厌氧短棒菌苗对环磷酰胺免疫抑制作用的影响

本文研究了厌氧短棒菌苗(CP)对环磷酰胺(Cy)免疫抑制作用的影响。研究结果表明:CP对小鼠肝脾单核巨噬细胞功能和体液免疫具有显著促进作用,并能对抗由Cy造成的小鼠脾重减轻,脾有核细胞数减少和抗体生成抑制等作用。腹腔注射CP可对抗Cy产生的腹腔巨噬细胞(Mφ)吞噬功能抑制,但CP可加剧Cy减轻胸腺重量。     

细胞外半胱氨酸/胱氨酸氧化还原电位对NAFLD肝细胞线粒体功能的影响

目的:研究细胞外半胱氨酸/胱氨酸氧化还原电位(EhCys/Cy SS)对非酒精性脂肪肝(NAFLD)肝细胞线粒体功能的影响。方法:用EhCys/Cy SS分别为0 m V(氧化)、-80 m V(正常)和-150 m V(还原)的氧化还原培养基培养肝细胞株LO2并采用油酸诱导细胞建立NAFLD模型。荧光探针DCFH-DA和Mito SOX分别检测细胞整体水平和线粒体活性氧簇(ROS)生成,使用apocynin(NADPH氧化酶抑制剂)和Mito Q10(靶向线粒体抗氧化剂)、rotenone(线粒体呼吸链复合体I抑制剂)和antimycin A(线粒体呼吸链复合体Ⅲ抑制剂)作用细胞检测线粒体复合体活性从而探究ROS的来源,JC-1检测细胞线粒体膜电位。结果:油酸诱导的NAFLD细胞模型使肝细胞内ROS增多,线粒体膜电位下降;氧化的EhCys/Cy SS加剧了NAFLD肝细胞ROS的生成以及线粒体膜电位的下降,而还原的EhCys/Cy SS能清除ROS并逆转线粒体膜电位的下降。线粒体ROS清除剂Mito Q10能显著地减少氧化的EhCys/Cy SS所增加的ROS,而apocynin效果不明显。Rotenone作用于细胞后,ROS的增长率与细胞外EhCys/Cy SS有关,氧化状态下ROS增长率最小且复合体I活性减弱,即氧化的EhCys/Cy SS能通过抑制线粒体复合体I增加ROS的生成。结论:氧化的EhCys/Cy SS能通过抑制线粒体复合体I,从而加剧NAFLD肝细胞ROS的生成,并使线粒体膜电位进一步下降,而还原的EhCys/Cy SS能减少高脂所致ROS生成并减轻线粒体损伤。     

JC病毒样颗粒可直接转运进入细胞核

目的探讨JC病毒(JCV)病毒样颗粒(VLP)是否可以直接转运进入细胞核。方法心用JCV主要外壳蛋白VP1体外表达、重组VIP，在其表面标记异硫氰基荧光素(FTTC)，同时在其内部包裹荧光染料Cy3，感染培养的HeLa细胞和SVG细胞，荧光显微镜观察VLP入核转运。结果HeLa和SVG细胞感染包裹Cy3的FTTC-VLP时，FTTC与Cy3同时出现于细胞核内相同部位；而感染FTTC—VP1与Cy3混合物时，FTTC虽可在细胞核内检测到，但Cy3信号几乎消失。包裹Cy3的VIP用SDSPAGE展开，荧光显像后行考马斯亮蓝(CBB)染色，发现Cy3和VLP移行至不同部位，证明Cy3不能与VP1结合，提示VLP以完整的颗粒形式转运进入细胞核。应用包裹外源性DNA的VLP感染培养的HeLa和SVG细胞，发现包裹的DNA在细胞浆和细胞核内均可检测到，提示JCV入核过程与VIP相同。结论VLP可以不经裂解直接转运进入细胞核，JCV入核转运可能与VLP相同。     

应用基因芯片研究As2O3诱导K562细胞前后差异表达基因

目的研究三氧化二砷(As2O3)处理K562细胞前后,基因表达的变化。方法提取As2O3作用K562细胞前后的总RNA,逆转录成cDNA并用Cy3标记对照组,Cy5标记处理组,与自制的包含162个cDNA片段的K562芯片杂交。结果K562细胞经As2O3作用后,162个基因片段的表达都有所降低,其中25个基因片段的表达降低较为显著(Cy5/Cy3<0.5)。这些表达下调的基因片段包括转导因子、代谢酶、信号通路蛋白、激酶等,有6个差异表达基因与细胞的凋亡通路密切相关。As2O3可能通过抑制胰岛素样生长因子的功能,诱导细胞凋亡。结论应用自制的基因芯片筛选到了As2O3诱导K562细胞前后差异表达的基因,主要与细胞凋亡密切相关。     

促吞噬肽和胸腺五肽对小鼠单核吞噬细胞功能的影响

研究了人工合成的内源性活性肽促吞噬肽(Tuf)和胸腺五肽(TP5)对吞噬细胞功能的刺激作用。Tuf刺激小鼠腹腔巨噬细胞(PMφ)和血清内溶菌酶(LSZ)及PMφ内酸性磷酸酶(ACP)活力升高,并呈剂量依赖关系;单次皮下注射给药时,血内LSZ水平升高,峰时在6天左右;不完全福氏佐剂(FIA)延缓并增强血内LSZ的升高作用。在环磷酰胺(Cy)免疫抑制小鼠模型,TP5使PMφ内Cy激活的酶活性进一步增高,使Cy抑制的脾LSZ活性恢复正常,提示TP5兼有激活吞噬细胞功能;又有恢复细胞数目的作用。     

蝉拟青霉多糖免疫调节和抗肿瘤活性的实验研究

目的：研究蝉拟青霉总多糖(PcPSt)及其组分PcPSAc的免疫调节和抗肿瘤活性。方法：将实验动物分为5组：正常对照组、肿瘤对照组、PcPSt组、环磷酰胺（Cy）组和PcPSt + Cy组，除正常对照组外其余各组均复制荷瘤小鼠模型，每日分别向5组小鼠腹腔注射生理盐水（NS）、NS、PcPSt、Cy和PcPSt+Cy，10 d后，观察各组白细胞、脾指数、瘤重和抑瘤率等指标的变化。以cell counting kit 8（CCK-8）为指标，以脂多糖（LPS）为阳性对照，观察PcPSAc对体外培养的小鼠脾细胞增殖活性影响。以LPS为阳性对照，观察不同浓度PcPSAc刺激体外培养小鼠腹腔巨噬细胞（PMΦ）产生一氧化氮（NO）的作用。结果： PcPSt能增加荷瘤小鼠白细胞数量，缓解Cy所致荷瘤小鼠白细胞数的降低，提高荷瘤小鼠的脾指数，联用小剂量Cy时明显增强其抑制肿瘤作用。PcPSAc在600 mg/L和300 mg/L浓度时能提高体外培养小鼠脾细胞的增殖活性。PcPSAc在15-300 mg/L浓度范围内均能刺激体外培养小鼠PMΦ产生NO，其中以300 mg/L PcPSAc作用最强。结论：体内试验和体外试验表明蝉拟青霉多糖具有促进免疫功能和抗肿瘤的作用。     

羧甲基淀粉对小鼠产生抗体和免疫器官的影响

本实验研究了国产羧甲基淀粉(CMS)对小鼠产生 IgE及 IgM抗体和对小鼠胸腺及脾脏重量的影响,结果证明,无论给予或不给予小剂量环磷酰胺(Cy),CMS均能显著或非常显著地抑制小鼠体内诱生抗绵羊红细胞(SRBC)的 IgM直接空斑形成细胞(PFC)数及显著降低小鼠产生抗 SRBC的凝集抗体效价;卵清蛋白致敏的小鼠如加注 Cy能促进IgE产生,但若使用CMS,即使给 Cy仍能非常显著地抑制抗卵清蛋白的 IgE产生。单用CMS能显著增高胸腺的重量,但对脾脏重量无明显影响。机理可能与该药能促进胸腺发育而产生或激活较多的T抑制细胞有关,提示 CMS可能具有免疫调节效应。     

参芪扶正注射液促进环磷酰胺处理小鼠肠道相关淋巴组织B细胞数量的恢复

目的考察参芪扶正注射液(SQFZ)对环磷酰胺(Cy)处理后小鼠肠道相关淋巴组织(GALT)B细胞数量恢复的影响。方法将BALB/c小鼠随机分为正常对照组、Cy组和SQFZ组。Cy组和SQFZ组小鼠均腹腔注射Cy(100 mg/kg),对照组给予等量生理盐水;24 h后,SQFZ组小鼠灌服SQFZ 1 m L/只,其余2组给予等量的生理盐水,每天灌胃1次连续10 d;每天记录小鼠体质量。给药第10天处死小鼠,测定胸腺指数和脾指数;流式细胞术检测肠系膜淋巴结(MLN)和Peyer集合淋巴结(PP)淋巴细胞中B细胞比例及股骨骨髓细胞周期。体外实验中,小鼠淋巴细胞经SQFZ处理后,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测B细胞表达CD86分子水平;羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记法检测B细胞增殖。结果 SQFZ减少Cy处理小鼠体质量的下降,促进胸腺指数、脾指数、MLN和PP中B细胞数量恢复,但未见明显改善骨髓抑制状态。体外实验结果表明SQFZ可以增加小鼠淋巴细胞活性,提高小鼠B细胞活化和增殖比例。结论 SQFZ促进Cy处理后小鼠GALT中B细胞数量恢复,可能通过促进B细胞增殖而发挥作用。     

利用量子点免疫荧光双标法在石蜡包埋组织中进行抗原的检测

在组织切片中利用免疫荧光标记抗原是一种广泛使用的方法.在大多数研究中,使用的荧光染料是一些有机分子如F1TC、TBITC、Cy3等.     

应用环孢素(Cyclosporin A)建立EBV转化的永久人类淋巴母细胞系

人类细胞遗传学研究提示科学的进步取决于实验方法的改进,真正的临床细胞遗传学开端是以淋巴细胞培养技术为标志的,但是由于这种细胞生活周期有限,因此需反复采血进行检查。当病人由于某些原因不能继续采血时,这种细胞培养方法就不适宜了。最近,采用了一种简便的常规研究方法,即利用EB病毒(EBV)转化B淋巴细胞,并且加入环孢素(cyclosporin A,Cy A)可有效地促进EBV转化的B淋巴细胞系生长,这样就可以建成永久的淋巴母细胞系(LCL)。实验证明,利用Cy A建立淋巴母细胞系成功率达95～100%,并且同     

中药免疫调节剂对小鼠细胞免疫功能的影响

目的探讨中药免疫调节剂对正常小鼠及环磷酰胺(Cy)所致免疫抑制小鼠细胞免疫功能的影响。方法以Cy诱导建立免疫抑制小鼠模型,给正常小鼠和免疫抑制小鼠饮服中药及生理盐水,采用MTT法检测淋巴细胞的增殖反应情况。结果试验各组小鼠脾细胞在48h培养时间内淋巴细胞转化率与各组含药血清加入到正常小鼠脾细胞反应体系中,在相同培养时间内的淋巴细胞转化率呈高度正相关。表现为在机体正常条件下,两个中药组与正常组之间差异无统计学意义(P>0.05),但均高于Cy组(P<0.05);在免疫抑制条件下,两个中药组明显高于正常对照组和Cy组(P<0.05),且中药免疫调节剂组优于玉屏风组(P<0.05);另外,50mL/L浓度的含药血清优于100mL/L浓度的含药血清(P<0.05)。结论该中药免疫调节剂能显著促进免疫抑制小鼠淋巴细胞的转化,而对正常小鼠作用不明显。     

Bu/Cy预处理异基因造血干细胞移植病人肝静脉闭塞病的预防

目的 研究Bu/Cy预处理异基因造血干细胞移植（Allo-HSCT）病人肝静脉闭塞病（VOD）的发生。方法 10例Bu/Cy预处理的Allo-HSCT病人，MTX/CsA预防急性移植物抗宿主病。阿波莫斯10ml和前列素E1（PGE1）10μg静脉输注（-7d至＋28d）预防VOD。结果 本组病人仅1例发生VOD；移植前后病人ALT和TBIL无差异（P〉0．05）。结果 前列素E1与阿波莫斯的联合应用可预防VOD的发生。     

Bu/Cy预处理异基因造血干细胞移植病人肝静脉闭塞病的预防

目的研究Bu/Cy预处理异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)病人肝静脉闭塞病(VOD)的发生.方法 10例Bu/Cy预处理的Allo-HSCT病人,MTX/CsA预防急性移植物抗宿主病,阿波莫斯10ml和前列素E1(PGE1)10μg静脉输注(-7d至+28d)预防VOD.结果本组病人仅1例发生VOD;移植前后病人ALT和TBIL无差异(p>0.05).结果前列素E1与阿波莫斯的联合应用可预防VOD的发生.     

D-半乳糖导致小鼠海马基因表达谱变化

本实验采用cDNA芯片研究D-半乳糖皮下注射小鼠海马的基因表达变化。小鼠皮下注射D-半乳糖[50m∥(kg．d)]60d造模，Morris水迷宫测试小鼠行为，分别提取模型组和对照组海马组织总RNA，掺入荧光分子Cy3和Cy5，经逆转录合成cDNA荧光探针与4000点小鼠cDNA基因芯片杂交。结果显示，在4000条待研究的基因中，两组小鼠海马间存在2倍表达差异的有76条，其中上调26条，下调50条。经分析，模型组基因表达谱与老年性痴呆(AD)相关基因表达谱在氧应激、能量代谢相关基因等方面有相似之处。提示D-半乳糖小鼠模型有可能作为拟AD病理模型。     

伤寒减毒活疫苗Ty21a免疫前后小鼠肠细胞差异表达的基因

以基因表达谱芯片对Ty2 1a免疫前后小鼠肠细胞 (包括肠粘膜上皮细胞和肠上皮间淋巴细胞 )基因表达的差异性进行研究比较。将 490条经抑制消减杂交法筛选出的与小鼠Ty2 1a免疫相关的cDNA制备成表达谱芯片 ;利用免疫前后小鼠肠细胞的mRNA通过逆转录方法 ,将Cy3和Cy5两种荧光分别标记到两种组织的cDNA上 ,制备成cDNA探针 ,并与表达谱芯片进行杂交及扫描 ,单点重复 2次实验 ,通过计算机数据处理判定基因是否在上述两种细胞群中有表达差异。筛选出差异表达基因共 98条 ,其中 92条为表达上调基因 ,6条为表达降低基因。提示 ,基因表达谱芯片技术是高通量进行基因表达模式研究的方法 ,可同时定量研究大量的基因表达水平 ,从而鉴定可能参与免疫的基因。     

第三代测序技术简介

Heliscope单分子测序技术与SMRT技术都是基于边合成边测序的思想。Heliscope单分子测序仪,将待测序列打断成小片段并在3′末端加上Poly(A),在另一端加上Cy3荧光标记。然后与表面带有寡聚Poly(T)的平板杂交。再加入DNA聚合酶和Cy5荧光标记的dNTP进行DNA合成反应,每轮加一种dNTP。洗脱后检测,用荧光信号判断反应位置碱基。用化学试剂去掉荧光标记,进行下一轮反     

应用基因芯片技术对Graves病免疫相关基因的研究

目的 :应用基因芯片技术研究Graves病 (GD)和正常成人甲状腺组织免疫相关基因的差异表达。方法 :分别用Cy5和Cy3两种不同的荧光染料通过逆转录反应将GD组和对照组甲状腺组织的mRNA分别标记成探针 ,并与载有一组靶基因的基因表达谱芯片进行杂交。通过扫描荧光强度 ,计算机软件分析 ,寻找两组差异表达基因。结果 :GD组和正常对照组之间共筛选出80条差异表达基因 ,其中表达增加的基因有 31条 (2 0倍以上 ) ,表达降低的基因有 4 9条 (0 5倍以下 )。结论 :基因表达谱芯片筛选GD与正常成人甲状腺组织差异表达基因具有样品用量少、高速度、…     

应用基因芯片技术对甲状腺癌基因的研究

目的 :应用基因芯片技术研究甲状腺乳头状癌 (PTC)和正常成人甲状腺组织基因的差异表达。方法 :分别用Cy5和Cy3两种不同的荧光染料通过逆转录反应将PTC组和对照组甲状腺组织的mRNA分别标记成探针 ,并与载有一组靶基因的基因表达谱芯片进行杂交。通过扫描荧光强度 ,计算机软件分析 ,寻找两组差异表达基因。结果 :PTC组和正常对照组之间共筛选出 6 5条差异表达基因 ,其中表达增加的基因有 4 8条 (2 0倍以上 ) ,表达降低的基因有 17条 (0 5倍以下 )。结论 :基因表达谱芯片筛选PTC与正常成人甲状腺组织差异表达基因具有样品用量少、高…     

基因芯片检测人肺鳞癌和肺腺癌基因表达的异同

目的用基因芯片技术检测肺鳞癌和肺腺癌基因表达的异同。方法提取人肺鳞癌和肺腺癌组织及正常肺组织的RNA,分别用Cy5-dCTP或Cy3-dCTP标记,再与4096点基因芯片杂交,检测肺鳞癌和肺腺癌组织基因表达的异同。结果肺鳞癌和肺腺癌表达共同上调的基因17条,共同下调的基因19条;肺鳞癌表达显著高于肺腺癌的基因20条,显著低于肺腺癌的基因14条。结论多基因参与肺癌发病,基因芯片技术是肺癌基因表达检测的有效方法。     

引物标记与掺入标记在HBV基因多态性芯片检测中应用的研究

目的 研究引物标记与掺入标记在乙型肝炎病毒（HBV）基因多态性芯片检测中的应用。方法 用掺入标记或引物标记荧光分子Cy5，扩增HBV P区、前C／C区，制备含荧光分子Cy5的目的片段后，分别与HBV基因多态性芯片杂交、扫描并分析结果。结果 掺入标记法信号强度略高于引物标记法，但非特异信号强度也高，两法检测42份乙型肝炎患者血清，结果完全一致，重复性均较好，批内CV15％－20％，引物标记法用于检测HBV基因多态性灵敏度达10^4 copies/ml。结论 引物标记法信号强度虽略低于掺入标记法，但检测灵敏度、特异性仍满足临床要求。