江苏省1999-2005年分离的霍乱弧菌耐药谱和毒力基因研究

目的了解江苏省1999-2005年分离的霍乱弧菌表型特征和毒力基因表达是否存在差异以及差异程度。方法应用药物敏感试验分析霍乱弧菌的耐药谱,用PCR方法检测其毒力相关基因(ctx-A、zot、ace、tcp-A)的分布情况。结果 136株霍乱弧菌中,对1～8种抗生素耐受的菌株,分别为3、1、12、9、36、73、1、1株。PCR结果显示,携带1～4种毒力相关基因的菌株,分别为4、11、15、102株,4种毒力相关基因均不携带的菌株有4株。结论临床来源比环境来源的菌株耐药性严重得多,提示人群滥用抗生素的情况非常严重。毒力基因表达谱可以和耐药谱分析相互补充和印证,在追踪传染源、调查和控制暴发疫情以及提示霍乱弧菌的进化路线、预测流行趋势中发挥重要作用。     

浙江霍乱弧菌O139耐药状况及毒力基因研究

目的了解浙江霍乱弧菌O139的耐药状况及毒力基因携带情况。方法采用WHO推荐的改良K-B法,进行了14种抗菌药物的耐药性测定;以多重PCR法对6种毒力相关基因(ctxA、rtxA、Ace、TcpA、Cri、Zot)进行检测分析。结果霍乱弧菌O139主要对SD、AMP、SM、COS、CAR、FURX耐药,耐药率均在76.7%以上;对FPA、CF、CIPX、AKN、较为敏感,敏感率均在94.5%以上;而且不同年份菌株的耐药情况有所不同。所有菌株均携带3种以上毒力基因,其中93.2%携带ctxA基因,86.3%携带全部6种毒力基因。结论霍乱的治疗和预防中应首选CF、AKN、FPA、CIPX等敏感抗菌药物;霍乱弧菌O139的毒力基因携带率高,致病性和流行性均强,所以今后的霍乱防制中应加强对霍乱弧菌O139监测与研究,及时发现和控制疫情蔓延。     

杭州市O139群霍乱弧菌耐药变迁及毒力基因携带

目的 研究杭州市1994～2003年分离的O139群霍乱弧菌耐药性变迁以及携带ctxA、tcpA毒力基因的情况。方法 运用K—B法和PCR，检测90株O139群霍乱弧菌对抗生索的敏感性以及是否携带ctxA、tcpA毒力基因。结果 90株O139群霍乱弧菌中无丁胺卡那耐药的菌株，13株对诺氟沙星和环丙沙星耐药；对氨苄青霉索、复方新诺明分别有5年和6年的耐药率为100％；2002、2003年耐药谱增加到7种。87．87％的O139群霍乱弧菌同时携带ctxA、tepA毒力基因。结论10年来分离自杭州的O139群霍乱弧菌的耐药情况日益严重；O139群霍乱弧菌是否携带ctxA、tcpA毒力基因在对抗生素敏感性方面差异有统计学意义。     

江西省239株霍乱弧菌毒力相关基因分布特征

摘要:目的　对江西省2000-2011年分离的霍乱弧菌进行毒力相关基因检测,在分子水平上了解霍乱弧菌毒力基因的分布特点以及流行和变迁规律。方法　采用PCR方法对239株霍乱弧菌进行ctxA、ace、zot、tcpA、rtxA 和 cri 基因检测。结果　在239株霍乱弧菌中,共表现出15种毒力基因携带类型,其中病例分离株,带菌者和环境调查分离株分别有7种,6种和3种基因携带类型,以6种基因全部携带为主,携带率分别为76.09%（35/46）,81.82%（27/33）,83.33%（20/24）,而外环境霍乱监测中霍乱弧菌毒力基因携带则有13种毒力基因携带型,呈现多样性。结论　霍乱弧菌中6种毒力基因的携带情况呈现多态性,病例相关分离株的毒力基因携带率高于外环境监测分离株。     

霍乱弧菌毒力相关基因ctxAB、zot、cri特征分析研究

目的在分子水平上了解霍乱弧菌毒力基因的分布特点和变迁及其流行规律。方法采用PCR方法对1964—2008年天津市疾病预防与控制中心分离、保存的176株霍乱弧菌的CTXΦ基因元件中的ctxAB、zot基因,TLC因子中的cri基因进行检测。结果176株霍乱弧菌中,有131株携带CTXΦ遗传单元中的ctxAB、zot基因,阳性率分别为72.72%(128/176),73.30%(129/176),TLC因子中cri基因的阳性率为40.34%(71/176)。在1964—1996年间分离的O1群霍乱弧菌中,有69.00%(69/100株)携带cri基因,而1998—2008年间分离的霍乱弧菌中cri基因的阳性率仅为1.33%(1/75)。1株O139群霍乱弧菌ctxAB、zot、cri均呈阳性。结论毒力相关基因检测能反映不同年代菌株间的分子特征,对于霍乱的分子流行病学研究具有重要意义。     

多重PCR检测霍乱弧菌RTX毒力基因

目的：探索建立一种快速、敏感的诊断方法，用于检测霍乱弧菌RTX毒力基因。方法：针对霍乱弧菌霍乱肠毒素A亚单位基因（ctxA）、RTX毒素家族的细胞毒素基因（rtxA）和毒素激活子基因（rtxC）分别设计3对引物，建立多重PCR方法；用Hep-2细胞测毒方法检测rtxA、rtxC阳性菌株毒素的表达。结果：所有183株临床和环境中分离的霍乱弧菌中，PCR和Hep-2细胞测毒法RTX毒素均为阳性，而古典生物型标准株（569B）二者均为阴性。结论：该方法快速、特异、敏感，具有较大的应用价值。     

苏州市部分水产品分离的霍乱弧菌耐药状况及毒力基因分析

目的:分析苏州市部分养殖水产品霍乱弧菌分布情况,并对其进行耐药性分析和毒力基因检测。方法:对甲鱼、牛蛙及其养殖用水等样品,进行霍乱弧菌的分离、鉴定及耐药性分析和4种毒力基因的PCR检测。结果:分离到的18株霍乱弧菌标本中O139群8株,O1群4株,其余6株为非O1非O139群霍乱弧菌。经耐药性分析,对试验的12种抗生素均无100%敏感株;对多粘菌素B和红霉素的中介率高达83.3%。检测的4个毒力基因中,阳性率最高的是Zot基因。结论:分离到的18株霍乱弧菌血清型有一定的种属相关特性,中介耐药性突出,毒力基因阳性率较高。     

霍乱弧菌毒力基因检测与16S rRNA基因分型研究

目的：了解浙江省霍乱弧菌毒力基因携带情况和16SrRNA基因型状况，为霍乱防治提供科学依据。方法：利用16SrRNA基因探针分析了浙江省不同时期分离的88株霍乱弧菌经BglI消化的16SrRNA基因限制性酶谱，以多重PCR法对140株霍乱弧菌进行6种毒力相关基因（ctxA、rtxA、Ace、TcpA、Cri、Zot）检测分析。结果：发现各菌株的杂交片断范围为2～12Kb，每个菌株有6～9条杂交带不等。88株霍乱菌株可分为9个16SrRNA基因型（ribotype，RT），其中埃尔托型霍乱弧菌（el tor vibrio cholerae，EVC）可分为6个RT，0139群霍乱弧菌（vibrio cholerae 0139，VC 0139）分为3个RT；所有VC0139菌株均携带3种以上毒力基因，86．3％的菌株携带全部6种毒力基因，所有EVC流行株均携带2种以上毒力基因，79．1％的菌株携带全部6种毒力基因。结论：认为霍乱流行菌株基因型的变迁可能是引起新一次流行的原因。结合毒素基因检测结果，我们认为VC0139与EVC在遗传特征上有相近的特点，但又有所区别。     

湖北省部分霍乱弧菌毒力基因和基因分型结果分析

目的检测霍乱弧菌毒力基因和基因分型,为科学防治提供依据。方法用PCR方法检测从湖北省部分地区的猪肉、基围虾、湖水、病人、病人厕所等处采集标本培养分离血清学分型确认的霍乱弧菌毒力基因,采用脉冲场电泳技术（PPGE）检测霍乱弧菌基因分型。结果同一地区的猪肉、基围虾、湖水中01群小川型霍乱弧菌基因分型结果一致,毒力基因阴性;病人及病人厕所0139群霍乱弧菌基因分型结果一致,毒力基因为阳性。结论检测猪肉、基围虾、湖水中霍乱弧菌毒力基因阴性的结果,可以为现场提供避免采取应急防治措施的依据,节约大量的社会和人力资源。     

Ｏ１群霍乱弧菌毒力基因和菌株流行能力关系研究

摘要：目的　调查福建省１９６２－２００５ 年不同流行时期、不同流行血清型的Ｏ１ 群埃尔托型霍乱弧菌
（ＥＶＣ）毒力基因分布情况;探讨霍乱弧菌（ＶＣ）不同毒力基因特征与霍乱流行能力的关系。方法　运用
ＰＣＲ 扩增技术,检测１９６２－２００５ 年６９ 株（稻叶２１、小川４８） 霍乱患者分离株的犮狋狓犃基因, 同时进行
犮狋狓犅、狋犮狆犃、狉狊狋犚、犺犾狔犃毒力因子的古典型（犆犾）和埃尔托型（犈犾）基因亚型的扩增;结合流行病学资料
分析不同毒力特征菌株的流行能力。结果　６９株Ｏ１群霍乱弧菌犮狋狓犃基因阳性６２株,犮狋狓犃基因阴性的菌
株均不同程度地携带有其他各相关毒力基因;各毒力因子古典型和埃尔托型的阳检率分别为犮狋狓犅６０．９％
（４２株）和７２．５％ （５０株）,狉狊狋犚３７．７％ （２６株）和７２．５％ （５０株）,狋犮狆犃４．３５％ （３株）和６９．５７％ （４８
株）,犺犾狔犃６５．２２％ （４５株）和７９．７１％ （５５株）。犮狋狓犅 犆犾、狉狊狋犚 犆犾基因以及菌株同时携带狉狊狋犚 犆犾和狉狊狋犚
犈犾基因的阳性率在稻叶型（阳性率分别为３８．１％ 、０ 和０） 和小川型（阳性率分别为７０．８％ 、５４．２％ 和
３５．４％ ）菌株中的差异有统计学意义（犘均＜０．０５）。犮狋狓犅 犈犾、狉狊狋犚 犆犾、狉狊狋犚 犈犾基因的阳性率在１９６２－
１９６４年、１９７８ 年、１９９４－２０００ 年的小川型３ 个不同流行时期（阳性率分别为犮狋狓犅 犈犾：１００．０％ 、
１００．０％ 、４４．８％ ;狉狊狋犚 犆犾：０、０、８９．７％ ;狉狊狋犚 犈犾：１００．０％ 、８７．５％ 、５８．６％ ） 的差异有统计学意义
（犘均＜０．０５）。犮狋狓犅 犆犾、犮狋狓犅 犈犾、狉狊狋犚 犈犾基因的阳性率在１９８０－１９８６ 年、２００５ 年稻叶型两个不同流行
时期（阳性率分别为犮狋狓犅 犆犾：１３．３％ 、１００．０％ ;犮狋狓犅 犈犾：１００．０％ 、６６．７％ ;狉狊狋犚 犈犾：９３．３％ 、５０．０％ ）
的差异有统计学意义（犘均＜０．０５）。结论　福建省１９６２－２００５年Ｏ１群霍乱菌株不同程度地携带有相关的
毒力因子;各毒力因子埃尔托型基因片段的检出率均要高于古典型,以狉狊狋犚和狋犮狆犃基因的差异最明显;
相对于稻叶血清型,小川血清型更容易整合古典型的犮狋狓犅和狉狊狋犚基因片段;犮狋狓犅和狉狊狋犚基因的类型和不
同血清型霍乱菌株的流行能力有相关性。
关键词：霍乱弧菌;毒力基因;ＰＣＲ;等位基因
中图分类号：Ｒ１８３．４　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１４）０１ ００４１ ０５     

广东省2009－2013 年霍乱弧菌病原学特征分析

目的 分析广东省2009－2013 年霍乱病例及环境来源O1/O139 群霍乱弧菌病原学特征。方法 选取2009－2013 年广东省霍乱病例来源、环境（水体和海水产品）来源的O1/O139群霍乱弧菌。采用血清分型、抗菌药物敏感性试验、毒力基因PCR 检测和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型方法 , 研究不同来源的霍乱弧菌血清型、抗菌药物敏感性、毒力基因携带以及分子分型方面的异同。结果 2009－2013 年广东省共分离得到各类来源O1/O139 群霍乱弧菌190株（病例16 株, 外环境174 株）。病例来源菌株分为O1 群稻叶型（3 株）、小川型（7 株）和O139 群（6株）3 种菌型;其中10 株ctxA 基因阳性, 2 株小川型菌株携带不完整CTXΦ噬菌体;5 株菌对11 种抗菌药物完全敏感, 3 株对4 种抗菌药物表现出耐受。外环境来源菌株中53 株稻叶型, 22 株小川型和2 株O139 群菌株携带不完整CTXΦ噬菌体;2 株O139 菌株检出ctxA 基因阳性;25 株对≥4 种抗菌药物耐受, 其中有2 株同时对11 种抗菌药物中的7 种耐受, 以水产品中的稻叶型菌株为主（13株）。PFGE分子分型结果显示, 菌株经NotⅠ酶切后的PFGE型别表现出明显的多样性。稻叶型和O139 群病例菌株的带型聚集在同一个聚类中, 小川型病例菌株带型分散在不同的聚类中, 病例来源菌株与环境来源菌株的带型差别较大。结论 广东省O1/O139 群霍乱弧菌毒力基因和遗传特征复杂多样, 菌株多重耐药形势严峻, 需要加强菌株型别变异及耐药监测。     

广东省2009-2014年霍乱弧菌耐药监测分析

目的 了解广东省2009-2014年霍乱弧菌耐药情况,为霍乱临床合理用药和防治提供科学依据。方法 采用WHO推荐的改良K-B纸片扩散法,对在广东省2009-2014年收集的253株霍乱弧菌进行12种抗菌药物的药敏试验。结果 广东省2009-2014年共收集分离霍乱弧菌O1群189株(小川型72株,稻叶型117株),O139群26株,非O1/O139群38株;药敏结果显示,253株霍乱弧菌对头孢噻肟(CTX)和头孢曲松(CRO)均100% 敏感,对诺氟沙星(NOR)、环丙沙星(CIP)、阿米卡星(AMK)的敏感率分别为98.8% 、98.4% 、98.0%;O1群小川型、O1群稻叶型、O139群、非O1/O139群霍乱弧菌比较,不同血清型霍乱弧菌对萘啶酸(NAL)、四环素(TCY)、多西环素(DOX)、复方新诺明(SXT)、氨苄西林(AMP)、阿莫西林(AMX)、氯霉素(CHL)等抗生素的耐药率差异均有统计学意义(均P<0.05);多重耐药分析结果显示,37.5% 的菌株同时对≥3种抗生素耐受,其中有12株O1群稻叶型菌株同时对≥6种抗生素耐受,有3株O1群小川型和1株非O1/O139群菌株同时对6种抗生素耐受,有2株O139群菌株同时对4种抗生素耐受。结论 CTX、CRO、NOR、CIP、AMK对霍乱弧菌的敏感率较高;非O1/O139群霍乱弧菌感染比例增高且部分菌株表现出多重耐药现象,应加强此类菌株的耐药监测。     

132株副溶血性弧菌毒力基因及耐药性分析

目的了解2014年-2017年桐乡市副溶血性弧菌分离株毒力基因携带与耐药性情况,为临床更为有效用药提供数据上的支持。方法利用RT-PCR技术对其分离株进行毒力(tlh、tdh、trh)检测;采用纸片扩散法操作,测定其对22种抗生素的耐药性。结果在132株副溶血性弧菌中,毒力基因tlh、tdh和trh阳性携带率分别为100.00%(132/132)、57.58%(76/132)和0.00%(0/132);对氨苄西林、头孢唑啉、哌拉西林、复方新诺明的耐药率分别为31.5%、23.5%、12.5%、12.5%,对除碳青霉烯类和喹诺酮类外的6大类抗生素均有耐药性,而其中对β-内酰胺类抗生素和叶酸代谢途径抑制剂及氯霉素的耐药性相对较高。多重耐药方面,对2种以上抗生素耐药的有15株,占11.90%。结论126株副溶血性弧菌分离株主要携带毒力基因为tlh、tdh。除氨苄西林等9类抗生素外,其余13类在副溶血性弧菌感染的治疗中可作为首选。     

霍乱弧菌毒力基因LAMP方法快速检测

目的 建立快速、特异检测霍乱弧菌的环介导等温扩增(LAMP)方法。方法 针对霍乱弧菌毒素基因(ctxA)设计4条引物,建立环介导等温扩增检测方法,优化反应体系,测定方法的特异性和灵敏度,并进行鱼肉模拟样品和实际样品检测。结果 LAMP最佳反应条件为8.0 mmol/L Mg²⁺、0.6 mmol/L dNTPs、1.6 μmol/L FIP和BIP(2条内引物)、0.2 μmol/L F3和B3(2条外引物);对细菌纯培养物的检测灵敏度为10 cfu/mL,对鱼肉模拟样品检测灵敏度为10² cfu/g;在16份实际样品中检测出4份ctxA基因阳性。结论 建立的LAMP方法灵敏度高、特异性强,可快速地检测食品样品中霍乱弧菌。     

霍乱弧菌主要毒力和管家基因序列分析

目的分析广东霍乱弧菌（VC）代表菌株主要毒力基因和管家基因序列。方法PCR扩增霍乱弧菌的主要毒力基因（ctxAB和tcpA）和管家基因（dnaE、hlyA、mdh和recA）、基因测序、对序列进行生物信息学分析。结果不同年代分离的2株埃尔托型（EVC）产毒株和1株0139群VC产毒株的主要毒力基因序列与国内外相关报告比较，ctxA基因及推测的氨基酸序列的同源性分别为99．7％～100％和98．8％～100％．ctxB基因及推测的氨基酸序列的同源性分别为98．8％～100％和96．8％～100％，tcpA基因序列与EVC国际标准株N16961 100％同源。3株产毒株的dnaE、hlyA、mdh和recA基因序列同源性分别为99．8％～100％，100％，99．5％～99．8％和100％，氨基酸序列同源性分别为100％．100％，98．5％～99．3％和100％；3株产毒株和O139群VC非产毒株的管家基因序列同源性分别为97．0％～97．2％，91．8％，94．1％～94．4％，96．9％，氨基酸序列同源性分别为100％，94．6％，94．3％～98．5％和99．7％。结论广东省不同年代EVC产毒株和O139群VC产毒株的群体遗传学关系高度密切，而与O139群VC非产毒株较远，O139群VC产毒株可能起源于EVC产毒株。     

2005年上海市霍乱弧菌菌株表型及ctxA毒力基因分析

目的：分析本市2005年不同来源01群和0139群霍乱弧菌菌株表型和ctxA毒力基因特征。方法：以PCR方法，对所有菌株进行ctxA毒力基因检测。采用WHO推荐的改良K—B纸片法，对所有菌株均进行了12种抗菌药物的药敏试验。结果：从病人和外环境中分离出的0139群霍乱弧菌均为产毒株；从病人中分离出的01群霍乱弧菌流行株均产毒，外环境中分离出的非流行株少数也产毒。0139群霍乱弧菌菌株耐药谱较01群霍乱弧菌菌株广；两者对氨苄青霉素、强力霉素、庆大霉素、复方新诺明、利福平耐药率有显著差异。结论：本市2005年霍乱的流行株都是产毒株，但产毒株不一定是流行株。药敏结果显示，对01群和0139群霍乱弧菌应采取不同抗菌治疗，0139群霍乱弧菌多重耐药应引起重视。     

霍乱弧菌分子生物学检测技术介绍

随着医学分子生物学的迅速发展,大量的分子生物学技术被用于霍乱弧菌的研究,为霍乱弧菌快速检测及分型提供了重要依据,也进一步从分子水平阐明了霍乱弧菌的变异和不同菌株之间的遗传关系,以及霍乱疫情的溯源、菌株类型和流行性质.     

龙泉市首例O139群霍乱弧菌耐药性及毒力基因携带情况研究

目的：研究龙泉市首例O139群霍乱弧菌耐药性及毒力基因携带情况。方法：运用药敏试验及PCR方法．分要该霍乱弧菌的耐药性以及携带ctxA、tcpA毒力基因的情况。结果：该O139群霍乱弧菌对庆大霉素等9种抗生素多重耐药：仅对丁胺卡那、诺氟沙星和环丙沙星敏感；该O139群霍乱弧菌携带ctxA、tcpA毒力基因。结论：在对O139群霍乱弧菌引起霍乱的防治工作中应密切监测其耐药性以及携带毒力基因的情况。     

广州海珠地区非O1/非O139群霍乱弧菌流行状况调查及生物学特征研究

目的 了解广州海珠地区2001-2009年非O1/非O139群霍乱弧菌的流行、分布状况及生物学特征,为防控该类病原菌引起的急性腹泻病提供科学依据.方法 参照<霍乱防治手册>(第5版)中的检测方法,对本区珠江河水、饮用水、养殖水、各种海(水)产品、市售熟食等外环境标本764份、健康人群标本189份及肠道门诊腹泻患者标本3398份,共计4351份标本进行非O1/非O139群霍乱弧菌的检定.结果 4351份标本共检出非O1/非O139群霍乱弧菌101株,总检出率为2.32%;其中有66株可分型,分属于26个血清型,分型率为65.3%;VBO9、VBO38和VBO76为优势菌.外环境与腹泻患者标本中分离到9株同型别非O1/非O139群霍乱弧菌,提示两者可能存在关联.结论 非O1/非O139群霍乱弧菌在本地区的血清型分布呈现多样性,在人群中有一定的感染率;外环境中该类菌群广泛存在,对人群是一个潜在的危害因素.     

山东省分离的霍乱弧菌毒力基因的研究

目的：了解山东省不同年代、不同地区收集的霍乱菌株携带的毒力基因情况、分布特点和变迁。方法：应用分子杂交、PCR技术对霍乱弧菌的CTX基因元件中的ctxA、zot基因，VPI毒力岛中的tcpA、tcpH、aldA、toxT、acfB基因，TLC因子中的cri、orf2—3基因，RTX基因簇中的rtxA、rtxC，以及toxR基因进行了检测。结果：用原位杂交检测，180株霍乱弧菌中有168株携带CTX遗传单元中的ctxA、zot、RS1基因，阳性率均为93．33％，表现出高度的一致性。用打点杂交检测不同时期的28株01群霍乱弧菌，所有被检菌都具有ToxR、RTX相关基因，在1980～1987年间分离的O1群霍乱弧菌流行株中，有92．86％携带编码TLC因子的基因，而1994～2000年间分离的流行株菌株中编码TLC因子的基因携带率仅有7．14％。Southern杂交结果显示，48株O1群霍乱弧菌可产生大小为9．4kb和6．5kb左右的两条ctxA杂交带，用zot基因探针进行杂交，11株O1群霍乱弧菌可产生与ctxA杂交带同样大小的条带。1株O139霍乱弧菌具有检测的所有毒力基因，但其ctxA（zot）杂交带与O1群霍乱弧菌有差异。结论：目前已知的霍乱弧菌毒力基因在山东省分离到的菌株中有广泛的分布，并且随时间的推移而发生变迁。