补气活血合剂对脑缺血再灌注模型大鼠血清外泌体及Nestin、GFAP蛋白表达的影响

目的：观察补气活血合剂对脑缺血再灌注模型大鼠血清外泌体及巢蛋白（Nestin）、胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein, GFAP）表达的影响。方法：将40只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补气活血合剂组及补气活血合剂+外泌体抑制剂GW4869组（后简称合剂+GW4869组）各10只，模型组、补气活血合剂组及合剂+GW4869组均采用大脑中动脉线栓法复制大鼠大脑中动脉梗塞模型，假手术组仅给予颈内动脉、颈外动脉及颈总动脉的解剖分离而不进行线栓插入，缺血2h后拔除线栓进行再灌注；补气活血合剂及合剂+GW4869组分别在再灌注2h后开始灌胃补气活血合剂（10mL/kg，3次/日），合剂+GW4869组在每次灌胃前给予外泌体抑制剂GW4869腹腔注射（2.5mg/kg·d），假手术组及模型组给予灌胃等量生理盐水，四组均连续干预7天。7天后，分别记录各组大鼠干预前后的神经功能缺损评分，TTC染色法计算干预后各组大鼠脑梗死体积，HE染色法评估各组大鼠神经组织形态学变化，Western Blot法检测大鼠梗死区组织Nestin、GFAP蛋白及血清外泌体CD63蛋白的表达水平。结果：干预7天后，假手术组未表现出神经功能缺损症状，模型组神经功能缺损评分显著升高（P<0.01），补气活血合剂组神经功能缺损评分较模型组显著降低（P<0.05），应用GW4869后，神经功能缺损评分较补气活血合剂组显著升高（P<0.01）。TTC染色结果显示：假手术组大鼠脑组织成正常红色，未见肉眼苍白梗死灶，模型组、补气活血合剂组、合剂+GW4869组均可见右侧大脑苍白梗死灶；与假手术组相比，模型组、补气活血合剂组、合剂+GW4869组大鼠的脑梗死体积比均显著增加（P<0.01）；与模型组相比，补气活血合剂组的大鼠脑梗死体积比显著降低（P<0.05）；与补气活血合剂组相比，合剂+GW4869组大鼠的脑梗死体积比均显著增加（P<0.01）。HE结果显示：假手术组染色均匀，组织完整，神经细胞形状为圆锥状，排列整齐，核大居中，有明显的核仁；模型组脑皮层神经细胞排列不规则，神经元明显肿胀，核仁不明显，出现核固缩、细胞间隙存在不同大小的空泡样改变，出现间质水肿；与模型组相比，补气活血合剂组、合剂+GW4869组神经元坏死减少、组织水肿的形态表现较轻；与合剂+GW4869组相比，补气活血合剂组坏死神经元和脑组织水肿等病理损伤较轻。Western Blot结果显示：与假手术组相比，模型组GFAP、CD63表达显著降低（P<0.05）；与模型组相比，补气活血合剂组GFAP、CD63表达显著升高（P<0.05）；加用GW4869后，补气活血合剂组GFAP、CD63表达显著下降（P<0.05），Nestin表达仅有与GFAP、CD63相似的趋势，但差异无统计学意义（P>0.05）。结论：补气活血合剂可缩小脑梗死体积，提高脑梗死组织中GFAP蛋白的表达，改善大鼠缺血再灌注后神经功能缺损程度，该作用可能与促进外泌体分泌有关。     

敦煌医学古方大补脾汤对放射性肺损伤大鼠PI3K/Akt信号通路的影响

目的观察敦煌医学古方大补脾汤对放射性肺损伤大鼠PI3K/Akt信号通路的影响,探讨其作用机制。方法 40只SPF级SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、单次给药组、两次给药组,每组10只。各给药组每日予大补脾汤灌胃,空白对照组和模型组予等量生理盐水灌胃。2周后,模型组、单次给药组、两次给药组大鼠右肺予8 Gy X射线单次照射,空白对照组不予照射。照射后,两次给药组继续每日予大补脾汤灌胃,其余各组灌胃等量生理盐水。2周后处死所有大鼠,ELISA检测大鼠血清PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt含量,Western blot及免疫组化检测大鼠右肺组织PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白表达,qPCR检测大鼠右肺组织PI3K、Akt mRNA表达。结果与空白对照组比较,模型组大鼠血清PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt含量明显增加(P0.01),右肺组织PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Aktm RNA表达明显升高(P0.01);与模型组比较,单次给药组和两次给药组大鼠血清PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt含量明显减少(P0.05,P0.01),右肺组织PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt mRNA表达显著降低(P0.05,P0.01)。结论大补脾汤对放射性肺损伤大鼠具有保护作用,其机制与抑制PI3K、Akt磷酸化,调控PI3K/Akt信号通路相关。     

加味人参乌梅汤调控腹泻大鼠GABA能信号通路的系统效应

目的 研究加味人参乌梅汤对腹泻模型大鼠结肠组织中γ-氨基丁酸（GABA）能信号通路相关调控因子的影响,进一步揭示加味人参乌梅汤益气生津止泻的作用机制。方法 从48只SD幼龄大鼠中随机抽取12只作为正常组,其余大鼠以番泻叶泻下、劳倦力竭及饮食失宜等复合因素造模14 d。造模成功后,随机分为模型组、西药组及中药组,每组12只。正常组与模型组给予生理盐水灌胃（20 mL·kg^-1）,西药组给予妈咪爱灌胃（0.7 g·kg^-1）,中药组给予加味人参乌梅汤灌胃（35 g·kg^-1）,均1次/d,连续干预7 d。每日观测记录大鼠一般情况、稀便率及腹泻指数。获取大鼠结肠标本,采用免疫组化法（IHC）检测大鼠结肠GABA蛋白积分吸光度表达;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B2（Akt2）、磷酸化（p-）Akt及白细胞介素-1β（IL-1β）的含量,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠结肠PI3K、Akt2及γ-氨基丁酸A型受体β₂亚基（GABRB2） mRNA和蛋白的表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠一般情况明显变差,稀便率及腹泻指数差异无统计学意义,GABA蛋白表达明显升高（P<0.05）,PI3K、Akt2、p-Akt及IL-1β表达含量明显升高（P<0.05,P<0.01）,PI3K、Akt2、GABRB2 mRNA及蛋白表达均极显著升高（P<0.01）。与模型组比较,中药组、西药组大鼠一般情况明显好转,稀便率及腹泻指数显著下调（P<0.01）,中药组、西药组PI3K、Akt2、p-Akt及IL-1β含量均明显下调（P<0.05）,中药组PI3K、Akt2、GABRB2 mRNA均明显下调（P<0.05,P<0.01）,GABA、PI3K及GABRB2蛋白表达明显下调（P<0.05,P<0.01）;西药组PI3K及Akt2 mRNA和PI3K蛋白表达均明显下降（P<0.05）。结论 加味人参乌梅汤能通过调节腹泻大鼠结肠GABA能信号通路,减少肠上皮细胞中Cl^-向肠腔流动,改善腹泻模型大鼠结肠水液代谢失衡状态,进而发挥其益气生津止泻效应。     

电针对脊髓损伤大鼠血清外泌体及脊髓组织促炎因子表达的影响

目的:观察电针对脊髓损伤(SCI)大鼠血清外泌体表达和脊髓组织形态、超微结构及脊髓组织白细胞介素(IL)-1β、IL-6的影响，探讨电针治疗SCI的作用机制。方法:Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、电针结合外泌体抑制剂组，每组6只。采用打击器以势能撞击法复制脊髓中度损伤大鼠模型。电针组电针“夹脊”,每次30 min,每日1次，连续治疗7 d;电针结合外泌体抑制剂组在造模前1 d给予大鼠腹腔注射200μL外泌体抑制剂GW4869(300μg/mL),电针方法同电针组，治疗期间每2 d注射1次。采用BBB评分评价各组大鼠后肢运动功能变化；HE染色观察各组大鼠脊髓组织病理变化；透射电镜观察脊髓组织超微结构变化；透射电镜及Western blot法对血清外泌体进行提取、鉴定及检测；Western blot法检测各组大鼠脊髓组织中IL-1β、IL-6蛋白的表达水平。结果:与假手术组比较，模型组BBB评分显著降低(P<0.01);与模型组比较，电针组和电针结合外泌体抑制剂组大鼠BBB评分均升高(P<0.01)。HE染色显示，模型组脊髓组织疏松严重，炎性细胞浸润，实质神经...     

熊果酸调控外泌体介导的miR-155-5p保护脓毒症大鼠心肌组织的作用研究＊

目的 研究熊果酸通过外泌体介导微小核糖核酸-155-5p（micro ribonucleic acid-155-5p，miR-155-5p）对脓毒症大鼠心肌的保护作用。方法 从60只SD雄鼠中随机挑出50只为建模大鼠，通过腹腔注射内毒素（lipopolysaccharide，LPS）法建立脓毒症大鼠模型。余下10只为正常对照组。将建模成功大鼠随机分为5组，熊果酸高、中、低剂量组、GW4869组、模型组。熊果酸高、中、低剂量组腹腔注射5 mg/kg LPS+50%二甲基亚砜（dimethylsurfoxide，DMSO）后立即尾静脉注射熊果酸120、80、40 mg/kg+50% DMSO混合液；GW4869组腹腔注射5 mg/kg LPS+50% DMSO后立即尾静脉注射鞘磷脂酶抑制剂GW4869 2.5 μg/g+50% DMSO混合液；模型组大鼠腹腔注射5 mg/kg LPS+50% DMSO后，尾静脉注射等体积生理盐水；正常对照组仅腹腔注射等体积生理盐水后，尾静脉注射等体积生理盐水。另将各组外泌体与原代培养乳鼠心肌细胞共培养，设置未加外泌体仅加入等体积PBS的心肌细胞为PBS对照组；通过脂质体转染技术将miR-155-5p minic转染至大鼠心肌细胞，将转染miR-155-5p心肌细胞与动物实验中各组外泌体共培养24 h，另设置未转染miR-155-5p minic且不加外泌体仅加入等体积PBS的心肌细胞为PBS对照组，仅转染miR-155-5p minic且不加外泌体的心肌细胞为miRNA-155-5p minic转染组和GW4869+熊果酸+miR-155-5p minic组（其中熊果酸分别设置低、中、高剂量）。结果 模型组和GW4869组大鼠心肌细胞出现明显空泡样变、核肿胀，组织水肿明显，可见明显炎性浸润，熊果酸3剂量组大鼠心肌组织病变均出现好转；各组均从外周血中分离出外泌体；模型组和熊果酸3剂量组外泌体中miR155-5p表达水平均高于正常对照组（P<0.05），GW4869组外泌体中miR155-5p表达水平低于正常对照组（P<0.05）；经培养鉴定证实所取细胞为乳鼠心肌细胞；模型组、GW4869组、熊果酸3剂量组白介素1β（interleukin-1β，IL-1β）、白介素6（interleukin-6，IL-6）水平均高于磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）对照组和正常对照组（P<0.05），熊果酸3剂量组上述指标水平均低于模型组和GW4869组（P<0.05）；miR-155-5p minic转染乳鼠心肌细胞后miR-155-5p minic转染组细胞中miR-155-5p表达水平升高（P<0.05）。将各组外泌体与miR-155-5p minic转染后细胞共孵育，GW4869组细胞培养基中IL-1β、IL-6浓度均高于其余各组（P<0.05），模型组+miR-155-5p minic均高于miR-155-5p minic转染组（P<0.05），GW4869+熊果酸高剂量+miR-155-5p minic组与miR-155-5p minic转染组差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 熊果酸可改善脓毒症大鼠心肌病变，且可通过抑制外泌体中miR-155-5p表达水平，抑制心肌细胞炎症反应。     

四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎模型大鼠结肠组织PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的 探讨四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎（UC）模型大鼠结肠组织磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路相关基因mRNA和蛋白以及血清中细胞因子白细胞介素-1β（IL-1β）,白细胞介素-10（IL-10）表达水平的影响。方法 将120只SPF级Wistar大鼠在SPF级实验室适应性喂养7 d后分为空白组和造模组,造模组大鼠采用二硝基苯磺酸盐（DNBS）/乙醇溶液灌肠+皮下注射氢化可的松+番泻叶灌胃法建立脾肾阳虚型UC大鼠模型。将成功建立模型的大鼠随机分为5组,分别为模型组,美沙拉嗪（0.36 g·kg^-1）组,四神丸高、中、低剂量（3.2,1.6,0.8 g·kg^-1）组,灌胃体积均为10 mL·kg^-1,模型组和空白组灌服等体积蒸馏水,1次/d,连续21 d。每日观察大鼠一般情况,并记录小鼠体质量、粪便性状及隐血情况进行疾病活动指数（DAI）评分。取大鼠结肠组织,观察大体形态及结肠损伤情况,进行结肠黏膜损伤指数（CMDI）评分。采用苏木素-伊红（HE）染色观察各组大鼠结肠组织病理改变,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测结肠组织PI3K,Akt,mTOR mRNA的表达水平,酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血清IL-1β,IL-10的含量,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠组织PI3K,磷酸化（p-）PI3K,Akt,p-Akt,mTOR,p-mTOR蛋白的表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠一般生存状况相对较差,DAI评分,CMDI评分显著升高（P<0.01）;大鼠病理切片见肠黏膜部分消失,腺体消失,有大量的炎性细胞浸润,聚集于黏膜层和基层;PI3K,Akt,mTOR mRNA表达水平显著升高（P<0.01）;IL-1β含量显著升高,IL-10含量显著降低（P<0.01）;p-PI3K,p-Akt,p-mTOR蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较,四神丸高、中剂量组及美沙拉嗪组大鼠DAI评分明显下降（P<0.05）;四神丸高、中、低剂量组及美沙拉嗪组大鼠CMDI评分显著降低（P<0.01）;大鼠病理切片显示各给药组炎性细胞减少,黏膜层结构不同程度的恢复正常,美沙拉嗪组和四神丸中剂量组效果最好,黏膜结构接近空白组;四神丸高、中剂量组及美沙拉嗪组大鼠PI3K,Akt,mTOR mRNA及四神丸低剂量组Akt mRNA表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,四神丸低剂量组PI3K,mTOR mRNA的表达水平虽有降低,但差异无统计学意义;四神丸高、中剂量组及美沙拉嗪组IL-1β含量明显降低,IL-10含量明显升高（P<0.05,P<0.01）,四神丸低剂量组IL-1β含量降低,IL-10含量升高,但差异无统计学意义;四神丸高、中、低剂量组及美沙拉嗪组p-PI3K,p-Akt,p-mTOR蛋白表达水平均有不同程度下降（P<0.05,P<0.01）。结论 四神丸具有改善脾肾阳虚型UC模型大鼠的一般情况和肠黏膜损伤的作用,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

海藻玉壶汤加减海藻甘草反药组合对甲状腺肿大大鼠PI3K/Akt通路相关基因表达的影响

目的：探讨海藻、生甘草剂量为2015年版《中华人民共和国药典》规定高限剂量的2倍条件下,海藻玉壶汤加减海藻甘草反药组合对甲状腺肿大大鼠PI3K/Akt通路相关基因表达的影响。方法：84只大鼠按体质量分为空白组、模型组、阳性药组、全方组、去海藻组、去甘草组、去藻草组,每组12只。用丙硫氧嘧啶复制甲状腺肿大动物模型,然后给予相应药液灌胃治疗。采用TUNEL检测细胞凋亡,计算凋亡指数,采用实时定量PCR和Western Blot检测PI3K、Akt、Cyclin D1、Bcl-2 mRNA和Akt、p-Akt蛋白表达水平。结果：与模型组比较,全方组凋亡指数显著升高（P<0.05）,各中药给药组PI3K、Cyclin D1和Bcl-2 mRNA表达水平显著降低（P<0.01,P<0.05）,全方组和去藻草组Akt mRNA表达显著降低（P<0.05）,各中药给药组p-Akt、p-Akt/Akt蛋白表达显著降低（P<0.01,P<0.05）。结论：海藻玉壶汤加减海藻甘草对丙硫氧嘧啶所致甲状腺肿大大鼠有显著治疗作用,通过作用于PI3K/Akt信号通路,下调Cyc...     

“调神畅志”法针刺对帕金森伴便秘模型大鼠结肠组织PI3K/AKT/eNOS信号通路的影响

目的：探讨“调神畅志”针法对帕金森(PD)伴便秘大鼠结肠组织磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶(PI3K/AKT/eNOS)信号通路关键标志物(PI3K、AKT、p-Akt及eNOS)的影响,并探究此针法治疗的机制。方法：采用颈背部皮下注射鱼藤酮的方法制造PD伴便秘大鼠模型,并用APO诱导检测。40只造模成功大鼠随机分为模型组、西药组、常规针刺组与调神畅志组,每组10只,另空白组、假手术组各10只,共计60只,予相应干预4周。采用Western blot法检测各组大鼠远端结肠组织中PI3K、AKT、p-Akt蛋白表达和eNOS含量。结果：与空白组相比,模型组大鼠远端结肠组织中PI3K、AKT及p-Akt蛋白表达显著降低,eNOS含量显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,西药组、常规针刺组和调神畅志组远端结肠组织PI3K、AKT及p-Akt蛋白表达均明显升高,eNOS含量均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与常规针刺组比较,调神畅志组PI3K、AKT及p-Akt蛋白表达明显较高,eNOS含量显著较低,差异具...     

电针通过PI3K/Akt/GSK3β信号通路调节抑郁大鼠糖代谢紊乱

目的:探讨电针“足三里”改善应激后抑郁大鼠糖代谢紊乱的作用机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组，每组10只。采用慢性束缚应激复制抑郁大鼠模型。电针组造模期间同时进行双侧“足三里”电针干预，每次30 min,每日1次，持续4周。造模前后记录大鼠体质量并计算体质量增加量；造模结束后行糖水偏好实验、强迫游泳实验观察大鼠行为学；生化法检测大鼠血清中葡萄糖含量及糖化白蛋白水平；HE染色、PAS染色观察大鼠肝脏组织病理形态及肝糖原含量；Western blot法检测肝脏组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化(p)-PI3K、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、糖原合成酶激酶-3(GSK3β)、p-GSK3β蛋白表达量。结果:与空白组相比，模型组大鼠体质量增加量、糖水偏好指数降低(P<0.01),游泳不动时间延长(P<0.01),血清中葡萄糖含量及糖化白蛋白水平升高(P<0.05),肝脏组织中p-Akt蛋白表达量及p-Akt/Akt比值降低(P<0.001),p-GSK3β蛋白表达量及p-GSK3β/GSK3β比值升高(P<0.01,P<0.00...     

基于PI3K/Akt/NF-κB通路探讨前列舒通胶囊对慢性非细菌性前列腺炎大鼠的影响

目的 探讨前列舒通胶囊抗慢性非细菌性前列腺炎(CNP)的作用。方法 采用角叉菜胶诱导建立CNP大鼠模型,随机分为模型组、普乐安片(阳性药)组和前列舒通胶囊低、中、高剂量组,另设假手术组,每组10只。给药4周后取材,HE染色观察大鼠前列腺组织形态变化,ELISA法检测血清和前列腺组织IL-6、IL-1β、TNF-α水平,Western blot法检测前列腺组织p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠前列腺组织内有大量炎性细胞浸润和腺体增生,血清和前列腺组织IL-6、IL-1β、TNF-α水平升高(P<0.01),前列腺组织p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,普乐安片组及前列舒通胶囊各剂量组大鼠前列腺炎症及破坏程度减轻,血清和前列腺组织IL-6、IL-1β、TNF-α水平降低(P<0.05,P<0.01),前列腺组织p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达降低(P<0.01)...     

基于miRNA126调控PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨肾衰泄浊汤干预慢性肾脏病合并动脉粥样硬化作用机制

目的 探讨微小核糖核酸126（miRNA126）调控磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路在慢性肾脏病合并动脉粥样硬化（CKD AS）中的作用,以及肾衰泄浊汤干预5/6肾切除术联合高脂饲养的CKD AS大鼠的作用机制。方法 将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、氯沙坦组、肾衰泄浊汤低、中、高剂量组。通过5/6肾切除术联合高脂饲养10周建立大鼠CKD AS模型,肾衰泄浊汤低、中、高剂量组（6.0、12.0、24.0 g·kg^-1·d^-1）,氯沙坦组（20 mg·kg^-1·d^-1）剂量灌胃,进行相应的干预8周,然后处死大鼠,取材进行相应检测。全自动生化分析仪器检测大鼠肾功能和血脂：血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平;苏木素-伊红（HE）、马松（Masson）染色主动脉组织并在光学显微镜下进行病理学观察;通过透射电子显微镜观察自噬体和自噬溶酶体;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠miRNA126、PI3K、Akt、mTOR mRNA水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠磷酸化（p）-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR、苄氯素-1（Beclin-1）、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ（LC3Ⅱ/LC3Ⅰ）蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠血清SCr、BUN、TC、TG、LDL-C均显著升高（P<0.01）;与模型组比较,氯沙坦组与肾衰泄浊汤低、中、高剂量组大鼠SCr、BUN、TC、TG、LDL-C明显降低（P<0.05）;与假手术组比较,模型组大鼠内膜可见增厚斑块形成,单核巨噬细胞浸润,少量泡沫细胞,中膜平滑肌纤维排列紊乱,胶原纤维增多,氯沙坦组与肾衰泄浊汤各组较模型组病变减轻;与模型组比较,肾衰泄浊汤中、高剂量组中电镜的自噬小体及自噬溶酶体的数量增多;与假手术组比较,模型组大鼠主动脉组织miRNA126表达显著下降（P<0.01）,PI3K、Akt、mTOR mRNA表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较,肾衰泄浊汤高、中、低剂量组及氯沙坦组大鼠主动脉组织miRNA126表达显著升高（P<0.01）,PI3K、Akt、mTOR mRNA表达显著降低（P<0.01）。与假手术组比较,模型组p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达显著升高（P<0.01）,Beclin-1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白水平显著降低（P<0.01）。与模型组比较,氯沙坦组和肾衰泄浊汤低、中、高剂量组的p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达降低（P<0.05）,Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平升高（P<0.05）。结论 CKD AS大鼠主动脉组织miRNA126表达降低,激活PI3K/Akt/mTOR通路抑制自噬通量;肾衰泄浊汤通过miRNA126调控PI3K/Akt/mTOR信号通路,恢复主动脉内皮细胞的自噬,保护CKD血管损伤,减少As斑块的形成,减缓心血管并发症的发展。     

电针内关预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌PI3K/Akt通路的影响

目的:观察电针内关穴预处理对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)模型大鼠心肌组织自噬相关通路磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)的影响，探讨电针对MIRI的治疗作用机制。方法:48只SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、针刺组，每组12只。采用冠状动脉左前降支结扎法建立MIRI模型。针刺组电针双侧“内关”穴，30 min/次，1次/d,连续干预7 d。记录不同组大鼠在造模前、结扎后40 min、松解后1 min、再灌注60 min的心电图并分析其ST段电位变化。HE染色观察心肌明显损伤部位病理变化；免疫组化法观察大鼠心肌组织PI3K、Akt表达。Western blotting法检测心肌组织PI3K、Akt、磷酸化Akt(p-Akt)表达水平，并计算各组p-Akt/Akt比值。结果:模型组和针刺组结扎后40 min与松解后1 min的ST段电位均较假手术组升高，差异有统计学意义(均P<0.05)。模型组和针刺组松解后1 min、再灌注60 min时心电图ST段电位均较结扎后40 min降低，差异有统计学意义(均P<0.05)。针刺组再灌注60 min的心电图...     

电针刺激头部运动区调控PI3K/Akt信号通路对脑瘫鼠海马神经元凋亡的影响

目的:证明电针刺激脑瘫鼠头部运动区具有调控PI3K/Akt信号通路抑制海马神经元凋亡作用。方法:构建脑瘫大鼠模型,将实验大鼠分为正常组、模型组、头部电针组,电针+LY294002组,每组15只;正常组仅进行假手术处理,模型组进行造模手术,头部电针组造模后直接给与电针刺激脑瘫鼠头部运动区干预;头部电针+LY294002组在造模前20 min脑室内注射PI3K抑制剂LY294002,造模后给与电针刺激脑瘫鼠头部运动区干预;在造模后的不同时间节点各组取5只实验大鼠,先后进行BBB运动功能等级评分,Western blot法检测海马组织Akt、p-Akt的表达,脑组织海马神经元凋亡情况观察。结果:与模型组比较,头部电针组的运动功能评分在各时段都较高,海马神经细胞凋亡减少,海马组织Akt、p-Akt的表达明显,有统计学意义(P0.05);而头部电针+LY294002组与模型组比较均无显著差异。结论:通过调控PI3K/Akt信号通路抑制海马神经元凋亡可能是电针刺激脑瘫鼠头部运动区治疗脑瘫的机制之一。     

归芪益元膏对辐射旁效应损伤大鼠PI3K/Akt信号通路的调节作用

目的：探讨归芪益元膏对辐射旁效应损伤大鼠肾组织磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的影响。方法：将32只SPF级SD大鼠随机分为正常组、单纯辐射组、辐射+中药组、单纯中药组，每组8只。辐射+中药组、单纯中药组预先灌胃归芪益元膏3.28g/(kg·d),正常组和单纯辐射组分别灌胃等量生理盐水，连续灌胃2周。2周后单纯辐射组、辐射+中药组大鼠右肺予8 Gy X射线单次照射，铅皮屏蔽身体其余部位。正常组、单纯中药组不予照射。照射后处死所有大鼠。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中PI3K、Akt、磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)水平，免疫组化检测肾组织中PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白表达，实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肾组织中PI3K、Akt mRNA表达。结果：与正常组对比，单纯辐射组大鼠肾组织中PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt mRNA表达上调，差异有统计学意义(P<0.01);与单纯辐射组对比，辐射+中药组和单纯中药组大鼠肾组织中上述指标表达下调(P<...     

基于PI3K/Akt/GSK3β信号通路研究心宝丸对慢性心力衰竭大鼠心肌肥厚的影响

目的探讨心宝丸是否能够通过调控PI3K/Akt/GSK3β信号通路抑制慢性心力衰竭（CHF）大鼠模型心肌肥厚。方法将60只雄性SD大鼠按体重随机分为假手术组、模型组、心宝丸低、中、高剂量组和贝那普利组。除假手术组外所有大鼠采用腹主动脉缩窄法复制CHF模型，假手术组只分离腹主动脉，不结扎，术后4周心宝丸药物干预组［40、80、120 mg/（kg·d）］和贝那普利组［1.05 mg/（kg·d））］开始灌胃给药8周，假手术组和模型组用等体积生理盐水灌胃8周。术后12周用超声心动图检测大鼠心脏功能，全部大鼠禁食24 h后处死， HE染色法观察心肌组织形态，小麦胚凝集素染色（WGA）观察心肌细胞大小， ELISA法检测血清NT-proBNP值， Real-time PCR法检测肥厚相关基因ANP、Myh7 mRNA表达水平，Western Blot法检测心肌组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、GSK3β、p-GSK3β蛋白表达水平。结果与假手术组比较，模型组大鼠术后第12周左心室射血分数（LVEF）、短轴缩短率（FS）降低（P<0.01），左心室收缩末期内径（LVIDs）升高（P<0.05），心肌细胞横截面积（CSA）增大（P<0.01），血清NT-proBNP水平升高（P<0.01），ANP、Myh7 mRNA及p-PI3K、p-AKT、p-GSK3β蛋白表达水平上调（P<0.01，P<0.05），GSK3β表达水平下调（P<0.01）；与模型组比较，心宝丸低、中、高剂量组和贝那普利组LVEF升高（P<0.05，P<0.01），心肌细胞大小减小（P<0.01），Myh7 mRNA表达水平降低（P<0.05，P<0.01），血清中NT-proBNP水平降低（P<0.01），p-PI3K、p-AKT、p-GSK3β表达水平下调（P<0.01），GSK3β表达水平上调（P<0.01），心宝丸中、高剂量组FS升高（P<0.05），心宝丸中、高剂量组和贝那普利组LVIDs减小（P<0.05），心宝丸高剂量组和贝那普利组ANPmRNA表达水平降低（P<0.01）；HE染色结果显示：心宝丸可以改善心肌肥厚，心肌细胞排列紊乱，间隙增宽的病理变化。结论心宝丸可以抗心肌肥厚，提升心脏功能，其机制可能与抑制PI3K/Akt信号的磷酸化激活，抑制GSK3β的磷酸化有关。     

养阴通络方对脑缺血大鼠海马p-Akt、Akt及PI3K蛋白表达的影响

目的:观察养阴通络方对脑缺血损伤大鼠磷酸化Akt(P-Akt)、蛋白激酶B(Akt)及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)蛋白表达作用,对其神经保护作用机制进行探讨。方法:在长期激怒法致肝肾阴虚证动物模型基础上,采用大鼠线栓法复制局灶性脑缺血再灌注模型,免疫印迹法检测海马p-Akt(Ser473)、Akt、PI3K蛋白的表达。结果:与模型组比较,养阴通络方16g/kg组大鼠海马Akt蛋白表达增加(P<0.01),p-Akt(Ser473)、PI3K蛋白表达水平有升高趋势。结论:养阴通络方对脑缺血损伤保护作用的机制,可能是通过上调PI3K、Akt的表达,促进Akt的磷酸化。     

抵当陷胸汤调控PI3K/Akt信号通路对糖尿病大鼠足细胞凋亡的影响

目的 观察抵当陷胸汤对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其对磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路的调控作用与对足细胞凋亡的影响,探讨抵当陷胸汤改善糖尿病肾病的机制。方法 采用单次腹腔注射链脲佐菌素（STZ）溶液55 mg·kg^-1的方法建立糖尿病模型,将模型复制成功的30只随机分为模型组、抵当陷胸汤组（8.10 g·kg^-1）、小陷胸汤组（4.05 g·kg^-1）、抵当汤组（4.05 g·kg^-1）、阿拉氯胺（ALT-711）组（3 mg·kg^-1）,每组6只,另设6只空白组大鼠。连续给药8周后,采用苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠肾脏组织病理形态变化;马松（Masson）染色观察胶原沉积程度;高碘酸-席夫（PAS）染色观察基底膜病变;免疫组化法检测大鼠肾组织磷酸化（p）-PI3K、p-Akt蛋白表达;原位末端标记法（TUNEL）检测大鼠足细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠肾组织PI3K、Akt mRNA表达情况;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肾组织中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、磷酸化糖原合成酶激酶-3β（p-GSK-3β）、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）的蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠肾小球代偿性膨胀,系膜细胞增殖,系膜间质大量胶原沉积,基底膜增厚,PI3K、Akt mRNA表达减少,PI3K、Akt蛋白磷酸化显著受到抑制（P<0.01）,足细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著降低（P<0.01）,Bax、p-GSK-3β、Caspase-3表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,抵当陷胸汤组肾脏组织病理明显改善,PI3K、Akt mRNA表达显著升高（P<0.01）,PI3K、Akt蛋白磷酸化水平显著升高（P<0.01）,Bcl-2表达显著升高（P<0.01）,Bax、p-GSK-3β、Caspase-3表达显著降低（P<0.01）,足细胞凋亡率显著降低（P<0.01）。结论 抵当陷胸汤可能通过促进PI3K/Akt信号通路活化,抑制足细胞凋亡,减缓糖尿病肾病的发展进程。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬探讨当归四逆汤对痛风性关节炎大鼠的影响

目的 基于磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路,探讨当归四逆汤对痛风性关节炎（GA）大鼠自噬水平的影响。方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组（0.3 mg·kg^-1）和当归四逆汤低、中、高剂量组（6.54、13.08、26.16 g·kg^-1）,每组10只,并分别给予相应药物灌胃,正常组、模型组给予等体积生理盐水灌胃,连续7 d。于第5天给药1 h后向各组（正常组除外）大鼠右侧踝关节注射尿酸钠混悬液（50 g·L^-1）建立GA模型,正常组注射等体积的无菌生理盐水。观察大鼠踝关节肿胀情况;测定血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、IL-1β水平;观察踝关节病理形态变化;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测滑膜PI3K、磷酸化（p）-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ（LC3Ⅱ/Ⅰ）、自噬效应蛋白（Beclin-1）、泛素结合蛋白（p62）表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测PI3K、Akt、mTOR、LC3、Beclin-1、p62 mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠关节肿胀指数显著升高（P<0.01）,血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平升高（P<0.01）,踝关节滑膜组织可见明显炎性细胞浸润和纤维组织增生,滑膜组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、p62蛋白表达显著升高（P<0.01）,PI3K、Akt、mTOR、p62 mRNA表达显著升高（P<0.01）,LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白和LC3、Beclin-1 mRNA表达降低（P<0.01）。与模型组比较,当归四逆汤中、高剂量组大鼠关节肿胀明显减轻（P<0.05）;血清中TNF-α、IL-6、IL-1β表达量显著明显降低（P<0.05）;踝关节滑膜组织未见明显炎性细胞浸润,纤维组织增生减轻;滑膜组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、p62蛋白表达量均明显降低（P<0.05）,PI3K、Akt、mTOR、p62 mRNA表达量亦明显降低（P<0.05）,而LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白和LC3、Beclin-1 mRNA表达量均明显上升（P<0.05）。结论 当归四逆汤可以抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,提高大鼠滑膜组织自噬水平,改善痛风性关节炎,并且以高剂量效果最佳。     

基于PI3K/Akt通路探讨首乌丸对D-半乳糖衰老大鼠海马神经元凋亡的影响

目的 探讨首乌丸通过磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路对D-半乳糖衰老大鼠海马神经元凋亡的影响。方法 将SPF级SD雄性大50只随机分为正常组、模型组、维生素E组、首乌丸中剂量组及首乌丸高剂量组,除正常组外,其余4组均用D-半乳糖（120 mg·kg^-1）制造衰老模型,同时首乌丸中、高剂量组用首乌丸（1.08、2.16 g·kg^-1）进行灌胃,维生素E组予以维生素E（0.018 g·kg^-1）灌胃。造模6周后取全脑、海马组织,尼氏染色观察海马神经元形态学变化,原位末端标记法（TUNEL）检测海马细胞凋亡,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测海马组织中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）,磷酸化（p）-PI3K,蛋白激酶B（Akt）,p-Akt、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、叉头框蛋白O3a（FoxO3a）、p-FoxO3a、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）的蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测海马FoxO3a mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠海马神经元凋亡阳性细胞明显增多,凋亡指数显著升高（P<0.01）,海马CA1区尼氏染色显示海马神经元丢失、排列稀疏,尼氏体数量减少,存在尼氏体固缩和深染,p-PI3K、p-Akt、Caspase-3蛋白相对表达、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt均显著升高（P<0.01）,FoxO3a、p-FoxO3a蛋白相对表达、p-FoxO3a/FoxO3a显著降低（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达显著降低（P<0.01）,Bax蛋白表达显著升高（P<0.01）,FoxO3a mRNA表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,经首乌丸治疗后,凋亡阳性细胞明显减少,细胞凋亡指数显著降低（P<0.01）,海马CA1区尼氏染色显示各治疗组神经元丢失好转,尼氏体增多,排列较密集,大鼠PI3K、Akt蛋白表达差异无统计学意义,首乌丸中、高剂量组的p-PI3K、p-Akt、Caspase-3蛋白表达、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt显著降低,FoxO3a、p-FoxO3a蛋白表达、p-FoxO3a/FoxO3a显著升高（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达显著升高（P<0.01）,Bax蛋白表达显著降低（P<0.01）,Foxo3a mRNA表达显著升高（P<0.01）。结论 首乌丸能够改善海马神经元组织结构,抑制PI3K/Akt信号通路,下调Caspase-3蛋白表达,激活FoxO3a,上调Bcl-2,下调Bax,上调Bcl-2/Bax,从而减少神经元细胞凋亡。     

基于胶质细胞源性神经营养因子甲基化修饰探讨电针改善慢传输型便秘大鼠肠动力的作用机制

目的:观察电针大肠俞募穴"天枢""大肠俞"对慢传输型便秘(STC)大鼠肠道传输功能的改善情况,通过检测大鼠结肠组织胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的表达以及GDNF基因启动子区CpG岛甲基化状态,探讨电针治疗STC的可能机制。方法:雄性SD大鼠随机分为正常组、盐水组、模型组和电针组,每组16只。采用15 mg/mL复方地芬诺酯混悬液灌胃(10 mL·kg^-1·d^-1)复制STC大鼠模型。盐水组予同等剂量的0.9%氯化钠溶液灌胃。电针组电针双侧"天枢""大肠俞",每次15 min, 1次/d,连续14 d。观察大鼠排便情况并检测大鼠肠道传输功能;采用透射电镜观测结肠组织Cajal间质细胞(ICC)超微结构;Western blot法、实时荧光定量PCR法检测结肠组织中GDNF蛋白、mRNA的表达;重亚硫酸盐测序法检测结肠组织GDNF基因启动子区CpG岛甲基化状态。结果:与正常组、盐水组比较,模型组大鼠24 h排便量下降(P<0.01),粪便性状评分降低(P<0.05),小肠推进率下降(P<0.01),ICC形态结构遭到破坏...