APP/PS1 转基因小鼠的甲状腺功能变化

 目的观察APP/PS1转基因小鼠甲状腺功能的动态变化并探讨AD与甲状腺功能的关系。方法6 月龄雌性APP/PS1
转基因鼠（ n=9）和野生型小鼠（ n=9）自由摄食和饮水,2 组小鼠分别于9,12,18 月龄时各取3 只处死,应用ELISA方法检测血
清TSH 和甲状腺激素（TT3、TT4、FT3、rT3）。结果（1）APP/PS1转基因小鼠与野生型小鼠相比血清TT3、FT3 水平均有降低,但
9 月龄时差异不显著（ P> 0.05）,12 月龄时差异显著（ P< 0.05）,18 月龄时差异更为显著（ P< 0.01）（2）APP/PS1转基因小鼠与
野生型小鼠相比血清TT4、rT3 均升高,但9月龄时差异不显著（ P> 0.05）,12 月龄时差异显著（ P< 0.05）,18 月龄时差异更加显
著（ P< 0.01）（3）各年龄段APP/PS1 转基因小鼠血清TSH 水平较野生型小鼠虽有所降低,但无统计学意义（ P> 0.05）。结论
APP/PS1 转基因小鼠在生长过程中伴随着甲状腺功能的改变,且逐渐加重。     

APP/PS1双转基因老年性痴呆小鼠早期病理和认知行为变化

【目的】探讨APP/PS1双转基因老年性痴呆(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠早期病理和行为学变化。【方法】选取5、7月龄的APP/PS1双转基因小鼠和非转基因小鼠,采用刚果红染色法和定量方法,并结合Morris水迷宫行为学测试,对其脑内淀粉样斑块积聚与学习记忆能力的月龄变化关系进行研究。【结果】(1)7月龄的双转基因组小鼠的空间辨别学习记忆能力与非转基因组小鼠比较差异有统计学意义(P<0.05);(2)APP/PS1双转基因组小鼠在5、7月龄时海马与脑皮质均观察到明显的橘红色斑块沉积,但非转基因组小鼠海马及脑皮质均未观察到淀粉样斑块沉积。【结论】7月龄APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆能力下降,APP/PS1双转基因小鼠大脑皮层和海马部位淀粉样斑块的早期出现随年龄依赖性增加。     

APP/PS1双转基因小鼠认知功能和实时步态行为相关性研究

目的初步探讨APP/PS1双转基因小鼠认知功能和实时步态行为学的改变的相关性。方法 3月龄APP/PS1转基因小鼠16只随机分成模型组和石杉碱甲片组,正常对照组选用同龄C57/BL6J小鼠14只。连续治疗150 d,Morris水迷宫(MWM)检测学习记忆能力,大小鼠步态分析仪(GAS-2)检测实时步态行为,并比较两种行为学的相关性。结果与正常对照相比,模型组小鼠有学习记忆能力的显著降低,逃避潜伏期均显著延长(P0.05),在目标象限停留时间、游泳路程显著降低(P0.05),第一次穿越平台的时间显著延长(P0.05),穿台次数显著减少(P0.05);在步态行为实验中,模型组小鼠平均步行速度显著降低(P0.05),平均步行周期、绝对值平均体转角和侧向移动均显著升高(P0.05),在一个步行周期中左后足(left foot,LF)、右后足(right foot,RF)支撑时相显著延长(P0.05),摆动时相显著缩短(P0.05),左前足(left hand,LH)、右前足(right hand,RH)、右后足推进指数均显著增加(P0.05),制动指数显著降低(P0.05)。石杉碱甲片能显著改善认知功能,并能在一定程度上纠正步态行为的变化。比较两种行为学的相关性,得出学习记忆能力与双前足的制动指数相关性较高(相关系数分别为-0.433、-0.379,P值分别为0.039、0.079),其他方面的相关性不大。结论 APP/PS1转基因小鼠在8月龄时有显著的学习记忆能力障碍和步态行为的改变,并且两种行为学存在一定的相关性。     

大麻素HU-210对APP/PS转基因小鼠学习记忆及脑内老年斑的影响

目的：研究大麻素HU-210对APP/PS转基因小鼠空间学习记忆能力和脑组织中老年斑表达变化的影响。方法：3.5月龄APP/PS转基因小鼠随机分为HU-210处理组和生理盐水对照组,每组10只,用大麻素HU-210[100 μg/（kg·次）]和等量生理盐水分别腹腔注射1个月。应用Morris水迷宫和恐惧实验检测各组小鼠学习记忆能力的变化;采用免疫组化染色以观察小鼠脑内老年斑的变化。结果：水迷宫实验显示,与对照组相比,HU-210处理组小鼠找到平台的潜伏期及搜索路程显著缩短;HU-210处理组小鼠穿越平台次数（5.40±1.52）明显高于对照组小鼠（1.60±1.14,P<0.01）;恐惧实验显示,电击后HU-210处理组小鼠出现Freeze次数（电击后即刻：38.30±15.16;电击后24 h：99.89±5.71）明显高于生理盐水对照组（电击后即刻：17.84±5.33;电击后24 h：56.00±4.78,P<0.01）。免疫组化显示,与对照组（3.90±2.51）相比,HU-210处理组小鼠脑内老年斑数量（9.70±5.67）明显减少（P<0.05）。结论：在老年斑形成初期使用大麻素可明显减少痴呆模型小鼠脑内老年斑的形成,从而改善痴呆模型小鼠的认知功能。     

APP/PS1转基因小鼠大脑内锌转运蛋白3的表达

目的研究锌转运蛋白3(ZnT-3)在APP/PS1转基因小鼠大脑皮质及海马内的分布和表达变化。方法应用免疫组织化学技术检测ZnT-3在APP/PS1转基因小鼠脑内的分布,并应用Western blot方法分析ZnT-3在大脑皮质及海马的表达水平。结果ZnT-3主要分布于APP/PS1转基因小鼠脑内的老年斑中,且主要定位于老年斑周围变性的神经元及其突起内;ZnT-3在APP/PS1转基因小鼠大脑皮质和海马的表达均明显高于野生型小鼠。结论ZnT-3在APP/PS1转基因小鼠大脑内的高表达以及在老年斑内的定位,提示ZnT-3可能在老年斑内锌离子的聚集过程中起着重要的调节作用,进而参与了APP/PS1转基因小鼠大脑内Aβ老年斑的形成。     

TRB3在APP/PS1转基因小鼠脑内的表达及其意义

目的 探讨内质网应激因子TRB3在不同月龄APP/PS1转基因小鼠脑内的表达情况,阐明TRB3与阿尔茨海默病(AD)病情进展的关系。 方法 将APP/PS1转基因小鼠分为3月龄WT组、3月龄APP/PS1组、7月龄WT组、7月龄APP/PS1组,每组各10只。分别以3月龄、7月龄野生型(WT)C57/BL6J小鼠为对照组,每组10只。采用Morris水迷宫实验检测小鼠行为学改变,采用免疫组织化学及Western blotting方法检测TRB3在小鼠脑内的表达。 结果 与同月龄WT组比较,3月龄APP/PS1组未出现明显行为学改变(P>0.05),而7月龄APP/PS1组学习记忆能力下降,差异有统计学意义(P<0.05);TRB3主要在大脑皮层表达,与同月龄WT组比较,TRB3在3月龄及7月龄APP/PS1组脑内的表达均明显增多(P<0.05),且7月龄APP/PS1组脑内TRB3的表达水平明显高于3月龄APP/PS1组(P<0.05)。 结论 TRB3在APP/PS1转基因小鼠脑内表达增多,且TRB3表达水平的增多可能与AD的病情进展有关。     

培哚普利通过调控脑锌代谢改善APP/PS1转基因小鼠认知功能

 目的 探讨培哚普利对APP/PS1转基因小鼠认知功能和大脑皮层锌、铁、锰、铜、镁、钙水平,以及锌转运体家族成员（ZnT1、ZnT2、ZnT3、ZnT4、ZnT5、ZnT6、ZnT7） mRNA表达水平的影响。方法 10只APP/PS1转基因小鼠随机分为对照组和培哚普利治疗组（各5只）。应用水迷宫实验检测小鼠认知功能;应用电感耦合等离子体质谱（inductively coupled plasma mass spectrometry,ICP-MS）检测小鼠大脑皮层6种金属微量元素的含量;应用real-time PCR检测小鼠大脑皮层锌转运体家族成员mRNA表达水平。结果 培哚普利降低了APP/PS1转基因小鼠逃避潜伏期,增加了小鼠穿越平台次数;培哚普利增加了APP/PS1转基因小鼠大脑皮层锌水平,而铁、锰、铜、镁、钙水平在培哚普利应用前后未见显著性差异;培哚普利降低了锌转运体家族成员中ZnT1的mRNA表达水平,而ZnT2、ZnT3、ZnT4、ZnT5、ZnT6、ZnT7 的表达水平在培哚普利应用前后未见显著性差异。结论 培哚普利可以通过下调大脑皮层ZnT1表达,调控脑锌代谢,进而改善APP/PS1转基因小鼠认知功能,提示调控脑内锌稳态是培哚普利改善阿尔茨海默病（Alzheimer's disease,AD）认知水平的重要机制之一。     

5月龄APP/PS1双转基因小鼠行为学及老年斑病理改变

目的 评价5月龄APP/PS1双转基因小鼠学习记忆功能及脑部病理改变。方法 5月龄APP/PS1（+/-）小鼠,采用Morris水迷宫实验评价空间学习记忆功能,免疫组织化学和刚果红染色观察淀粉样斑块沉积情况。结果 Morris水迷宫实验显示APP/PS1（+）小鼠逃避潜伏期明显长于APP/PS1（-）小鼠,表明5月龄APP/PS1（+）小鼠已经出现了空间学习记忆功能的损害。新物体识别实验中5月龄APP/PS1（+）小鼠对新物体的分辨指数无显著降低,免疫组化、刚果红染色显示5月龄APP/PS1（+）小鼠海马及皮质均出现斑块沉积。结论 5月龄APP/PS1双转基因小鼠出现空间学习记忆功能损害,小鼠脑内已经出现相应的病理改变。     

中药Ⅰ号方对APP/PS1双转基因模型小鼠APP代谢的影响

目的 研究中药 I号方对APP/PS1双转基因模型小鼠APP代谢的影响. 方法 将5月龄APP/PS1双转基因模型小鼠随机分为模型组(vehicle)、中药Ⅰ号方低剂量组(0.6 g/kg)、中剂量组(1.2 g/kg)和高剂量组(2.4 g/kg),并以同窝阴性小鼠作为正常对照组(wild-type, WT),每组16只,雌雄各半.给药小鼠每天灌胃一次,模型组和正常对照组分别给予等体积的双蒸水灌胃.给药四个月后,用免疫组化和Western blot检测淀粉样前体蛋白(APP)及其代谢产物和分解酶的变化.结果 Western blot结果显示,与模型组相比,治疗组低剂量、中剂量和高剂量给药组能显著降低APP分解酶(ADAM10和BACE1)(P<0.01)及APP的分解产物的量,如:β-CTF(C99)、α-CTF(C83)、 sAPPα、sAPPβ(P<0.01).结论 中药I号方通过影响APP的分解过程减少淀粉样蛋白(β-amyloid peptide,Aβ)的生成,减少脑内老年斑的沉积.     

早期APP/PS1转基因AD模型小鼠海马胆碱能神经元改变的体视学研究

目的 应用体视学方法定量研究APP/PS1双转基因AD模型小鼠海马内胆碱能神经元的早期改变情况.方法 Morris水迷宫检测10月龄雌性APP/PS1双转基因AD小鼠(APP/PS1组)和同月龄同窝生雌性野生型小鼠(Wild-type组)的空间学习记忆能力.运用现代体视学方法结合免疫组织化学方法精确定量小鼠海马各亚区的体积和胆碱能神经元的数量.结果 APP/PS1组小鼠定位航行实验中逃避潜伏期长于Wild-type组(P＜0.01).空间探索实验中,APP/PS1组小鼠穿越平台的次数及平台所在象限时间百分比均少于Wild-type组(P=0.007、0.041).APP/PS1组小鼠海马齿状回(dentate gyrus,DG)的体积较Wild-type组缩小(P =0.001),而APP/PS1组小鼠海马CA1、CA2/3区的体积较Wild-type组差异无统计学意义(P =0.089、0.059).APP/PS1组小鼠海马DG内胆碱能神经元的数量较Wild-type组显著减少(P=0.017),APP/PS1组小鼠海马CA1区、CA2/3区内胆碱能神经元较Wild-type组差异均无统计学意义(P =0.076、0.074).结论 早期APP/PS1双转基因AD小鼠海马DG内胆碱能神经元丢失,可能是AD早期出现空间学习记忆能力障碍的重要结构基础之一.     

链脲佐菌素对APP/PS1转基因小鼠学习记忆及JNK信号通路的影响

目的 观察链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)对APP/PS1转基因小鼠学习记忆和海马组织MKK4、JNK、c-Jun磷酸化水平的影响.方法 3月龄APP/PS1转基因小鼠腹腔内注射STZ,采用Morris水迷宫实验观测学习记忆功能,应用尼氏染色观察海马神经元细胞形态,应用免疫印迹法检测海马组织内MKK4、JNK和c-Jun的表达水平.结果 水迷宫隐蔽平台实验中,从第2天到第5天,给予STZ后APP/PS1转基因小鼠逃避潜伏期和目标路径均明显长于对照组(P＜0.05或P＜0.01);Nissl染色显示STZ组小鼠海马神经元损伤明显;与对照组比,STZ组海马组织中磷酸化JNK和c-Jun的表达水平明显增高,分别增高到217.78 ±23.49和189.27±17.80(P＜0.01).结论 STZ可使APP/PS1转基因小鼠学习记忆功能减退,神经元损伤,其机制可能与JNK信号转导通路有着密切的关系.     

Micro PET 观察姜黄素对9月龄AD小鼠脑葡萄糖代谢的影响

目的 通过氟18-脱氧葡萄糖Micro PET(18F-FDG Micro PET)影像技术观察姜黄素对9月龄AD小鼠的脑葡萄糖代谢影响。方法 随机挑选9月龄（3月龄小鼠,干预6个月）模型组、西药组和姜黄素大、中、小剂量组AD小鼠各3 只,以及同月龄C57BL/6J正常对照组小鼠3 只,通过吸入2% 异氟烷麻醉后,每例弹丸式从尾静脉注射放射性示踪剂18F-FDG约14. 8～16. 5 MBq,摄取1h后采集10 min Micro PET 图像。计算每组小鼠每克脑组织( 除小脑) 18F-FDG的摄取率并比较分析其差异。结果 姜黄素中剂量组小鼠和西药组小鼠每克脑组织18F-FDG的摄取率高于正常对照组和模型组。结论 姜黄素治疗后,9月龄AD模型小鼠脑18F-FDG的摄取有所改善,提示AD模型脑糖代谢所反映的脑功能得到改善,姜黄素发挥了神经保护作用。     

锌离子与锌转运体6在APP/PS1转基因小鼠小脑内的分布

 目的 研究游离锌离子和锌转运体6（zinc transporter 6,ZnT6）在APP/PS1转基因小鼠小脑内的分布。方法 应用浸入式金属自显影技术（AMG）和免疫组织化学染色标记游离锌离子、ZnT6和淀粉样前体蛋白（amyloid precursor protein,AYY）,通过免疫荧光染色和共聚焦激光扫描显微镜观察ZnT6和β-淀粉样蛋白（β-amyloid,Aβ）在老年斑内的定位,并分析锌离子、ZnT6与APP和Aβ分布的相关性。结果 游离锌离子、ZnT6和APP免疫阳性反应产物均定位于老年斑内,老年斑主要分布于小脑分子层,浦肯野细胞层和颗粒层分布较少;ZnT6和Aβ荧光双标的结果进一步证实两者共存于老年斑内。结论 APP/PS1转基因小鼠小脑Aβ老年斑内有大量的ZnT6蛋白表达,并聚集着大量的锌离子,提示锌离子可能参与小脑Aβ老年斑的形成,而ZnT6在老年斑内锌离子的聚集过程中起着重要的调节作用。