褪黑素对子宫内膜异位症大鼠细胞因子及NK细胞活性的作用

目的:观察褪黑素对大鼠子宫内膜异位症模型细胞因子及自然杀伤(NK)细胞活性的影响。方法:采用手术移植法制备大鼠子宫内膜异位症模型,大鼠随机分为正常对照组、模型对照组和褪黑素高、低剂量组,测定大鼠的血清TNF-α、IL-6、IL-8及脾脏NK细胞活性。结果:褪黑素治疗组与模型组相比血清TNF-α、IL-6、IL-8活性明显降低,脾脏NK细胞活性显著增高。结论:褪黑素对子宫内膜异位症大鼠具有治疗作用,其作用机制可能与其抑制TNF-α、IL-6、IL-8以及增强脾脏NK细胞活性有关。     

HPLC-UV检测法同时测定血浆色氨酸和犬尿氨酸的方法学研究

目的 建立一种同时测定血浆中Trp和Kyn浓度的HPLC-UV检测法.方法 以3-硝基酪氨酸(3-N-Tyr)为内标,采用Agilent Hypersil ODS色谱柱进行分离.流动相中醋酸缓冲液( 15 mmol/L,pH 5.5):乙腈为94∶ 6(v/v);流速为0.8 ml/min;柱温:25℃;紫外程序化检测波长:0～4 min,360 nm;4～5 min,302 nm.选取2010年9-12月重庆市九龙坡区第一人民医院15例慢性乙型肝炎患者、8例慢性肾炎患者、10例血小板减少性紫癜患者以及15名健康体检者,用该方法检测其血浆Trp、Kyn水平并计算Kyn/Tp比值;各指标在上述4组间的比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK法.结果 Kyn与Trp的保留时间分别为2.9 min和4.4 min,线性范围分别为0.44～18.30μmol/L和3.67～470.00 μmol/L,检测限分别为0.014 μmol/L和0.122 μmol/L.Kyn与Trp的日内变异均小于3％,日间变异均小于4％.平均回收率均在92.29％～104.40％之间.用该方法测定临床标本,健康对照组、慢性肾炎组、血小板减少性紫癜组以及慢性乙型肝炎组血浆中Kyn浓度分别为(1.59±0.28)、(2.73±0.56)、(2.69±0.44)和(1.54±0.48) μmol/L,Trp浓度分别为(59.8±10.0)、(46.1±11.7)、(58.5±8.0)和(41.4±13.1)μmol/L,Kyn/Trp比值分别为(0.027 4±0.007 5)、(0.061 6±0.0165)、(0.0467±0.0091)和(0.038 3±0.007 5),差异均有统计学意义(F值分别为23.734,8.463和20.921,P均＜0.01).结论 所建立HPLC-UV检测法可同时测定血浆中Kyn和Trp浓度,适合于临床检测.     

高纯度CD3~-CD56~+CD16~+NK细胞体外扩增技术的研究

本研究探索高纯度CD3-CD56+CD16+NK细胞体外扩增技术。应用免疫磁珠分选法(MACS)分离出高纯度的CD3-CD56+CD16+NK细胞,置于含10%人AB血清的造血干细胞培养基(SCGM)中,加入细胞因子IL-2、IL-15、SCF组成不同培养体系进行体外扩增。采用细胞计数法、流式细胞术免疫表型分析和CCK-8试剂盒检测对K562细胞的杀伤率等方法比较不同培养体系对NK细胞增殖前后的数量、纯度及杀伤活性的影响;并采取相同方法对IL-2的浓度与NK细胞增殖效率及杀伤活性之间的关系进行探讨。结果发现,经免疫磁珠分选法所得的高纯度CD3-CD56+CD16+NK细胞扩增18天后,IL-2/IL-15/SCF组扩增倍数显著高于其他组(p0.05);含细胞因子组的NK细胞对K562细胞的杀伤活性显著提高,尤其是IL-2/IL-15组和IL-2/IL-15/SCF组在效靶比10∶1时杀伤活性均高达90%以上。低、中、高浓度IL-2组扩增倍数之间比较差异无显著性(p0.05),而在对K562细胞杀伤率的比较上,高浓度组明显高于低、中浓度组(p0.05)。结论:在10%人AB血清的SCGM中加入IL-2/SCF/IL-15细胞因子组合,可使经MACS纯化的NK细胞在体外高效地活化及增殖;本培养体系中IL-2浓度较低(1 000U/ml)时,NK细胞的扩增效率及对K562细胞的杀伤率与IL-2的浓度高低无相关性;而高浓度的IL-2(≥1 000U/ml)可进一步激活纯化后NK细胞的体外杀伤活性。     

心力衰竭患者心功能与细胞因子及神经激素的关系

目的探讨慢性心力衰竭患者血浆细胞因子、神经激素的变化及其与心功能的关系。方法用酶联免疫双抗体夹心法测定122例慢性心力衰竭患者及30例健康人血浆中肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactoralpha,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukine-6,IL-6)的浓度,放免法测定血浆肾素活性、血管紧张素Ⅱ(angiotensionⅡ,AngⅡ)浓度,荧光测定法测定血浆儿茶酚胺、去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)的浓度。结果①慢性心力衰竭患者血浆中TNF-α水平明显高于对照组[对照组(13.09±2.47)ng/L],差异有显著性意义(P<0.05～0.01),且随着心力衰竭程度的加重,TNF-α水平呈进行性增高[Ⅱ级(18.85±2.82)ng/L,Ⅲ级(26.65±9.78)ng/L,Ⅳ级(38.01±19.21)ng/L];IL-6水平在心功能Ⅲ,Ⅳ级组中明显高于对照组[(18.72±8.28),(24.63±10.76)和(14.71±1.30)ng/L],差异有显著性意义(P<0.05～0.01),而心功能Ⅱ级组[(16.24±4.02)ng/L]与对照组相比差异无显著性。心功能Ⅲ、Ⅳ级组心力衰竭患者血中肾素活性、AngⅡ、儿茶酚胺、NE的浓度明显高于对照组(P<0.01)。②TNF-α与肾素活性、AngⅡ、儿茶酚胺、NE呈正相关(r=0.439,0.608,0.440,0.441,P<0.01),IL-6与肾素活性、儿茶酚胺、NE呈正相关(r=0.319,0.411,0.420,P<0.01)。结论神经激素-细胞     

肠道病毒性脑炎儿童外周血NK细胞、T淋巴细胞亚群及相关细胞因子水平的变化

目的:探讨肠道病毒性脑炎(EVE)儿童外周血NK细胞、T淋巴细胞亚群及相关细胞因子水平变化及意义。方法:选取2015年10月至2017年10月河南省儿童医院神经科住院的EVE患儿136例为阳性组,对症治疗后根据预后情况分为预后良好组和预后不良组,以90例健康儿童为对照组。比较两组患儿T淋巴细胞亚群、 NK细胞及相关细胞因子的变化水平。结果:EVE组CD4~+T细胞、CD4~+/CD8~+比值及NK细胞水平均低于对照组,CD8~+T细胞水平高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);EVE组IL-2水平低于对照组,IL-6、TNF-α水平高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。136例EVE患儿,122例(89.71%)预后良好,14例(10.29%)预后不良。预后良好组CD4~+T细胞、CD4~+/CD8~+比值及NK细胞水平高于预后不良组,CD8~+T细胞水平低于预后不良组,差异均有统计学意义(P0.05);预后良好组IL-2水平高于预后不良组(P0.05),IL-6、TNF-α水平低于预后不良组,差异有统计学意义(P0.01)。结论:EVE患儿常伴免疫功能紊乱,IL-6、TNF-α水平升高,且预后不良者免疫功能紊乱更明显。     

小檗碱对小鼠艾氏腹腔积液肿瘤细胞增殖的影响及其机制

目的探讨小檗碱对小鼠艾氏腹腔积液肿瘤细胞的影响,并阐述其作用机制。方法将50只小鼠随机分为空白对照组、环磷酰胺(CTX)组、小檗碱3组(不同剂量),每组各10只。每只鼠注入0.5 ml艾氏腹腔积液肿瘤细胞,CTX组予CTX 5 mg/kg,小檗碱组分别予小檗碱5、10、15 mg/kg腹腔注射。计算小鼠生存时间及生命延长率,并测定巨噬细胞吞噬功能、肿瘤坏死因子α(TNF-α)细胞杀伤率和自然杀伤(NK)细胞活性。结果存活时间空白对照组、CTX组、小檗碱不同剂量(5、10、15 mg/kg)组分别为(12.2±3.3)d、(17.8±4.6)d、(15.4±2.8)d、(17.5±3.0)d、(19.8±2.7)d,除空白对照组外,各组生命延长率分别为39.7%、29.2%、42.8%、59.7%。用药组与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);CTX组与小檗碱组比较差异无统计学意义(P>0.05);小檗碱组随给药剂量增加存活时间有所延长,用药剂量与小鼠存活时间呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05)。用药组巨噬细胞吞噬功能、TNF-α细胞杀伤率、NK细胞活性与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);CTX组与小檗碱组比较差异无统计学意义(P>0.05);小檗碱组间巨噬细胞吞噬功能比较差异无统计学意义(P>0.05)。TNF-α细胞杀伤率随小檗碱剂量增大呈增高趋势,小檗碱15 mg/kg组NK细胞的活性有所降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论小檗碱对小鼠肿瘤具有一定的抑制和促溶作用,可明显延长小鼠存活时间。     

血清瘦素、肿瘤坏死因子α及白细胞介素6与慢性阻塞性肺疾病缓解期患者营养不良的相关性

目的探讨血清瘦素(leptin)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)与慢性阻塞性肺病(chronicobstructive pulmonary disease,COPD)缓解期患者营养状况的关系。方法测定50例COPD缓解期男性患者(营养不良组25例、非营养不良组25例)及25例正常人的leptin、TNF-α、IL-6水平和理想体质量百分比(NBM%)、体质量指数(BMI)、三头肌皮褶厚度(TSF)、上臂肌围(AMC)、血清白蛋白(ALB)等营养学指标,并分析leptin、TNF-α、IL-6水平与营养学指标的相关性。结果 COPD营养不良组TNF-α及IL-6水平均明显高于COPD非营养不良组(P<0.01)。COPD营养不良组leptin水平明显低于COPD非营养不良组,(4.74±0.92)μg/L vs(6.96±0.75)μg/L(P<0.01)。3组血清leptin浓度与NBM、BMI、TSF、AMC等营养学指标均有明显正相关(P<0.01)。COPD营养不良组血清TNF-α浓度与NBM、BMI正相关性(P<0.05),与余各指标均无相关性。3组血清IL-6浓度与营养学指标、leptin及TNF-α均无相关性。结论 leptin与COPD缓解期患者营养学指标有明显相关性。     

ST2、NK细胞和B细胞在T2DM患者中的水平及相关性分析

目的 探讨可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)、自然杀伤(NK)细胞与B细胞在2型糖尿病(T2DM)患者中的水平及相关性。方法 选取2022年10-12月在南京医科大学附属江宁医院住院治疗的50例T2DM患者作为T2DM组,另选取同期该院30例健康体检者作为对照组。采用流式细胞术检测NK细胞(CD45⁺CD3^-CD19^-CD56⁺)和B细胞(CD45⁺CD3^-CD56^-CD19⁺)比例;采用流式荧光法检测血清IL-6、TNF-α、IFN-γ的水平;采用免疫荧光干式定量法检测所有研究对象血清sST2水平;分析在T2DM患者中血清sST2水平与NK细胞、B细胞的相关性以及在T2DM患者中B细胞与NK细胞的相关性。结果 T2DM组患者血清sST2水平高于对照组,B细胞及NK细胞的比例均明显低于对照组,炎症因子IL-6、TNF-α、IFN-γ水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。T2DM患者血清s...     

IL-2和IL-15刺激脐血NK细胞对K562/Jurkat细胞的杀伤活性研究

本研究旨在探讨脐血(cord blood,CB)NK细胞的杀伤功能及细胞因子IL-2和IL-15对NK细胞杀伤K562/Jurkat细胞活性的影响。采用autoMACS及CD3阴选后CD56阳选两步免疫磁珠分选法从脐血单个核细胞纯化NK细胞,分选后NK细胞用流式细胞仪测定纯度,通过IL-2及IL-2和IL-15两种细胞因子组合培养3天,用LDH释放法检测培养前后脐血NK细胞对白血病细胞株K562和Jurkat的细胞毒活性(效靶比10∶1),并记录不同细胞因子培养体系条件下NK细胞的生长状况。结果表明,CB-MNC中CD3-CD56+细胞含量为(14.88±9.2)%,分选后CD3-CD56+细胞含量为(92.39±0.8)%;培养3天后,IL-2组NK细胞形成集落数为148.60±13.0,IL-2复合IL-15组NK细胞形成集落数为831.80±23.0,两者比较,有显著性差异;以K562为靶细胞时,新鲜纯化CB-NK的杀伤活性为(27.76±8.8)%,IL-2组杀伤活性为(61.9±9.1)%,IL-2复合IL-15组杀伤活性为(87.62±3.7)%,差别有统计学意义;以Jurkat为靶细胞时,新鲜纯化CB-NK细胞的杀伤活性为(29.32±2.5)%,IL-2组杀伤活性为(69.43±4.4)%,IL-2复合IL-15组杀伤活性为(92.95±3.2)%,差别有统计学意义。结论:脐血新鲜纯化NK细胞对K562、Jurkat细胞有一定的杀伤作用,但自发细胞毒活性较低,IL-2/IL-15刺激后杀伤活性显著提高,IL-15复合IL-2对促进脐血NK细胞的生长和提高其细胞毒活性明显优于单用IL-2。