雪旺细胞分泌的〉10kD蛋白分子支持脊髓前角神经元生存的初步报告

目的：探讨成年大鼠坐骨神经瓦勒变性期雪旺细胞（ＳＣ）促进周围神经再生的物质基础。方法：将２１５ｍｌＳＣ无血清条件培养液经ＰＭ１０超滤浓缩器（分子筛）分离，获得分子量＜１０ｋＤ（１ｄａｌｔｏｎ＝０．９９２１ｕ）蛋白质滤过液及＞１０ｋＤ蛋白质浓缩液，分别加入２４孔、９６孔培养板内脊髓前角神经元（ＳＡＨＮ）的培养液中，用倒置显微镜及ＭＴＴ微量自动比色法进行神经营养活性观察。结果：在＞１０ｋＤ蛋白分子影响下，ＳＡＨＮ在体外培养４８小时仍存活良好，并伴有少部分ＳＡＨＮ长出短突起。ＭＴＴ微量自动比色法进一步显示，＞１０ｋＤ蛋白分子神经营养活性在统计学上显著高于＜１０ｋＤ蛋白分子。结论：成年大鼠瓦勒变性期ＳＣ在无血清培养条件下仍能合成与分泌神经营养因子，其活性存在于＞１０ｋＤ蛋白分子中。     

雪旺氏细胞分泌的神经营养活性物质的提取及体外生物活性研究

雪旺氏细胞（ＳＣ）分泌多种神经营养因子促进周围神经再生，但ＳＣ分泌的各种蛋白质对周围神经再生的影响尚未完全阐明。为此，从成年大鼠瓦勒氏变性坐骨神经中分离出ＳＣ，经培养获得ＳＣ无血清条件培养液（ＳＣ－ＳＦＣＭ）。通过ＰＭ１０超滤浓缩、Ｄｉｓｃ－ＰＡＧＥ和Ｂｉｏｔｒａｐ电洗脱，从ＳＣ－ＳＦＣＭ中分离出Ｄ蛋白带，分子量在４３～６７Ｋｄ之间。经ＭＴＴ检测，Ｄ带蛋白在２５～５０ｎｇ／ｍｌ浓度时对脊髓前角神经元表现出明显的体外成活作用。Ｄ蛋白带可能是一种有别于已知的ＳＣ源神经营养物质，其活性浓度达到了神经营养因子分子检测水平，值得深入研究     

雪旺氏细胞分泌的神经营养活性物质的提取及体外生物活…

雪旺氏细胞（ＳＣ）分泌多种神经营养因子促进周围神经再生，但ＳＣ分泌的各种蛋白质对周围神经再生的影响尚未完全阐明。为此，从成年大鼠瓦勒氏变性坐骨神经中分离出ＳＣ，经培养获ＳＣ无血清条件培养液（ＳＣ－ＳＦＣＭ）。通过ＰＭ１０超滤浓缩、Ｄｉｓｃ－ＰＡＧＥ和Ｂｉｏｔｒａｐ电洗脱，从ＳＣ－ＳＦＣＭ中分离出Ｄ蛋白带，分子量在４７－６７Ｋｄ之间，经ＭＴＴ检测，Ｄ带蛋白在２５－５０ｎｇ／ｍｌ浓度时对脊髓产角神经元     

雪旺细胞源神经营养因子预防臂丛神经根性撕脱伤所致运动神经元死亡

目的　研究雪旺细胞源神经营养因子（ Ｓ Ｄ Ｎ Ｆ）对臂丛神经根性撕脱伤所致前角运动神经元死亡的保护作用。方法　选成年 Ｓ Ｄ 大鼠,制成颈６、７神经根性撕脱伤动物模型,损伤处定期应用 Ｓ Ｄ Ｎ Ｆ,３ 周后观察损伤侧脊髓前角运动神经元的成活率和形态学变化,以及一氧化氮合酶（ Ｎ Ｏ Ｓ）表达的情况。结果　对照组６８６％ 的脊髓前角运动神经元死亡,成活神经元胞体明显萎缩,同时表达 Ｎ Ｏ Ｓ神经元增多;实验组脊髓前角运动神经元的死亡率较对照组降低３５％ ,成活神经元胞体无萎缩,表达 Ｎ Ｏ Ｓ神经元未见增多。结论　 Ｓ Ｄ Ｎ Ｆ对臂丛神经根性撕脱伤所致运动神经元死亡有明显的保护作用,一氧化氮在臂丛神经根性撕脱伤所致运动神经元死亡中起一定作用。     

雪旺细胞源神经营养因子预防臂丛神经根性撕脱伤所致 …

目的 研究雪旺细胞源细胞神经营养因子（ＳＤＮＦ）对臂丛神经根性撕脱伤所致前角运动神经元死亡的保护作用。方法 选成年ＳＤ大鼠,制成颈６、７神经根性撕脱伤动物模型,损伤处定期应用ＳＤＮＦ,３周后观察损伤侧脊髓前角运动神经元的成活率和形态学变化,以及一氧化氮合酶（ＮＯＳ）表达的情况。结果 对照组６８．６％的脊髓前角运动神经元死亡,成活神经元胞体明显萎缩,同时表达ＮＯＳ神经元增多;实验组脊髓前角运动神经元     

雪旺细胞源神经营养因子对脊神经根性撕脱所致运动神经元死亡的保护作用

目的研究雪旺细胞源神经营养因子（ＳＤＮＦ）对臂丛神经根性撕脱所致前角运动神经元死亡的保护作用。方法于颈神经根性撕脱处应用ＳＤＮＦ,３周后观察损伤侧脊髓前角运动神经元的存活率和形态学变化以及ＮＯＳ表达的情况。结果对照组６８．６％的神经元死亡,存活神经元胞体明显萎缩,同时表达ＮＯＳ神经元增多;实验组的死亡率较对照组降低３５％,存活神经元胞体无萎缩,表达ＮＯＳ神经元未见增多。结论ＳＤＮＦ对脊髓前角运动神经元死亡有明显的保护作用,ＮＯ在臂丛神经根性撕脱所致运动神经元死亡中起一定作用。     

神经生长因子对脊髓前角运动神经元的保护作用

目的：证实神经生长因子（ｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＮＧＦ）对脊髓前角运动神经元有保护作用。方法：切断ＳＤ大鼠一侧坐骨神经，借助单盲端硅胶管系统在神经损伤局部给予ＮＧＦ。术后行酶组织化学检测。结果：坐骨神经切断可致腰段脊髓前角运动神经元明显损害，其表现为神经元乙酰胆碱脂酶（ａｃｅｔｙｌ－ｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ，ＡｃｈＥ）活性降低和酸性磷酸酶（ａｃｉｄｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＣＰ）活性升高，应用ＮＧＦ可显著改善上述酶学变化。结论：ＮＧＦ对受伤的脊髓前角运动神经元有保护作用     

肿瘤坏死因子对周围神经损伤后脊髓前角运动神经元 …

目的 探讨肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）对周围神经损伤后的脊髓前角运动神经元胞体的保护作用。方法 Ｗｉｓｔａｒ大鼠２０只,随机分为实验组与对照组,每组１０只。切断灰侧坐骨神经、近端套入硅胶管内,管内分别注入生理盐水（ＮＳ）、ＴＮＦ－α（３０Ｕ／ｍｌ）各１６μｌ。术后２周,取腰４、５脊髓,行乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）、一氧化氮合酶（ＮＯＳ）染色。应用计算机图像分析系统计算出脊髓前角运动神经元ＡＣｈＥ、     

实验性脊髓缺血性损伤后神经元病变的神经丝免疫组织化学研究

目的：观察实验性兔腰髓缺血４０ｍｉｎ和再灌流４ｈ的脊髓运动神经元胞体和轴突的病理学改变。方法：用免疫组织化学方法观察神经丝（ｎｅｕｒｏｆｉｌａｍｅｎｔｓ，ＮＦ）抗体特异标记神经元胞体和轴突，并对其结果进行图像分析。结果：缺血４０ｍｉｎ，脊髓前角运动神经元胞体和轴突内神经丝反应异常增强，胞体内神经丝分布紊乱聚集。再灌流４ｈ，脊髓前角运动神经元胞体和轴突内神经丝反应阳性，胞体内神经丝散乱、稀疏、崩溃和溶解，轴突肿胀、扩大、消失。图像分析了脊髓前角运动神经元胞体内神经丝的面积、灰度和脊髓前索内轴突的数量，其结果具有明显的统计学意义。结论：神经丝免疫组织化学方法能更清楚地显示脊髓运动神经元胞体和轴突的病理学改变，脊髓损伤后细胞骨架紊乱在神经元的病理发病机制中起重要作用。     

pSVP_0Mcat微基因修饰雪旺细胞脊髓内移植对损伤脊髓再生的影响

采用ｐＳＶＰ０Ｍｃａｔ微基因修饰雪旺细胞（ＳＣ）脊髓内移植，观察其对损伤脊髓再生的影响。将ＳＤ大鼠脊髓半横断损伤模型随机分为ｐＳＶＰ０Ｍｃａｔ微基因修饰ＳＣ移植组（Ａ组）、ＳＣ移植组（Ｂ组）及损伤对照组（Ｃ组），每组１０只大鼠。术后３个月，用辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）逆行示踪技术及体视学计量法，检查移植术后脊髓的再生能力。结果：①Ａ、Ｂ两组的ＨＲＰ标记细胞在近损伤区上段、红核、动眼神经核等中脑水平均有发现，Ａ组多于Ｂ组，Ｃ组损伤近端未发现ＨＲＰ标记细胞。②损伤区脊髓前角灰质神经元密度及１００μｍ白质范围内有髓神经纤维计数：Ａ组＞Ｂ组＞Ｃ组。提示，ｐＳＶＰ０Ｍｃａｔ微基因修饰ＳＣ脊髓内移植有促进损伤脊髓再生的作用     

Heymann肾炎自身单克隆抗体C3—6制备和特征

为了进一步研究Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ＨＮ）的病理损伤机制，发展有效的治疗手段。方法 应用大鼠肾小管刷状缘抗原ＦＸＩＡ免疫近交系Ｌｅｗｉｓ大鼠，诱导了主动型ＨＮ模型。并用该ＨＮ大鼠的淋巴细胞与小鼠ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，建立异种大鼠／小鼠之间的杂交瘤细胞株，产生了大鼠抗致病原Ｃ３－６自身单克隆抗体（ＭｃＡｂ）。结果 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ显示，ＭｃＡｂＣ３－６识别分子量为３３００     

周围神经损伤后外源性神经生长因子及睫状神经营养因子对神经 …

目的：研究周围神经损伤后神经生长因子（ＮＧＦ），睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）对神经元的保护作用方法：以硅管套接大鼠坐骨神经，局部及皮下分别应用ＳＡＬ（生理盐水），ＮＧＦ和ＣＮＴＦ。术后２周，应用酶组织化学方法显示相应在节段脊髓前角运动神经凶和脊神经节感觉神经元中胆碱脂酶（ＣＨＥ），酸性磷酸酶（ＡＣＰ）酶活性冻结计算机图像分析，结果：与正常相比，ＳＡＬ组两类神经元中ＣＨＥ活性显著减弱，ＡＣＰ活性显著     

雪旺氏细胞分泌蛋白质及其神经营养活性物质的生化分析

成年大鼠瓦勒氏变性神经来源的雪旺氏细胞（ＳＣ），经体外无血清分离培养，收集ＳＣ无血清条件培养液，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析其超滤浓缩液（分子量大于１０ＫＤａ）中ＳＣ分泌蛋白，发现其含有１４条蛋白带，分子量从大于９４ＫＤａ至小于３４ＫＤａ。用免疫印迹技术、抗２．５Ｓ神经生长因子（ＮＧＦ）抗体鉴定证实ＳＣ分泌蛋白中含有ＮＧＦ。用Ｄｉｓｃ－ＰＡＧＥ（４℃）分离ＳＣ分泌蛋白带，分别经电洗脱、浓缩收集１０份蛋白区带，结合有髓腹侧运动神经元细胞培养、ＮＴＦｓ生物学活性鉴定，初步发现其中一组蛋白区带（Ｂ＋）含运动性神经营养因子（ＮＴＦ）活性，其分子量在６５ＫＤａ至３４ＫＤａ。     

雪旺细胞源神经营养因子对脊神经根性撕脱所致运动神经元 …

目的 研究雪旺细胞源神经营养因子对臂丛神经根性撕脱所致前角运动神经元死亡的保护作用。方法 于颈神经根性撕脱处应用ＳＤＮＦ,３周后观察损伤侧脊髓前角运动神经元的存活率和形态学变化以及ＮＯＳ表达的情况。结果 对照组６８．６的神经元死亡,存活神经元胞体明显萎缩,同时表达ＮＯＳ神经元增多;实验组的死亡率较对照组降低３５％,存活神经元胞体无萎缩,表达ＮＯＳ神经元未见增多。     

嗅神经鞘细胞对胚胎大鼠脊髓后角神经元突起生长的促进作用

实验证实 ,嗅神经鞘细胞 (ｏｌｆａｃｔｏｒｙｅｎｓｈｅａｔｈｉｎｇｃｅｌｌｓ,ＯＥＣｓ)可促进多种神经元轴突的生长 ,如背根节神经元、视网膜节细胞以及向脊髓投射的皮层神经元、前庭神经元、中缝核神经元 ,等等。近年ＯＥＣｓ移植用于脊髓损伤后再生研究 ,已成功促进下行传导路纤维的再生和运动功能的恢复[1] 。但目前就ＯＥＣｓ对脊髓后角神经元的作用目前还缺乏研究。本实验的目的就是观察原代培样的ＯＥＣｓ对胚胎脊髓后角神经元的突起生长有无促进作用 ,从而为进一步的体内移植实验提供依据。1.材料与方法 :ＯＥＣｓ原代培养采用 3…     

大鼠脊髓损伤后兴奋性氨基酸的变化及其对血流量的影响

采用Ａｌｌｅｎ＇ｓ打击法复制大鼠脊髓损伤（ＳＣＩ）模型，氨基酸微量检测技术和氢清除法分别测定伤段脊髓组织２４ｈ内兴奋性氨基酸（ＥＡＡ）即谷氨酸（Ｇｌｕ）、天冬氨酸（Ａｓｐ）含量和脊髓灰质血流量（ＳＣＢＦ）的变化，并观察脊髓蛛网膜下腔注射ＥＡＡ受体激动剂Ｎ－甲基－Ｄ－天冬氨酸（ＮＭＤＡ）对ＳＣＢＦ的影响，探讨ＥＡＡ在ＳＣＩ中的作用。结果发现：ＳＣＢＦ在伤后１０ｍｉｎ即有明显下降，２ｈ较１ｈ略有回升，４～８ｈ又进一步下降，第二次下降与第一次下降相差显著。伤后脊髓蛛网膜下腔注射ＮＭＤＡ明显加剧ＳＣＩ后脊髓缺血。Ｇｌｕ、Ａｓｐ伤后１０ｍｉｎ均明显升高，１～２４ｈＡｓｐ较对照组明显降低，８ｈ较２ｈ略有回升；Ｇｌｕ在伤后１０ｍｉｎ有所下降，但仍高于对照组，４ｈ、８ｈ较２ｈ略增加。ＥＡＡ变化与ＳＣＢＦ呈显著负相关。结果提示ＳＣＩ后ＥＡＡ的过度释放是ＳＣＩ后继发损伤的重要因素。     

脊髓损伤早期三七总皂甙抗氧自由基作用的实验研究

Ｗｉｓｔａｒ大鼠４８只随机分三组，Ａｌｌｅｎ＇ｓ脊髓损伤（ＳＣＩ）模型２５０ｇ·ｃｍ致伤Ｔ_（１３）～Ｌ_１脊髓节段，腹腔注射三七总皂甙（ＰＮＳ），伤后３０ｍｉｎ时１００ｍｇ／ｋｇ，２ｈ及４ｈ各５０ｍｇ／ｋｇ；以二甲亚砜（ＤＭＳＯ）为抗氧自由基阳性对照药物，并设立空白对照。伤后１ｈ及４ｈ取伤区脊髓组织测定丙二醛（ＭＤＡ）及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ），发现ＰＮＳ显著减少ＭＤＡ的生成，保护ＳＯＤ活力降低。组织形态学观察到灰质区出血坏死，髓鞘分离及线粒体水肿较轻。提示ＳＣＩ早期ＰＮＳ具有明显的抗氧自由基反应和减轻继发性损害的作用。     

Heymann肾炎自身单克隆抗体C_（3－6）制备和特征

为了进一步研究Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ＨＮ）的病理损伤机制，发展有效的治疗手段。方法应用大鼠肾小管刷状缘抗原ＦＸＩＡ免疫近交系Ｌｅｗｉｓ大鼠，诱导了主动型ＨＮ模型。并用该ＨＮ大鼠的淋巴细胞与小鼠ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，建立异种大鼠／小鼠之间的杂交瘤细胞株，产生了大鼠抗致病原Ｃ３－６自身单克隆抗体（ＭｃＡｂ）。结果ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ显示，ＭｃＡｂＣ３－６识别分子量为３３００００的刷状缘抗原。ＭｃＡｂＣ３－６诱导的被动型ＨＮ大鼠免疫组化和免疫电镜表明该ＭｃＡｂＣ３－６在体内识别肾小球基底膜上皮足突表面抗原，并与之结合形成免疫沉积，其识别的抗原分布与文献报导ｇｐ３３０抗原分布相似。结论证明ＭｃＡｂＣ３－６是针对致病原ｇｐ３３０的自身ＭｃＡｂ。     

雪旺细胞源神经营养因子的神经营养活性及其抗NO神经毒性作用

目的：研究雪旺细胞源神经营养因子对脊髓前角神经元的神经营养活性及对抗一氧化氮（ＮＯ）神经细胞毒性的作用。方法：分４组进行神经元培养：（１）营养因子组：加入不同浓度的雪旺细胞源神经营养因子；（２）ＮＯ组：加入ＮＯ体外供体硝普钠；（３）营养因子＋ＮＯ组：同时加入雪旺细胞源神经营养因子和硝普钠：（４）对照组：加Ｄ－Ｈａｎｋ，培养２天后，ＭＴＴ法观察各组细胞情况。结果：营养因子组ＯＤ值均明显高于对照组；ＮＯ组ＯＤ值明显低于对照组：营养因子＋ＮＯ组，当神经营养因子浓度大于３０ｎｇ·孔－１时，ＯＤ值显著高于ＮＯ组。结论：ＮＯ抑制体外培养脊髓前角神经元的存活；雪旺细胞源神经营养因子对体外培养脊髓前角神经元具有明显的神经营养活性，且能对抗ＮＯ的神经细胞毒性。     

破骨细胞对磷酸三钙陶瓷人工骨生物降解的研究

目的 采用破骨细胞与磷酸三钙（ＴＣＰ）陶瓷体外混合培养方法，观察其对ＴＣＰ陶瓷的降解作用。方法 从新生ＳＤ大鼠长骨骨髓中分离出破骨细胞，与ＴＣＰ陶瓷圆盘混合培养，分别于４８及９６小时终止培养并观察。结果 在倒置显微镜下见破骨细胞胞体呈圆形或椭圆形，多核，胞浆伸出许多细胞突起。抗酒石酸酸性磷酸酶（ＴＲＡＰ）染色阳性。ＳＥＭ观察见在ＴＣＰ陶瓷圆盘表面出现许多散在分布的圆形吸收空隙，直径一般〈２０μｍ，