兴奋性氨基酸Ca~(2 )在短暂性脑缺血后海马DND发生机制中的作用

本实验用氨基酸自动分析技术测定脑缺血10分钟时背侧海马氨基酸含量;通过结扎沙土鼠双侧颈总动脉10分钟再灌流7天,造成海马迟发性神经元坏死(delayed neuronal death;DND)模型,以计数海马CA_1区神经元密度作为指标,观察谷氨酸钠和氯胺酮对海马DND的影响;检测背侧海马组织Ca~(2 )含量,观察氯胺酮对背侧海马Ca~(2 )含量的影响。结果表明短暂性脑缺血时谷氨酸和天门冬氨酸含量显著增加(P<0.05);谷氨酸钠能显著降低海马CA_1区神经元密度(P<0.01);氯胺酮能显著提高海马CA_1区神经元密度(P<0.01);再灌流2天后背侧海马组织Ca~(2 )增加(P<0.05),氯胺酮能阻止其增加(P>0.05)。本实验结果均直接或间接提示兴奋性氨基酸和Ca~(2 )在短暂性脑缺血后海马DND发生机制中起着重要作用,Ca~(2 )超载是神经元坏死的最后共同通路。     

短暂性脑缺血后海马神经元损伤(DND)的实验研究

本实验通过夹闭沙土鼠双侧颈总动脉20分钟,开夹再灌流7天内,动态观察背侧海马组织的形态学变化,Ca~(2 )、MDA含量的变化;及用海马CA_1区神经元密度作指标,观测Nimodipine(1mg/kg,ip)、SOD(9000     

迟发性神经元损伤发生中与自由基的作用机制及防治

本文用沙土鼠制作迟发性神经元损伤动物模型。从自由基代谢角度观察了动物脑6个分区5种生化指标在缺血前后7个时相的变化情况。结果表明,海马CA_1区有其独特变化规律,突出地表现为:在短时脑缺血后1—96小时的重灌流过程中,自由基含量呈持续性升高,线粒体中的锰超氧化物歧化酶则呈进行性降低,铜锌超氧化物歧化酶和脂质过氧化物含量的变化则都具有波动性。在除CA_2区外的其余部分脑组织中则没有上述这些变化。本实验的结果表明:自由基代谢紊乱是迟发性神元经损伤发生机理中的关键环节。经进一步研究发现,Aniacetam、豆腐果甙和尼卡地平对这种自由基代谢紊乱都有不同程度的改善作用。     

食欲素A促进短暂性全脑缺血大鼠的海马CA1区谷氨酸摄取并抑制迟发性神经元死亡

目的探讨食欲素A(OX-A)对短暂性全脑缺血(tGCI)大鼠的海马CA1区胶质细胞谷氨酸转运体-1(GLT-1)的表达与功能以及迟发性神经元死亡(DND)的影响及机制。方法将大鼠分为假手术(sham)组、模型(model)组、OX-A组和OX-A+LY294002组。用[~3H]-谷氨酸标记法检测海马CA1区GLT-1的结合能力和对谷氨酸的摄取能力;用谷氨酸定量试剂盒检测海马CA1区组织中谷氨酸含量;用Nissol、NeuN和Fluro-Jade C染色法观察海马CA1区神经元病理改变;用Western blot检测海马CA1区组织中GLT-1、p-PI3K和p-AKT的表达。结果 OX-A能促进tGCI大鼠海马CA1区的GLT-1的结合能力和GLT-1对谷氨酸摄取能力、增加谷氨酸含量、GLT-1表达和PI3K/AKT信号活性并抑制DND(P0.05);而LY294002能减弱OX-A的上述治疗效应(P0.05)。结论 OX-A能通过增强PI3K/AKT信号活性来增加tGCI大鼠海马CA1区GLT-1的表达与功能并减轻DND。     

全脑缺血早期大鼠海马各区域小白蛋白免疫反应阳性中间神经元的不同时相变化的定量分析

近十几年来,缺血性脑损伤的细胞分子机制已成为神经科学界的重要研究内容之一。本实验用免疫组织化学定量分析方法对四管阻塞造成的全脑缺血20min后再灌流0～24h的大鼠海马小白蛋白中间神经元的变化进行了观察。结果显示：再灌流0～6h之间CA2、CA3区小白蛋白阳性中间神经元均出现一过性减少．到24h时恢复三缺血前水平：而CA1区小白蛋白阳性中间神经元的减少出现于再灌流12h后。此外齿状回颗粒层及门区小白蛋白阳性中间神经元变化不显著。本实验结果提示,短暂性全脑缺血早期海马各区域小白蛋白阳性神经元减少的不同时相特征．可能与海马各区域的不同缺血敏感性及不同缺血的病理学表现有关。     

海马结构内衰老色素的地域差异和脑衰老的不同步性

用诱发荧光的组织学方法结合落点法测量研究海马结构不同部分神经元内衰老色素(Lp)荧光颗粒含量。结果显示30月龄大鼠海马的CA_1、CA_3区和海马下托的锥体细胞以及齿状回的颗粒细胞内Lp 点核周质含量的百分比明显不同:CA_1区是32. 74±6. 27%;CA_3区是36. 53±8. 15%;海马下托为为29. 12±4. 75%;齿状回是21. 46±5. 2%,P<0. 05。表明海马结构各亚区神经元Lp 产生和累积的速度不同,也表明它们的衰老进程是不同步的。     

4-辛基衣康酸通过Keap1/Nrf2/GPX4通路减少癫痫大鼠海马神经元铁死亡

目的:探讨4-辛基衣康酸(4-OI)对癫痫大鼠海马神经元铁死亡的影响。方法:雄性SD大鼠45只，随机分为生理盐水组、戊四氮组(PTZ)和4-辛基衣康酸和戊四氮联合治疗组(4-OI+PTZ)。观察记录各组大鼠癫痫发作程度行为学及脑电图变化，应用尼氏染色观察海马区神经元变化，膜片钳技术评估海马CA1区的神经元兴奋性，试剂盒测定海马区铁离子、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平，采用免疫组化与Western Blot检测各组大鼠海马区神经元核因子红细胞2相关因子2(Nrf2)、Klech样ECH关联蛋白1(Keap1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、前列腺素内过氧化物合成酶2(PTGS2)的表达情况。结果:与生理盐水组比较，PTZ组癫痫样发作明显，神经元尼氏体的含量显著减少，神经元的兴奋性显著增加，海马区铁离子、MDA、PTGS2与Keap1的表达明显升高，GSH、Nrf2、GPX4的表达明显下降(P<0.05);与癫痫组相比，4-OI处理组癫痫发作等级降低，神经元尼氏体的含量显著增加，神经元的兴奋性显著下降，海马区铁离子、MDA、PTGS2与Keap1的表达明显下降，GSH、...     

雌二醇对缺血性脑损伤的保护作用

目的　观察雌二醇对大鼠海马神经元缺血性损伤的保护作用。方法　 3月龄SD雌性大鼠 2 9只 ,应用Pulsinelli Brierley脑缺血模型 ,分为脑缺血性损伤雌二醇组 (n =9,10 0 μg·kg-1·d-1)肌肉注射 ;尼莫地平组 (n =8,1μg·kg-1·d-1)腹腔注射 ;以及缺血损伤对照组和假手术组。再灌流 6天后 ,观察海马各区神经元变化。结果　雌二醇治疗组海马CA1和CA2区神经元死亡的数量 (CA1、CA2分别为 9 8± 2 4和 7 7± 2 1)明显少于对照组 (CA1、CA2分别为 4 7± 2 2和 5 0± 3 0 ) ,P <0 0 1,脑缺血性癫痫的发生率和大鼠的死亡率均较对照组低。结论　雌二醇对大鼠全脑缺血 /再灌流损伤具有保护作用。     

失血性休克时缺血—再灌流中肺的抗氧化作用

本实验应用失血性休克动物模型,动态观察休克时缺血-再灌流后不同时间入、出肺血浆总SOD活力和脂质过氧化代谢终产物丙二醛(MDA)含量的变化,探讨肺自身的抗氧化作用及休克时缺血-再灌流肺易损伤的机理,为休克肺的防治提供一定的理论依据。     

大鼠海马结构至外侧隔核各部的投射——HRP法研究

本实验用大鼠19只,将HRP注入外侧隔核各部(背侧部、中间部和腹侧部)研究海马结构至外侧隔核各部的纤维投射。结果表明,外侧隔核接受双侧CA_1区、CA_3区、CA_4区、背侧下托和同侧腹侧下托的纤维投射。并且有明显的局部定位关系:背侧CA_1区和背侧下托投射至外侧隔核的背侧部背内侧分和中间部背内侧分;腹侧CA_1区和腹侧下托投射至外侧隔核背侧部腹外侧分、中间部腹外侧分和腹侧部。CA_3、CA_4区投射至外侧隔核外,还发纤维至双侧隔伞核。齿回似无纤维投射至外侧隔核。     

中风脑得平冲剂防治大鼠脑缺血再灌注损伤的实验研究

目的与方法:以雄性Wistar大鼠双侧颈总动脉缺血再灌注模型, 观察中风脑得平冲剂对脑组织含水量, 海马Ca²⁺、兴奋性氨基酸含量及形态学变化的影响, 以探讨药物的作用机制。结果与结论:大鼠脑缺血再灌注后, 有明显脑水肿及海马神经元损伤, 脑组织含水量, Ca²⁺及兴奋性氨基酸的含量明显升高, 中风脑得平冲剂表现出不同程度的抑制上述指标异常升高的作用, 从而保护神经元减轻损伤。     

Significance of nerve growth factor content levels after transient forebrain ischemia in gerbils.

Involvement of nerve growth factor (NGF) in the pathogenesis of delayed neuronal death (DND) of CA1 neurons in the hippocampus has been suggested. We measured regional changes in the content of tissue NGF of the hippocampus in the Mongolian gerbil after 5 min forebrain ischemia. The NGF content was found to decrease significantly in the CA3 and dentate regions by 32% two days after ischemia. By contrast in the CA1 region, the level of NGF became significantly elevated by 50% two weeks after ischemia or later. The early reduction of NGF content in the afferent area projecting to the CA1 sector might be primarily linked to the pathogenesis of DND, whereas the delayed increase within the CA1 sector might be a secondary local response mainly of reactive astroglia.     

浅低温对沙土鼠脑缺血再灌后能量代谢及羟自由基产生的影响

目的:研究浅低温对沙土鼠脑缺血再灌后海马三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、腺苷酸(AMP)含量和羟自由基(OH·)产生以及延迟性神经元死亡(DND)的影响。方法:沙土鼠前脑缺血再灌注模型,脑缺血10min。应用高效液相结合电化学检测器测定海马OH·含量,高效液相及紫外检测器测定ATP、ADP、AMP含量,组织学检查判断DND。结果:缺血再灌96h,浅低温+缺血再灌组DND数目明显少于缺血再灌组。缺血再灌6h,浅低温+缺血再灌组海马2,3-二羟基苯甲酸(2,3-DHBA)含量明显低于缺血再灌组(P＜0.01),但在缺血再灌48和96h,3组间2,3-DHBA含量相比差异无显著性。脑缺血再灌6h,3组间ATP、ADP、AMP含量相比差异无显著性。在再灌48和96h,浅低温+缺血再灌组海马ATP、ADP、AMP含量明显高于缺血再灌组。结论:浅低温可能通过改善脑缺血后细胞能量代谢而减少DND。     

小檗碱对大鼠全脑缺血后海马的保护作用

本研究室以往曾发现小檗碱具有预防脑缺血短期（７ｄ）再灌流海马ＣＡ１迟发性神经元坏死（ＤＮＤ）的作用。本研究采用Ｐｕｌｓｉｎｅｌｌｉ－Ｂｒｉｅｒｌｅｙ四血管阻塞（４ＶＯ）致大鼠全脑缺血模型，观察了小檗碱对脑缺血（２ｍｉｎ）长期再灌流后海马的影响，并对脑缺血经短、长期再灌流对照及用药组大鼠进行了Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫学习记忆能力检测。结果显示，小檗碱能有效的保护海马ＣＡ１区锥体细胞免于脑缺血后ＤＮＤ，经长期（３个月）再灌流后这种保护作用依然存在，细胞密度为１６８个／ｍｍ，占正常８０．５％；对脑缺血经长期再灌流引起的海马ＣＡ２、ＣＡ３、ＣＡ４继发性神经无死亡也有明显的对抗作用。脑缺血短期（１０ｄ）再灌流后，大鼠表现为明显的学习障碍，潜伏期延长，但经多次训练后，大鼠在原平台象限泳距比其它非平台象限都显著长，表明尚有良好的空间记忆能力；脑缺血经长期再灌流后，其空间学习障碍加重、记忆能力也受到严重影响。而用药组缺血大鼠无论短期或长期再灌流后，均保存了良好的空间学习、记忆能力。表明脑缺血经长期再灌流后，海马的形态和学习、记忆能力比短期再灌时将进一步受损害，而小檗碱不但对短期再灌流有保护作用，对长期再灌流的进一步损害也有明显的?     

Bicyclol attenuates oxidative stress and neuronal damage following transient forebrain ischemia in mouse cortex and hippocampus

To assess its potential neuroprotective effect against ischemia/reperfusion (IR) injury in mice, bicyclol was administered intragastrically once a day for 3 days. After 6 h of bicyclol pretreatment on the third day, forebrain ischemia was induced for 1 h by bilateral occlusion of the carotid arteries. After different times of reperfusion, the histopathological changes and the levels of mitochondria-generated reactive oxygen species (ROS), malondialdehyde (MDA) and the activity of superoxide dismutase (SOD) in the cortex and hippocampus were measured. We found that extensive neuronal death occurred in the cortex and the CA1 area of the hippocampus at day 7 after IR and that bicyclol significantly attenuated IR-induced neuronal death in a dose-dependent manner. We also found that pretreatment with bicyclol dose dependently decreased the generation of ROS and the MDA content and reduced the compensatory increase in SOD activity in the cortex and hippocampus at 4 h of reperfusion. These results suggest that bicyclol protects the mouse brain against cerebral IR injury by attenuating oxidative stress and lipid peroxidation.     

脑缺血海马CA1区5-HT变化的免疫组织化学研究

目的：观察脑缺血及缺血再灌流海马ＣＡ１区５－ＨＴ的变化，探讨脑缺血海马ＣＡ１区神经元损伤与５－ＨＴ变化的关系。方法：用免疫组织化学ＡＢＣ法及图像分析技术对沙土鼠脑缺血海马ＣＡ１区５－ＨＴ含量变化进行研究。结果：（１）脑缺血１０ｍｉｎ时，沙土鼠海马ＣＡ１区５－ＨＴ免疫反应阳必纤维的平均光密度值（ＯＤ）与对照组比较无显著性差异。而缺血３０ｍｉｎ时，ＯＤ值则下降，４ｈ时下降得更多，Ｐ〈０．０５。（２）脑     

阿司匹林与尼莫地平预处理可改善脑缺血再灌注损伤

目的 探讨阿司匹林与尼莫地平预处理对脑缺血再灌注预后的影响。方法 80只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阿司匹林预处理组以及阿司匹林+尼莫地平预处理组,每组20只。以线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,各组大鼠均于模型制作前5 d开始灌胃给药,连续用药5 d。假手术组和模型组给予生理盐水;阿司匹林预处理组灌胃给予阿司匹林50 mg/kg;阿司匹林+尼莫地平预处理组灌胃给予阿司匹林50 mg/kg+尼莫地平10 mg/kg。缺血2 h及再灌注24 h后比较各组神经功能缺失评分,用TTC染色测定脑梗死体积,用ELISA法测定脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、血栓素B2和6-酮-前列腺素1α的含量,并通过Real-time PCR检测大鼠Notch1、Jagged1和Hes1 mRNA表达以及通过Western blotting 检测Notch信号通路中Notch1、Jagged1及下游物质Hes1的表达水平。结果 与模型组相比,阿司匹林+尼莫地平预处理组神经功能缺损评分显著降低（P<0.05）,脑梗死体积显著缩小;阿司匹林预处理组和阿司匹林+尼莫地平预处理组脑组织SOD及6-酮-前列腺素1α显著高于模型组,MDA、血栓素B2及血栓素B2/6-酮-前列腺素1表达均低于模型组,且阿司匹林+尼莫地平预处理组变化更明显(P<0.05);阿司匹林预处理组和阿司匹林+尼莫地平预处理组的Notch1、Jagged1和Hes1 mRNA及蛋白表达水平显著低于模型组（P<0.05）,且阿司匹林+尼莫地平预处理组表达量低于阿司匹林预处理组（P<0.05）。结论 阿司匹林与尼莫地平两药合用时明显优于阿司匹林单独给药,可显著改善大鼠脑缺血再灌注损伤,这可能是通过影响Notch信号通路达到脑组织保护的作用。     

The contribution of low affinity NGF receptor (p75NGFR) to delayed neuronal death after ischemia in the gerbil hippocampus

The implication of low affinity nerve growth factor receptor (p75NGFR), which is believed to play a pro-apoptotic role, in delayed neuronal death (DND) after ischemia in the gerbil hippocampus was investigated. Immunohistochemistry and Western blot analysis revealed that the presence of p75 NGFR immunoreactivity (IR) was negligible in the hippocampus of the sham control gerbil but appeared clearly in CA1 neurons 3 and 4 days after 5-min transient ischemia. Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated UTP nick end labeling (TUNEL) positive nuclei appeared when the level of p75NGFR IR increased. Furthermore, almost all TUNEL-positive CA1 neurons also costained for p75NGFR. These results suggest that p75NGFR contributes to DND after ischemia by an apoptotic mechanism.