大鼠骨髓间充质干细胞原代培养及成骨成脂分化能力染色鉴定

目的：实验旨在建立一套简便有效的骨髓间充质干细胞原代培养、诱导分化及染色方法,观测骨髓间充质干细胞生物学特性,及其成骨、成脂分化潜能,为后续进行骨髓间充质干细胞基因修饰实验做好准备。方法本实验通过全骨髓培养法分离骨髓间充质干细胞,并用诱导分化培养液做定向诱导培养,观察骨髓间充质干细胞向成骨及成脂肪细胞分化过程中的细胞形态学变化,进行成骨成脂细胞染色鉴定,以探讨骨髓间充质干细胞的分离培养方法、生长规律及向成骨成脂细胞分化的条件。结果(1)通过全贴壁法成功进行了骨髓间充质干细胞原代及传代培养并绘制出第4代细胞生长曲线;(2)通过茜素红染色验证了骨髓间充质干细胞的成骨分化能力;(3)通过油红O染色验证骨髓间充质干细胞的成脂分化能力。结论全贴壁法提取的大鼠骨髓间充质干细胞经传代4次左右可达到一定纯度,在一定诱导条件下,经特定染色方法鉴定,可分化为成骨细胞,成脂细胞。     

bFGF真核表达质粒的构建及骨髓基质细胞转染

目的 探讨bFGF基因转染骨髓基质干细胞的方法 及可行性.方法 构建bFGF基因真核表达质粒,用脂质体法介导转染骨髓基质细胞,通过形态学观察、免疫组化、ELISA法、及RT-PCR方法 检测bFGF基因转染骨髓基质干细胞的成功性,以及转染后骨髓基质干细胞的生物学特性.结果 bFGF基因成功转染骨髓基质干细胞,并能持续稳定的分泌bFGF蛋白,可诱导骨髓基质干细胞向成软骨方向分化.结论 bFGF基因可以转染骨髓基质干细胞,并能诱导骨髓基质干细胞向成软骨方向分化.     

骨髓基质(间充质)干细胞向神经细胞分化潜能的研究进展

通过近十年来的研究发现，骨髓中存在有骨髓基质干细胞，该干细胞具有多向分化潜能，在一定条件下，能在体内、外诱导其分化为神经细胞，本文就骨髓基质干细胞向神经细胞分化的相关研究进展作一综述。     

骨髓干细胞移植在慢性肾功能衰竭中的研究应用

骨髓干细胞是骨髓组织中的一群具有自我更新、多向分化和高度增殖能力的未分化成熟细胞,是临床中应用最成熟的组织干细胞。各种肾脏疾病发展为终末期肾衰时传统的治疗方法不能有效的缓解肾功能,给病人也带来极大的痛苦,近年来国内外有研究报道,骨髓干细胞可以分化为肾小管和肾脏实质细胞,参与肾损伤修复,表明骨髓干细胞疗法可能成为慢性肾功能衰竭治疗的新措施,本文就近年来骨髓干细胞移植治疗肾脏疾病的研究作一综述。     

骨髓干细胞移植在慢性肾功能衰竭中的研究应用

骨髓干细胞是骨髓组织中的一群具有自我更新、多向分化和高度增殖能力的未分化成熟细胞,是临床中应用最成熟的组织干细胞。各种肾脏疾病发展为终末期肾衰时传统的治疗方法不能有效的缓解肾功能,给病人也带来极大的痛苦,近年来国内外有研究报道,骨髓干细胞可以分化为肾小管和肾脏实质细胞,参与肾损伤修复,表明骨髓干细胞疗法可能成为慢性肾功能衰竭治疗的新措施,本文就近年来骨髓干细胞移植治疗肾脏疾病的研究作一综述。     

骨髓干细胞移植治疗慢性肾功能衰竭的研究进展

骨髓干细胞是骨髓组织中的一群具有自我更新、多向分化和高度增殖能力的未分化成熟细胞,是临床中应用最成熟的组织干细胞。各种肾脏疾病发展为终末期肾衰时传统的治疗方法不能有效的缓解肾功能,给病人也带来极大的痛苦,近年来国内外有研究报道,骨髓干细胞可以分化为肾小管和肾脏实质细胞,参与肾损伤修复,表明骨髓干细胞疗法可能成为慢性肾功能衰竭治疗的新措施,本文就近年来骨髓干细胞移植治疗肾脏疾病的研究作一综述。     

移植的骨髓间充质干细胞在兔腰椎间盘内分化的研究

目的观察移植的骨髓间充质干细胞在兔椎间盘内分化的情况。方法从兔骨髓中分离和培养骨髓间充质干细胞,用核标记物BrdU标记后注入到兔的椎间盘中,8周后取材采用双染的方法检测移植骨髓间充质干细胞的细胞质中Ⅱ型胶原蛋白的表达情况。结果移植后的骨髓间充质干细胞部分双染呈阳性显色,即胞质内含有Ⅱ型胶原蛋白,向软骨细胞方向分化。结论在椎间盘环境的影响下骨髓间充质干细胞可以分化为软骨样细胞。     

小鼠骨髓干细胞有诱导分化为胰岛素分泌细胞的可能性

[目的] 探讨小鼠骨髓干细胞有无被诱导分化为胰岛素分泌细胞的可能性.[方法] 培养小鼠骨髓干细胞,采用含 GLP-1和 nicotinamide的无血清培养液诱导分化,在培养过程中,检测有关基因的表达.[结果]培养的小鼠骨髓干细胞具有与文献报道相似的生物学特性;在诱导分化第 7天,有 ngn3和 pdx-1基因表达;在诱导分化第 14天,有 nkx2.2、 pdx-1和 ins2基因表达.[结论] 小鼠骨髓干细胞有诱导分化为胰岛素分泌细胞的可能性,值得进一步研究.     

依达拉奉体外诱导大鼠骨髓基质干细胞分化为神经元样细胞的电生理研究

目的探讨新型氧自由基清除剂依达拉奉诱导大鼠骨髓基质干细胞分化为神经元样细胞的电生理特性。方法Ficoll-Paque分离液离心分离大鼠骨髓基质干细胞,体外扩增,含依达拉奉的无血清L-DMEM诱导。观察细胞形态变化,Western-blot检测分化前后细胞膜离子通道蛋白表达,全细胞膜片钳检测细胞电生理特性。结果分化的骨髓基质干细胞胞体收缩,突起伸出;钠、钾、钙膜蛋白分化前后均有表达,分化后钾、钠、钙膜蛋白表达上调;分化后细胞静息电位值增大,外向电流增大,尤以外向整流钾电流显著。结论依达拉奉诱导大鼠骨髓基质干细胞分化的细胞具有神经细胞电生理特性。     

骨髓间质干细胞体外增殖及诱导分化成肌样细胞实验研究

目的比较SD大鼠、Wistar大鼠和C57BL/6J小鼠骨髓间质干细胞在体外的增殖及在体外将骨髓间质干细胞诱导分化成肌样细胞的情况。方法体外分离成年SD大鼠、Wistar大鼠和C57BL/6J小鼠的骨髓干细胞,培养增殖,用5-氮杂胞苷诱导分化,使其向肌细胞定向分化。结果SD大鼠和Wistar大鼠的原代骨髓间质干细胞约10 d可达90%以上融合,平均3 d左右传代,C57BL/6J小鼠的骨髓间质干细胞在1周内可迅速增殖,1周后基本处于停滞状态,且细胞集落很少,难传代。SD大鼠的骨髓间质干细胞在含5-氮杂胞苷、两性霉素B和5%马血清的分化培养基作用下,可以分化为肌肉特异性抗原desmin和-αsarcomeric actin染色阳性反应的肌样细胞。结论不同种系的骨髓干细胞在体外用相同的培养基培养,可以具有截然不同的增殖能力;5-氮杂胞苷可以促使骨髓干细胞定向分化为肌样细胞。     

人骨髓间质干细胞体外培养诱导成为心肌样细胞的实验研究

目的 研究人骨髓间质干细胞的体外培养及向心肌样细胞转化的条件。方法 取成人髂骨骨髓，分离出骨髓间质干细胞进行培养、传代。观察在培养液中添加诱导剂5-氮胞苷(5-aza)条件下骨髓间质干细胞的生长和分化。结果 成人骨髓间质干细胞贴壁呈集落生长，有成纤维细胞样外观。5-aza诱导人骨髓间质干细胞转化为心肌样细胞。结论 人骨髓间质干细胞能够在体外被诱导分化为心肌样细胞，是心肌组织工程良好的细胞来源。     

4例异体骨髓间充质干细胞和外周血造血干细胞联合移植治疗白血病的护理

造血干细胞(HSC)是来源于红骨髓．能自我更新,有较强分化发育和再生能力．可以产生各种类型血细胞的一类细胞。而骨髓间充质干细胞(BM-MSC)是不同于HSC的另一类骨髓干细胞．具有分裂、增殖、分化形成多种间质细胞潜能,在骨髓中它是造血间质细胞的来源．通过胞体接触和分泌多种造血因子．为HSC的分裂、增殖、分化提供适合的微环境。外周血造血干细胞移植(PBSCT)已广泛用于临床,     

人骨髓间充质干细胞原代提取及成神经诱导分化

目的对人骨髓间充质干细胞进行原代提取、细胞性质鉴定及成神经细胞分化诱导,探讨人骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的可能性,为自体细胞移植提供种子。方法使用试剂盒进行骨髓有核细胞混悬液的制备,纯化培养后对细胞进行流式细胞术鉴定,对成神经分化诱后细胞进行染色形态学观察。结果原代提取细胞培养至10天时可呈漩涡性生长,类细胞克隆样。细胞存在稳定的干性表达,70%骨髓间充质干细胞可实现成神经细胞诱导分化。结论原代人骨髓间充质干细胞可实现向成神经细胞的诱导分化。     

骨髓间质干细胞多向分化及其机制的研究进展

骨髓间质干细胞具有强大的增殖能力和多向分化潜能。而关于其分化机制,目前认为是微环境因素诱导,通过一定的信号转导通路传递,转录因子抑制或激活,启动关键基因表达的结果,本文综述了骨髓间质干细胞的生物学特征、多向分化及分化机制的研究进展。     

受体特异性骨髓干细胞诱导肝移植大鼠长期存活的研究

目的 研究受体特异性骨髓干细胞在大鼠移植肝中的诱导分化情况及对大鼠长期存活的影响.方法 雌性受体SD大鼠随机分成空白对照组、D-hanks液组、间充质干细胞组、造血干细胞组.空白对照组仅行原位肝移植术;D-hanks液组在肝移植术后大鼠门静脉注射D-hanks液0.5ml;间充质干细胞组在肝移植术后大鼠门静脉注射雄性SD大鼠骨髓问充质干细胞0.5ml(5×105个/mL);造血干细胞组注射骨髓造血干细胞0.5ml(5×105个/mL).观察大鼠的中位生存时间及术后60d Sry基因原位杂交和白蛋白免疫组化双标检测观察骨髓干细胞的分化情况.结果 间充质干细胞组、造血干细胞组中位生存时间分别为大于180 d、102d,较空白对照组、D-hanks液组明显延长(P＜0.05);间充质干细胞组又较造血干细胞组明显延长(P＜0.05);间充质干细胞组、造血干细胞组Sry基因原位杂交和白蛋白免疫组化双标检测呈阳性,且双阳性细胞百分率间充质干细胞组高于造血干细胞组(P＜0.05).结论 受体特异性骨髓干细胞能诱导大鼠肝移植术后长期存活,并能在移植肝的环境中诱导分化为肝细胞,表达白蛋白,并逐渐替代移植肝本身的细胞;间充质干细胞在移植肝内诱导分化为肝细胞并替代的能力较强;移植的肝脏被受体特异性骨髓干细胞分化来的肝细胞替代,是大鼠长期存活的可能原因.     

阿伦磷酸钠对大鼠骨髓基质干细胞成骨分化的影响

目的在体外培养条件下观察阿伦磷酸钠对大鼠骨髓基质干细胞成骨分化的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测阿伦磷酸钠对骨髓基质干细胞活性的影响;茜素红染色法来确定骨髓基质干细胞的成骨分化程度;碱性磷酸酶（ALP）活性检测;分光光度法来测定钙峰值,和免疫荧光流式细胞术测定CD44表达。结果0．1μg／ml、1μg／ml、10μg／ml阿伦磷酸钠对大鼠骨髓基质干细胞的细胞毒性不明显,都可以促进其增值和成骨分化,浓度为1μg／ml时作用最大,浓度为10μg／ml时作用明显降低。结论适当浓度的阿伦磷酸钠可以促进大鼠骨髓基质干细胞的增值和成骨分化。     

骨髓基质干细胞诱导分化为成骨细胞影响因子的研究进展

骨髓基质干细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）,又称骨髓间充质干细胞,是存在于骨髓中非造血干细胞的另一种干细胞。自1968年Friendenstein利用BMSCs的粘附性特点,对其进行分离、培养,及多向分化潜能研究以来,BMSCs成为现代生物学和医学领域研究的热点。现普遍认为BMSCs是中胚层发育的早期细胞,具有多向分化潜能,     

骨髓基质细胞条件培养液对中脑神经干细胞分化的影响

目的 :探讨骨髓基质细胞条件培养液诱导中脑神经干细胞分化为高比例神经元的机制。 方法 :采用骨髓基质细胞条件培养液培养中脑神经干细胞 7d ,通过免疫细胞化学染色方法鉴别和计数神经元的数量 ,并与自然分化组、骨髓基质细胞膜片段组、骨髓基质细胞固定组以及骨髓基质细胞共培养组相比较。 结果 :用成年大鼠骨髓基质细胞的条件培养液体外培养新生大鼠中脑神经干细胞 ,神经干细胞分化为神经元比例 [(40 .5± 14 .5 ) % ]明显高于自然分化组 [(16 .6± 10 .5 ) % ]、骨髓基质细胞膜片段组 [(2 0 .8± 12 .5 ) % ]以及骨髓基质细胞固定组 ,但与骨髓基质细胞共培养组 [(36 .1± 9.7) % ]相比无统计学差异 (P >0 .0 5 )。 结论 :骨髓基质细胞条件培养液可明显提高神经干细胞分化为神经元的比例     

骨髓源性肝干细胞的研究进展

肝干细胞用于肝病治疗的研究日益增多,尤其是骨髓分离骨髓源性肝干细胞.文章就骨髓源性肝干细胞的分离、培养、纯化、诱导分化、检测及肝内移植的可能机制和应用前景进行综述.     

骨髓源性肝干细胞的研究进展

肝干细胞用于肝病治疗的研究日益增多,尤其是骨髓分离骨髓源性肝干细胞。文章就骨髓源性肝干细胞的分离、培养、纯化、诱导分化、检测及肝内移植的可能机制和应用前景进行综述。