酶母表达的重组HEV ORF2蛋白在戊型肝炎诊断中的初步应用

戊型肝炎是经消化道途径传播的传染病 ,对人民健康影响很大 ,疫苗和诊断抗原的研制和开发是预防和控制其流行和传播的重要手段。戊型肝炎病毒(ＨｅｐａｔｉｔｉｓＥｖｉｒｕｓ ,ＨＥＶ)结构区蛋白ＯＲＦ2存在多个抗原性决定簇并可能具有中和抗体的结合位点 ,因此戊型肝炎病毒基因工程重组蛋白的研制主要集中于ＯＲＦ2。我们应用巴氏毕赤酵母 (ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ)成功表达了戊型肝炎病毒结构区蛋白ＯＲＦ2 ,制备了新型重组ＨＥＶＯＲＦ2 ,将其作为抗原建立酶联免疫吸附试验 (简称Ｐ ＥＬＩＳＡ) ,检测正常人群及戊型肝炎患者血清…     

戊型肝炎病毒结构区基因ORF2在Pichia pastoris中的分泌表达

戊型肝炎是近年来被发现的一种较为严重的新型肝炎 ,经消化道传播 ,世界各地均有流行 ,戊型肝炎疫苗是预防和控制其流行的有效手段之一 ,而基因工程抗原作为候选疫苗有很好的应用前景。已被证实 ,戊型肝炎病毒 (ＨＥＶ)结构区基因ＯＲＦ2编码蛋白具有较强的免疫学活性。ＨＥＶ基因工程抗原的研制主要集中于ＯＲＦ2上。目前 ,ＯＲＦ2基因已成功在原核细胞、昆虫细胞中得到表达 ,表达产物均有一定免疫原性〔1〕。酵母表达系统以其表达产物类似于天然蛋白、能保持很好的生物学活性、表达条件易于控制、易于工业化生产等优势作为疫苗研制的载体…     

戊型肝炎病毒结构区基因在大肠杆菌中的表达

目的获得可用于研制戊型肝炎疫苗的基因工程抗原。方法用非融合蛋白表达载体ｐＥＴ１１ａ,表达戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）第二读码框区（ＯＲＦ２）２２４６６０ａａ段蛋白。结果得到分子量为５００００的表达产物,经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实,表达产物具有ＨＥＶ特异抗原性。结论该基因工程抗原可能具有制备戊型肝炎疫苗的前景。     

戊型肝炎酶联免疫诊断方法的建立及其应用

用基因工程重组的戊型肝炎病毒抗原ＯＦＲ３，ＯＲＦ２和ＯＦＲ３－２嵌合抗原及化学合成的ＯＲＦ３多肽抗原，分别建立了酶联免疫方法，检测５５份临床可凝的戊型肝炎病人血清中ＨＥＶ抗体，以ＯＲＦ３－２嵌合抗原检测的抗体阳性率最高，为９４．５％，ＯＲＦ３重组抗原和多肽抗原检测的抗体阳性率分别为９３％和９１％，ＯＲＦ２抗原检测的抗体阳性率为４９％。     

戊型肝炎病毒ORF2 C端抗原片段的表达及其免疫 …

目的 表达戊型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｅ ｖｉｒｕｓ,ＨＥＶ）ＯＲＦ２ Ｃ端１２８个氨基酸残基的抗原片段ＯＲＦ２．３,并进行其免疫学特性的研究。方法 用ｐＢＶ２２０载体进行抗原的非融合表达,包涵体经变性凝胶过滤层析及离子交换层析纯化后透析复性,以Ｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔ、ＥＬＩＳＡ、动物免疫与抗原籍捕获ＲＴ－ｍＰＣＲ等方法研究其免疫学特性。结果 获得了ＯＲＦ２．３的高效表达,表达量占菌体总蛋白     

戊型肝炎病人和实验感染戊型肝炎病毒的猕猴血清抗－HEV ORF2和ORF3的动态变化

应用人工合成的戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）基因组开放读码框架２（ＯＲＦ２）和３（ＯＲＦ３）两段多肽，分别建立了酶联免疫试验（ＥＩＡ），检测８５份实验感染ＨＥＶ的猕猴和１４３份戊型肝炎（简称戊肝）病人血清，结果两组抗－ＨＥＶＯＲＦ２阳性率分别为７０．８９％和６８．５３％，均显著高于抗－ＨＥＶＯＲＦ３（分别为４０．０３％和５７．３４％），且前者阳转时间较早，持续阳性时间也较长。虽然多数（９７．３％）抗－ＨＥＶＯＲＦ３阳性血清，抗－ＨＥＶＯＲＦ２也为阳性，但有少数血清（２．７％）抗－ＨＥＶＯＲＦ２为阴性。上述结果提示，ＨＥＶ基因组ＯＲＦ２和ＯＲＦ３编码的蛋白含有不同的抗原表位，可引起宿主不同的免疫反应。因此，在制备抗－ＨＥＶＥＩＡ试剂时，应联合应用ＯＲＦ２和ＯＲＦ３多肽，以提高其灵敏度和特异性。     

戊型肝炎病人和实验感染戊型肝炎病毒的猕猴血清抗——H…

应用人工合成的戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）基因组开放读码框架２（ＯＲＦ２）和３（ＯＲＦ３）两段多肽，分别建立了酶联免疫试验（ＥＩＡ），检测８５份实验感染ＨＥＶ的猕猴和１４３份戊型肝炎（简称戊肝）病人血清，结果两组抗－ＨＥＶ ＯＲＦ２阳性率分别为７０．８９％和６８．５３％，均显著高于抗－ＨＥＶ ＯＲＦ３，且前者阳转时间较早，持续阳性时间也较长。虽然多数（９７．３％）抗－ＨＥＶ ＯＲＦ３阳性血清，抗－ＨＥＶ     

戊型肝炎病毒中国株结构区ORF2 cDNA的克隆及表达

将戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）中国株结构区第二开放读码框架（ＯＲＦ２）８３７ｂｐ ｃＤＮＡ片段插入ｐＧＥＸ１λＴ质粒中进行表达。经免疫吸印法证明，该质粒表达的融合蛋白具有识别抗－ＨＥＶ的抗原表位，可用于制备抗－ＨＥＶ检测试剂。     

戊型肝炎病毒结构区基因的克隆表达及其在诊断中的 …

目的 研制戊型肝炎病毒诊断试剂。方法 利用融合蛋白表达载体ＰＧＥＸ－３Ｘ表达了戊型肝炎病毒第二读码框区（ＯＲＦ２４０２－６６０）优势怕表位，表达抗原溶于水，可利用商品化的谷胱甘肽Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ亲合层析柱得到纯化的抗原。结果 经应用发现，此基因重组抗原作为酶联免疫试剂的抗原，用于检测血清中戊型肝炎病毒抗体，与新加坡进口试剂盒有高度的一致性。和血清中的抗体反应性更强。结论 预示该基因抗原可能     

庚型肝炎病毒E2抗体的检测及其临床意义

目前多采用逆转录聚合酶链反应(ＲＴ ＰＣＲ)扩增方法检测肝炎病人血清中的庚型肝炎病毒 (ＨＧＶ) ,此技术需要病毒在血液中存在时才会出现阳性结果 ,同时临床也需要通过特异性免疫测定方法来跟踪感染及恢复过程。由于ＧＢＶ Ｃ在培养中不能成功地获得 ,没有天然抗原可供血清学检测之用 ,近年来国外一种ＧＢＶ ＣＥ2蛋白被克隆并在ＣＨＯ细胞中成功地表达 ,这种分泌型Ｅ2蛋白被纯化后在固相ＥＬＩＳＡ中应用 ,可用于确定人群血清ＧＢＶ ＣＥ2抗体水平、探讨这种抗体的产生在庚型肝炎临床流行病学中的意义。我们对 18例庚型肝炎病毒感染患者…     

戊型肝炎病毒结构区基因的克隆表达及其在诊断中的初步应用

目的研制戊型肝炎病毒诊断试剂。方法利用融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－３Ｘ表达了戊型肝炎病毒第二读码框区（ＯＲＦ２４０２～６６０）优势抗原表位。表达抗原溶于水，可利用商品化的谷胱甘肽Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ亲合层析柱得到纯化的抗原。结果经应用发现，此基因重组抗原作为酶联免疫试剂的抗原，用于检测血清中抗戊型肝炎病毒抗体，与新加坡进口试剂盒有高度的一致性，和血清中抗体反应性更强。结论预示该基因抗原可能具有较好的反应谱，应用前景乐观     

庚型肝炎病毒NS3蛋白在大肠杆菌中的表达

目的　获取具备免疫反应原性的庚型肝炎病毒ＮＳ３ 抗原。方法　从重组质粒Ｉｗｑ２利用ＰＣＲ 反应扩增出ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＮＳ３ 基因片段,克隆至表达载体ｐＰＲＯＥＸ ＨＴａ 后进行核苷酸序列测定,待鉴定正确后经ＩＰＴＧ 诱导重组工程菌,用ＳＤＳＰＡＧＥ 和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 对重组蛋白进行鉴定。结果　酶切鉴定和核苷酸序列测定结果表明成功地构建了重组工程菌ｐＨＴＮＳ３／ ＤＨ５α且克隆的基因片段为ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＮＳ３ 基因片段。ＳＤＳＰＡＧＥ 分析诱导表达产物发现在相对分子质量约４３ ８１０处有一条明显的蛋白表达带,占菌体总量的１７ ．７ ％ 。用ＮｉＮＴＡ 亲和层析柱快捷地获得了纯化的重组蛋白。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 鉴定发现重组蛋白可与ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＲＮＡ 阳性病人血清发生抗原抗体反应。结论　获得了具备免疫反应原性的ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＮＳ３ 抗原,该重组蛋白可用于ＧＢＶＣ／ＨＧＶ 感染的检测。     

一氧化氮合酶及CD34在贲门癌的表达及其意义

新近研究发现 ,在实体肿瘤组织中 ,如中枢神经系统肿瘤、结肠癌等 ,ＮＯＳ活性和酶蛋白的表达与血管内皮生长因子 (ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ)的表达、肿瘤组织内微血管密度 (ｍｉｃｒｏｖｅｓｓｅｌｄｅｎｓｉｔｙ ,ＭＶＤ)密切相关〔1〕。ＮＯＳ、ＶＥＧＦ和ＭＶＤ都与肿瘤的生长浸润及转移有密切关系 ,可以作为预测肿瘤预后的重要指标〔2〕。但其在贲门癌的表达情况 ,尚未见文献报道 ,故应用免疫组化方法 ,研究贲门癌组织中ＮＯＳ2、ＮＯＳ3、ＣＤ34和ＶＥＧＦ的表达 ,探讨其相互关系和…     

丁型肝炎病毒感染树肝组织中Fas和ICE表达的初步研究

我们采用免疫组化技术检测感染丁型肝炎病毒 (ＨＤＶ )树肝组织中ＨＤＡｇ、Ｆａｓ和ＩＣＥ表达 ,并应用免疫组化双重染色分析病毒抗原、Ｆａｓ和ＩＣＥ表达之间的关系。1　材料和方法1 1　标本来源　 30份感染ＨＤＶ树肝组织 ,取自本科建立的感染ＨＤＶ树经免疫组化和原位杂交证实ＨＤＶ在肝细胞中稳定复制、表达 ,且伴ＡＬＴ升高。1 2　ＨＤＡｇ检测　采用ＳＰ法 ,ＳＰ检测试剂盒购自情士德生物工程有限公司 ,ＨＤＶ多克隆抗体由本室用ＨＤＶＡｇ合成肽免疫家兔制备而成 ,工作浓度 1∶12 0 ,ＨＤＶＲＮＡ原位杂交检测试剂盒购自华西…     

戊型肝炎患者外周血T细胞亚群的改变及意义

戊型肝炎患者外周血Ｔ细胞亚群的改变及意义黄书明（江苏省南通市传染病院南通２２６００６）１９８９年Ｒｅｙｅｓ等［１］获得戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）的基因克隆并建立了检测抗ＨＥＶ血清学方法，但对戊型肝炎肝细胞损伤的机制仍不十分清楚。本文通过对３１例戊型肝炎患...     

庚型肝炎病毒NS5区部分基因的表达及其在EIA中的 …

目的 在大肠杆蓖中表达ＨＧＶ ＮＳ５抗原,以建立ＨＧＶ抗体血清学检测方法。方法 利用扫转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）法从人血浆中分离庚型肝炎病毒ＮＳ５部分基因,克隆到ｐＲＳＥＴ Ａ载体,经酶切初步鉴定后进行ＤＮＡ序列分析,结果表明克隆序列正确。以ｐＰＲＯＥＸ－１为表达载体,转化ＤＫ５α,诱导表达后进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析。结果 克隆的基因片段在大肠杆菌中表达出相对分子质量（Ｍ     

STUDY OF NOVEL MEMBRANOUS MATERIAL FOR CHARCOAL KIDNEY

ＳＴＵＤＹＯＦＮＯＶＥＬＭＥＭＢＲＡＮＯＵＳＭＡＴＥＲＩＡＬＦＯＲＣＨＡＲＣＯＡＬＫＩＤＮＥＹＳＴＵＤＹＯＦＮＯＶＥＬＭＥＭＢＲＡＮＯＵＳＭＡＴＥＲＩＡＬＦＯＲＣＨＡＲＣＯＡＬＫＩＤＮＥＹＧｕＨａｎｑｉｎｇ；ＬｕＭｏｚｕ（Ｔｉａｎｊｉｎｉｎｓｔｉｔｕ...     

慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞Fas和FasL的表达及临床意义

Ｆａｓ和ＦａｓＬ是介导细胞凋亡的主要系统 ,我们应用逆转录 ＰＣＲ方法 ,对 37例慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞Ｆａｓ和ＦａｓＬ的表达进行检测 ,初步探讨其在慢性乙型肝炎患者活化诱导的外周血淋巴细胞凋亡中的作用。对象与方法病例来源 :我院 1998～ 1999年 37例慢性乙型肝炎患者 ,男 2 6例 ,女 11例 ,年龄 16～ 6 0岁。诊断按1995年全国传染病与寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎标准〔1〕。活动期 :ＡＬＴ >10 0Ｕ/Ｌ ,乙肝标志物 :ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢｃＡｂ阳性 ,ＨＢＶＤＮＡ阳性。排除ＨＡＶ、ＨＣＶ、ＨＤＶ、ＨＥＶ…     

THE CURATIVE EFFECT OF HIGH EFFICIENCY HEMODIALYSIS AND THE GRADIENT CHANGE OF PLASMA OSMOTIC PRESSURE(Report of 27 Cases)

ＴＨＥＣＵＲＡＴＩＶＥＥＦＦＥＣＴＯＦＨＩＧＨＥＦＦＩＣＩＥＮＣＹＨＥＭＯＤＩＡＬＹＳＩＳＡＮＤＴＨＥＧＲＡＤＩＥＮＴＣＨＡＮＧＥＯＦＰＬＡＳＭＡＯＳＭＯＴＩＣＰＲＥＳＳＵＲＥ（Ｒｅｐｏｒｔｏｆ２７Ｃａｓｅｓ）ＣｈｅｎＨｕａｊｉ（ＣｅｎｔｒａｌＨｏｓ...     

合成肽作抗原酶免疫技术检测非甲－戊型肝炎病人血清中抗HGV

本文应用人工合成肽作为抗原建立了检测庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）抗体的酶免疫技术（ＥＩＡ），最适抗原包被浓度为４μｇ／ｍｌ。在特异性验证的基础上，检测了３４例非甲－戊５型肝炎病人血清和３２例丙型肝炎感染病人血清。结果表明，在ＨＧＶ感染高危人群中，诸如输血后肝炎－丙型肝炎中有较高的ＨＧＶ的感染率。本方法的建立为临床上难于作出诊断的庚型肝炎提供了敏感、特异、易于应用的新技术。