肿瘤抑制基因PTEN的研究现状

肿瘤抑制基因PTEN是1997年由三个研究小组发现,现统称为PTEN。PTEN包括N端、C2区域和C端区域。其主要结构功能区位于N端,编码的蛋白与张力蛋白、辅助蛋白同源,参与细胞生长及肿瘤细胞浸润、血管发生及肿瘤转移的调节;并具有磷酸酶活性,参与细胞调控。PTEN的C端可调节PTEN稳定性和酶活性。其C2区域参与正确定位PTEN的催化结构域。PTEN可通过三磷脂酰肌醇激酶途径调节细胞周期;通过FAK途径抑制细胞的浸润、转移;通过蛋白激酶途径参与细胞转化和细胞周期调控。许多原发性肿瘤中都有PTEN缺失,但早期便发生完全缺失的只有子宫内膜癌和卵巢癌,其余病例中的完全失活发生在肿瘤后期,所以PTEN基因的缺失被认为是恶变过程中的后期事件。PTEN突变中有1/3是与以常染色体为主的疾病有关。     

PTEN：白血病防治新靶点

0引言与张力蛋白同源的10号染色体缺失的磷酸酶基因(phosphatase and tensin hemology deleted on chromosome ten gene,PTEN)是1997年发现的编码具有脂质磷酸酶和蛋白磷酸酶活性的抑癌基因,具有双重肿瘤抑制功能.此后研究发现在多种实体瘤中存在PTEN基因的突变、等位基因的缺失或低表达,从而影响其肿瘤抑制功能[1-3].近年来PTEN在造血系统肿瘤,如白血病发病中的作用逐渐受到重视,PTEN蛋白可能通过其磷酸酶活性抑制多重信号转导通路,而PTEN的异常与白血病的发病有关.     

miR-214通过PTEN调控AKT信号通路抑制鼻咽癌细胞凋亡CSCD

目的探讨miR-214通过PTEN调控下游AKT信号通路激活对鼻咽癌细胞凋亡的影响。方法miR-214抑制剂转染鼻咽癌5-8F和6-10B细胞。MTT法评估细胞增殖情况。Annexin-V/PI染色法检测两种鼻咽癌细胞凋亡情况。Western blot和real-time PCR检测miR-214抑制剂对PTEN基因转录和蛋白表达以及对AKT信号通路和凋亡相关蛋白表达水平的影响。检测shRNA沉默PTEN基因转录和蛋白表达后,miR-214抑制剂对鼻咽癌细胞凋亡影响。结果miR-214抑制剂可抑制鼻咽癌细胞生长,诱导5-8F和6-10B细胞凋亡。miR-214通过靶向3'-UTR区域调控PTEN基因转录和蛋白表达。抑制miR-214可促进PTEN的表达,抑制AKT信号通路激活,进而调控下游细胞周期和凋亡相关蛋白表达。沉默PTEN基因转录和蛋白表达可逆转miR-214抑制剂对鼻咽癌细胞AKT信号通路活性和凋亡的影响。结论miR-214可通过直接靶向PTEN基因转录促进AKT信号通路激活抑制鼻咽癌细胞凋亡。     

mTOR和PTEN在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

背景与目的 mTOR是调节细胞生长和增殖的重要信号转导分子,也是一种蛋白激酶.它通过活化下游的相关的效应蛋白发挥作用.在信号转导通路中PTEN基因可通过对该信号途径的负调控而抑制mTOR的活化.本研究通过分析mTOR信号转导途径中mTOR和PTEN基因在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达和临床意义.方法 外科手术中获取65例NSCLC组织及30例癌旁组织,RT-PCR技术检测NSCLC组织及癌旁组织中mTOR和PTEN基因的表达水平.结果 mTOR在NSCLC组织中表达量(0.23±0.16)显著高于癌旁组(0.12±0.09)(P<0.01),PTEN在NSCLC组织中表达量(0.19±0.28)显著低于癌旁组(0.53±0.28)(P<0.01).mTOR和PTEN与病人的性别、年龄、病理类型、淋巴结转移情况无关,与病人的肿瘤大小有关.结论 mTOR在NSCLC中被激活,PTEN在NSCLC组织表达缺失或减少,mTOR路的激活和PTEN表达缺失在NSCLC发生发展中起到一定的作用.     

PTEN基因转染对白血病细胞VEGF调控作用的影响

目的:探讨在白血病细胞中与张力蛋白同源的10号染色体缺失的磷酸酶基因(phosphatase and tensin hemology deleted on chromosome ten gene,PTEN)对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体1(VEGF receptor 1,VEGFR1)调控作用的影响.方法:将携带有野生型PTEN及绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及空载体腺病毒(Ad-GFP)转染人慢性粒细胞白血病急变细胞株K562,实时荧光定量PCR法检测不同转染组细胞中PTEN、VEGF和VEGF1 mRNA表达水平,Western印迹法检测PTEN、VEGF、Akt和磷酸化Akt蛋白的表达水平,并采用Transwell小室侵袭实验检测不同转染组细胞的侵袭性.通过MTT实验及FCM法检测PTEN基因对脐静脉内皮细胞株ECV304增殖和凋亡的影响.通过鸡胚尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)体内血管生长实验检测PTEN基因对鸡胚血管生成的影响.结果:与空载体腺病毒(Ad-GFP)相比,Ad-PTEN-GFP 转染人白血病细胞K562后,VEGF及其受体的表达被明显抑制,并呈剂量依赖性负相关;同时,Ad-PTEN-GFP 转染后K562细胞侵袭能力明显减弱.PTEN基因转染能够抑制血管内皮细胞ECV304增殖,并促进其细胞凋亡,细胞周期阻滞在S期.PTEN基因转染可明显抑制CAM血管生长.结论:肿瘤抑制基因PTEN能够抑制内皮细胞增殖和白血病细胞侵袭,其作用机制可能是负调控白血病细胞VEGF表达以及抑制肿瘤血管新生.     

PTEN基因对子宫内膜癌细胞生长的抑制作用

目的 探讨PTEN基因在子宫内膜癌基因治疗方面的可行性。方法 通过腺病毒载体(Ad-PTEN)将人野生型PrENcDNA导入Ishikawa细胞,观察外源性PTEN蛋白的表达情况,以及PTEN蛋白对Ishikawa细胞生长的影响,同时还观察了PTEN蛋白是否影响胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)对Ishikawa细胞的作用。结果 Ad-PTEN感染IsHikaWa细胞后1d,即可见PTEN蛋白表达;第3天时,表达明显增强,并能持续表达10d。感染后的IshikaWa细胞生长受到明显抑制,并且PTEN还能明显抑制IGF-Ⅱ诱导的Ishikawa细胞生长。结论 腺病毒介导的PTEN基因导入能诱导Ishikawa细胞生长受到明显抑制,提示野生型PTEN基因可能是治疗子宫内膜癌的一种新途径。     

PTEN对K562细胞mTOR调控的研究

目的:探讨肿瘤抑制基因PTEN在人慢性粒细胞白血病细胞株K562中对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin ,mTOR)的调控作用,以及雷帕霉素(rapamycin,RAPA)对K562细胞增殖抑制的影响.方法:通过实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantification PCR,RFQ-PCR)法检测甲磺酸伊马替尼(imatinib mexylate)干预K562细胞后BCR/ABL、PTEN、mTOR mRNA的表达水平及相互关系;Western 印迹法检测甲磺酸伊马替尼干预和以腺病毒为载体感染野生型PTEN(Ad-PTEN-GFP )后K562细胞PTEN、Akt和p-Akt的蛋白表达水平;用MTT和FCM方法检测RAPA对不同腺病毒感染组K562细胞增殖及凋亡的影响.结果:格列卫干预K562细胞后,BCR/ABL和mTOR mRNA表达下调,PTEN mRNA表达上调;与感染Ad-GFP组相比,感染Ad-PTEN-GFP组的mTOR mRNA表达下调;Ad-PTEN-GFP感染与10 nmol/L RAPA联合作用于K562细胞能够发挥协同作用,对K562细胞的增殖抑制率明显高于单独作用组.结论:PTEN是mTOR的上游调控基因,能够抑制mTOR的表达.RAPA与野生型PTEN一起可以协同抑制K562细胞的增殖.     

PTEN基因诱导人脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡及bcl-2蛋白表达下调

目的　探讨PTEN基因对人脑胶质瘤SHG 44细胞凋亡及凋亡相关基因bcl 2表达的影响 ,阐明PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机理。方法　PTEN基因体外转染SHG 44细胞 ,筛选阳性细胞克隆 ,以原位杂交、免疫组化方法检测PTEN基因的表达情况采用透射电镜、流式细胞仪和核DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞的凋亡情况以免疫荧光法检测bcl 2基因的表达。结果　PTEN基因转染的SHG 44细胞有PTEN基因和蛋白的表达。透射电镜下可见转染PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞浆浓缩、核碎裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表现 ;流式细胞仪示细胞周期从G1 期到S期发生抑制 ,并且在G1 期峰前出现一明显的凋亡峰 (1 2 .9% ) ;细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡细胞特有的梯状条带 ;bcl 2的表达也显著下调。转染空载体和未转染的SHG 44细胞无明显的凋亡表现。结论　PTEN基因可诱导SHG 44细胞凋亡 ,并下调bcl 2蛋白的表达 ,这可能是PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的分子机制之一     

野生型PTEN基因对胶质细胞瘤侵袭力的影响

目的观察转入野生型PTEN基因的胶质瘤细胞体外侵袭力改变,探索PTEN基因对胶质瘤细胞影响方式.方法构建野生型PTEN基因的pcDNA3.1 Hygro(-)真核质粒载体,并用于转染PTEN基因失活的U251细胞系,采用重组基底膜侵袭模型,观察转染前后细胞侵袭力的改变.结果转染PTEN基因可以明显抑制U251细胞的侵袭力.结论 PTEN基因可通过抑制胶质瘤细胞的侵袭力达到抑制肿瘤生长.     

PTEN基因与肿瘤浸润转移

PTEN是最近克隆的肿瘤抑制基因,能多途径调控肿瘤浸润转移过程,抑制肿瘤浸润和转移.PTEN能稳定和增强肿瘤细胞间粘附,抑制肿瘤细胞迁移扩散和非锚定依赖性生长,以及诱导失巢凋亡,并可抑制细胞外基质降解和肿瘤血管生成等,从而抑制肿瘤浸润和转移.     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。