润肤止痒汤对小鼠慢性湿疹角质形成细胞凋亡及组织病理的影响

目的:探讨"润肤止痒汤"对小鼠慢性湿疹模型角质形成细胞凋亡及组织病理的影响。方法:将80只实验小鼠随机分为4组,每组20只,设为不造模组:正常对照组;造模组:空白对照组、中药治疗组、西药治疗组。造模组60只小鼠耳部应用2,4-二硝基氯苯丙酮溶液小剂量反复刺激制备接触性湿疹模型,中药治疗组:润肤止痒汤汤剂浓煎液,每次灌胃剂量为每只0.75 mg·d-1,日2次,疗程5 d。西药治疗组:盐酸西替利嗪片剂配成水溶液,灌胃剂量为每只0.025 mg·d-1,日1次,疗程5 d。空白对照组给予同等剂量生理盐水灌胃。用免疫组化方法观察各组Bcl-2及Bax蛋白表达情况。结果:小鼠耳部经2,4-二硝基氯苯丙酮溶液最后一次激发后24 h HE病理可见:表皮角化过度,颗粒层细胞轻度增生,棘层细胞增生,上皮角下延,基底层散在液化变性,真皮浅层轻度水肿,间质及血管周围见炎细胞浸润提示造模成功。Bcl-2及Bax蛋白空白对照组表达最明显,中药组与西药组表达低于空白对照组(P0.05),正常对照组表达低(P0.05)。结论:在慢性湿疹模型部位促凋亡蛋白大量表达,经中药灌胃治疗后,可降低凋亡通路中促凋亡蛋白表达,调节局部皮损免疫平衡,使局部皮损改善。     

常用治疗银屑病的中药对角质形成细胞、血管内皮细胞的影响的研究进展

银屑病是一种常见的慢性复发性炎症性皮肤病,以角质形成细胞过度增生、炎症细胞浸润和新生血管形成为主要组织病理改变,其病因不明,有多基因遗传背景,涉及到免疫、炎症、细胞增殖与凋亡、神经介质等多方面因素,在治疗上,到目前为止现代医学还不能对其根治,     

活血解毒方含药血清对银屑病角质形成细胞增殖及细胞周期的影响

目的观察活血解毒方对体外培养的银屑病角质形成细胞增殖及细胞周期的影响。方法根据血清药理学方法 ,用清洁级SD大鼠制备大、中、小剂量活血解毒方含药血清、地塞米松含药血清及空白血清,分别加入角质形成细胞培养体系中。培养48h后,用MTT法观察COLO-16细胞增殖情况;用流式细胞仪检测细胞周期分布。结果不同浓度活血解毒方明显抑制COLO-16角质形成细胞株的增殖,同时可改变细胞分裂周期各时相分布比例。结论中药活血解毒方通过抑制角质形成细胞的异常增殖对银屑病有治疗作用。     

祛银颗粒对角质形成细胞生长因子诱导的HaCaT细胞增殖及分泌TNF-α的影响

目的 探寻中药组方祛银颗粒治疗银屑病的作用机制.方法 体外培养HaCaT细胞,以10 ng/mL的KGF刺激HaCaT细胞增殖的方法建立银屑病的细胞模型.用祛银颗粒不同浓度含药血清干预细胞,倒置显微镜下观察药物作用后的细胞生长状态,ELISA法检测细胞分泌TNF-α的影响,流式细胞仪检测药物血清对细胞增殖、细胞周期的影响.结果 48 h祛银颗粒低、中、高剂量组药物与模型组比较,对细胞均有抑制作用（P＜0.05）;祛银颗粒中、高剂量组抑制作用与维A酸组差异无统计学意义（P＞0.05）.流式细胞仪检测显示：在细胞合成S期,祛银颗粒高剂量组同期细胞数量较模型组减少（P＜0.05）,与维A酸组相近（P＞0.05）.祛银颗粒高剂量组与模型组比较,分泌的TNF-a降低（P＜0.05）.结论 祛银颗粒含药血清具有抑制KGF诱导的HaCaT细胞增殖的作用,并可抑制细胞分泌INF-α,提示抑制表皮增殖和抑制细胞产生炎症因子可能是祛银颗粒发挥治疗银屑病的作用机制之一.     

愈银方含药血清对角质形成细胞增殖与凋亡的影响

目的：探讨愈银方对角质形成细胞株COLO-16增殖及凋亡的调节作用。方法：利用体外细胞培养技术、MTT法、流式细胞仪、荧光显微镜技术检测愈银方的大鼠含药血清对COLO-16细胞株增殖及凋亡的影响。结果：愈银方含药血清对COLO-16细胞株增殖的抑制作用与浓度呈一定的关系，浓度越高则抑制作用越强。含药血清的浓度为10%；20%；设相应的正常大鼠血清浓度为对照组，培养48h后，COLO-16细胞的凋亡率分别为12．93%、19．80%，正常对照组为3．71％、10．96%，两者相比差异显著。结论：抑制COLO-16细胞株的增殖及诱导其凋亡可能是愈银方治疗银屑病的机理之一。     

鸦胆子油乳对肺癌 A549 细胞凋亡及血管内皮生长因子分泌的影响

 目的 观察鸦胆子油对肺癌 A549 细胞凋亡和血管内皮生长因子分泌的影响,以探讨其治疗肺癌的作用机制。 方法 用不同浓度鸦胆子油乳（ 0.5 , 1.25 , 2.5 , 3.75 g·L^-1 ）与 A549 细胞共育不同时间（ 6 , 24 , 48 h ）,采用流式细胞仪（ Annexin V 双标法、 DNA 含量测定和 凋亡细胞 DNA 片段原位末端检测等方法）检测凋亡细胞百分比,采用定量 Sandwich 酶免疫技术（ ELISA ）观察细胞血管内皮生长因子（ VEGF ）分泌量。 结果 3 种检测方法均表明, 中、高浓度鸦胆子油乳（ 2.5 , 3.75 g·L^-1 ）作用 6 h 以上,具有显著的诱导 A549 细胞凋亡的作用。 Annexin V 双标法和 DNA 凝胶电泳结果表明, 1.25 g·L^-1 的鸦胆子油乳作用 24 ~ 48 h ,也能诱导 A549 细胞凋亡。 2.5 g · L^-1 鸦胆子油乳作用 48 h 能使 A549 细胞分泌 VEGF 显著减少。 结论 鸦胆子油乳通过诱导肿瘤细胞凋亡,减少肿瘤细胞分泌 VEGF 发挥其治疗肺癌的作用。     

姜黄素对Raji细胞增殖及VEGF表达的影响

目的：探讨抗血管生成药物姜黄素对人非霍奇金淋巴瘤（NHL）Raji细胞增殖及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法：不同浓度姜黄素（5μmol／L、10μmol／L、25μmol／L、50μmol／L）作用Raji细胞24h、48h、72h后,WST-1检测姜黄素对细胞增殖的影响;ELISA检测姜黄素对R@i细胞上清中VEGF含量的影响。结果：不同浓度姜黄素作用Raji细胞24h后,对照组上清液中VEGF浓度为（707．92±55．92）pg／ml;而10μmol／L、25μmol／L姜黄素处理组细胞上清液VEGF浓度分别为（369．73±14．22）pg／ml、（178．24±21．18）pg／ml,与对照组相比两者均显著性降低（P〈0．05,P〈0．01）。结论：姜黄素能够抑制Raji细胞分泌VEGF,其抑制作用存在浓度依赖性,提示姜黄素有抑制血管新生的作用,可达到抗NHL的目的。     

养血解毒方对银屑病角质形成细胞紧密连接的调节作用

目的:观察银屑病样小鼠皮损紧密连接蛋白中水闸蛋白(claduin-1,claudin-7),闭锁蛋白(occludin)的表达,明确养血解毒方对银屑病表皮通透屏障的修复作用,为养血解毒方治疗银屑病提供科学依据。方法:将C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组、甲氨喋呤组、养血解毒方组,制备甲氨喋呤溶液、养血解毒方水煎剂对应灌胃干预,同时小鼠背部剃毛后给予咪喹莫特涂抹诱导银屑病样皮损模型。每日拍照记录皮损形态并对严重程度指数(PASI)评分;水油测试笔检测皮损表皮含水量;苏木素-伊红(HE)染色观察其病理改变、测量表皮厚度;免疫荧光法检测增殖相关的核抗原(Ki67);免疫组化法检测表皮兜甲蛋白(loricrin),真皮中CD3^+T淋巴细胞浸润和紧密连接蛋白claduin-1,claudin-7,occludin的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测皮损中claudin-7,occludin的表达。模拟银屑病皮损微环境,建立白细胞介素-17(IL-17,1 mg·L^-1)刺激的角质形成细胞(Hacat)模型,制作养血组分、解毒组分、养血解毒方喷干粉进行干预。采用细胞增殖毒性检测试剂盒-8(CCK-8)法检测药物对Hacat细胞的毒性;细胞免疫荧光法检测药物对角质形成细胞claudin-1,claudin-7,occludin表达的干预作用。结果:与模型组比较,养血解毒方可显著减轻小鼠银屑病样皮损表现,降低PASI评分及皮损表皮厚度(P<0.01),增加皮损区表皮水分含量(P<0.01),减少表皮ki67,loricrin的异常表达和真皮CD3+T细胞浸润(P<0.01),并增加紧密连接蛋白claudin-1,claudin-7,occludin的表达(P<0.05),增加紧密连接结构的完整性;体外研究发现,与模型组比较,养血解毒方组和养血组分组明显升高紧密连接蛋白claudin-1,claudin-7,occludin的表达(P<0.05);与模型组比较,解毒组分组蛋白表达水平无统计学差异。结论:养血解毒方通过调节角质形成细胞间紧密连接的表达抑制其异常的增殖分化过程,进一步恢复破坏的表皮通透屏障,可能是其治疗银屑病的作用机制之一。其中养血解毒方的养血组分对调节紧密连接的修复起主要作用。     

法舒地尔对VEGF诱导肺动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖是肺动脉高压（PAH）中肺动脉重塑的一个重要因素.各种刺激均可促进PASMCs的移行和增殖,导致动脉壁增厚和PAH的形成[1].血管内皮生长因子（VEGF）可以促进PASMCs的增殖[2,3],在严重的PAH发病过程中,VEGF控制着毛细血管前动脉的重构[4].小G蛋白Rho及其效应物Rho激酶（ROCK）信号通路在各种细胞功能中,包括血管平滑肌细胞的收缩和增殖中都起着重要作用.     

养血止痒膏治疗血液透析皮肤瘙痒21例临床研究

目的：观察养血止痒膏对尿毒症维持性血透合并皮肤瘙痒患者的治疗效果。方法：将41例病人随机分为治疗组和对照组。治疗组给予自拟养血止痒膏外擦。对照组外擦强生牌婴儿润肤乳。疗程共2个月。结果：治疗组瘙痒积分降低明显,优于对照组。两组差异明显,有统计学意义。结论：养血止痒膏对尿毒症维持性血透合并皮肤瘙痒症患者有显著疗效。     

丹槐银屑浓缩丸对银屑病模型兔血管内皮生长因子及其受体表达的影响

目的：观察丹槐银屑浓缩丸对日本大耳白兔实验性银屑病血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor, VEGF)及其受体表达的影响。方法将42只健康日本大耳白兔按随机数字表法分为空白对照组,模型组,阿维A组,丹槐银屑浓缩丸小、中、大剂量组,除空白对照组外,其余各组均于兔耳背侧涂5％普萘洛尔溶液4周造模,空白对照组耳背侧涂生理盐水。造模成功后1 d,阿维A组灌胃1%阿维A胶囊溶液;丹槐银屑浓缩丸小、中、大剂量组分别灌胃丹槐银屑浓缩丸混悬液20、40、80 mg/kg;空白对照组和模型组灌胃等体积生理盐水,各组均给药1次/d,连续给药4周。采用ELISA法测定给药前后耳病变组织VEGF及其受体1(FLT-1)、受体2(KDR)蛋白表达,采用PCR检测给药前后耳病变组织VEGF mRNA表达,测定耳病变组织真皮乳头血管密度(microvessel density, MVD)、外周血T淋巴细胞增殖。结果与模型组比较,丹槐银屑浓缩丸中、大剂量组 VEGF 蛋白[(114.43±9.52)ng/ml、(109.65±9.15)ng/ml比(179.90±11.30)ng/ml]、VEGF mRNA[(0.83±0.07)、(0.80±0.06)比(2.74±0.15)]、FLT-1[(4.54±0.26)ng/ml、(4.16±0.24)ng/ml 比(6.92±0.38)ng/ml]、KDR[(2.48±0.16)ng/ml、(2.51±0.19)ng/ml比(6.79±0.27)ng/ml]、MVD[(10.12±1.97)、(9.83±1.12)比(16.45±2.05)]表达及外周血T淋巴细胞增殖[(87.35±6.29)%、(86.21±6.42)%比(123.74±9.18)%]均明显降低(P＜0.05)。结论丹槐银屑浓缩丸可降低VEGF过度表达,阻断VEGF与其受体结合,抑制病变组织皮下血管新生、重建,降低真皮乳头微血管的异常增生,抑制T细胞增殖。     

丹参多酚酸盐对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及血管内皮生长因子表达的影响

目的观察中药丹参多酚酸盐对SD大鼠骨髓间充质干细胞的增殖及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,以探讨其对促骨折愈合的可能机制。方法将0.5 mg/ml浓度丹参多酚酸盐与大鼠骨髓间充质干细胞共培养,对照组为无药物单位培养的大鼠骨髓间充质干细胞。培养48小时镜下观察细胞情况,1、3、5、7天行MTT检测细胞增殖情况。行实时荧光定量PCR检测方法,对培养7天的两组细胞的VEGF mRNA水平进行检测分析。结果共培养48小时后骨髓间充质干细胞生长密集程度明显优于对照组;MTT检测也显示实验组细胞增殖情况优于对照组;实验组VEGF mRNA表达高于对照组。结论丹参多酚酸盐能促大鼠骨髓间充质干细胞增殖,并提高其VEGF的表达。可能是其促骨折愈合的作用机制之一。     

解毒散结方联合化疗治疗晚期胃癌疗效及对患者血管内皮生长因子和受体的影响

目的:探讨解毒散结方联合化疗对晚期胃癌患者疗效及对血清血管内皮生长因子-A(VEGF-A)、血管内皮生长因子-D(VEGF-D)、血管内皮生长因子受体-1(VEGFR-1)的影响。方法:选取102例晚期胃癌患者为研究对象,以随机数字表法分为对照组(替吉奥联合奥沙利铂化疗)和观察组(对照组基础上联合解毒散结方治疗),每组均为51例,两组均治疗12周。观察两组临床疗效、治疗前后中医症候评分、血清VEGF-A、VEGF-D、VEGFR-1水平以及治疗期间不良反应发生情况。结果:治疗12周后两组疗效等级分布比较差异显著(P<0.05),且观察组的总有效率高于对照组(P<0.05); 治疗12周后两组患者中医症候评分均降低(P<0.05),且观察组更低(P<0.05); 治疗12周后,两组血清VEGF-A、VEGFR-1水平均降低(P<0.05),两组血清VEGF-D水平均升高(P<0.05),且观察组血清VEGF-A、VEGFR-1水平更低(P<0.05),观察组血清VEGF-D水平更高(P<0.05); 两组不良反应发生率相近(P>0.05)。结论:解毒散结方联合替吉奥联合奥沙利铂化疗用于治疗脾胃虚弱、瘀毒蕴结证晚期胃癌患者能够改善临床症状及血管内皮生长因子水平,疗效显著。     

卷柏总黄酮及穗花杉双黄酮对人脐静脉内皮细胞增殖及VEGF蛋白表达的影响

 目的 观察卷柏总黄酮、穗花杉双黄酮对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖及血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达的影响。方法 采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度卷柏总黄酮及穗花杉双黄酮对HUVEC细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期;Western blot检测VEGF蛋白的表达。结果 不同质量浓度的卷柏总黄酮（1、5、10、15、20 μg·mL-1）和穗花杉双黄酮（0.3,1,2,4,5 μg·mL-1）可以剂量依赖地促进HUVEC细胞增殖,其中卷柏总黄酮10 μg·mL-1、穗花杉双黄酮1 μg·mL-1在36 h时显著促进细胞增殖,提高S期细胞比例,VEGF蛋白表达明显升高。结论 细胞实验结果提示卷柏中黄酮类物质可能具有促血管新生的作用。     

Total saponins of Panax notoginseng enhance VEGF and relative receptors signals and promote angiogenesis derived from rat bone marrow mesenchymal stem cells

Ethnopharmacological relevance

Total saponins of Panax notoginseng (tPNS), main constituents extracted from Panax Notoginseng, a highly valued traditional Chinese medicine, has been shown to increase protein expression and the secretion of vascular endothelial growth factor (VEGF) in human umbilical vein endothelial cells.

Aims of the study

The effects of tPNS on angiogenesis were studied in rat bone marrow mesenchymal stem cells (rBMSCs).

Materials and methods

rBMSCs were stimulated by tPNS of 48 h. The mRNA expression levels of VEGF-A, Flt-1 and Kdr in rBMSCs were determined by quantitative real time PCR (qRT-PCR). rBMSCs were induced to differentiate into endothelial-like cells and the effects of tPNS on the angiogenesis ability of rBMSCs and rBMSCs after endothelial differentiation were assayed by a Matrigel model in vivo and in vitro.

Results

tPNS (100 μg/ml) significantly enhanced the mRNA expression level of VEGF-A and Kdr compared to the control group, while they had no obvious effect on the expression of Flt-1. tPNS (1 μg/ml and 100 μg/ml) significantly increased capillary network forming of rBMSCs after endothelial differentiation in Matrigel in vitro. tPNS (50 μg/kg, 100 μg/kg and 150 μg/kg) also significantly increased angiogenesis induced by the combination with implantation of rBMSCs and Matrigel in vivo.

Conclusion

tPNS up-regulate VEGF-A and Kdr expression, and promote angiogenesis in rat bone marrow mesenchymal stem cells.     

电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮层微血管超微结构及血管内皮生长因子表达的影响

目的:探讨电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮层的保护作用。方法:SD大鼠随机分为正常组(n=8)、假手术组(n=8)、模型组(n=32)、电针组(n=32),后两组再各分为再灌注后1d、2d、4d、8d4个亚组,每组8只大鼠。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞模型。电针组于脑缺血0.5h再灌注1h后每天行1次电针治疗,取"百会"水沟"足三里"穴。透射电子显微镜下观察各组大鼠右侧大脑皮层微血管内皮的超微结构,逆转录酶-聚合酶链反应法检测各组大鼠右侧大脑皮层血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达。结果:模型组大鼠的大脑皮层微血管超微结构损害明显,缺血侧大脑皮层VEGF mRNA表达与正常组、假手术组比较明显升高(P<0.05,P<0.01);电针组大脑皮层微血管超微结构明显改善,大脑皮层VEGF mRNA表达水平与相应时相的模型组相比均明显增强(P<0.01)。结论:脑缺血再灌注促使缺血脑区微血管内皮细胞VEGF mRNA合成;电针对脑缺血再灌注大鼠大脑皮层微血管的超微结构形态学损伤具有明显的保护作用,电针治疗可进一步促进缺血脑区微血管内皮细胞VEGF mRNA的表达并调控血管新生,帮助脑内微血管的功能重建是针刺发挥脑保护作用的途径之一。     

化瘀通络灸对血管性痴呆患者认知功能及外周血BDNF、VEGF水平的影响

目的:通过化瘀通络灸对血管性痴呆(VD)患者的临床干预,观察其对认知功能的影响并探讨认知功能的改变与脑源性神经营养因子(BDNF)及血管内皮生长因子(VEGF)之间的相关性。方法:严格按照纳入与排除标准筛选30例VD患者,分为化瘀通络灸组15例与西药组15例。化瘀通络灸组予艾灸治疗,3次/周;西药组予盐酸多奈哌齐口服,5 mg/晚;两组均口服尼莫地平为基础治疗,30 mg,3次/d两组均治疗12周。观察两组治疗前及12周后MMSE、ADL量表积分及血清BDNF、VEGF水平的变化。结果:化瘀通络灸组治疗后MMSE、ADL量表评分、血清BDNF、VEGF水平均较治疗前显著升高(P<0.05);且治疗后各量表积分及血清BDNF、VEGF水平与西药组比较均显著增高(P<0.01)。化瘀通络灸组总有效率93.3%(14/15),西药组总有效率53.3%(8/15),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:化瘀通络灸是一种有效的治疗方法,可能通过增加VEGF、BDNF的表达,保护受损的血管及神经元,促进新神经元的形成,从而改善VD患者的认知功能与日常生活能力,为临床诊断和治疗VD提供参考。