基因表达芯片技术筛选转移性卵巢癌相关性基因

目的:利用基因表达谱芯片筛选转移性卵巢癌相关性基因,对卵巢癌转移过程中可能参与的基因间的信号转导通路进行分析。方法:选取6例不同病理类型的转移性卵巢癌组织和2例正常卵巢上皮组织,提取DNA。采用CytoScan HD芯片检测,筛选卵巢癌转移性相关性基因,并进行基因本体(GO)和信号通路分析,筛选出对转移过程可能具有重要作用的基因。结果:染色体定位分析6例转移性卵巢癌组织共同有216个基因发生微结构异常,分别位于8、12、16、17及X染色体,其中X染色体最多。对216个基因GO分析显示,92个基因编码与3个GO分类(生物学过程、分子功能、细胞组分)相关的蛋白,信号通路分析得到20个基因具有显著性的调节信号通路。进一步与正常卵巢上皮组织对比筛选出38个差异性基因,GO分析显示24个基因编码与3个GO分类相关的蛋白,B2M和CTDSPL、NOBOX等11个基因具有显著性的调节信号通路。结论:卵巢癌的转移与多个基因相关,8、12、17号染色体拷贝数的变异可能与卵巢癌的转移密切相关,差异性基因中B2M基因是卵巢癌转移的关键基因,通过TGF信号通路调节卵巢转移癌的转移,是一个转移性卵巢癌治疗的新靶点。     

miRNA表达谱改变与卵巢癌转移潜力相关性的研究

目的:探讨卵巢癌转移的相关机制,检测有不同侵袭力卵巢癌细胞的miR-NA差异表达谱。方法:应用包含924条成熟miRNA探针的哺乳动物miRNA芯片V3.0杂交检测具有不同侵袭力的人卵巢乳头状腺癌SKOV3.ip1细胞与其母系SKOV3细胞miRNA表达谱的差异,并与cDNA芯片基因检测结果进行比对分析。结果:miRNA芯片检测到39个2倍以上差异表达miRNA,对比SKOV3细胞,SKOV3.ip1细胞中有11个miRNA表达上调和28个miRNA表达下调,其中包括了hsa-miR-200a/b、-10b、-34a、-224、-148a等已知与侵袭转移相关的重要miRNA。比对cDNA芯片检测结果,提供了IG-FBP1、VEGFB、NME1等重要侵袭相关基因可能调控miRNA的机制。结论:卵巢癌侵袭转移过程中,多个miRNA参与其中,担当重要的调控作用。miRNA有望成为卵巢癌转移的标记物和治疗的靶点。     

卵巢上皮性癌DNA异常甲基化模式的建立及其应用

目的 建立卵巢上皮性癌(卵巢癌)的DNA异常甲基化模式,探讨其在寻找新的卵巢癌特异性标志物中的应用价值.方法 用激光显微切割技术从20例卵巢癌组织冰冻切片中获取的肿瘤细胞作为实验对象,用原代培养的5例正常卵巢上皮细胞作为对照,用基于芯片技术的差异甲基化杂交(DMH)方法检测卵巢癌的DNA异常甲基化模式.选择7个DMH结果显示在卵巢癌中低甲基化的基因启动子区胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤二核苷酸岛(CGI),用甲基化实时荧光定量PCR技术检测其在87例卵巢癌和42例卵巢良性病变患者病变组织中的甲基化状态.结果 182个过甲基化位点和64个低甲基化位点(阳性率为25%以上的位点分别有18个和31个)组成了卵巢癌的DNA异常甲基化模式.87例卵巢癌和42例卵巢良性病变患者组织DNA中,基因LSM2、EGFLAM和CDKN2A的甲基化率依次为11%(10/87)和33%(14/42)、8%(7/87)和21%(9/42)、9%(8/87)和31%(13/42),与卵巢良性病变相比,卵巢癌中3个基因甲基化率均有显著下降,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 建立卵巢癌的DNA异常甲基化模式是卵巢癌研究中非常重要的基础环节.基因EGFLAM、CDKN2A和LSM2启动子区CGI有可能成为新的卵巢癌特异性的低甲基化肿瘤标志物.     

基因芯片在筛选卵巢癌基因中的应用研究

目的:研究人卵巢癌相关基因在卵巢癌组织和正常卵巢组织中的差异表达。方法:用含512条癌及抑癌基因的cDNA表达谱芯片研究一组卵巢癌组织样本的基因表达谱。结果:共筛选出差异表达与癌相关的基因54条,其中18条表达上调,36条表达下调。结论:用基因表达谱芯片研究基因谱,可有效的筛选出新的卵巢癌相关基因。     

卵巢癌相关基因筛选的初步研究

目的 通过研究人卵巢癌组织和正常卵巢组织中差异表达的基因，筛选出卵巢癌相关基因以用于早期诊断和治疗。方法 以cDNA基因表达谱芯片分析研究卵巢组织样本和正常卵巢组织的基因表达谱，计算机分析后比较两种组织中差异表达的基因。结果 共筛选出差异表达的基因1785条，表达上调基因有40条，下调基因138条，有显著表达差异的基因54条，涉及到11大类基因。结论 卵巢癌同其它恶性肿瘤一样，是多种基因结构和功能改变的结果，有关卵巢癌特异性相关基因及其作用尚有待进一步研究。     

应用组织芯片技术分析卵巢癌组织中Bit1基因的表达

目的:研究B it1基因在正常卵巢组织和不同病理分级的卵巢癌组织中的表达。方法:应用组织芯片技术,通过免疫组织化学方法检测82例卵巢癌标本和78例正常卵巢组织标本中B it1基因的表达。结果:B it1基因在卵巢癌和正常卵巢组织中的弱阳性及阳性表达率分别为100%和33.3%,差异有统计学意义(P<0.01);B it1基因在不同病理分级的卵巢癌组织中的阳性表达率分别为:Ⅰ级,53.1%;Ⅱ级,28.1%;Ⅲ级,7.1%。统计学分析表明,B it1基因在Ⅰ级与Ⅱ级或Ⅲ级的卵巢癌组织中的表达存在显著的统计学差异(P=0.042,0.003),而在Ⅱ级和Ⅲ级中的表达则无统计学差异(P=0.143)。结论:B it1基因在正常卵巢组织中的表达明显低于卵巢癌组织,而且卵巢癌组织中B it1基因的表达与病理分级密切相关。     

卵巢上皮性癌中p53基因缺失与HER-2基因扩增及其临床意义

目的:检测卵巢上皮性癌中17号染色体上野生型p53基因缺失与HER-2基因的扩增情况并探讨其临床意义。方法:分别以不同颜色荧光标记的p53、HER-2基因和17号染色体着丝粒为双色探针组,应用间期双色荧光原位杂交(FISH)技术检测54例卵巢上皮性癌间期细胞核中p53基因、HER-2基因和17号染色体的拷贝数及其相对比例,以确定其缺失或扩增,并统计分析其临床意义。结果:54例卵巢上皮性癌中p53基因缺失38例(70.4%);HER-2基因扩增14例(25.9%);17号染色体多倍体有35例(64.8%)。p53基因缺失与17号染色体多倍体呈正相关(χ2=12.116,P<0.001),与HER-2基因的扩增无关(χ2=0.00,P=1.00)。p53基因缺失与卵巢上皮性癌患者肿瘤分期及体积大小无关(P>0.05),而与血CA125水平及淋巴结转移有关(P<0.05);术后2年存活率p53基因缺失患者显著低于无缺失患者(81.3%,χ2=4.186,P=0.047)。结论:p53基因高频缺失和HER-2基因扩增,可能与部分卵巢上皮性癌的发生发展有关。     

磷脂酰肌醇3-激酶在卵巢癌中的表达

目的研究磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)在卵巢癌组织中的表达及意义。方法(1)应用4 097靶基因点基因芯片对2006年吉林大学第一医院5例卵巢浆液性囊腺癌及5例正常卵巢组织进行基因表达谱分析,筛查卵巢癌差异表达基因。(2)应用RT-PCR检测2006年该院10例卵巢癌组织、10例卵巢瘤组织及10例正常卵巢组织中PI3K表达。结果(1)基因芯片筛查出卵巢浆液性囊腺癌差异表达基因58个,其中表达增高(上调趋势)基因30个,表达降低(下调趋势)基因28个,PI3K为表达上调基因。(2)PI3K基因在卵巢癌组织中表达增高,与正常卵巢及卵巢瘤比较差异有统计学意义(PI3KmRNA表达量分别为0.931±0.598、0.350±0.235、0.297±0.168,P<0.01),在卵巢瘤组织中表达与正常卵巢组织表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论基因芯片可以用于筛查卵巢癌差异表达基因;PI3K为表达增高基因;PI3K在卵巢癌组织中表达显著高于卵巢瘤组织及正常卵巢组织。     

HE4、Sp1在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义

目的探讨人附睾蛋白4(HE4)和转录因子Sp1在卵巢癌中的表达及其临床价值。方法应用免疫组化法检测40例卵巢癌和20例卵巢上皮性良性卵巢肿瘤组织中HE4、Sp1的表达。结果 HE4在卵巢癌中的阳性表达率(80.00%)明显高于良性上皮性肿瘤(20.00%),差异有统计学意义(P0.01);HE4在各种病理类型卵巢癌中均表达,在浆液性卵巢癌中表达率最高(92.59%),其次为子宫内膜样癌(71.43%);HE4在中低分化卵巢癌阳性表达率(85.71%)高于高分化者(40.00%),差异有统计学意义(P0.05),而与卵巢癌FIGO分级及是否伴有淋巴结转移无明显相关性。Sp1在卵巢癌中的阳性表达率(42.50%)高于良性上皮性肿瘤组(15.00%),差异有统计学意义(P0.05);Sp1在浆液性癌、黏液性癌、内膜样癌中均有表达,表达率差异无统计学意义(P0.0 5);Sp1在晚期卵巢癌中表达阳性率(57.14%)高于早期卵巢癌(26.32%),中低分化组中阳性率(48.57%)高于高分化组(0.00%),差异均有统计学意义(P0.05),但与淋巴转移情况无关。HE4及Sp1在上皮性卵巢癌组织中的表达呈正相关(r=0.496,P0.05)。结论 HE4、Sp1与卵巢癌的发生、发展关系密切,HE4及Sp1有望成为卵巢癌诊断、治疗的新靶点。     

卵巢癌大网膜转移差异基因的筛选及验证

目的:通过筛选并验证卵巢癌原发灶和大网膜转移灶组织样本的差异表达基因,从中发现与卵巢癌大网膜转移相关的基因。方法:应用基因芯片检测3对配对的卵巢癌原发灶和大网膜转移灶组织样本差异基因表达谱,初步筛选出差异表达显著的基因,并通过qRT-PCR和免疫组化法验证基因芯片结果。结果:通过基因芯片检测共筛选得到187个差异性表达的mRNA,其中大网膜转移组相对于卵巢癌原发灶组表达上调的基因160个,表达下调的基因27个。初步筛选出差异表达显著的2个mRNA:Interleukin 8(IL-8)和Armadillo Repeat Containing 9(ARMC9);qRT-PCR和免疫组化结果显示,IL-8和ARMC9在大网膜转移灶中的表达均显著高于卵巢癌原发灶(P0.05)。结论:IL-8和ARMC9基因可能与卵巢癌大网膜转移有关。     

苏拉明对体外培养的人卵巢癌细胞HO-8910PM增殖及乙酰肝素酶表达的影响

目的探讨苏拉明对体外培养的人卵巢癌细胞增殖和乙酰肝素酶基因表达的影响。方法不同浓度苏拉明作用于人卵巢癌细胞株HO-8910PM,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测HO-8910PM增殖情况;免疫细胞化学方法和原位杂交方法检测苏拉明作用前后HO-8910PM乙酰肝素酶基因mRNA及蛋白表达变化。结果MTT结果显示50、100、200、300、400、500、600μg/ml浓度的苏拉明作用于HO-8910PM细胞96h的生长抑制率(GI)分别是13.1%、22.6%、35.1%、43.7%、54.3%、64.8%、70.9%(P0.01),不同时间及不同浓度组吸光光度值A差异有统计学意义(P0.01)。对照组比较苏拉明作用48h后,HO-8910PM细胞乙酰肝素酶基因mRNA及蛋白表达显著降低(P0.01)。结论苏拉明以时间及剂量效应方式抑制体外培养的HO-8910PM增殖;同时下调乙酰肝素酶基因mRNA及蛋白表达;提示苏拉明作为HPA抑制剂有望成为转移性卵巢癌联合化疗用药。     

卵泡刺激素对上皮性卵巢癌细胞株的增殖及E-钙粘素表达的影响

目的 :研究在上皮性卵巢癌细胞株中卵泡刺激素 (FSH)受体的不同表达并通过不同浓度的FSH作用 ,观察FSH刺激后各卵巢癌细胞株的增殖与上皮钙粘素 (E -cadherin)在各细胞株中的表达情况。方法 :应用逆转录聚合酶链反应(RT -PCR)及免疫细胞化学方法研究体外培养上皮性卵巢癌细胞株HO - 8910、HO - 8910PM及SKOV3中FSH受体表达 ,免疫组化半定量研究各细胞株中E -cadherin表达及其在FSH作用后的表达情况 ,噻唑蓝染色法了解FSH作用后各细胞株的细胞增殖程度。结果 :在卵巢癌细胞株HO - 8910及HO - 8910PM中存在着FSH受体 ,SKOV3细胞株中的FSH受体表达阴性。用不同浓度FSH培养 4 8小时后 ,HO - 8910及HO - 8910PM的细胞增殖指数高于SKOV3。当FSH浓度为 4 0U/L时细胞增殖指数最高 (P <0 .0 5 )。E -cadherin在 3株细胞中的表达随试验中细胞株转移程度的不同而具有差异 ,FSH培养后 ,FSH受体阳性细胞株HO - 8910及HO - 8910PM的E -cadherin表达均减弱。结论 :FSH是FSH受体阳性卵巢癌细胞增长的促进因素并可引起受体阳性肿瘤细胞E -cadherin表达的下调 ,从而增强卵巢癌细胞的转移能力。     

TWEAK对人卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移的影响及其机制的研究

目的:研究肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM转移相关能力的影响及其作用机制。方法:水溶性四唑盐(WST-1)比色法检测TWEAK对HO-8910PM细胞增殖力的影响,细胞黏附和移动实验检测TWEAK对细胞体外黏附和移动力的影响,细胞侵袭重建基底膜实验检测TWEAK组细胞体外侵袭力的变化。采用Western blot法检测TWEAK对细胞IκB-α、NF-κB(P65)和VEGF蛋白表达的影响。通过应用NF-κB拮抗剂PDTC,观察阻断NF-κB通路后VEGF蛋白表达的变化。结果:TWEAK组在24、48h和72h时细胞增殖率无明显变化(P>0.05)。TWEAK组细胞黏附力提高23.67%(P<0.01);TWEAK可增强细胞体外的移动和侵袭力,其趋化指数和侵袭指数分别为1.9±0.3和1.7±0.3(P<0.01)。TWEAK能显著下调IκB-α蛋白表达,上调NF-κB(P65)蛋白在核内的表达,并使VEGF蛋白表达量显著增加。用NF-κB拮抗剂PDTC阻断NF-κB通路,能有效抑制VEGF蛋白的表达。结论:TWEAK对HO-8910PM细胞增殖力无明显影响。TWEAK能促进HO-8910PM细胞移动、黏附和侵袭力。TWEAK促肿瘤侵袭转移的机制之一可能是通过激活NF-κB通路上调VEGF蛋白表达。     

卵巢癌细胞侵袭转移相关转录因子表达分析

目的:分析并比较卵巢癌细胞中与肿瘤转移、侵袭相关的转录因子。方法:采用细胞划痕及小室跨膜实验比较卵巢癌细胞HO-8910及其高转移株HO-8910PM的转移侵袭能力差异;采用高通量转录因子活性检测芯片(DNA/蛋白结合芯片)分析并比较两种细胞中转录因子的活化情况,明确与肿瘤侵袭、转移相关表达的转录因子;用转录因子酶联免疫活性分析方法验证芯片检测结果。结果:细胞划痕实验及侵袭实验表明HO-8910PM比HO-8910细胞转移侵袭能力强,在345个转录因子中共筛选出与肿瘤侵袭、转移相关的31个表达差异转录因子。HO-8910PM细胞与HO-8910细胞相比,表达上调的有13种,下调的有18种。v-Maf仅表达于HO-8910PM,HLF仅表达于HO-8910。结论:v-Maf、HLF等31种转录因子可能参与了卵巢癌侵袭转移的相关机制。     

卵巢上皮性癌细胞转移相关蛋白的比较蛋白组学分析

目的筛选卵巢上皮性癌（卵巢癌）转移相关蛋白,进一步探讨卵巢癌的转移机制。方法以卵巢癌细胞系HO-8910和高转移卯巢癌细胞系HO-8910PM为研究对象,采用比较蛋白组学的研究技术（双向电泳、质谱分析）,筛选两个细胞系中差异表达的蛋白质。结果高转移细胞系HO-8910PM与卵巢癌细胞系HO-8910比较,共出现了21个差异表达蛋白质点,其中16个蛋白质点表达上调,5个蛋白质点表达下调。21个差异表达蛋白质点有17个被鉴定,并分为7大类,即锌指蛋白、钙结合蛋白、DNA修复及合成蛋白、细胞调节蛋白、细胞代谢相关蛋白、细胞信号和传导蛋白及细胞表面抗原。结论卵巢癌细胞系HO-8910和高转移卵巢癌细胞系HO-8910PM的蛋白质表达存在明显差异。     

Suppression of human ovarian carcinoma metastasis by the metastasis-suppressor gene, BRMS1

Metastasis-suppressor genes, by definition, suppress metastasis without affecting tumorigenicity and, hence, present attractive targets as prognostic or therapeutic markers. BRMS1 (breast cancer metastasis suppressor) has recently been identified as a metastasis-suppressor gene for human breast cancer and melanoma. Expression of BRMS1 messenger RNA (mRNA) in multitissue including normal prostate, ovarian, testis, and colon has been detected by northern blot analysis. We hypothesize that the role of BRMS1 in tumor progression may not be limited to breast cancer and melanoma. We previously found that BRMS1 mRNA levels in primary ovarian epithelial carcinomas were significantly lower than that in normal ovarian and benign tumors (P < 0.05), and statistical analysis of BRMS1 mRNA levels revealed that BRMS1 mRNA levels were significantly higher in early tumor stages (I, II) compared with advanced tumor stages (III, IV) in which lymph node or distant metastases were present (P < 0.01). Our data showed that reduced BRMS1 mRNA seems to influence ovarian carcinoma metastatic ability. Therefore, we transfected BRMS1 plasmid into highly malignant ovarian carcinoma cell line, HO-8910PM, and examined cell biologic behaviors including proliferation, adhesion, invasion, and metastasis in vitro and in vivo. BRMS1 expression did not alter the proliferation of HO-8910PM cells in vitro and primary tumor formation in vivo. But, BRMS1 expression significantly suppressed the cell adhesion to extracellular matrix components and in vitro cell invasion in BRMS1-transfected HO-8910PM cells compared to parental HO-8910PM and vector-only transfectants (HO-8910PM-vect). Furthermore, motility of BRMS1 transfectants was inhibited. lung colony formation of intravenously injected BRMS1 transfectants in nude mice was significantly reduced. Also, BRMS1 transfectants form significantly less metastatic to organs of peritoneal cavity in orthotopically implanted ovarian tumor nude models. We further discovered that BRMS1 expression did downregulate expression of an actin-bundling protein associated with cell motility -fascin, which perhaps is the mechanism underlying BRMS1 suppression of metastasis. These data suggested that in addition to its already described role in breast cancer and melanoma, BRMS1 functions as a metastasis-suppressor gene in ovarian carcinoma by modifying several metastatic-associated phenotypes, offering a new target for therapeutic intervention.     

与ezrin基因表达相关的微小RNA的筛选及在卵巢上皮性癌浸润转移中的作用

目的 筛选卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞中与ezrin基因表达相关的微小RNA(miRNA),并分析其在卵巢癌浸润转移中的作用.方法 (1)实时逆转录(RT)PCR技术和蛋白印迹法分别检测两对具有不同侵袭转移能力的卵巢癌细胞系SKOV3和SKOV3ip细胞、HO-8910和HO-8910PM细胞中ezrin mRNA和蛋白的表达差异,选取其中ezrin mRNA和蛋白表达差异相对较大的1对细胞系(即SKOV3和SKOV3ip细胞)用于以下实验.(2)用miRNA芯片筛选SKOV3和SKOV3ip细胞中差异表达miRNA,然后用生物信息学工具[三大数据库,即TARGETSCAN(http://www.targetscan.org)、MICROCOSM(http://www.ebi.ac.uk/enright-srv/microcosm/htdocs/targets/v5/)和PICTAR(http://www.pictar.mdc-berlin.de)数据库]预测并比对miRNA芯片的筛选结果,筛选出与ezrin基因表达相关的miRNA,并采用实时RT-PCR技术验证.将筛选出来的miRNA转染SKOV3ip细胞,用蛋白印迹法和实时RT-PCR技术检测其对SKOV3ip细胞中ezrin mRNA和蛋白表达的调控作用,以未做任何处理者为空白对照.结果 (1)SKOV3ip细胞中ezrin mRNA的表达水平是SKOV3细胞的(81.74±5.34)倍,HO-8910PM细胞中ezrin mRNA的表达水平是HO-8910细胞的(2.61±0.14)倍,两者分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);蛋白印迹法检测显示,SKOV3ip细胞中ezrin蛋白的表达强度明显高于SKOV3细胞,HO-8910PM细胞中ezrin蛋白的表达强度明显高于HO-8910细胞.选取其中ezrin mRNA和蛋白表达差异相对较大的1对细胞系,即SKOV3和SKOV3ip细胞用于以下实验.(2)将miRNA芯片筛选结果与生物信息学工具预测结果对比分析,筛选出两个可能调控ezrin基因表达的特异miRNA,即miR-183和miR-22;实时RT-PCR技术检测显示,miR-183和miR-22在SKOV3和SKOV3ip细胞中的表达差异,与miRNA芯片筛选结果一致,SKOV3细胞中miR-183和miR-22的表达水平分别是SKOV3ip细胞的(5.84±0.66)和(6.67±0.67)倍,两者分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).miRNA转染SKOV3ip细胞后,其ezrin mRNA的表达水平是空白对照的(1.03±0.10)倍,两者比较,差异无统计学意义(P＞0.05);而ezrin蛋白的表达强度则明显低于空白对照.结论 侵袭力强的卵巢癌细胞中ezrin mRNA和蛋白均高表达,与ezrin基因表达相关的miRNA--miR-183和miR-22的过度表达均能有效调节侵袭转移相关基因ezrin蛋白的表达水平,它们可能具有ezrin基因介导的抑制卵巢癌细胞浸润转移的潜在功能.     

透明质酸结合蛋白1在人卵巢癌细胞系中表达及其与紫杉醇敏感性的关系

目的探讨透明质酸结合蛋白1在人卵巢癌细胞系SKOV3、HO-8910PM、HO-8910LM、OVCA429和OVCA420中的表达和定位及其与紫杉醇敏感性之间的关系。方法 2007年2月至2008年12月在哈尔滨医科大学附属三院研究所应用荧光定量RT-PCR技术和免疫荧光化学法结合激光共聚焦显微镜分别检测人卵巢癌细胞系SKOV3、HO-8910PM、HO-8910LM、OVCA429和OVCA420中HABP1 mRNA和蛋白的表达以及其在细胞中的定位,MTT法分析各卵巢癌细胞系对紫杉醇的敏感性。结果 HABP1 mRNA在人卵巢癌细胞系SKOV3、OVCA429和HO-8910PM中的表达水平分别是OVCA420的3.7、2.8和2.1倍(P值均<0.05),HO-8910LM和OVCA420中HABP1 mRNA的表达水平无统计学差异(P值>0.05),激光共聚焦显示5种人卵巢癌细胞系中HABP1蛋白的表达变化趋势与mRNA水平基本一致,其中SKOV3、OVCA429和HO-8910PM细胞系中HABP1蛋白在细胞核周的表达量明显高于OVCA420和HO-8910LM。MTT分析显示,SKOV3、OVCA429、OVCA420、HO-8910PM和HO-8910LM细胞对紫杉醇的中效浓度分别是:0.047μmol/L、0.221μmol/L、0.723μmol/L、0.092μmol/L和0.672μmol/L,相关分析显示HABP1 mRNA表达水平与卵巢癌细胞对紫杉醇的中效浓度之间的相关系数为-0.888,P<0.05。结论 HABP1的表达与卵巢癌细胞对紫杉醇的敏感性呈显著正相关,其机制可能是由于其在细胞中的分布位置不同所致,HABP1可作为筛选卵巢癌化疗药物的指标之一。     

微小RNA-7抑制人卵巢癌细胞株增殖及侵袭能力的研究

目的:探讨微小RNA-7(miR-7)对低转移人卵巢癌细胞株HO-8910、高转移人卵巢癌细胞株HO-8910pm增殖及侵袭转移能力的影响。方法:检测两种细胞株的miR-7表达情况,构建miR-7质粒,通过lipofectmin 2000瞬时转染miR-7低表达的细胞株,通过实时PCR检测转染前后细胞株miR-7以及EGFR mRNA表达情况,Western blot法检测EGFR蛋白表达。细胞划痕实验、transwell实验检测细胞体外迁移及侵袭能力;CCK-8检测增殖能力变化。结果:HO-8910细胞miR-7表达为HO-8910pm的(2.517±0.508)倍;转染后HO-8910pm的miR-7表达提高了(8.015±0.1805)倍,同时抑制EGFRmRNA及蛋白表达,抑制侵袭、迁移、增殖能力(P<0.05);而miR-7表达相对高的HO-8910体外迁移、侵袭及增殖能力均低于HO-8910pm。结论:miR-7可通过调控EGFR的表达抑制HO-8910、HO-8910pm的增殖及侵袭转移能力,miR-7可能为临床治疗卵巢癌提供新靶标。     

RNA干扰技术对卵巢上皮性癌细胞基质金属蛋白酶9基因表达及侵袭和黏附能力的影响

目的探讨以基质金属蛋白酶(MMP)9基因为靶向的 RNA 干扰(RNAi)技术对 MMP-9基因在卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞中表达的抑制作用,以及对卵巢癌细胞侵袭和黏附能力的影响。方法以 MMP-9基因为靶基因,在编码区选择4个不同的目标序列,分别为 Site1、Site2、Site3、Site4及1个非特异性序列 Site5,利用 PCR 方法构建小分子干扰 RNA(siRNA)表达元件,转染卵巢癌 HO-8910PM 细胞,并依据序列不同将细胞分组,分别为 Site1、Site2、Site3、Site4和Site5组,另以未转染的母代细胞作为对照组。利用 RT-PCR、蛋白印迹法检测 MMP-9 mRNA 及蛋白的表达,通过四甲基偶氮唑蓝法绘制细胞生长曲线,细胞侵袭重建基底膜实验检测细胞体外侵袭能力,通过细胞黏附实验检测细胞体外黏附能力。结果 Site1、Site2、Site3、对照组细胞 MMP-9 mRNA 的相对表达水平分别为0.64±0.06、0.47±0.07、0.55±0.10、0.91±0.08,蛋白的相对表达水平分别为0.30±0.09、0.27±0.08、0.37±0.12、0.63±0.09,与对照组细胞比较,Site1、Site2、Site3组 MMP-9 mRNA 和蛋白的相对表达水平均有不同程度的下降(P<0.05),针对 Site2序列的 siRNA 的基因抑制效果最好。细胞生长曲线显示,Site1、Site2、SitP3、Site4组细胞的生长不同程度的减慢。Site1、Site2、Site3组细胞的侵袭抑制率分别为50.0%、50.0%和37.5%,均高于对照组细胞(0),分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。Site1、Site2、Site3、Site4组细胞60min 时的黏附抑制率分别为43.8%、48.8%、33.9%和24.2%,90min 时的黏附抑制率分别为41.6%、40.2%、35.1%和16.0%,黏附抑制率均高于对照组(0),差异有统计学意义(P<0.05)。结论卵巢癌 HO-8910PM 细胞中存在 RNAi 现象,MMP-9siRNA 能特异性地抑制 MMP-9基因的表达,使卵巢癌细胞的侵袭和黏附能力受到不同程度的影响。