补肾活血方调控复发性流产小鼠母胎界面血管生成实验研究

目的：观察补肾活血方对复发性流产（RSA）小鼠血管内皮生长因子（VEGF）、可溶性血管内皮生长因子受体-1 (sFlt-1)、缺氧诱导因子-1α (HIF-1α)、转化生长因子-β (TGF-β)的影响,探讨其降低流产率的作用机制。方法：构建RSA小鼠模型,将40只RSA模型小鼠随机分为模型组、补肾活血方低、中、高剂量组（6.53、13.06、26.13 g/kg） 4组,每组10只,另取10只正常妊娠小鼠作空白组。补肾活血方低、中、高剂量组给予对应剂量的补肾活血方颗粒剂水溶液灌胃,空白组、模型组给予等容量蒸馏水灌胃,连续给药14 d后,处死小鼠,收集样本。观察各组小鼠胚胎丢失情况及蜕膜组织病理形态学改变;采用ELISA法检测血清VEGF、sFlt-1、HIF-1α、TGF-β含量;采用RT-PCR法检测蜕膜组织VEGF、sFlt-1、HIF-1α、TGF-βmRNA表达。结果：与空白组比较,模型组小鼠胚胎丢失率、血清HIF-1α、sFlt-1及蜕膜组织HIF-1α、sFlt-1 mRNA水平升高（P<0.05）,蜕膜组织VEGF、TGF-β mRNA及血清VEGF、TGF-β水...     

滋肾育胎丸对复发性流产小鼠调节因子表达的影响

目的观察滋肾育胎丸(菟丝子、人参、续断,等)对复发性流产(RSA)小鼠的大鼠肉瘤蛋白(RAS)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2)、可溶性血管内皮生长因子受体-1(s VEGFR-1)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)等因子的调节作用,探讨其作用机制。方法分别选取CBA/J雌性小鼠和DBA/2雄性小鼠,CBA/J雌性小鼠与BALB/c雄性小鼠,按雌雄2∶1比例合笼交配,以检出阴栓者计为妊娠第0天,分别建立得到RSA模型和正常妊娠模型CBA×BALB/c小鼠;取造模成功的CBA/J×DBA/2小鼠30只,随机分为模型对照组、滋肾育胎丸组和黄体酮胶囊组,10只CBA×BALB/c小鼠作为正常妊娠对照组。各给药组连续给药15 d后,检测并计算各组小鼠子宫胚胎丢失率,HE染色观察小鼠蜕膜组织病理变化,免疫组化和real-time PCR分别检测RAS、VEGF、VEGFR-2、s VEGFR-1、MAPK的蛋白和mRNA表达。结果滋肾育胎丸能够显著降低RSA小鼠的胚胎丢失率,改善RSA小鼠蜕膜组织的病理改变,能够通过降低RAS、VEGF、VEGFR-2的水平和提高s VEGFR-1的表达,调节小鼠蜕膜组织的血管生成及重铸。结论滋肾育胎丸能够通过调节RAS、VEGF、VEGFR-2及s VEGFR-1等因子的表达,改善RSA小鼠胚胎丢失率和蜕膜血管新生。     

寿胎丸对复发性流产小鼠蜕膜组织有氧糖酵解抑制的影响

目的 观察寿胎丸防治复发性流产（RSA）的作用,探讨其调控有氧糖酵解的作用。方法 将40只CBA/J小鼠随机分为正常组、RSA组、地屈孕酮组和寿胎丸组,每组10只,分别灌胃蒸馏水、地屈孕酮溶解剂、寿胎丸14天。14天后将正常组CBA/J雌鼠与BALB/c雄鼠2∶1合笼,其余3组雌鼠与DBA/2雄鼠2∶1合笼,建立RSA模型,并按照前法继续灌胃至见栓第10天。计算各组小鼠胚胎丢失率,HE染色观察蜕膜组织,Western Blot、实时荧光定量PCR技术（qRT-PCR）检测小鼠蜕膜组织己糖激酶（HK）2、M2型丙酮酸激酶（PKM2）、乳酸脱氢酶（LDH）A、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（Bax）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达,乳酸脱氢酶比色法检测乳酸（LA）含量,检测HK、PK、LDH活性。结果 与正常组比较,RSA组小鼠胚胎丢失率升高（P<0.05）,蜕膜组织细胞减少,排列疏松,胞浆空泡样变,部分细胞核消失,蜕膜组织HK2、PKM2、LDHA、Bcl-2蛋白及mRNA表达降低（P<0.05）,Bax、Caspase-3蛋白...     

寿胎丸对复发性流产模型小鼠胚胎有氧糖酵解关键酶及相关蛋白表达的影响

目的 探讨寿胎丸治疗复发性流产（RSA）的可能作用机制。方法 雌性CBA/J小鼠随机分为正常组、模型组、地屈孕酮组和寿胎丸组，每组14只。正常组雌性CBA/J小鼠与雄性BALB/c小鼠合笼交配；其余3组为雌性CBA/J小鼠与雄性DBA/2小鼠合笼交配建立RSA小鼠模型。寿胎丸组雌鼠从合笼前14天到妊娠第6天或第14天给予寿胎丸1.66 g/（kg·d）灌胃；地屈孕酮组妊娠第1天到妊娠第6天或第14天给予地屈孕酮片0.33 g/（kg·d）灌胃，正常组和模型组雌鼠给予0.4 ml蒸馏水灌胃。各组在妊娠第6天时随机选取8只雌鼠取胚胎组织，检测胚胎组织糖酵解关键酶己糖激酶2 (HK2)、M2-型丙酮酸激酶（PKM2）、乳酸脱氢酶A (LDHA) mRNA和蛋白表达，检测葡萄糖转运体1 (GLUT1)、单羧酸转运体4 (MCT4)和G蛋白偶联受体81 (GPR81)蛋白表达水平。剩余6只雌鼠在妊娠第14天注射台盼蓝染色剂，计算胚胎丢失率。结果 妊娠第14天，正常组雌鼠胚胎丢失率为6.12%，模型组小鼠胚胎丢失率为33.33%，差异有统计学意义（P<0.05）；地屈孕酮组和寿胎丸组胚胎丢失...     

补肾活血方对不明原因复发性流产小鼠蜕膜化过程中p53、p21的影响

目的:观察在不明原因复发性流产(URSA)小鼠蜕膜化过程中补肾活血方对p53、p21的影响,探讨补肾活血方治疗URSA的作用机制.方法:将动情周期稳定的CBA/J雌鼠分别与BALB/c、DBA/2雄鼠合笼,构建正常妊娠模型与URSA妊娠模型,正常妊娠雌鼠记做对照组(25只),URSA妊娠雌鼠随机分为模型组(25只)、中...     

滋肾育胎丸对RSA小鼠蜕膜组织VEGF/PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达的影响

目的:探讨滋肾育胎丸对RSA小鼠蜕膜组织VEGF/PI3K/Akt信号通路中相关蛋白表达的影响。方法:取正常妊娠模型CBA×BALB/c小鼠8只作为正常组,RSA模型成功的CBA/J×DBA/2小鼠24只,按妊娠顺序随机分为模型组和黄体酮胶囊对照组和滋肾育胎丸组,每组动物数均为8只。其中正常妊娠组、模型对照组分别予以蒸馏水灌胃,黄体酮胶囊组和滋肾育胎丸组分别给予相应药物灌胃,连续15天,末次给药24h后,颈椎脱臼处死孕鼠,观察子宫和各组小鼠胚胎丢失率;取其子宫蜕膜组织,HE染色观察子宫蜕膜组织变化,蛋白免疫印迹技术(Western Blotting)检测蜕膜组织VEGF、MVD、PI3K、AKT、p-AKT和HIF-1α蛋白的表达。结果:与模型组RSA小鼠相比,黄体酮胶囊组(156mg/kg)和滋肾育胎丸组(11.7g/kg)的胚胎丢失率显著降低,子宫蜕膜组织病变明显减轻;蜕膜组织的VEGF、MVD、PI3K、AKT、p-AKT和HIF-1α蛋白的表达显著升高,而ES蛋白则显著降低。结论:滋肾育胎丸改善RSA小鼠胚胎丢失率和蜕膜血管新生与调控VEGF/PI3K/Akt通路蛋白表达有关。     

补肾活血方对复发性流产小鼠蜕膜组织VEGF/PI3K/Akt通路表达的影响

目的观察补肾活血方对复发性流产小鼠蜕膜组织VEGFA、VEGFR2及对PI3k/Akt信号转导通路的影响,探讨其治疗复发性流产的可能作用机制。方法建立BALB/c×CBA/J正常妊娠小鼠模型及DBA/2×CBA/J复发性流产小鼠模型,实验随机分为正常组、模型组、黄体酮组(3.33 mg/kg)、补肾活血方低剂量组(10.47 g/kg)、补肾活血方中剂量组(20.93 g/kg)、补肾活血方高剂量组(41.87 g/kg),各组给予相应药物灌胃2周。观察各组不同浓度药物干预后CBA/J小鼠的胚胎丢失率;采用免疫组化检测小鼠蜕膜组织VEGFA、VEGFR2蛋白的表达;采用Western blot检测小鼠蜕膜组织VEGFA、VEGFR2、PI3K、Akt、p-Akt蛋白的表达。结果 (1)与模型组比较,黄体酮组和补肾活血方低、中、高剂量组小鼠胚胎丢失率均明显下降(P0.05)。(2)免疫组化结果表明,与模型组比较,黄体酮组和补肾活血方中、高剂量组VEGFA蛋白阳性表达增强,黄体酮组和补肾活血方低、中、高剂量组VEGFR2蛋白阳性表达增强(P0.05);与补肾活血方低剂量组比较,补肾活血方中、高剂量组VEGFA蛋白阳性表达增强(P0.05)。(3)Western blot结果表明,与模型组比较,黄体酮组和补肾活血方低、中、高剂量组VEGFA、VEGFR2、PI3K、p-Akt蛋白表达水平明显升高(P0.05);与补肾活血方低、中剂量组比较,补肾活血方高剂量组VEGFA、VEGFR2、PI3K、p-Akt蛋白表达水平明显升高(P0.05)。结论补肾活血方能上调复发性流产模型小鼠蜕膜组织VEGFA及其受体VEGFR2的表达,其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路相关。     

补肾固胎合剂通过调控PKA/CREB/AQP5通路改善流产模型大鼠子宫蜕膜组织及螺旋动脉血供的机制

目的 观察补肾固胎合剂通过PKA-CREB信号通路对羟基脲片联合米非司酮诱导的流产大鼠模型子宫血供的作用及安胎机制。方法将SPF级SD大鼠以2∶1比例合笼,制备孕鼠60只,依其妊娠顺序随机分为6组,每组10只,分别为正常组、模型组、补肾固胎合低、中、高剂量剂组（0.5、1.0、2.0 g·kg-1）,及地屈孕酮组（3.02 mg·kg-1）。除正常组外,余下每组采用妊娠1-9天羟基脲灌胃（450.0 mg·kg-1）,妊娠第10天予米非司酮灌胃（4.0 mg·kg-1）复制流产模型。妊娠第1-9天,给予对应药物灌胃治疗,模型组和正常妊娠组予等量0.9%生理盐水灌胃。末次给药24 h取子宫蜕膜组织;苏木素-伊红（HE）染色观察子宫蜕膜组织中螺旋动脉管腔直径及管壁厚度;免疫组化学染色方法（IHC）检测血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）在蜕膜组织中的表达,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组孕鼠子宫蜕膜组织中磷酸化蛋白激酶A(Phosphorylated protein kinase A,p-PKA）、蛋白激酶A(...     

补肾活血中药动员大鼠骨髓EPC修复内皮功能的实验研究

目的探讨补肾活血中药对心肌梗死（MI）模型大鼠外周血、缺血心肌组织内皮祖细胞（EPC）数量及血管内皮功能的影响。方法结扎法建立大鼠MI模型,随机分为补肾活血中药高剂量组（H组）、低剂量组（L组）和模型组（M组）,正常大鼠为空白组（K组）,每组10只。H组、L组以补肾活血中药灌胃,M组、K组正常喂养,4周后外周血、缺血心肌组织EPC培养,7d后收集贴壁细胞运用流式细胞仪鉴定CD34／CD133表型,ELISA法检测血管内皮生长因子（VEGF）,硝酸还原酶法检测一氧化氮（NO）。结果H组、L组外周血和缺血心肌表达CD34／CD133阳性率、EPC数量均高于M组、K组（P〈0．05或P〈0．01）;H组、L组外周血和缺血心肌NO含量、VEGF表达均高于M组、K组（P〈0．05或P％0．01）。结论补肾活血中药具有动员骨髓EPC进入血液循环、修复血管内皮损伤的作用。     

补肾活血方对复发性流产孕鼠Th17/Treg平衡及妊娠结局的影响

目的 观察补肾活血方对复发性流产(RSA)孕鼠辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡及相关细胞因子水平和妊娠结局的影响。方法 将雌性CBA/J小鼠与雄性DBA/2小鼠按照2∶1比例交配建立RSA模型,成功后将RSA小鼠随机分为模型组、地屈孕酮组和补肾活血方低、中、高剂量组,每组10只;另将雌性CBA/J小鼠与雄性BALB/C小鼠按照2∶1交配,取正常妊娠的10只雌性小鼠作为正常妊娠组。妊娠第1天,正常妊娠组和模型组孕鼠给予生理盐水灌胃,地屈孕酮组孕鼠给予6.18 mg/kg地屈孕酮灌胃,补肾活血方低、中、高剂量组孕鼠分别给予7.83 g/kg、15.67 g/kg、31.34 g/kg补肾活血方灌胃,均每天1次,连续14 d。疗程结束,取各组孕鼠外周血,检测血清中白细胞介素-17(IL-17)、转化生长因子-β(TGF-β)水平,计算IL-17/TGF-β比值;处死孕鼠,计算胚胎吸收率;流式细胞术检测脾脏淋巴细胞中Th17细胞比例、Treg细胞比例,计算Th17/Treg比值。结果 与模型组比较,地屈孕酮组及补肾活血方各组孕鼠血清IL-17水平及IL-17/TGF-...     

寿胎丸对复发性流产模型小鼠母胎界面乳酸含量及免疫相关因子表达的影响

目的 从母胎界面酸性微环境下免疫耐受角度探讨寿胎丸治疗复发性流产(RSA)的可能机制。方法雌性CBA/J小鼠随机分为正常组、模型组、地屈孕酮组、寿胎丸组,每组15只。正常组和模型组小鼠给予0.2 ml/d蒸馏水灌胃,寿胎丸组给予寿胎丸水煎液0.15 g/(10 g·d)灌胃,地屈孕酮组给予地屈孕酮片0.44 mg/(10 g·d)灌胃。灌胃14天后,正常组CBA/J雌性小鼠与BALB/c雄性小鼠2∶1合笼,其余各组CBA/J雌性小鼠与DBA/2雄性小鼠2∶1合笼建立RSA小鼠模型。次日雌性小鼠清晨做阴道涂片,以阴道涂片出现大量精子并见到阴道栓作为妊娠第1天。见栓后按照之前的给药方式继续给药,直至妊娠第10天。各组雌鼠在妊娠第10天取母胎界面组织,乳酸脱氢酶比色法检测乳酸(LA)含量;qPCR法、Western blot法分别检测免疫相关因子白细胞介素4 (IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)、转化生长因子β1 (TGF-β1)、叉头转录因子(Foxp3) mRNA和蛋白表达;流式细胞术检测辅助性T淋巴细胞1 (Th1)、辅助性T淋巴细胞2 (Th2)、调节性T细胞(Treg)、经典巨噬细...     

白术对复发性流产小鼠母胎界面辅助性T细胞及调节性T细胞的影响

目的 探讨白术对复发性流产模型小鼠子宫组织中辅助性T细胞(T helper cell 17,Th17)及调节性T细胞(regulatorycells, Treg)的影响。方法 采用CBA/J(雌鼠)与BALB/C(雄鼠)合笼建立正常妊娠模型,与DBA/2(雄鼠)合笼建立复发性流产模型。将CBA/J雌鼠按体重随机分为正常妊娠组、流产模型组以及白术低、中、高剂量组,每组8只。给药14天后计算其流产率及胚胎吸收率;取子宫蜕膜组织分别进行HE染色和免疫荧光定量;ELISA法检测子宫组织匀浆白细胞介素17A(interleukin-17A,IL-17A)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)的含量。结果 复发性流产组小鼠HE染色见子宫内膜蜕膜化程度低,胚胎吸收率较其余各组明显升高(P<0.05);白术各剂量组子宫蜕膜形态与正常妊娠组相似,ELISA结果及免疫荧光定量显示白术各剂量组Th17表达较流产模型组均明显下降(P<0.05),而Trge的表达明显上升(P<0.05)。结论 白术通过上调Treg细胞及其分泌的TGF...     

丹参酮ⅡA对复发性流产小鼠模型蜕膜组织膜联蛋白A2 mRNA及蛋白表达的影响

目的:观察丹参酮ⅡA(TⅡA)对复发性流产(RSA)小鼠蜕膜组织膜联蛋白A2(ANXA2) mRNA及蛋白表达的影响.方法:取雌性小鼠CBA/J分别与DBM2及Balb/c两种雄性小鼠合笼交配分别建立RSA小鼠模型和正常妊娠小鼠模型.实验分为空白对照组、模型组、阿司匹林组及TⅡA低、中、高剂量组.干预后测定各组凝血酶原...     

补肾活血方调控Wnt/β-catenin信号通路改善复发性流产小鼠子宫螺旋动脉重铸的机制

目的 观察补肾活血方对复发性流产模型小鼠子宫蜕膜组织Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路及子宫螺旋动脉重铸的影响，探讨其作用机制。方法 以CBA/J×BALB/c小鼠合笼构建正常妊娠小鼠模型，以CBA/J×DBA/2小鼠合笼构建复发性流产小鼠模型，将复发性流产模型小鼠随机分为模型组、地屈孕酮组、中药低剂量组及中药高剂量组，以正常妊娠小鼠作为空白组，每组10只，各组分别给予药物治疗14 d。疗程结束后观察各组小鼠胚胎吸收率，苏木素-伊红（HE）染色观察蜕膜组织病理形态、螺旋动脉生理性转变率，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、血管内皮生长因子（VEGF）及Wnt/β-catenin信号通路的mRNA与蛋白表达水平。结果 与空白组比较，模型组胚胎吸收率明显升高（P<0.05）；子宫螺旋动脉生理性转变率明显降低（P<0.05）；子宫蜕膜组织的细胞水肿变性，排列紊乱；螺旋动脉重铸关键因子MMP-2、MMP-9、VEGF及Wnt/β-catenin信号通路相关因子Wnt2、β-catenin、细胞周期蛋白D₁（Cyclin D₁）、c-Myc的mRNA与蛋白表达明显降低（P<0.05）。与模型组比较，中药低剂量组、中药高剂量组可以明显降低胚胎吸收率（P<0.05）；明显提高螺旋动脉生理性转变率（P<0.05）；改善子宫蜕膜组织的细胞形态、增加蜕膜血管数量；明显上调MMP-2、MMP-9、VEGF及Wnt/β-catenin信号通路相关因子的mRNA与蛋白表达（P<0.05）。结论 复发性流产存在子宫螺旋动脉重铸障碍，补肾活血方可以通过激活Wnt/β-catenin信号通路，增加VEGF、MMP-2及MMP-9的表达，促进子宫螺旋动脉重铸，从而治疗复发性流产。     

补肾活血方对肾虚血瘀型大鼠着床期子宫内膜血供相关因子的调控

目的:子宫内膜的血液供应状态与胚胎着床息息相关,血管内皮生长因子(VEGF)通过与血管内皮生长因子受体(VEGFR-2)结合,可促进子宫内膜螺旋小动脉生成、发育及成熟,改善子宫组织的血液供应。本研究旨在观察模型大鼠着床期血液流变学、血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(VEGFR-2)的表达,探究补肾活血方改善肾虚血瘀模型大鼠着床期子宫内膜血液供应机制的研究。方法:统一处于动情前期的雌性SD大鼠50只,随机分为空白组、模型组、补肾活血方高剂量组(14.6 g·kg~(-1))、低剂量组(7.3 g·kg~(-1))、五子衍宗丸组(1.68 g·kg~(-1)),除空白组外,各组通过羟基脲灌胃(450 mg·kg~(-1))及尾静脉快速推注高分子右旋糖酐(5 m L·kg~(-1))造成肾虚血瘀模型。与此同时,空白组和模型组给予蒸馏水灌肠,其余各组给予不同剂量中药灌肠,动情期合笼,至妊娠第4天。末次给药1 h后股动脉取血,进行血液流变学检测。后迅速脱颈处死大鼠,取出子宫称重并固定,计算大鼠子宫指数,运用免疫组化法检测子宫内膜组织中VEGF、VEGFR-2的含量及螺旋动脉血管数量。结果:与空白组相比,模型组大鼠子宫指数降低,血液流变学各指标显著升高,子宫内膜VEGF、VEGFR-2含量及螺旋动脉血管数量明显减少。与模型组相比,补肾活血方低、高剂量组大鼠子宫指数增加,血液流变学各指标显著下降,子宫内膜VEGF、VEGFR-2含量及螺旋动脉血管数量明显升高。结论:补肾活血方可通过上调着床期VEGF及其受体VEGFR-2在子宫内膜中的表达,促进子宫螺旋动脉血管生成,同时可改善肾虚血瘀模型大鼠着床期血液流变学,促进内膜组织的血液灌注,促进胚胎着床。     

寿胎丸对复发性流产小鼠蜕膜蛋白质组的影响

目的:分析寿胎丸对复发性流产小鼠蜕膜蛋白质组的影响,从分子水平探讨寿胎丸安胎的作用机制.方法:50只雌性CBA/J小鼠分别与20只雄性DBA/2和5只雄性BALB/C小鼠按2∶1合笼交配,建立复发性流产模型40只与正常妊娠模型10只.将复发性流产CBA/J×DBA/2孕鼠按妊娠先后顺序随机分为模型组(10只)、寿胎丸低剂量组(10只,3g·kg·d-1)、寿胎丸中剂量组(10只,6g·kg·d-1)和寿胎丸高剂量组(10只,12g·kg·d-1),从妊娠第1天开始灌胃给药,至孕14 d处死小鼠,计算各组胚胎丢失率.采用双向电泳结合质谱技术分离和鉴定各组小鼠蜕膜差异表达的蛋白质,并利用生物信息学资源对所鉴定蛋白质的功能进行分析.结果:寿胎丸高、中剂量组胚胎丢失率较模型组均明显降低(p＜0.01),寿胎丸低剂量组胚胎丢失率有所降低,但与模型组相比差异无统计学意义;建立了模型组、正常组、寿胎丸高、中、低剂量组小鼠蜕膜组织的2-DE图谱,通过比较各组双向凝胶电泳图谱的差异,发现并鉴定了30个可能与复发性流产及寿胎丸干预相关的蛋白质,这些蛋白质的功能涉及绒毛外滋养细胞的侵袭、蜕膜组织血管的重建及蜕膜细胞的凋亡等.结论:寿胎丸能够降低复发性流产小鼠胚胎丢失率,具有显著的安胎作用;复发性流产是由多种蛋白质参与的复杂过程,寿胎丸可调节复发性流产小鼠蜕膜组织多种蛋白质的表达,该复方具有多靶点的作用特点.     

孕康口服液调节复发性流产小鼠内分泌系统及VEGF信号通路降低流产率的作用和机制

研究孕康口服液对Clark经典复发性流产模型小鼠流产率、内分泌系统及VEGF信号通路的影响。采用Clark经典复发性流产模型,成功复制RSA(recurrent sponiaeous abortion)模型小鼠并随机分为模型组,孕康口服液低、中、高3个剂量组,黄体酮组,正常妊娠的小鼠为正常组;从妊娠第1天起,分别给予蒸馏水,孕康口服液9,18,36 m L·kg-1·d-1,黄体酮0.039 g·kg-1·d-1。于妊娠第15天处死小鼠,观察各组小鼠胚胎丢失率,血清雌激素(E2)、孕激素(P)、催乳素(PRL)、黄体生成素(LH)、促卵泡生成素(FSH)水平,子宫蜕膜雌、孕激素受体(ER,PR)、催乳素受体(PRLR)蛋白以及子宫蜕膜RAS,MAPK,VEGF,VEGFR-2基因及蛋白表达。结果显示,孕康中、高剂量、黄体酮能显著降低RSA小鼠的胚胎丢失率;孕康高剂量能显著升高RSA小鼠血清中FSH激素水平;孕康低、中、高剂量均能显著升高RSA小鼠血清中LH,PRL激素水平;孕康中、高剂量升高RSA小鼠血清中P,E2水平;黄体酮仅能显著升高RSA小鼠血清中P,PRL激素水平。Western blot结果显示,孕康低、中、高剂量、黄体酮能显著升高RSA小鼠子宫蜕膜中PRLR,PR,ER表达,且孕康高剂量改善ER的表达强于黄体酮组;Western blot及PCR结果显示孕康中、高剂量、黄体酮均能显著升高RSA小鼠子宫蜕膜组织中RAS,MAPK,VEGF,VEGFR-2基因及蛋白表达。结果说明孕康口服液能有效降低RSA模型小鼠的胚胎丢失率,该作用与升高血清中FSH,LH,PRL,P,E2激素水平,促进小鼠子宫蜕膜中PRLR,PR,ER蛋白表达以及子宫蜕膜中RAS,MAPK,VEGF,VEGFR-2基因及蛋白表达,促进母胎界面血管重铸,改善小鼠子宫内膜容受性,促使蜕膜发育,促进胚泡着床有关。     

清益调免方通过调控细胞因子纠正自然流产模型小鼠母胎界面Th17/Treg失衡

目的 探讨清益调免方通过对关键细胞因子的调控来调节辅助性T细胞17(Helper T cells 17,Th17)/调节性T细胞（Regulatory T cell,Treg）平衡的作用机制。方法 采用随机对照试验设计,将CBA/J雌鼠分为3组：正常对照组（Normal control group,N）、模型组（Model group,M）、清益调免方治疗组（QYTMtreated group,Q）,每组8只。N组雌鼠和BALB/c雄鼠合笼,M组和Q组雌鼠与DBA/2雄鼠合笼,Q组给予清益调免方溶剂,N组和M组给予等体积的蒸馏水。妊娠第14.5天处死孕鼠取材,计算胚胎丢失率;苏木精-伊红（HE）染色观察蜕膜组织的形态变化;流式细胞术检测孕鼠脾脏中CD4+CD25+Foxp3+(Treg)细胞、CD4+IL-17A+(Th17)细胞占CD4+T细胞的比例;酶联免疫吸附测定胎盘中白介素10(IL-10)、转化生长因子β1(TGF-β1)、白介素17A(IL-17A)、白介素6(IL-6)水平变化;实时荧光定量PCR检测胎盘组织中维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)、叉头状螺旋转录因子3(...     

寿胎丸对RSA模型小鼠子宫蜕膜Annexin A_2及TTR表达影响的研究

目的:分析寿胎丸对复发性流产小鼠蜕膜蛋白质组的影响。方法:建立复发性流产模型。CBA/J×BALB/C建立正常妊娠模型,CBA/J×DBA/2建立复发性流产模型,将复发性流产模型CBA/J×DBA/2孕鼠按怀孕先后顺序随机分为4组,分别为模型组、寿胎丸高剂量组、寿胎丸中剂量组和寿胎丸低剂量组,从妊娠第1 d开始灌胃给药,至孕14 d处死小鼠,采用蛋白印迹和免疫组化方法检测差异蛋白质Annexin A2及TTR的蛋白表达。结果:小鼠模型组与正常组相比,蜕膜Annexin A2表达明显降低,TTR表达明显下降,差异有显著统计学意义(P<0.01);寿胎丸高、中、低剂量组与模型组相比,蜕膜Annexin A2表达均升高,寿胎丸高剂量组蜕膜TTR表达升高,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论:寿胎丸通过上调Annexin A2、TTR蛋白的表达,从而实现维持妊娠,降低胚胎丢失率,这可能是其安胎的作用机制之一。     

寿胎丸对复发性流产小鼠蜕膜组织Tf表达的影响

目的 探讨寿胎丸对复发性流产小鼠蜕膜组织转铁蛋白(Transferrin,Tf)表达的影响.方法 CBA/J×BALB/C建立正常妊娠模型,CBA/J×DBA/2建立复发性流产模型,将复发性流产模型CBA/J×DBA/2孕鼠按怀孕先后顺序随机分为四组,分别为模型组、寿胎丸高剂量组、寿胎丸中剂量组和寿胎丸低剂量组,从妊娠第1天开始灌胃给药,至孕14 d处死小鼠,采用免疫组化与蛋白印迹方法检测各组蜕膜组织Tf的表达.结果 模型组与正常组相比,蜕膜Tf表达明显降低,差异有显著统计学意义(P＜0.01);寿胎丸高剂量组与模型组相比,蜕膜Tf表达升高,差异有显著统计学意义(P＜0.01);寿胎丸中、低剂量组与模型组相比,蜕膜Tf表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 寿胎丸通过上调复发性流产小鼠蜕膜组织Tf的表达,从而实现维持妊娠,这可能是其安胎的作用机制之一.