Calbindin—D28k mRNA在大鼠三叉神经节和背根节初级传入神…

用原位杂交组织化学技术，用同位素标记的寡核苷酸探针，对Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ ｍＲＮＡ在大鼠三叉神经节和背根节初级传入神经元中的表达进行了观察。结果发现：在大鼠三叉神经节中，约１６．１％的神经元为Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ Ｄ２８ｋ阳性神经元，而在背根神经节中，阳性神经元占节细胞总数的２０．６％，这两个神经节中的阳性神经元主要集中在大型细胞（８．１％和１２．３％）及小型细胞（４．２％和６．８％）。从     

Calbindin—D28k在出生前人海马本部及下托神经元的表达及其 …

本实验采用免疫组织化学方法研究了１３￣３８周人胎儿海马本部及下托Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ神经元扮布和发育。结果表明：在１３￣１４周时，许多含Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ锥体细胞可见于ＣＡ１区锥体细胞层中部及深部，随着胎龄增大，ＣＡ１区含Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ锥体细胞的数量及密度逐渐下降，最终消失，并且这种下降及消失首先从含Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ锥体细胞区浅部开始，然后向深部推进；在     

Calbindin-D28k在出生前人海马本部及下托神经元的表达及其变化

本实验采用免疫组织化学方法研究了１３～３８ 周人胎儿海马本部及下托含Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ 神经元的分布和发育。结果表明：在１３～１４ 周时,许多含Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ 锥体细胞可见于ＣＡ１ 区锥体细胞层中部及深部,随着胎龄增大,ＣＡ１ 区含Ｃａｌ－ｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ 锥体细胞的数量及密度逐渐下降,最终消失,并且这种下降及消失首先从含Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ 锥体细胞区浅部开始,然后向深部推进;在１３～２８ 周期间,ＣＡ２ 和ＣＡ３ 区也有许多含Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ 锥体细胞,但至３２ 周以及其后,ＣＡ３ 和ＣＡ２ 区则不见含Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ 锥体细胞,仅在ＣＡ２ 与ＣＡ１ 交界区见到少量弱染的含Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ 锥体细胞。此外,在２８～３８ 周期间,ＣＡ３ 和ＣＡ２ 区锥体细胞层周围可见许多含Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ 的苔藓纤维,其密度随胎龄增大而增加。１４～３８ 周期间,许多含Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ 的锥体细胞也出现于下托锥体细胞层全层及前下托锥体细胞层浅部（细胞岛区）及中部。这些区域含Ｃａｌ－ｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ 锥体细胞的数量及染色强度在１４～２４ 周期间逐渐增     

GDNF在坐骨神经损伤后大鼠L4—6背根节神经元的表达及变化

目的 观察坐骨神经夹伤后不同时间点,胶质细胞源性神经营养因子（ＧＤＮＦ）在成年大鼠Ｌ４～６背根节（ＤＲＧ）中的分布,探讨ＧＤＮＦ对感觉神经元损伤的反应。方法 成年大鼠右侧坐骨神经夹伤后,分别取伤后１、５、７、１０、１４、２８和５６ｄＬ４～６背根节,行抗ＧＤＮＦ多克隆抗体免疫组织化学ＡＢＣ法染色,之后对染色结果进行图像分析。结果 ＧＤＮＦ免疫反应存在于坐骨神经夹伤后１、５、７、１０、１４、２８和５６ｄ成年大鼠Ｌ４～６背根节神经元中,图像分析结果表明,伤后１、３、５和７ｄ的损伤侧背根节神经元的平均光密度大于对照侧背根节神经元。结论 大鼠坐骨神经夹伤后,ＧＤＮＦ在背根节Ｌ４～６感觉神经元中有一定量的变化,且伤后１周内ＧＤＮＦ在伤侧背根节神经元中的表达增强。     

阿片μ受体与SP、CGRP和SOM在大鼠三叉神经节和背根神经节内的共存研究

本研究应用免疫荧光及免疫荧光双重染色技术，观察了大鼠三叉神经节和背根神经节内阿片μ受体免疫反应阳性神经元的分布及其与SP、CGRP和SOM阳性神经元之间是否存在共存关系。结果显示：（1）三叉神经节和背根神经节内的阿片μ受体免疫反应阳性神经元多为中小到细胞，其免疫反应阳性产物不仅见于胞膜表面也出现于胞浆内。SP和SOM免疫反应阳性神经元亦为中小型细胞，但以小细胞为主，而CGRP免疫反应阳性神经元有一部分为大型神经元。（2）在三叉神经节内，有相当数量的阿片μ受体阳性神经元同时呈SP、CGRP或SOM免疫反应阳性。其中双重免疫反应神经元分别占阿片μ受体阳性细胞总数的34．6％、54．3％和23.9％，而在SP、CGRP和SOM各阳性细胞中分别有49．4％、50．9％和37.5％的神经元同时是阿片μ受体免疫反应阳性．（3）在背根神经节内，也有相当数量的神经元呈阿片μ受体与SP、CGRP和SOM双重免疫反应阳性，其中双标细胞数分别占阿片μ受体免疫反应阳性细胞总数的30．1％、48．4％和26.8％，各占SP、CGRP和SOM阳性细胞总数的51．5％、44．2％和35．9％。本文结果提示吗啡的镇痛作用中有部分可能是通过激活阿片μ受体来影响初级传入纤维中SP、CGRP和SOM的释放而实现的．     

含Parvalbumin和Calbindin D—28k样免疫阳性神经元在大鼠三 …

本研究应用免疫组织化学技术对Ｐａｒｖａｌｂｕｍｉｎ--和Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ Ｄ－２８ｋ样免疫阳性神经元在大鼠三叉神经本体觉中枢通路上的分布状况作了普查。结果表明：这两种钙结合蛋白在该通路上具有下列的分布特点;（１）三叉神经中脑核神经元几乎全部为ＰＶ样免疫阳性,胞体和突起染色强或中等强度,胞体大,多为假单级神经元,偶见中等大小的多极神经元。（２）在三叉神经脊束核吻侧亚核尾侧段水平的三叉神经脊束核吻侧亚     

阿片μ受体与SP,CGRP和SOM在大鼠三叉神经节和背根神经节内 …

本研究应用免疫荧光及免疫荧光双重染色技术，观察了大鼠三叉神经节和背根神经节内阿片μ受体免疫反应阳性神经抑的分布及其与ＳＰ，ＣＧＲＰ和ＳＯＭ阳性神经元是是否存在共存关系，结果显示：（１）三叉神经节和背极神经节内的阿片μ受体免疫反应阳性神经元多为中心小型细胞，其免疫反应阳性产物不仅于胞膜表面也出现于胞浆内，ＳＰ和ＳＯＭ免疫反应阳性反应神经亦为中小型细胞，但以小细胞为主，而ＣＧＲＰ免疫反应阳性神经元有一     

大鼠三叉神经节细胞向三叉神经脊束核各亚核的分枝投射

本文应用荧光素双标记与免疫荧光结合方法研究了单个含ＳＰ或ＣＧＲＰ的三叉神经节细胞向三叉神经脊束核的尾侧亚核、极间亚核和吻侧亚核的分枝投射。将ＤｉａｍｉｄｉｎｏＹｅｌｌｏｗ（ＤＹ）注入尾侧亚核，ＦａｓｔＢｌｕｅ（ＦＢ）分别注入吻侧亚核或极间亚核，发现ＤＹ／ＦＢ双标细胞占同侧三叉神经节内标记细胞总数的１３．２％（ＦＢ注入吻侧亚核例）和２．３％（ＦＢ注入极间亚核例）；双标细胞中含ＳＰ者分别为７４．４％和６９．６％；含ＣＧＲＰ者分别为７２．１％和６４．３％。将ＤＹ注入极间亚核，ＦＢ注入吻侧亚核时，ＤＹ／ＦＢ双标细胞占同侧三叉神经节标记细胞总数的１．６％，双标细胞中有６７．９％为ＳＰ阳性，７３．９％为ＣＧＲＰ阳性。多数的双标且呈ＳＰ或ＣＧＲＰ阳性的三叉神经节细胞直径约为２５～５０μｍ，为中、小型节神经元，而直径大于５０μｍ的大型细胞较少见。以上结果提示，三叉神经初级传入纤维进入脑干后的下降支分枝投射向三叉神经脊束核的各亚核，它们可能与面口部的痛信息传递有关。ＳＰ和ＣＧＲＰ是这些分支投射神经元的重要神经活性物质。     

骨骼肌提取液对大鼠坐骨神经损伤所致腰段脊髓腹角和背根节神…

用ＣＴ－ＨＲＰ逆行追踪法及ＣｈＡＴ单克隆抗体的ＡＢＣ免疫组织化学研究了新生大鼠骨骼肌提取液（ＭＥ，２０－５０ｋＤ）对钳夹大鼠坐骨神经所致的腰骶部脊髓腹角和背根节神经细胞溃变的影响。实验结果显示：注射ＭＥ实验组的脊髓腹角运动神经元和背根节细胞的存活元旦数与注射直的对照组相比，其比值为６：０，有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。提示骨骼肌提取液（２０－５０ｋＤ）对脊髓腹角运动神经元和背根节感觉神经细胞的溃变     

大鼠三叉神经半月神经节内一氧化氮合酶阳性神经元的分布、投射及其与CGRP、SP的关系

用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶组织化学方法观察了大鼠三叉神经半月神经节内一氧化氮合酶阳性神经元的分布．结果发现约５～８％的节细胞呈一氧化氮合酶阳性，几乎均是中、小细胞，弥散地分布在神经节各处．结合荧光金逆行追踪技术观察，发现荧光金注入三叉神经脊束核尾侧亚核浅层后，约９０％的一氧化氮合酶阳性节细胞被逆行标记，提示半月神经节内的一氧化氮合酶阳性神经元主要投射于三叉神经脊束核尾侧亚核浅层．用一氧化氮合酶组织化学反应结合荧光金逆行追踪技术及ＣＧＲＰ、ＳＰ免疫荧光技术进行重合处理的结果显示，在向三叉神经脊束核尾侧亚核投射的一氧化氮合酶阳性半月节神经元中，约６０％呈ＣＧＲＰ样免疫阳性，约６５％呈ＳＰ样免疫阳性．结合文献及本文结果，可以认为半月神经节向三叉神经脊束核尾侧亚核浅层投射的一氧化氮合酶与ＣＧＲＰ或ＳＰ共存的神经元可能在面口部伤害性信息的传递和调控中起重要作用．     

NGF,BDNF,NT-3和GDNF在背根节不同神经元的配布的免疫组织化学证据

为了探讨神经生长因子、脑源性神经生长因子 ,神经营养素 -3,胶原细胞源性神经生长因子在成年猫背根节神经元不同大小细胞的分布。取 L6背根节制成 2 0μm厚冰冻切片 ,用上述四种因子抗血清进行免疫组化反应。计数每一种因子阳性大、中、小型 (小于 42μm者为小型神经元 ;42～ 5 7μm者为中型神经元 ;大于 5 7μm者为大型神经元 )神经元的百分数。结果证明 ,此四种因子在背根节大、中、小神经元的阳性百分数分别为 :1.2± 0 .7,2 .1± 0 .9,3.3± 1.1;1.7± 0 .4,11.2± 1.2 ,30 .0± 1.5 ;2 6 .7± 2 .2 ,6 .2± 1.2 ,13.2± 2 .9;2 7.4± 3.3,8.1± 1.7,2 0 .1± 2 .4。表明 :在成年猫 L6背根节仅存在少数神经生长因子阳性细胞 ,而脑源性神经生长因子则主要配布于中、小神经元 ,神经营养素 -3和胶质细胞源性生长因子的免疫阳性细胞主要是大神经元 ,但也包括一些中小神经元。提示此四种因子在成年猫背根节的生理功能可能与神经元的不同大小有关。     

胶质细胞源性神经营养因子在成年大鼠背根节分布的免疫组织化学研究

目的　观察胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)在成年大鼠背根节中的分布。　方法　用 GDNF多克隆抗体免疫组织化学 ABC法及图像分析方法。　结果　 GDNF免疫反应主要存在于背根节的小神经细胞中 ,背根节的大神经细胞呈弱阳性反应 ,与背根节相连的感觉神经纤维呈免疫反应性。　结论　 GDNF在背根节感觉神经元和神经纤维中有一定量的分布。     

聚吡咯和背根神经节及游离细胞联合培养形态学观察

目的：探讨聚吡呼和周围神经组织的生物相容性。方法：取新生大鼠的背根神经节及细胞与聚吡咯膜联合培养,免疫细胞化学双重染色,光镜和扫描电镜观察。结果：背根神经节中,雪旺氏细胞生长迁移活跃;神经细胞突起借助雪旺氏细胞向外延伸,同时雪旺氏细胞和神经元又可借助这些神经突起向外迁移。游离神经细胞能在聚吡咯膜上良好生长,伸出多极突起及分枝。结论：在体外,聚吡咯与大鼠周围神经组织有较好的生物相容性。     

鸡胚背根神经节感觉神经元体外培养研究

本文对背根神经节感觉神经元的体外培养条件进行了研究。结果表明利用差速贴壁法可使神经元纯度达到95％以上;在血清和适宜的细胞外基质存在条件下，神经元分散良好。本研究还通过外源性脑源性神经营养因子对神经元纤维再生的作用进一步证实了该方法的可靠性。     

鸡后根神经节多巴胺细胞在体及体外培养中的免疫细胞化学观察

应用免疫细胞化学PAP法,研究了鸡胚和雏鸡后根神经节细胞内多巴胺递质的表现与胚胎发育过程中的变化,并在细胞培养条件下研究了周围靶组织——皮肤对后根节细胞胚胎发育的影响。鸡后根节细胞内多巴胺的免疫反应最先出现于E_(10),只占后根节细胞的0.8%,E_(18)时达5.6%,出壳后雏鸡为8.6%。在鸡后根节内,多巴胺免疫反应阳性细胞主要为较大的A类细胞,和极少较小的B类细胞。免疫反应阳性的周围神经末梢位于皮肤和交感干内。当取自E_9的鸡胚后根节细胞经7天培养后,部分神经细胞出现多巴胺免疫反应阳性;而取自E_6的鸡胚后根节细胞虽经10天培养后仍为免疫反应阴性;然而,将取自E_6后根节细胞与皮肤组织联合培养10天后,少量神经细胞及轴突出现多巴胺免疫阳性反应。作者认为:鸡后根节多巴胺细胞在胚胎时期的发育有赖于周围靶组织的作用。     

Role of tissue transglutaminase type 2 in calbindin-D28k interaction with ataxin-1

Spinocerebellar ataxia-1 (SCA1) is caused by the expansion of a polyglutamine repeats within the disease protein, ataxin-1. The mutant ataxin-1 precipitates as large intranuclear aggregates in the affected neurons. These aggregates may protect neurons from mutant protein and/or trigger neuronal degeneration by encouraging recruitment of other essential proteins. Our previous studies have shown that calcium binding protein calbindin-D28k (CaB) associated with SCAl pathogenesis is recruited to ataxin-l aggregates in Purkinje cells of SCAl mice. Since our recent findings suggest that tissue transglutaminase 2 (TG2) may be involved in crosslinking and aggregation of ataxin-l, the present study was initiated to determine if TG2 has any role in CaB-ataxin-l interaction. The guinea pig TG2 covalently crosslinked purified rat brain CaB. Time dependent progressive increase in aggregation produced large multimers, which stayed on top of the gel. CaB interaction with ataxin-l was studied using HeLa cell lysates expressing GFP and GFP tagged ataxin-l with normal and expanded polyglutamine repeats (Q2, Q30 and Q82). The reaction products were analyzed by Western blots using anti-polyglutamine, CaB or GFP antibodies. CaB interacted with ataxin-1 independent of TG2 as the protein-protein crosslinker DSS stabilized CaB-ataxin-l complex. TG2 crosslinked CaB preferentially with Q82 ataxin-1. The crosslinking was inhibited with EGTA or TG2 inhibitor cystamine. The present data indicate that CaB may be a TG2 substrate. In addition, aggregates of mutant ataxin-l may recruit CaB via TG2 mediated covalent crosslinking, further supporting the argument that ataxin-l aggregates may be toxic to neurons.     

不同初级感觉神经元ATP-激活电流的特征及意义

为探讨大鼠不同初级感觉神经元ATP-激活电流的电生理学特征及意义,本实验在新鲜分离的大鼠三种初级感觉神经元标本上,应用全细胞膜片钳技术记录,对外加ATP引起的膜电流的变化进行了研究。结果显示:(1)受检的细胞绝大多数对ATP敏感,外加ATP记录到内向电流,在背根神经节和三叉神经节神经元记录到三种形式的ATP-激活电流:快速激活快速失活型(fasttype,F型)、快速激活缓慢失活型(intermediatetype,I型)和缓慢激活缓慢失活型(slowtype,S型),但在结状神经节神经元主要记录到S型电流,三种形式的电流均具有浓度依赖性;(2)三种形式的ATP-激活电流上升相(risingphase,R)从10%至90%的时间(R10-90)有明显差异(P<0.05),去敏感相(desensitizingphase)从10%至90%的时间(D10-90)也有明显差异(P<0.05);(3)三种形式的电流EC50非常接近,I型的量-效曲线居中间,F型的下移,S型的上移;(4)小细胞的ATP-激活电流多表现为F型特征,大细胞多表现为S型特征,而中等大小的细胞多表现为I型特征,结状神经节神经元电流形式与细胞大小没有相关性。以上结果提示:躯体和内脏初级感觉神经元ATP-激活电流的类型可能与不同的感觉性质有关;不同形式的ATP激活电流可能由ATP受体的不同亚单位组成的各种亚型中介。     

5-HT受体亚型mRNAs在大鼠背根神经节和三叉神经节的表达—原位杂交组织化学法研究

应用原位杂交组织化学技术观察了大鼠背根节和三叉神经节内 5 -HT2 、5 -HT3 、5 -HT4、5 -HT5 、5 -HT6 和 5 -HT7受体亚型 m RNAs的表达。结果显示 :在背根节和三叉神经节中均观察到了 5 -HT2 A、5 -HT3 、5 -HT4和 5 -HT7受体亚型 m RNAs阳性细胞 ;两种神经节内上述受体亚型 m RNAs阳性细胞的百分比不同。 5 -HT3 受体亚型 m RNA阳性细胞的百分比最高 ,分别为 3 0 .4% (背根节 )和 3 2 .8% (三叉神经节 )。约 17.2 %和 14 .6 %的背根节和三叉神经节细胞分别呈 5 -HT2 A受体 m RNA阳性 ;而 5 -HT4和 5 -HT7受体亚型 m RNAs阳性细胞在此二节中的百分比分别为 14 .9%、2 4.7%和 11.2 %、9.8%。各受体亚型 m RNA阳性细胞均以中、小型节细胞为主。在各神经节内均未观察到 5 -HT2 B、5 -HT2 C、5 -HT5 和 5 -HT6 受体 m RNA的表达。上述结果提示 5 -HT2 A、5 -HT3 、5 -HT4和 5 -HT7受体亚型在外周伤害性感受中可能发挥着重要的作用     

含Calbindin－D28K mRNA神经元在大鼠脊髓中的分布──原位杂交组织化学法观察

用原位杂交组织化学技术，对大鼠脊髓内含Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ＫｍＲＮＡ的神经元的分布状况进行了观察。发现含Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ＫｍＲＮＡ的神经元见于脊髓灰质的各层，但是，不同区域或核团中所含阳性神经元的数量和标记强度各不相同。其中含强阳性神经元的部位有：Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ层及前角外侧运动柱的内侧部；含中等阳性神经元的部位有：Ⅲ、Ⅷ层及中间带；有的区域仅含弱阳性神经元，如：Ⅵ层及中央区，而中间带外侧核及前角的大型运动神经元未见到阳性杂交信号。Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ＫｍＲＮＡ在大鼠脊髓内的区域特异性分布特点，提示其在神经系统的某些生理功能中可能有重要作用。     

日本猴脑内阿片μ-受体样免疫反应物质的分布:Ⅱ.颈、胸、腰、骶段脊髓及后根节(英)

通过应用识别大鼠阿片μ-受体（MOR）C末端30个氨基酸残基特异性位点的豚鼠抗体，本文对日本猴颈、胸、腰、骶段脊髓和背根节内MOR-样免疫反应物质的分布形式和特点进行了免疫组织化学研究。结果如下：强染色MOR－Li密集分布于脊髓吻尾全长的背角浅层，主要以Rexed第二层内侧部为主。在脊髓背角深层和中央导水管周围区域内也可见中到低等数量的MOR-Li标记。在脊髓背角浅层，MOR-Li广泛分布于Ⅰ、Ⅱ层内神经毯和神经元突起，但似乎只分布于第Ⅱ层神经元胞体。背角深层（Ⅳ－Ⅵ层）有些神经元的胞体和树突也有较强的MOR－Li染色。MOR－Li在背根入髓区和Lissauer's氏束中分布密集且染色强。在后根节，MOR－Li主要分布于中、小细胞，其中MOR－Li阳性小细胞约占65.71％（1018／1562），直径平均为29.50±0．11μm（17．31～34．88μm），中等细胞约占34．19％（534／1562），直径平均为39．04±0．14μm（24.01～49．86μm），而MOR－Li阳性的大细胞只占0．64％（10／1562），直径平均为59.00±2.35μm（51．09～71．39μm）。本结果揭示猴脊髓内阿片肽主要通过突触前和突触后两种方式发挥镇痛作用，除此之外，还可能通过作用于外周伤害性感受器部位的MOR发挥镇痛作用。