清肝化瘀方药含药血清对肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的影响

目的:观察用两种方法制备的清肝化瘀方药含药血清对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:中药血清A为正常状态下大鼠的含药血清,中药血清B为病理状态下大鼠的含药血清,应用MTT比色法比较两种中药血清对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用.用流式细胞术检测中药血清B对肝癌细胞凋亡和细胞周期的影响.结果:中药血清A对肝癌细胞SMMC-7721增殖有轻微的抑制作用.中药血清B对肝癌细胞有明显的抑制作用,两种血清的抑制效应均呈时间依赖性.中药血清B还能促进肝癌细胞凋亡,使细胞滞留于G0/1期,降低SPF和PI.结论:病理状态下长期给药制备的清肝化瘀方药含药血清能够明显抑制人肝癌细胞增殖,促进其凋亡.     

通痹灵胶囊对体外培养的强直性脊柱炎成纤维细胞的影响

为观察中药通痹灵胶囊及含药血清对体外培养的强直性脊柱炎 (AS)成纤维细胞增殖的影响 ,探讨其药理作用机制 ,采用体外细胞培养技术 ,以AS患者髋关节囊成纤维细胞为材料 ,采用四甲基偶氮唑盐 (MTT)检测法、3 H TdR掺入法、流式细胞仪、绘制成纤维细胞生长曲线等方法观察中药通痹灵胶囊对AS成纤维细胞增殖、DNA合成及生长周期的影响。结果显示通痹灵胶囊浓缩液及含药血清不仅对成纤维细胞的增殖有明显抑制作用 (P <0 .0 1) ,还对其DNA的合成有抑制作用 (P <0 .0 1) ,流式细胞仪检测显示中药组G0 G1 期细胞增多 ,S期细胞明显减少 (P <0 .0 1)。说明中药通痹灵胶囊及其含药血清对体外培养AS成纤维细胞增殖所产生的明显抑制作用 ,可能是其治疗AS的药理机制之一。     

欣舒药物血清对原代培养平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察中药欣舒注射液药物血清对原代培养平滑肌细胞增殖的影响,探讨其防治pCI术后再狭窄的机制.方法 含药血清的制备,平滑肌细胞培养,平滑肌细胞鉴定.观察药物血清对平滑肌细胞作用24 h的影响:MTT比色法测定平滑肌细胞存活率,筛选合适药物血清浓度;流式细胞仪检测平滑肌细胞生长周期.结果 中药组和西药组G0/G1期细胞数目的百分比高于正常组;中药组S期、G2/M期细胞数目的百分比低于正常组;西药组G2/M期细胞数目的百分比低于正常组.中药组G2/M期细胞数目的百分比高于西药组.结论 欣舒注射液具有防治PCI术后再狭窄的作用,这可能与其具有抑制平滑肌细胞增殖的作用有关.     

半枝莲醇提物含药血清对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的:研究半枝莲醇提物(EESB,ethanol extract from Scutellaria barbata)含药血清对人结肠癌HT-29细胞株体外诱导其凋亡和周期的变化。方法:体外常规培养人结肠癌HT-29细胞株,制备含药血清,设置空白血清组、含有不同浓度EESB含药血清组、5-FU组,1应用MTT法评价EESB含药血清对HT-29细胞24 h、48 h、72 h的生长抑制率,2Annexin V-PE/7-AAD双染色分析在流式细胞仪上观察EESB含药血清处理HT-29细胞48 h后的细胞凋亡率,3PI法检测细胞周期变化。结果:1与空白组比较,MTT法显示EESB低、中、高剂量含药血清都能抑制HT-29细胞增殖(P0.05),抑制率与作用时间及血清含药浓度相关,72 h时其达到39%。2同空白组比较,低、中、高剂量含药血清处理HT-29细胞48 h后凋亡率显著高于对照组(P0.05),同时低、中、高剂量含药血清处理HT-29细胞48 h后,3与空白组比较,G0/G1期细胞明显较对照组增加(P0.05),提示半枝莲可促进细胞凋亡,并且将细胞生长周期阻滞于G0/G1期,并且S期减少。结论:半枝莲对人结肠癌HT-29细胞有抑制作用,作用机制可能不光与抑制细胞生长有关,还和阻滞细胞生长周期及诱导细胞凋亡有关。     

三物白散加味方影响肿瘤细胞周期实验研究

目的观察三物白散加味方对肿瘤细胞周期的影响。方法以三物白散加味方体外直接用药及含药血清加入人胃癌SGC-7901细胞中,观察对细胞周期影响;另制作S180荷瘤鼠肿瘤模型,观察用药后细胞周期变化。结果三物白散加味方直接用药及含药血清中、大剂量组能明显降低人胃癌SGC-7901细胞G0-G1期细胞,而使细胞阻滞于G2-M期,减少肿瘤细胞DNA合成,抑制其增殖。中、大剂量组灌注S180荷瘤鼠肿瘤模型后,影响S期向G2-M期转化,将肿瘤细胞阻滞在S期,抑制其增殖。结论本方通过影响细胞周期抑制肿瘤增殖。     

补肾健脾对衰老肝细胞增殖和凋亡变化的作用

目的:观察补肾健脾中药影响自然衰老大鼠肝组织细胞增殖和凋亡的作用.方法:利用自然衰老大鼠模型随机分3组老年对照组,老年补肾组,老年健脾组各连续给药4个月,观察补肾和健脾方药对模型动物肝脏组织细胞增殖和凋亡衰老性变化的治疗作用.结果:①与年轻大鼠对照,老年大鼠肝组织的G0-G1期细胞比例增加(P＜0.01),而S期细胞及G2-M期细胞比例减少(P＜0.01);同时凋亡细胞的比例增加(P＜0.01).②与老年大鼠对照,补肾和健脾方药组动物肝脏组织的G0-G1期细胞比例减少(P＜0.01)、G2-M期细胞比例增加(P＜0.01);健脾方药组S期细胞比例增加(P＜0.01),但补肾组S期细胞与老年对照组差异不显著(P＞0.05),且健脾组G2-M期细胞明显多于补肾组(P＜0.01).③补肾和健脾方药皆能减少老年大鼠肝脏组织细胞的凋亡(P＜0.01),但健脾方药抑制细胞凋亡的作用明显优于补肾方药(P＜0.01).结论:自然衰老大鼠肝组织细胞增殖减少而细胞凋亡增加;健脾方药对自然衰老大鼠肝组织细胞增殖和凋亡的作用,均优于补肾方药.     

半枝莲含药血清对小鼠肝癌细胞生长的抑制和诱导凋亡作用

目的：探讨中药半枝莲提取物（ESB）对小鼠肝癌细胞生长的抑制和诱导凋亡作用。方法：体外培养小鼠H22肝癌细胞,以ESB高、中、低剂量含药血清培养液作用于H22细胞,并设立空白血清及5-氟尿嘧啶组。应用MTT法检测药物对细胞增殖的抑制作用;Hoechst33258染色,荧光显微镜下观察细胞凋亡;流式细胞术检测肿瘤细胞周期及细胞凋亡情况。结果：ESB高、中剂量含药血清组有一定的抑制H22肝癌细胞增殖的作用,且呈明显的时效关系。荧光显微镜下可见部分细胞呈典型凋亡形态学改变。流式细胞仪检测结果显示：细胞周期各时相中,ESB高、中、剂量含药血清组S期细胞所占的比例明显减少,G1期细胞增多,有明显的诱导凋亡作用。其中空白对照、ESB低、中、高剂量组、5-氟尿嘧啶组H22细胞凋亡率分别为0.51%、1.07%、3.15%、7.83%、11.26%。结论：ESB含药血清不仅可直接抑制小鼠H22肝癌细胞生长,而且可有效诱导细胞凋亡。     

清毒栓血清药对宫颈癌SiHa细胞凋亡及周期的影响

目的 通过研究中药含药血清对宫颈癌SiHa细胞凋亡及细胞周期的影响,探讨中药抑制宫颈癌SiHa细胞生长可能的作用机制.方法 以不同浓度含药血清培养液作用于SiHa细胞,并设立空向血清及含中、西药阳性药血清为对照,用流式细胞分析技术进行细胞周期及细胞凋亡检测.结果 口服各组含药血清组S期所占比例较空白血清对照组减少,其差异有显著性(P＜0.05),尤以西药阳性组明显(P＜0.01),清毒栓组次之,中药阳性组再次之.而G0～G1期所占比例较空白血清对照组增加,其差异有显著性(P＜0.01).结论 清毒栓对人宫颈癌SiHa细胞的作用可能是通过阻断细胞从G0～G1期向S期分化及促进其凋亡而抑制细胞生长.     

软坚散结胶囊含药血清诱导人肾透明细胞癌7860细胞凋亡

目的:研究软坚散结胶囊对人肾透明细胞癌7860细胞系抑制和诱导凋亡的作用。方法:分别采用CCK-8检测细胞的生长抑制率,流式细胞仪、激光共聚焦显微镜观察软坚散结含药血清处理7860细胞后细胞凋亡和细胞周期阻滞的发生。结果:软坚散结胶囊低、中、高剂量含药血清均能抑制7860细胞增殖(P0.05),其抑制率与作用时间及血清含药浓度相关。中、高剂量含药血清处理7860细胞48h后凋亡率显著高于对照组(P0.05),同时低、中、高剂量含药血清处理7860细胞48 h后,G0/G1期细胞明显较对照组增加(P0.01),提示软坚散结胶囊可促进细胞凋亡,并且将细胞生长周期阻滞于G0/G1期。激光共聚焦显微镜下可见经染色的凋亡细胞增多且细胞出现凋亡形态学改变。结论:软坚散结胶囊对人肾透明细胞癌7860细胞有抑制作用,机制可能与抑制细胞生长、阻滞细胞生长周期及诱导细胞凋亡有关。     

清毒饮、养正片影响白血病K562细胞增殖周期、细胞凋亡的实验研究

目的:观察清毒饮、养正片诱导人白血病细胞株K562细胞凋亡及对细胞增殖周期的作用;探索其时效关系,为临床提供选择最佳用药时机的实验基础.方法:制备含清毒饮、养正片药物血清,建立相应的培养体系,加入含药小鼠血清,培养K562细胞株;分别于培养12、24、36、48、72h收集细胞,固定、染色、上流式细胞仪进行细胞周期、细胞凋亡的检测.结果:人白血病K562细胞株存在有自然凋亡,正常小鼠血清无诱导该细胞凋亡的作用;清毒饮、阿糖胞苷具有诱导细胞凋亡的作用,且随着培养时间的延长凋亡率愈加明显.清毒饮对K562细胞周期的影响,还表现出明显的时间依赖性;随着培养时间的延长,当细胞出现明显凋亡时,细胞株S期显著下降,G0/G1期升高,提示清毒饮和清毒加养正合剂都可引起K562细胞株的G0/G1期阻滞,对凋亡的敏感性增强.结论:清毒饮能抑制K562细胞增殖、促进细胞分化、诱导细胞凋亡,提示该中药复方具有从分子水平抗肿瘤细胞增殖的效应,这也是中药复方协同化疗药物治疗白血病在增效减毒方面的关键机制;清毒饮对K562细胞发生细胞毒作用,是通过抑制其细胞周期S期、将其阻滞于G1期,并通过促进K562细胞凋亡实现的,其作用强度与时间呈密切正相关.     

含中药血清对血管内皮细胞生长因子诱导的人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的：探讨含中药血清对人脐静脉内皮细胞增殖的影响。方法：通过在4代人脐静脉内皮细胞的培养液中加入血管内皮细胞生长因子和含中药血清，应用流式细胞仪分析其细胞周期，结果。含中药血清可以降低细胞周期中S期细胞的数目，抑制细胞的DNA合成，尤以高剂量含中药血清作用明显，结论：含高剂量中药的大鼠血清有抑制血管内皮细胞生长因子诱导内皮细胞增殖的作用。     

独角莲含药血清对肿瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用的研究

目的：观察独角莲含药血清在体外对K562白血病细胞增殖及凋亡的影响。方法：采用血清药理学方法制备独角莲含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562白血病细胞,采用MTT比色法观察独角莲含药血清对K562细胞增殖的影响;采用流式细胞仪（FCM）及DNA片段凝胶电泳观察和检测细胞凋亡情况。结果：不同浓度独角莲含药血清对K562细胞增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系。当含药血清作用96h后,其抑制作用开始减弱。流式细胞仪检测显示,独角莲含药血清能够诱导K562细胞的凋亡,且凋亡率随着剂量的增加而增大,与空白对照组比较（P〈0.01）;DNA琼脂糖凝胶电泳谱可见典型的DNA梯形带形成。结论：独角莲含药血清具有抑制K562白血病细胞增殖、促进细胞分化和诱导细胞凋亡的作用,其作用强度与时间-浓度呈正相关。独角莲含药血清对K562细胞发生细胞毒作用可能与诱导K562细胞凋亡有关。     

密蒙花方对缺氧状态下人血管内皮细胞细胞周期的影响

目的探讨密蒙花方对缺氧状态下人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vascular endothelialcell,HUVEC)细胞周期的影响。方法体外培养HUVEC,采用二氯化钴(CoCl2)建立细胞化学缺氧模型,采用流式细胞仪(flow cytometer,FCM)检测不同浓度密蒙花方水提液(10、20、40 mg/ml)对缺氧状态下HUVEC细胞周期的影响。结果①缺氧组较正常组G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增高,差异具有统计学意义(P<0.01);②各密蒙花方组均较缺氧组G0/G1期细胞比例增高,S期细胞比例减少(P<0.01),组间具有浓度依赖关系(P<0.01);③密蒙花方组在G0/G1期前还出现了指示细胞凋亡的亚G1期凋亡峰,表明密蒙花方对缺氧状态下的HUVEC具有促凋亡作用。结论密蒙花方抑制HUVEC增殖的作用与阻滞细胞由G1期进入S期,促进细胞凋亡有关。     

生脉成骨方对内毒素致血管内皮细胞损伤的保护作用研究

目的 探讨生脉成骨方对内毒素致血管内皮细胞(EC)损伤的影响。方法 从兔主动脉取材进行EC培养，分别用内毒素和生脉成骨方含药血清对培养的EC进行处理，通过光镜、电镜及MTT法观察EC形态结构及功能的变化。结果 内毒素对EC能产生病理性损伤，而生脉成骨方含药血清组细胞形态基本正常；MTT法结果提示，内毒素对EC的增殖具有抑制作用，减弱其功能活性；而生脉成骨方含药血清能增加EC的代谢活性，促进其增殖。结论 生脉成骨方对内毒素导致的EC损伤有保护作用。     

清毒栓含药血清对宫颈癌SiHa细胞MDM2基因的影响

目的研究中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞生长的调节作用,从细胞生物学及分子生物学水平探讨清毒栓对抑制宫颈癌SiHa细胞生长的作用机制。方法以不同浓度清毒栓含药血清培养液作用于SiHa细胞,并设立空白血清及含中、西药阳性对照药血清为对照,通过MTT法检测清毒栓对细胞生长增殖的影响;用流式细胞分析技术进行细胞周期及细胞凋亡检测,并用RT—PCR法半定量检测原癌基因MDM2表达。结果经清毒栓含药8％的血清培养液作用后细胞数量减少,其中以血清作用72h时对细胞抑制作用最强,与空白组比较,差异有显著性（P〈0．01）;细胞周期各时相中,清毒栓含药血清S期细胞所占的比例明显减少,对细胞凋亡有影响,但未见明显规律性,RT—PCR结果示清毒栓含药血清细胞中MDM2表达明显减少。结论清毒栓含药血清不仅可直接抑制宫颈癌细胞的生长,并可能通过下调MDM2基因表达的分子机制,达到抑制肿瘤的目的。     

中药对血管平滑肌细胞的影响

整理和分析中药对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)的影响。血管疾病对患者的危害较大,VSMC的表型转化、过度增殖和迁移是动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)、血管成形术后再狭窄和高血压等血管疾病形成的主要环节,故研究中药对VSMC的调节作用对血管疾病的防治意义重大。对中药促使VSMC表型转化、抑制细胞异常增殖和迁移及其分子机制、基础动物实验等方面的研究文献报道进行总结,并对血管平滑肌细胞与内皮细胞、内皮祖细胞及巨噬细胞之间的关系进行分析。结果表明,中药在AS等血管疾病的防治中具有良好的效果,但由于其成分复杂,作用机制难以明确、质量难以控制及毒副作用限制了其在临床中的应用,故结合中药血清药理学等方法,加强中药活性单体化合物对VSMC调节作用的深入研究或将给血管疾病的防治带来新的希望。     

六味地黄方含药血清对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的保护作用

目的：观察六味地黄方大鼠含药血清对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）损伤血管内皮细胞（VEC）的保护作用。方法：以MTT法观察人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的活力和流式细胞仪测定内皮细胞凋亡率,并通过测定胞内丙二醛（MDA）含量及细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、一氧化氮（NO）含量与超氧化物歧化酶（SOD）活力,探讨六味地黄方对血管内皮细胞损伤的保护作用及机制。结果：六味地黄方含药血清能促进ox LDL损伤的血管内皮细胞增殖、抑制ox LDL造成的内皮细胞凋亡、降低胞内MDA含量、减少细胞LDH释放量,提高SOD活力及NO含量。结论：六味地黄方对氧化低密度脂蛋白损伤的血管内皮细胞有一定的保护作用。     

黄芪、当归及其组方促血管内皮细胞增殖作用的研究

目的：探讨黄芪、当归及其组方对人脐静脉内皮细胞增殖和细胞周期的影响。方法：以离体培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,,HUVEC)为模型,采用MTT法测定细胞增殖、流式细胞仪分析其细胞周期、SABC法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,对黄芪、当归及其组方的促HUVEC增殖作用进行了观察研究。结果：黄芪、当归单用或合用均可促进内皮细胞生长,增加细胞周期中S期细胞的数目,尤以复方作用明显(P<0．05或P<0．001)。同时,各给药组均能上调VEGF的表达,而对照组VEGF仅有微弱表达(P<0．05或P<0．01)。结论：黄芪、当归有促进血管内皮细胞增殖及DNA合成的作用,两药配伍应用时具有协同效应,提示在缺血心肌新生血管的发生和发展中可能具有一定作用。     

益气活血方含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

目的：探讨益气与活血中药含药血清对骨髓间充质干细胞（ bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs ）增殖能力的影响。方法全细胞贴壁培养法获取、纯化BMSCs,体外培养,建立大鼠骨髓间充质干细胞的培养体系,采集空白对照大鼠、益气药、活血药、益气活血中药灌胃大鼠含药血清,用10%浓度以上不同含药血清培养第三代BMSCs,置于37℃,5% CO2培养箱中孵育。用流式细胞术鉴定BMSCs。噻唑基四唑比色法（ methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）测细胞活性,绘制生长曲线,观察10%益气、活血、益气活血中药含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响。结果采用全骨髓贴壁法获取的BMSCs,经流式细胞术检测,CD44、CD106呈阳性表达,基本不表达CD45、CD34;MTT法检测结果显示,培养第2、4、5天细胞快速增长,均较前一天增长明显（ P 〈0．05）,第6天时活血方血清组与益气活血方血清组细胞增长已呈下降趋势,而其它三组在第6天细胞增长达最大,与前一天比较仍有差异（ P〈0．05）,到第7天呈下降趋势。 BMSCs去除基线增殖率组间比较,培养第2天时,各组间比较虽无差异,但活血方血清组达最大（71．39±177;4．98%）;第4、6天时,益气活血方组达最大（66．40±177;1．47%）,与其它三组比较P〈0．01,活血方血清组次之;培养第6天时,益气方血清组较其它三组大,益气活血方血清组次之,活血方血清组最低。结论全细胞贴壁培养的大鼠骨髓间充质干细胞在细胞形态与表形表达上均具备BMSCs特征;益气活血中药含药血清对培养BMSCs增殖影响最大,活血方含药血清对细胞增殖影响出现最早、益气方含药血清对细胞增殖影响时间最长。