     

原因不明复发性流产患者蜕膜CD4~+CD25~+CD127~(dim/-) Treg细胞的表达频率和功能研究

目的:探讨原因不明复发性流产(URSA)患者母胎界面免疫耐受环境的变化。方法:留取URSA患者21例(URSA组)和30例正常早孕人流妇女(对照组)蜕膜组织,制备成单个核细胞悬液,流式细胞术分析CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞的表达频率;取两组蜕膜单个核细胞悬液各5例,用免疫磁珠分离法分离出CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞,流式细胞术分析CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞内IL-10和TGF-β的表达水平;体外增殖抑制试验分别检测用抗IL-10抗体和抗TGF-β抗体处理的CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞,和未用抗体处理的CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞对自身效应T细胞增殖的抑制作用。结果:URSA组蜕膜CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞的表达频率明显低于对照组(P=0.005);URSA组蜕膜CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞内IL-10和TGF-β表达频率均较对照组明显降低(P=0.04,P=0.01);URSA组CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞对自体效应性T细胞的增殖抑制作用显著低于对照组(P0.05),且抗IL-10抗体和抗TGF-β抗体可部分阻断蜕膜CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞的免疫抑制功能(P均0.05)。结论:URSA患者蜕膜CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞不仅表达频率降低,而且免疫抑制功能也减弱,且这种免疫抑制功能的减弱主要受IL-10和TGF-β介导,揭示CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞对URSA患者蜕膜局部免疫耐受环境产生影响。     

原因不明复发性流产母胎界面调节性T细胞对巨噬细胞的调控

目的探讨原因不明复发性流产(URSA)患者蜕膜组织中CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞对巨噬细胞(Mφ)的调控作用。方法选择2008年3月至2009年4月在上海交通大学医学院附属仁济医院就诊的URSA患者(URSA组)及正常早孕人工流产妇女(正常组)各15例,采集蜕膜组织,免疫磁珠法分选Treg细胞和Mφ。将两组Mφ单独培养,同时URSA组Mφ分别与正常组、URSA组Treg细胞共同培养(直接、培养液中加入抗TGF-β抗体和Transwell体系)6d,检测MφCD80、CD86、IL-10和IFN-γ的表达。结果 (1)与正常组相比,URSA组MφCD80、CD86表达显著增高;MφIL-10表达显著降低(P0.05);IFN-γ的表达差异无统计学意义(P0.05)。(2)两组Treg细胞均能下调MφCD80、CD86和IFN-γ表达,上调IL-10的表达;正常组Treg调控Mφ的能力显著高于URSA组(P0.05)。在含有anti-TGF-β的培养液或在Transwell体系中共培养后,Treg细胞丧失调控Mφ的能力。结论 URSA患者蜕膜中Treg细胞对Mφ调控失调,从而导致固有免疫异常所致的获得性免疫失调。     

TGF-β1在早孕妇女外周血和蜕膜组织中诱导生成T调节性(Treg)细胞

目的:研究TGF-β1是否能在人母-胎界面诱导生成T调节性(Treg)细胞。方法:早孕妇女外周血和蜕膜CD4+CD25-T细胞中加入不同浓度的TGF-β1(0 ng/ml、2 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml)分别于培养后第2日、第4日和第6日用流式细胞仪检测培养Foxp3的表达情况,随后将诱导生成的CD4+Foxp3+T细胞与CD8+T细胞混合培养,观察后者凋亡因子CD95配体(CD95L)的表达情况。结果:体外培养中,TGF-β1可诱导早孕妇女的外周血和蜕膜CD4+CD25-T细胞生成诱导性Treg细胞,随着培养时间增加而增强诱导效应,且在TGF-β1浓度为5 ng/ml时诱导功能最强;诱导生成的CD4+Foxp3+T细胞具有促进效应细胞CD8+T细胞凋亡的功能。结论:体外培养中,TGF-β1能将人外周血和蜕膜诱导生成Treg细胞,且具有免疫抑制功能,有良好的免疫治疗前景。