急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因检测及临床意义

急性早幼粒细胞性白血病(APL)是一组累及 17号染色体上的维甲酸受体α基因,其中t(15;17)(q22;q21)易位后形成的早幼粒细胞性白血病(PML)/维甲酸受体α(RARα)融合基因在APL中的重视率最高,占90%以上[1].本研究以34例形态学诊断为APL患者和2例疑似APL患者为对象,采用筑巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测患者PML/RARα融合基因,并追踪观察部分患者PML/RARα融合基因的动态变化,探讨其在诊断、疗效评估及预测预后中的意义.     

PML—RARα转基因小鼠发生急性早幼粒细胞白血病

为了从整体水平上研究ＰＭＬ－ＲＡＲα融合蛋白的致白血病作用,建立了仅在髓系细胞中表达ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因的转基因小鼠。通过表型分析发现一个单系的３只ｈＣＧ－ＰＭＬ－ＲＡＲα转基因小鼠在１－５个月时发生急性早幼粒细胞白血病,从而说明ＭＰＬ－ＲＡＲα融合基因的表达在白血病的发生中起着极为重要的作用。     

急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因检测的临床意义

目的探讨荧光原位杂交技术(FISH)检测PML/RARα融合基因在急性早幼粒细胞白血病(APL)诊断中的应用价值。方法应用常规细胞遗传学分析28例APL患者的染色体核型,同时用FISH法检测PML/RARα融合基因。结果 28例初诊的APL患者254例常规核型分析检出t(15;17)(q22;q12);2例患者核型正常;另1例未检出t(15;17),核型分析结果为涉及15和17号染色体的复杂异常;FISH检测所有病例均存在PML/RARα融合基因。结论 FISH法行PML/RARα融合基因检测特异性和敏感性好,是诊断APL的可靠方法。     

骨髓涂片双色荧光原位杂交检测急性早幼粒细胞白血病的PML/RARα基因重排

为了探讨双色荧光原位杂交(D—FISH)技术在骨髓涂片(BMS)上检测PML／RARα基因重排对急性早幼粒细胞白血病(APL)的诊断价值，采用光谱绿(Spectrum Green)和光谱桔红(Spectrum Orange)分别标记PML和RARα两种基因探针对27例临床拟诊为APL的患者进行BMS-D—FISH检测，并与常规细胞遗传学(CCG)、逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)检测结果作比较。结果表明：18例初诊患者中，CCG检出t(15；17)者14例，他们的BMS-D-FISH和RT—PCR均证实有PML／RARα基因重排，从而肯定了对APL的诊断；而CCG未检见t(15；17)易位的4例中有1例显示阳性的BMS-D-FISH和RT—PCR结果，证实该例有隐匿易位存在，其余3例的两种检测均是阴性，因而他们被重新诊断为AML而不是APL；9例缓解患者中，CCG查出1例部分缓解患者有t(15；17)易位，其BMS-D—FISH和RT—PCR均为阳性，而8例完全缓解患者(6例伴正常核型，2例未作CCG检测)的BMS-D-FISH和RTPCR检测显示6例阴性，2例阳性，提示该2例患者有微小残留病(MRD)存在。结论：BMS—D—FISH是检测APLPML／RARα基因重排的敏感可靠方法，有助于APL确诊及其MRD检测，适合于CCG检测失败、伴有隐匿易位、RT—PCR检测缺乏材料以及需作回顾性研究者。     

巢式RT-PCR检测急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因的意义

目的 探讨巢式RT-PCR技术在检测急性早幼粒细胞白血病(APL)患者PML/RARα融合基因的价值。 方法 采用巢式RT-PCR检测218例初诊为APL患者的PML/RARα融合基因的表达水平及在部分患者的动态变化;随机选择39例APL完全缓解(CR)的患者,分别用流式细胞术(FCM)和巢式RT-PCR监测外周血或骨髓中的微小残留病(MRD)白血病细胞。 结果 在确诊的167例APL患者中PML/RARα融合基因阳性率为90.4%(151/167);39例APL-CR患者中PML/RARα融合基因阳性率76.9%(30/39);FCM和巢式RT-PCR监测APL-CR患者MRD有很好的一致性(P＞0.05)。 结论 巢式RT-PCR对APL的诊断有高灵敏度和高特异性;对APL的疗效及预后判断有重要临床意义。     

荧光聚合酶链反应检测急性早幼粒细胞白血病PML/RARα的临床价值

实时定量逆转录聚合酶链反应是目前最精确地检测急性白血病微小残留病的方法,对急性早幼粒细胞PML／RARα融合基因表达量的测定及动态变化监测,取得PML／RARα融合基因的表达拷贝数,对临床治疗、预防复发、延长患者生存期,最终治愈白血病具有重要的指导意义。     

实时定量PCR检测46例初诊急性早幼粒细胞白血病患者PML/RARαmRNA的分子表达

本研究探讨实时定量PCR（Q-PCR）检测PML／RARα mRNA的方法学，并对46例初诊急性早幼粒细胞白血病（APL）患者骨髓标本进行检测。构建PML／RARα的bcr1型和ber3型转录本以及内参照abl基因转录本的阳性标准品质粒；利用ABI Prism 7500型Q-PCR仪对46例初诊APL患者和40例非APL患者骨髓标本进行检测，PML／RARα mRNA定量结果以校正比值（NQ）表示，NQ=PML／RARα mRNA拷贝数／ABLmRNA拷贝数；应用四色流式细胞术检测免疫表型。结果显示，Q-PCR结果的日间差和日内差平均变异系数（CV）分别为1．58％和0．88％。可重复敏感度为可以检测5 copies／100ng RNA。40例非APL患者PML／RARα mRNA均为阴性。46例初诊APL患者PML／RARα mRNA表达量NQ中位值为0．450（0．084—1．082）。比较32例bcr1型和14例bcr3型两组患者的特征表明，PML／RARα mRNANQ中位值分别为0.454（0.084—1、082）和0．386（0.151—0．848）（P〉0．05）。形态学诊断M3v的患者比例分别为9.40％和48.96％（P〈0.05）；初诊时WBC中位数分别为2．15（0．2—59．6）和9．35（0．91—122．8）（P〈0．05），而在性别、年龄、初诊时血红蛋白和血小板计数、骨髓中APL细胞比例、DIC指标等方面无差异。流式细胞仪术检测时，CD45／SSC射门情况下，APL细胞群分布可以分为两类：高侧向角（L-SSC，粗颗粒）和非高侧向角（NL-SSC，细颗粒）两类。bcr1型患者中85．70％表现为L—SSC，而bcr3型患者中64．29％表现为NL-SSC。结论：建立的Q—PCR方法稳定可靠，敏感度高；berl型和bcr3型APL患者的PML／RARetmRNA表达量无差异，bcr3型APL患者中形态学M3v比例和WBC数比bcr1型患者高；PML／RARα不同转录本类型和免疫表型以及细胞形态学之间有一定的相关性。     

全反式维甲酸治疗无PML/RARα融合基因的急性髓细胞白血病

全反式维甲酸 (ＡＴＲＡ)敏感性与急性早幼粒细胞白血病(ＡＰＬ)和ＰＭＬ ＲＡＲα融合基因高度相关。ＡＴＲＡ对无ＲＡＲα重排的ＡＰＬ及其他类型急性髓细胞白血病 (ＡＭＬ)疗效差[1] 。我们对无ＰＭＬ ＲＡＲα融合基因的ＡＰＬ患者采用ＡＴＲＡ治疗 ,具有一定的疗效 ,现将结果报告如下。病例和方法1　病例　 5例ＡＭＬ均为本院住院患者 ,其中 1例在外院进行ＡＴＲＡ治疗 ,余 4例在本院接受ＡＴＲＡ治疗 ;男 1例 ,女 4例 ,年龄 18～ 71岁。经骨髓及血涂片过氧化物酶 (ＰＯＸ)染色等细胞化学检查确诊 ,诊断和疗效标准参照文献 [2 ]。2　免…     

急性早幼粒细胞白血病PML—RARα融合基因检测的临床意义探讨

目的探讨PML-RARα融合基因检测在临床检查急性早幼粒细胞白血病（APL）治疗前后的意义。研究PML—RAR饯融合基因含量与急性早幼粒细胞白血病（APL）病变进程的关系。方法运用RT-PCR技术检测急性早幼粒细胞白血病患者治疗前后骨髓内PML-RARα融合基因含量。结果所有51例初诊为APL的患者均做PML—RARα融合基因检测,其中阳性4l例,阳性率为80．4％。初诊为APL的51例患者治疗18个月后（进行随访）,其中死亡3例,阳性3例,阳性率为5．9％。结论PML-RARα融合基因的检测对APL诊断具有重要价值。定期检测PML—RAR仅基因可尽早发现分子学复发以及时治疗,并避免血液学复发。     

维甲酸受体α与急性早幼粒细胞白血病PML－RARα融合受体特性研究

作者通过受体的放射配基结合分析方法，研究了ＨＬ－６０细胞中维甲酸受体α（ＲＡＲα）与急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）细胞中ＰＭＬ－ＲＡＲα融合受体的一些特性。结果显示：ＲＡＲα在细胞中以单体形式存在，而ＰＭＬ－ＲＡＲα则以复合体形式存在；ＰＭＬ－ＲＡＲα与全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）的亲和力比ＲＡＲα与ＡＴＲＡ的亲和力低。提示：ＲＡＲα与ＰＭＬ－ＲＡＲα这些特性的差异可能与ＡＰＬ发病及ＡＴＲＡ治疗作用有关。     

急性早幼粒细胞白血病患者PML/RARα融合基因及免疫表型与全反式维甲酸治疗预后的关系

急性早幼粒细胞白血病 (APL)是一组累及 17号染色体维甲酸受体α基因 ,导致粒系造血细胞分化阻滞在早幼粒阶段的异质性肿瘤。其中t(15 ;17) (q2 2 ;q12 )易位后形成的PML/RARα融合基因在APL的重现率最高 ,占 90 %以上[1] ;其余为t(5 ;17)、t(11;17)等易位形式[2 ,3 ] 。自从全反式维甲酸 (ATRA)应用于临床以来 ,APL的早期病死率明显下降、缓解率明显提高[4] ,但是仍然有近 2 0 %的APL患者不能缓解。因此 ,本研究以 6 3例形态学诊断为APL患者为对象 ,探讨PML/RARα融合基因及免疫表型与ATRA治疗预后的关系。1　资料和方法1.1…     

维甲酸受体α与急性早幼粒细胞白血病PML—RARα融合受体特性研究

作者通过受体的放射配基结合分析方法，研究了ＨＬ－６０细胞中维甲酸受体α（ＲＡＲα）与急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）细胞中ＰＭＬ－ＲＡＲα融合受体的一些特性。结果显示：ＲＮＡα在细胞中以单体形式存在，ＰＭＬ－ＲＡＲα则以复合体形式存在；ＰＭＬ－ＲＡＲα与全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）的亲和力比ＲＡＲα与ＡＴＲＡ的亲和力低。提示：ＲＡＲα与ＰＭＬ－ＲＡＲα这些特性的差异可能与ＡＰＬ发病及ＡＴＲＡ治疗作用有关     

荧光聚合酶链反应检测急性早幼粒细胞白血病PML／RARα的临床价值

实时定量逆转录聚合酶链反应是目前最精确地检测急性白血病微小残留病的方法，对急性早幼粒细胞PML／RARα融合基因表达量的测定及动态变化监测，取得PML／RARα融合基因的表达拷贝数，对临床治疗、预防复发、延长患者生存期，最终治愈白血病具有重要的指导意义。     

改进的RT-PCR检测PML/RARα融合基因快速诊断急性早幼粒细胞白血病

在急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞中迅速、准确检出PMI/RARα融合基因对于及时应用全反式维甲酸(ATRA)或亚砷酸(As2O3)提高诱导缓解率、减轻出血导致的早期死亡至关重要，但目前临床上采用的嵌套式RT—PCR方法繁琐且费时，亟待改进以满足临床APL快速、准确诊断的需要。本研究采用TRIZOL快速提取高质量的细胞总RNA，随机引物反转录，热启动单轮PCR，适当控制MgCl2及引物浓度和Taq酶用量，4条引物，3个体系，相同循环参数，对40例初诊APL患骨髓标本同时扩增PML/RARα融合基因及内对照RARα。结果显示，40例APL患标本均扩增出特异条带，非APL标本无特异扩增产物；阳性扩增片段清晰易辩、断裂点类型易于确定，检测可在6小时内完成。结论：此改进的RT-PCR检测PML/RARα融合基因快速、特异、简便，完全满足临床对初诊APL诊断的需要。     

急性早幼粒细胞白血病的维甲酸治疗

自 1 986年我国首次报导用全反式维甲酸(ATRA)诱导急性早幼粒细胞白血病 (APL)成功以来 ,ATRA诱导APL细胞分化治疗的显著疗效已得到公认 ,完全缓解率 (CR)达到90 %以上[1 ] 。同时ATRA大大地增加了APL患者的无病生存期及生存率 ,降低复发率[2 ] 。现将ATRA治疗APL的机制、方法、并发症等综述于下。1　APL的特征APL是急性髓系白血病的一个特殊类型 ,它具有下述 4个方面特征 :(1 )细胞形态学 ;表现为粒系分化停滞在早幼粒细胞阶段 ;(2 )细胞免疫表型 :CD9+ 、CD33+ 、CD1 3+ 、HLA-DR- 为APL的特征 ,而CD34、CD7、CD1 …     

检测PML/RARα基因的双重荧光定量PCR方法的建立

目的建立在一个反应体系中同时检测融合基因PML/RARα和内参基因ABL的双重荧光定量PCR方法。方法从DNA聚合酶含量、Mg2+浓度和引物浓度等方面进行优化,建立检测PML/RARα和ABL基因双重荧光定量PCR体系,从分析灵敏度,批内、批间精密度以及检测临床样本阳性率等方面对双重荧光定量PCR反应体系进行性能评价,并同时和北京思尔成公司荧光定量PCR试剂盒进行比较,分析两者的一致性。结果成功构建双重荧光定量PCR反应体系,检测质粒灵敏度为103copies/ml,检测NB4细胞的灵敏度为10-3,反应体系批内、批间精密度Ct值的变异系数CV都小于5%,检测20例确诊为APL病人,其检测阳性率,和北京思尔成公司的PCR反应试剂一致。结论成功开发出稳定的双重荧光定量PCR试剂盒,其操作简单,成本低,误差小,能够有效地用于APL分子生物学分型诊断、用药指导、预后观察及MRD监测。     

PML—RARα各种异质体的形成过程及其特点

１５；１７染色体易位是急性甲幼粒细胞白血病独有的，结果产生了ＰＭＬ－ＲＡＲα融合蛋白；其产生过程中基因断裂点不同，ｍＲＮＡ剪切和拼接的不同会产生不同的异质体。它们的生物学特点及临床意义不尽相同。     

早幼粒细胞白血病基因研究进展

早幼粒细胞白血病基因研究进展于文强综述孙秉中审校肿瘤细胞染色体易位的分子生物学研究可以帮助人们确定与肿瘤有关的新基因。１９９０年Ｂｏｒｒｏｗ等人先后发现急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）特征性的染色体易位ｔ（１５；１７）使位于１５号染色体上的早幼粒细胞白...     

急性早幼粒细胞白血病基因分析

目的：分析急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）患者经全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）联合细胞毒药物及异基因骨髓移植（ａｌｏ－ＢＭＴ）治疗后融合基因的变化。方法：采用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对２２例ＡＰＬ患者治疗前后ＲＡＲα／ＰＭＬ融合基因进行检测。其中１２例患者为单纯化疗，１０例接受了ａｌｏ－ＢＭＴ，９例患者于第１次完全缓解（ＣＲ１）期、１例于第１次复发（ＲＲ１）期接受了ａｌｏ－ＢＭＴ。结果：单纯维甲酸诱导完全缓解时，７５％ＡＰＬ患者融合基因仍然阳性；继用强化疗后８３％患者融合基因转为阴性，ＲＴ－ＰＣＲ转阴时间为发病后１～３９个月；ａｌｏ－ＢＭＴ后４个月内及４个月后，分别有６２．５％及８５．７％患者融合基因转阴。结论：化疗及ＢＭＴ均可使患者融合基因转阴，ａｌｏ－ＢＭＴ似乎能更快地清除体内白血病细胞     

抗PML—RARα反义核酸对NB4细胞形态,PML—RARα mRNA及蛋白质？…

目的 探讨抗ＰＭＬ－ＲＡＲα反义核酸（ＦＵＡＳ）对ＮＢ４细胞的分化、ＰＭＬ－ＲＡＲα ｍＲＮＡ表达及ＰＭＬ／ＰＭＬ－ＲＡＲα蛋白细胞内定位的影响。方法 以ＮＢ４细胞为研究对象,细胞形态观察采用Ｗｒｉｇｈｔ染以法;ＰＭＬ－ＲＡＲαｍＲＮＡ表达采用ＲＴ－ＰＣＲ法;ＰＭＬ／ＰＭＬ－ＲＡＲα蛋白细胞内定位采用免疫荧光技术。结果 ＦＵＡＳ处理后第５天,细胞出现部分分化。处理后２４,７２,１２０小时,ＰＭＬ－